Designación: F838 - 15a
Método de prueba estándar para
Determinación bacteriana Retención de filtros de membrana utilizados para
Liquid Filtración 1
Esta norma ha sido publicada bajo la designación F838 fi jo; el número inmediatamente después de la designación indica el año de adopción original o, en el caso de revisión,
el año de la última revisión. Un número entre paréntesis indica el año de la última aprobación. A epsilon superíndice ( ') indica un cambio editorial desde la última revisión o
re-aprobación.
NOTA-Fig. 1 se actualizan editorial y la fecha años cambió el 30 de septiembre de 2015.
1 Alcance
1.1 Este método de ensayo determina la retención bacteriana
características de filtros de membrana para líquido filtración utilizando
Brevundimonas diminuta como organismo de desafío. Este método de ensayo se puede
emplear para evaluar cualquier sistema de filtro de membrana fi utilizado para la
esterilización líquido.
1.2 Este método de ensayo no está destinado a ser utilizado en perfor-
Mance de validación fi c a productos y procesos específico de las características de
retención de bacterias de filtros de membrana Fi para ser utilizado en la industria
farmacéutica o biofarmacéutica esterilización de filtración, o ambos. De proceso y de la
validación de retención bacteriana fi c-producto específico deben llevarse a cabo usando
los parámetros del proceso de fabricación de productos deseados y la solución de
producto o sustituto como el fluido portador.
1.3 Los valores indicados en unidades SI deben ser considerados como
estándar.
1.3.1 Excepción- Los valores pulgada-libra dadas para unidades de presión han de ser
considerados como los estándares; conversiones de unidades SI se muestran entre paréntesis.
1.4 Esta norma puede involucrar materiales peligrosos, operaciones y
equipos. Esta norma no pretende considerar todos los problemas de
seguridad, si los hay, asociados con su uso. Es responsabilidad del usuario de
esta norma establecer las prácticas de seguridad y salud y determinar la
aplicabilidad de las limitaciones reglamentarias antes de su uso.
2. Documentos de referencia
2.1 Normas ASTM: 2
D1193 especificación para el reactivo agua
1 Este método de ensayo se encuentra bajo la jurisdicción del Comité ASTM E55 en la fabricación de
productos farmacéuticos y biofarmacéuticos los productos y es responsabilidad directa del Subcomité E55.03 sobre
Normas Generales farmacéuticos.
Edición actual aprobada el 30 de septiembre de 2015. Publicado en octubre de 2015. aprobado originalmente en
1983. Última edición anterior publicada en 2015 como F838 - 15. DOI:
10.1520 / F0838-15A.
2 Para las normas ASTM citadas, visite el sitio web de ASTM, www.astm.org, o el contacto de cliente en
ASTM service@astm.org. por Annual Book of ASTM Standards información de volumen, consulte la página
Resumen de documentos de la serie en el sitio web de ASTM.
Copyright © ASTM International, 100 Barr Harbor Drive, PO Box C700, West Conshohocken, PA 19428-2959. Estados Unidos
1
3. Terminología
3.1 Definiciones:
3.1.1 log de valor reducción el logaritmo en base 10 de la relación del
número de microorganismos en el reto para el número de organismos en el
filtrado.
4. Resumen de Método de prueba
4.1 Después de la esterilización, el filtro de prueba fi es desafiado con una
suspensión de B. diminuta ( ATCC 19146 3) a una concentración de 10 7 organismos
por cm 2 de área efectiva filtración (EFA) a una presión diferencial máxima a través
de la prueba de filtro de 30 psig (206 kPa) y un caudal de 2 a 4 × 10 -3 LPM por cm 2 área
efectiva de filtración. Todo el filtrado se a continuación se filtró a través de un disco
ler membrana fi analítica, que se incuba posteriormente en un medio de
crecimiento solidificado fi. Los microorganismos que no son retenidos por el filtro
que se está probando se desarrollará en colonias visibles en la membrana análisis
y luego pueden ser enumerados.
5. significación y Uso
5.1 Este método de ensayo está diseñado para evaluar la capacidad de retención de
una esterilización de filtro en condiciones estándar de desafío.
5.1.1 Un reto de 10 7 bacterias por cm 2 de área efectiva filtración se selecciona para
proporcionar un alto grado de seguridad de que el filtro será desafiado de manera
uniforme en toda la superficie de la membrana para asegurar que cuantitativamente
retendrá un gran número de organismos. El organismo modelo desafío, B. diminuta, es
ampliamente considerado para ser una pequeña bacteria y se reconoce como un estándar
de la industria para la calificación de esterilizantes filtros. Otras especies pueden
representar una prueba peor de los casos, en términos de capacidad de penetrar en un
filtro. Esta prueba no proporciona la seguridad de que filtros pueden retener por completo
este tipo de bacterias.
5.1.2 El procedimiento analítico utilizado en este método de ensayo
proporciona un método para asignar un valor numérico a la eficiencia de la filtración del
filtro que está siendo evaluado bajo condiciones de filtración estándar. Para los fines de
aseguramiento de la esterilidad del producto, se deben realizar estudios c fi proceso
especí adicionales.
3 Disponibles de la American Type Culture Collection (ATCC), 10801 University Boulevard,
Manassas, VA 20110, http://www.atcc.org.
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6. Aparato 7.2.1 Además, cualquier agua utilizada en este método de ensayo debe
ajustarse a los requisitos para la no bacteriostático especí agua fi ed en la
6.1 Montar el aparato descrito a continuación como en Figura 1 :
edición actual de Métodos estándar para el examen de agua y aguas
6.1.1 Acero inoxidable recipientes a presión, la capacidad (o más grande) 12-L, fi TTED
residuales. 5
con un medidor de presión de 0 a 50 psi (0 a 350 kPa).
6.1.2 Regulador de aire. 8. Reactivos y materiales
6.1.3 47-mm-142 mm Análisis disco de filtro ensamblajes, dos o más, con una
8.1 Solución salina Lactosa medio de caldo:
manguera o conexiones sanitarias según sea el caso.
8.1.1 La lactosa Broth- Disolver 1,3 g de medio de caldo de lactosa deshidratada
6.1.4 Diafragma-Protected 0 a 50 psi (0 a 350 kPa) Indicador de presión, para
en 100 ml de agua.
lectura de la presión aguas arriba.
8.1.2 Cloruro de Sodio Solución- Disolver 7,6 g de cloruro de sodio (NaCl)
6.1.5 Colector, con válvulas (autoclave) y conexiones de manguera.
en 970 ml de agua en un 2-L matraz con un cierre apropiado.

6.1.6 Autoclavable Tubing, ( debe ser capaz de resistir una presión de 50 psi
8.1.3 Añadir 30 ml de caldo de lactosa ( 8.1.1 ) A 970 ml de
(350 kPa)).
solución de cloruro de sodio. Autoclave a 121 ° C durante 15 min.
6.1.7 Filtros de hogar, con conexiones de la manguera.
6.1.8 Abrazaderas. 8.2 Frozen Método Cell Pegar:
6.1.9 Incubadora, 30 6 2 ° C. 8.2.1 Medio de Crecimiento A- Disolver en agua y diluir a 1
6.1.10 Banco de flujo laminar. L. autoclave a 121 ° C durante 15 min (pH 6,8 a 7,0).
6.1.11 Smooth-Tip fórceps. Tripticasa peptona (o Casitona) 7,5 g

6.1.12 Filtro de ensayo. Extracto de levadura 2,5 g

Cloruro de sodio (NaCl) 0,5 g
Sulfato de magnesio (MgSO 4 · 3H 2 O) 0,35 g
7. pureza de los reactivos y materiales
8.2.2 Cosechar-tapones Disolver 0,790 g de fosfato de potasio monobásico
7.1 La pureza de Reagents- deberán utilizarse productos químicos de grado reactivo. A
(KH 2 correos 4) y 1,0 g de K 2 HPO 4 en 100 ml de glicerol (C 3 H 8 O 3). Ajustar a pH 7,2
menos que se indique lo contrario, todos los reactivos se ajustarán a las especificaciones de
con solución 0,1 N de hidróxido de potasio. Diluir a 1 L con agua y esterilizar a
la American Chemical Society, donde tales especificaciones están disponibles. 4
121 ° C durante 15 min.

7.2 La pureza de Agua A menos que se indique lo contrario, las referencias a agua se 8.2.3 Solución de hidróxido potásico (0,1 N) - Disolver 5,61 g de hidróxido de
entenderá agua reactivo, Tipo IV según se ha definido en Speci fi cación D1193 . potasio (KOH) en agua y diluir a 1 L en un matraz volumétrico.

8.2.4 Agar de soja tríptico Prepara según las instrucciones del fabricante.

8.2.5 Soja tríptico Broth- Prepara según las instrucciones del fabricante.
4 Reactivos químicos, la Sociedad Química Americana Especi fi caciones, American Chemical Society,
Washington, DC, www.chemistry.org. Para sugerencias sobre las pruebas de reactivos no incluidos por la
American Chemical Society, véase Normas AnalaR para Laboratory Chemicals, BDH Ltd., Poole, Dorset,
5 Disponible a partir de la American Public Health Association (APHA), 800 I Street, NW, Washington,
Reino Unido y Estados
DC 20001-3710, http://www.apha.org.
Farmacopea de los Estados Unidos y el Formulario Nacional, Convención de la Farmacopea de los Estados Unidos,
Inc. (USPC), Rockville, MD, http://www.usp.org.

HIGO. 1 Configuración de la prueba para las pruebas de retención de bacterias

2
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8.3 Reactivos y materiales analíticos:
8.3.1 M-Plate Count agar Prepara según las instrucciones del fabricante.
8.3.2 Agua de peptona (1 g / L) - Disolver la peptona en agua. Dispensar volúmenes
adecuados, para la preparación de diluciones decimales, en recipientes con tapa de rosca.
Autoclave a 121 ° C durante 15 min.
8.4 B. diminuta ( ATCC 19146).
8.5 Los filtros de membrana analíticos, 47-mm o diámetro 142 mm, 0,45 m de
tamaño de poro, 130 a 160 m de espesor.
8.6 Los platos de Petri, 150-mm de diámetro.
9. métodos para la preparación de la exposición bacteriana Stock Suspensión
9.1 General- Los dos métodos siguientes se han utilizado ampliamente para la
preparación de B. diminuta suspensiones reto. La presentación de estos métodos
no significa que se excluyan otros métodos igualmente válidos para la
preparación de B. diminuta. Es importante, sin embargo, que cualquier BP.
diminuta
suspensión de prueba utilizada es monodispersa y cumple con los criterios establecidos
en la Sección 10 .
9,2 Reconstituir el cultivo de acuerdo con las instrucciones pro-
RESPETA por la American Type Culture Collection (ATCC). Comprobar la pureza de
la cultura reconstituida por medio de placas de racha. Examine para morfología de la
colonia uniforme, e identificar de una sola célula aísla como B. diminuta de
conformidad con la Sección
10 .
9.2.1 de las Culturas Preparar cultivos madre de células individuales aislados de 9.2 . Inocular
tubos inclinados de agar de soja tríptico y se incuba a 30 6 2 ° C durante 24 h. cultivos inclinados
de superposición con aceite mineral estéril y se almacena a 4 ° C. Compruebe semanal para la
viabilidad y pureza. Alternativamente, semisólidos soja cultivos de agar de arma blanca trípticos
pueden ser sustituidos por los cultivos inclinados.
9.2.2 Almacenamiento a largo plazo de las Culturas Liofilizar o almacenar en nitrógeno líquido.
9.3 Preparación del Reto de la suspensión en solución salina Lactosa Caldo:
9.3.1 Inocular 10 ml de caldo de soja tríptico estéril con Stock
cultura ( 9.2.1 ) Y se incuba a 30 6 2 ° C durante 24 h.
9.3.2 Transferencia de 2 ml de caldo de cultivo agitado a 1 L de agua estéril
caldo de lactosa solución salina, remolino para mezclar inóculo y se incuba a 30
6 2 ° C durante 24 h. Comprobar la pureza de caldo de semilla.
norte beneficios según objetivos 1-Saline suspensión de caldo de lactosa se puede almacenar a 4 ° C durante hasta 8 h
antes de su uso.
9.3.3 Determinar la concentración de células viables en el
desafiar suspensión de acuerdo con la Sección 11 (Concentración esperada es de 10 7 a
10 8 células / ml).
9.3.4 Identificar los organismos como B. diminuta de conformidad con la Sección 10 .
9.4 Preparación de la célula Pega Frozen de B. diminuta:
9.4.1 Inocular 10 ml de medio de crecimiento estéril A ( 8.2.1 )
con el cultivo de reserva ( 9.2.1 ) Y se incuba a 30 6 2 ° C durante 24
h.
9.4.2 Transferencia de 10 ml de la suspensión bacteriana a partir de 9.3.1
en 500 ml de estéril Crecimiento MediumA y se incuba a 30 6
2 ° C durante 24 h.
3
9.4.3 Preparar 10 l de un cultivo de siembra mediante la transferencia de 200 ml
de la suspensión bacteriana a partir de 9.4.2 en 10 L de de crecimiento estéril Medio
A. Incubar a 30 6 2 ° C durante 24 h.
9.4.4 inocular el 10 L del cultivo de siembra en 500 L de
Medio de Crecimiento A. Grow aeróbicamente a 30 6 2 ° C. Monitorear el crecimiento
espectrofotométricamente a 500 nm, y la curva de crecimiento trama.
9.4.5 Cuando el cultivo alcanza la fase estacionaria, cosecha
las células por centrifugación continua flujo.
células 9.4.6 Vuelva a suspender en dos o tres volúmenes de frío
tampón de recolección estéril.
9.4.7 suspensión Centrifugar y resuspender las células en un igual
volumen de tampón de la cosecha. Determinar la concentración de células (concentración
esperada de células viables es 1 × 10 12 células / ml).
9.4.8 alícuotas de transferencia (por ejemplo, 50 ml) de pasta de células
en tubos de centrífuga de plástico estériles, y congelar usando lotes de acetona-hielo seco o
nitrógeno líquido. Almacenar pasta de células congeladas a -70 ° C.
9.5 Preparación del Reto de la suspensión de pasta de células congeladas:
9.5.1 Desinfecte el tubo que contiene la pasta celular por inmersión
tubo en 80% de alcohol etílico y Aming fl sólo el tiempo suficiente para quemar la mayor parte
del alcohol. Utilice pinzas estériles para sujetar el tubo.
9.5.2 asépticamente quitar el tapón del tubo y soltar el
tubo en un Erlenmeyer estéril matraz contenía una barra de agitación magnética estéril
y 20 volúmenes de células de una solución estéril de
0,9% de NaCl que contiene 0,001-0,002 M MgCl 2 a temperatura ambiente (por
ejemplo, transferir una alícuota de 50 ml de pasta de células congeladas en 1 L de
solución estéril).
norte beneficios según objetivos 2-MgCl 2 debe estar en la solución antes de añadir la pasta de células congeladas para
impedir el dumping durante el deshielo.
9.5.3 Colocar el matraz en una unidad de agitación magnética y mezclar
hasta que todo el contenido del tubo se suspende de manera uniforme (aproximadamente 40 min).
9.5.4 Determinar la concentración de células viables de acuerdo
a la Sección 11 (Concentración esperada de la suspensión de células es de 1 a 2 x 10 10 células
/ ml).
9.5.5 identificar el organismo como B. diminuta de conformidad con la Sección 10 .
10. La identificación de B. diminuta
10.1 Morfología colonial:
10.1.1 Las colonias de B. diminuta son de color amarillo-beige, ligeramente convexa,
completa y brillante.
10.1.2 A 30 ° C (temperatura óptima de crecimiento) colonias son
microscópico para identificar después de 24 h y de 1 a 2 mm de diámetro después de 36 a 48 h.
10.2 Examinación microscópica:
10.2.1 Preparar una tinción de Gram.
10.2.1.1 Examinar la preparación con una luz compuesto
microscopio fi TTED con un micrómetro calibrado ocular y una lente de objetivo de
inmersión en aceite con un buen poder de resolución (por ejemplo, un objetivo
acromáticos con una apertura numérica de 1,2 o mayor). Observar varios campos
microscópicos para el tamaño y la disposición de las células de organismos.
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10.2.1.2 preparaciones teñidas deben revelar un Gram- 11,6 Incubar la membrana o extenderse placas de ensayo a 30 6
, Pequeño, organismo negativo en forma de barra sobre 0,3 a 0,4 m por 2 ° C durante 48 h.

0,6 a 1,0 m de tamaño, que se producen principalmente como células individuales.

11.7 Contar las colonias en las placas que muestran entre 30
10.2.2 Preparar una mancha flagelos (opcional). B. diminuta se caracteriza
y 300 colonias (de 20 a 200 colonias sobre filtros de membrana fi) y calcular la celda
por una sola, flagelo polar.
de concentración / ml de las suspensiones originales.
10.3 Caracterización bioquímica:
11.8 Comparar el título viable con el microscópico directo
10.3.1 Realizar una serie de la siguiente bioquímica
recuento determinado de 11.1 . El recuento viable no debe ser inferior al 25% del
ensayos de caracterización. B. diminuta da los resultados indicados: 6
número total de células.
B. diminuta
Prueba
(19146 ATCC) 12. Preparación de

La formación de esporas - 12.1 Instalar el filtro a ensayar en la carcasa. envolver el

De medio de glucosa, abierto -
conexiones de entrada y de salida con papel autoclave, y autoclave de acuerdo
De medio de glucosa, sellada -
De etanol medio (3%), abierto +
con las instrucciones del fabricante. Alternativamente, la prueba de filtro se puede
De etanol (3%) medio, sellado - esterilizar con vapor en situ o gamma irradiado de acuerdo con las instrucciones
indol -
del fabricante. El procedimiento de esterilización debe ser validado el uso de
rojo de metilo -
Acetylmethylcarbionol - indicadores biológicos, termopares u otros dispositivos apropiados (dosímetros).
gelatinasa -
Aerobio +
catalasa +
Citocromo (indofenol) oxidasa + 12.1.1 asépticamente realizar una prueba de integridad en el filtro
El crecimiento en agar MacConkey + con un procedimiento adecuado recomendado por el fabricante de filtro.
Denitri fi cación +
ADNasa (ADNasa agar prueba de BBL o -
equivalente) 12.2 Ensamble membranas filtrantes de análisis en fi Asam- ltro
la tolerancia Centrimide -
blies. Fije el tubo autoclavable 1 a 2 pies a las entradas y salidas. Envolver los

11. Preparación de Bacterial Challenge Suspensión extremos de la manguera con una única capa de papel autoclavable. Autoclave de
acuerdo con las instrucciones del fabricante por lo general de 30 a 45 min a 15 psi
11.1 Determine por microscópico directo contar el bacteriana
(103 kPa) y 121 ° C.
título de la suspensión. Esto determinará el número total, viables y no viables,
las células presentes. 12,3 Wrap la manguera del colector y la conexión (válvulas deben
estar en la posición abierta) en papel autoclave y autoclave. Alternativamente, el
11.2 Utilizando el volumen apropiado de un desafío de la
colector puede estar conectado a la salida de conjunto de filtro de prueba fi y
suspensión, preparar un volumen apropiado de una suspensión reto de B. diminuta en un
esteriliza en autoclave o in-situ de vapor esteriliza simultáneamente. Esto
caldo de solución salina lactosa o solución salina estéril para contener un total mínimo de
eliminará conexión uno aséptica aguas abajo antes de la prueba. Este
10 7 organismos por centímetro cuadrado de prueba fi área de filtro 10 10 m / ft 2. Mezclar
procedimiento de esterilización debe ser validado utilizando indicadores o
bien.
termopares biológicos.
11,3 asépticamente extraer una muestra de la fíos preparados
suspensión Lenge de B. diminuta.
12.4 Lugar todas las unidades esterilizadas en flujo laminar banco de
11.4 Dentro de un flujo laminar capó, asépticamente preparar dilución montaje.
ciones de la suspensión a través de 10 -6 usando 0,1% de agua de peptona.
12.5 El recipiente a presión y la conexión de corriente arriba
tubos no necesita ser tratado en autoclave, pero debe ser limpiado a fondo,
11.5 Realizar el ensayo de células viables, por duplicado, utilizando el desinfectados, y barrió con agua estéril antes de la prueba. El recipiente puede
ensayo de filtro de membrana o ensayo de placa de propagación directa bajo condiciones que ser desinfectada con una solución de hipoclorito de sodio al 1 + 999 dilución de
son similares a los especificados fi para pruebas de esterilidad en la edición actual de la Farmacopea
5% o 70% de etanol, se escurre, y se lava a fondo con agua.
de los Estados Unidos. 7

11.5.1 Para el ensayo de filtro de membrana fi, utilizar 1 ml de la

12.6 Realice todas las conexiones asépticamente en el flujo laminar
10 -4 a través de la 10 -6 diluciones. Colocar 50 ml de solución de NaCl al 0,9%
banco (ver Figura 1 para el sistema de prueba).
estéril en el embudo del soporte de filtro antes de añadir las alícuotas de 1,0 ml
de las diluciones decimales. Filtrar y lavar las paredes del embudo con 50 ml de 13. Procedimiento de prueba 8
solución estéril de NaCl al 0,9%. Retirar membrana ensayo de embudo, y colocar
13.1 Controlar- El control se ejecuta inmediatamente antes de la prueba de
en medio de agar.
provocación bacteriana, y el control y análisis desafío filtros se incuban
simultáneamente.
11.5.2 Para el ensayo de placa de propagación directa, utilice 0.1 ml de
13.1.1 Añadir un volumen suficiente de agua tamponada estéril o
10 -3, 10 -4, 10 -5 diluciones.
solución salina estéril al recipiente de presión.

13.1.2 Cierre las válvulas A, B, C.

6 La confirmación de la identidad de B. diminuta también se puede lograr usando métodos cuali fi cados de 13.1.3 Aumentar la presión del recipiente a 30 psi (207 kPa).
base molecular o de otro tipo (por ejemplo, 16S rRNA secuenciación, FAME).

7 Disponible a partir de la Convención de la Farmacopea de los Estados Unidos (USP) 12601 Twinbrook Pkwy, 8 filtros hidrófobos deben ser pre-humedecidos antes de la exposición. Un método para conseguir esto se

Rockville, MD 20852, http://www.usp.org. describe en anexo A1 .

4
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13.1.4 Abrir la válvula A lentamente y fi ll el conjunto de filtro de prueba montaje para eliminar todo el líquido. Transferir asépticamente la membrana del
con el líquido. La salida de aire desde el conjunto de filtro de prueba fi en un desinfectante adecuado. conjunto de filtro de análisis desafío en agar de recuento en m-placa en una placa de
Cuando el conjunto de prueba de filtro está lleno de líquido, cierre la válvula de ventilación. Petri. Se incuba a 30 6 2 ° C. Registrar el número de colonias observadas a las 48 h y
a los 7 días. Identificar cada colonia como B. diminuta o contaminante (Sección 10 ).
13.1.5 Válvula C Open (análisis conjunto de filtro de control). Respiradero
aire desde el conjunto de filtro de análisis de control en un desinfectante adecuado. Cerrar la
13.3 Prueba de integridad- Realizar una prueba de integridad en el filtro de prueba de fi
válvula de ventilación cuando el conjunto de filtro de análisis de control está llena de líquido.
acuerdo con el procedimiento recomendado por el fabricante de filtro al final de la prueba de
provocación.
13.1.6 Uso de la válvula A, ajustar el flujo a 1,0 L / min.
14. Presentación de los Resultados
13.1.7 Después de todo el volumen ha sido filtrada de la válvula, cerca
A y luego la válvula C. 14.1 Filtro identi fi cationes Informar del tipo de filtro, número de catálogo, fabricante,
13.1.8 Cerrar la presión de aire y liberar la presión en número de serie, la clasificación de tamaño de poro del fabricante, área efectiva de la
buque. filtración y otros datos pertinentes.
13.1.9 abrazadera el tubo cerrado entre la válvula C y la 14.2 Condiciones de operación- Informar de la presión, presión diferencial, la
análisis de control de montaje de filtro, luego se corta el tubo entre la abrazadera y la temperatura, velocidad de flujo y otros parámetros pertinentes.
válvula C. Transferir el conjunto de filtro de análisis de control al flujo laminar capó.
Aplicar vacío brevemente (15 s) en el lado aguas abajo del conjunto de filtro de
14.3 Las bacterias en reto Suspensión- Reporte la concentración de bacterias
análisis de control para eliminar todo el líquido. Transferir asépticamente la membrana
determinada en la etapa 11.7 . Calcular e informar el número total de bacterias
del conjunto de filtro de análisis de control en agar de recuento en m-placa en una
en la suspensión desafío.
placa de Petri. Se incuba a 30 6 2 ° C. Registrar el número de colonias observadas a
las 72 h y 7 días. 14.4 Las bacterias de filtrado:
14.4.1 Controlar- Informe el número de colonias observadas, en su caso, sobre la
membrana de filtro de análisis de control.
norte beneficios según objetivos 3-El análisis fi membrana de filtro de control debe tener un cómputo de cero bacterias para
14.4.2 Prueba- Informar el número de colonias observadas, en su caso, en la
una prueba válida.
membrana de filtro de análisis desafío. Informar cada colonia observado como B.
13.2 Desafío de la prueba:
diminuta o contaminante.
13.2.1 Añadir el volumen necesario de suspensión de bacterias a
14.5 Filtro Integridad- Informar de los parámetros y resultados de las pruebas de
el recipiente de presión.
integridad empleadas en los pasos 12.1.1 y 13.3 . Indicar si el filtro se juzgó que pasar o
13.2.2 Determinar la concentración real de bacterias viables
no cada una de las pruebas de integridad, y explicar los fundamentos de la sentencia.
en la suspensión desafío (Sección 11 ).
13.2.3 Cierre las válvulas A, B, C.
13.2.4 Aumentar la presión del recipiente a 30 psi (207 kPa). 14.6 Filtro Rendimiento- Calcular e informar el valor de reducción logarítmica.

13.2.5 Abrir la válvula A lentamente y fi ll el conjunto de filtro de prueba

norte beneficios según objetivos 4-La presencia de cualquier colonias sobre la membrana de filtro de análisis de control
con la suspensión de prueba. La salida de aire desde el conjunto de filtro de prueba fi en un
o de las colonias de organismos no prueba en la membrana de filtro de análisis desafío invalida la prueba.
desinfectante adecuado. Cuando el conjunto de prueba de filtro está lleno de líquido, cierre la
válvula de ventilación.
15. Precisión y Bias
Válvula B Abrir 13.2.6 (análisis conjunto de filtro desafío).
La salida de aire desde el conjunto de filtro de análisis desafío en un desinfectante 15.1 Métodos similares a los del método de ensayo anterior han sido
adecuado. Cerrar la válvula de ventilación cuando el conjunto de filtro de análisis desafío empleado por los fabricantes de filtro y usuarios filtrantes durante muchos años para
está llena de líquido. determinar las características de retención microbianas de filtros de membrana fi. La
precisión de este método de ensayo es más o menos el valor de reducción de un log
13.2.7 Uso de la válvula A, ajustar flujo de 2 a 4 × 10 -3 LPM / cm 2
(basado en Refs ( 1-9 )). 9
EPT.
13.2.8 Después de todo el volumen reto ha sido filtran, 15.2 El sesgo de este método de ensayo no se puede determinar.
Cerrar la válvula A y luego la válvula B.
15.3 Ejemplos de estos métodos están disponibles en las de referen-
13.2.9 Cerrar la presión de aire y liberar la presión en
Sección cias (ver las referencias ( 1-9 )).
el recipiente.

13.2.10 abrazadera el tubo cerrado entre la válvula B y la 16. Palabras clave

análisis desafío conjunto de filtro, luego se corta el tubo entre la abrazadera y la 16,1 retención bacteriana; filtración de líquido; filtros de membrana fi
válvula B. Transferir el conjunto de filtro de análisis reto para el flujo laminar
capó. Aplicar vacío brevemente (~ 15 9 Los números en negrita entre paréntesis se refieren a la lista de referencias al final de esta norma.

s) al lado aguas abajo del desafío análisis de filtro

5
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ANEXO

(Información obligatoria)

A1. PRE-humectación de membranas hidrófobas

A1.1 Material necesario A1.2.3 Cierre las válvulas A, B, C, y D (conjunto de válvula de 2 vías para salir USH fl).

Prueba A1.1.1 configuración deberá incluir una tercera salida del colector y una válvula de 2 vías

(válvula D) para permitir ushing fl de líquido pre-humectación. A1.2.4 Abrir conjunto de filtro de prueba fi válvula de ventilación. A1.2.5 Aumentar la presión

a 5 psi (34,5 kPa). A1.2.6 Abrir la válvula A lentamente y fi ll el conjunto de filtro con líquido
Reactivos A1.1.2 incluirán baja tensión superficial líquidos pre-humectación
miscibles en agua adecuados que son compatibles con las membranas filtrantes de pre-humectación. Cuando el conjunto de filtro está lleno de líquido, cierre la válvula de

para ser humedecida (por ejemplo, etanol, isopropanol, agua con tensioactivo). La ventilación.
tensión superficial máxima recomendada del líquido pre-humectación es de 26
dinas / cm 2.
Válvula D A1.2.7 abierto (para salir USH fl) y filtro de todo el volumen de líquido.

Procedimiento A1.2 Pre-humectante Descartar infiltrado en un desinfectante adecuado.

A1.2.1 Sincronización- Este procedimiento de pre-humectación debe llevarse a cabo A1.2.8 Cerrar la válvula A y luego la válvula D (para salir USH fl), liberar la

inmediatamente antes de realizar el control de prueba (ver presión del recipiente.

13.1 ). A1.2.9 Añadir un volumen suficiente de agua estéril al recipiente de presión.

A1.2.2 Añadir un volumen suficiente de líquido pre-humectación estéril al

recipiente de presión. El volumen requerido dependerá del tamaño del conjunto de Repita A1.2.10 A1.2.4 - A1.2.8 con agua estéril a ras del líquido pre-humectación
filtro de prueba fi y la membrana de humectación requisitos. del sistema de prueba. Un segundo USH fl agua puede ser necesaria para eliminar el
líquido pre-humectación residual.

Referencias

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