Seminario de Brucelosis

UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA
PRUEBAS DE LABORATORIO PARA EL

DIAGNÓSTICO DE BRUCELOSIS
ASIGNATURA:
PATOLOGÍA CLÍNICA Y MÉDICA TRANSFUSIONAL
DOCENTE:
DRA. LIDIA QUISPE GALINDO
ALUMNOS:
ORTEGA PALOMINO, JACKELINA
VI CICLO
ICA – PERÚ – 2018
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[PRUEBAS DE LABORATORIO PARA EL DIAGNÓSTICO DE BRUCELOSIS] 13 de setiembre del 2018
INDICE
Pág.
INDICE 02
INTRODUCCIÓN 03
CAPÍTULO I: BRUCELOSIS 04
1.1 DEFINICIÓN DE BRUCELOSIS 04
1.2 ETIOLOGÍA 04
1.3 SIGNOS Y SÍNTOMAS 05
1.4 ESTRUCTURA ANTIGÉNICA DE LA BARTONELLA 05
1.5 FISIOPATOLOGÍA 05
1.6 TRANSMISIÓN 10
1.7 PREVENCIÓN 11
CAPÍTULO II: PRUEBAS DE LABORATORIO PARA DIAGNÓSTICO DE
13
BRUCELOSIS – MÉTODOS DIRECTOS
2.1 CALDO Y AGAR TRIPTOSA 13
2.2 TRIPTICASA SOYA 14
2.3 PRODUCCION DE INDOL 15
2.4 AGAR BRUCELLA 16
2.5 MEDIO DE RUIZ CASTAÑEDA 18
2.6 EXAMEN MICROSCÓPICO 19
2.7 SUBCULTIVO Y ASPECTO COLONIAL 19
2.8 REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR) 19
CAPÍTULO III: PRUEBAS DE LABORATORIO PARA DIAGNÓSTICO DE
20
BRUCELOSIS – MÉTODOS INDIRECTOS
3.1 PRUEBA DE AGLUTINACIÓN EN TUBO ESTÁNDAR 20
3.2 MERCAPTOETANOL 21
3.3 PRUEBA DE COOMBS 21
3.4 ROSA DE BENGALA 22
3.5 PRUEBA DE HUDDLENSON 23
3.6 ELISA 25
3.7 ENZIMOINMUNOANÁLISIS 27
3.8 INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA Y FIJACIÓN DE
27
COMPLEMENTO
CONCLUSIONES 28
RECOMENDACIONES 29
BIBLIOGRAFÍA 31
2
INTRODUCCIÓN
Se conoce con el término brucelosis al conjunto de enfermedades ocasionadas, tanto en el

hombre como en los animales (zoonosis) por microorganismos del género Brucella. Incluye,
por consiguiente, tanto las diferentes formas clínicas de la infección humana como los
diversos cuadros que se presentan en el ganado, sobre todo en forma de abortos epizoóticos.
La expresión "brucelosis humana", es más correcta que las denominaciones "fiebre
ondulante" o "fiebre de Malta", que hacen referencia a una de sus características clínicas o a
una localización geográfica, respectivamente. Desde el punto de vista médico, sanitario y
económico, la brucelosis representa un problema de primer orden, fundamentalmente en
España, donde es todavía endémica, suponiendo costes económicos muy elevados.
Es causada por microorganismos del género Brucella spp, que son un grupo de bacterias
intracelulares, inmóviles y de crecimiento lento. B. abortus, B. suis, B. canis y B. melitensis
son patógenas en humanos.
Las causas principales de infección son a través de la ingesta de leche no pasteurizada y por
el contacto con animales infectados. El lipopolisacárido que se encuentra en la membrana de
la bacteria es el mayor determinante de virulencia. Las manifestaciones clínicas son
inespecíficas, existiendo formas localizadas hasta en un 30% de los casos. El diagnóstico se
basa en el aislamiento del microorganismo en cultivos de sangre y otros tejidos. Desde el
punto de vista serológico existen diversos métodos diagnósticos, destacando la aglutinación
en tubo y la reacción en cadena de polimerasa. El tratamiento recomendado por la
Organización Mundial de la Salud es de acuerdo a tres esquemas y el de elección es a base
de aminoglucósidos y tetraciclinas. Las principales causas de mortalidad son la endocarditis
y la meningoencefalitis. La prevención incluye principalmente el evitar el contacto con
animales infectados y la pasteurización de productos lácteos.
CAPÍTULO I: BRUCELOSIS
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1.1 DEFINICIÓN DE BRUCELOSIS

También denominada fiebre malta u ondulante, es una enfermedad zoonótica
infecciosa causada por especies de la bacteria del género Brucella.
Las bacterias se transmiten de animales a humanos por ingestión a través de productos
alimenticios infectados, contacto directo con un animal infectado o inhalación de
aerosoles. Los seres humanos son huéspedes accidentales, pero la brucelosis sigue
siendo un importante problema de salud pública en todo el mundo y es la infección
zoonótica más común.
1.2 ETIOLOGÍA
La enfermedad es causada por diferentes especies del género Brucella, el cual tiene las
siguientes características:
 Cocobacilos Gram negativos, de 0.5 a 0,7 um de ancho por 0,6 a 1,0 um de
longitud.
 No forman cápsula, esporas, ni flagelos
 No toman coloración bipolar
 No son ácido resistentes, pero pueden resistir la decoloración por ácidos débiles o
álcalis.
 Son aerobios e inmóviles. Algunas cepas requieren CO (5% 10%) para su
crecimiento.
 Tienen metabolismo respiratorio (oxidativo)
Organismo Reservorio de animales Distribución geográfica

Brucella melitensis Cabras, ovejas, camellos Mediterráneo, Asia,
América Latina, partes de
África y algunos países del
sur de Europa
Brucella abortus Vacas, búfalos, camellos, En todo el mundo
yaks
Brucella suis Cerdos (biotipo 1-3) América del Sur, Sudeste
Asiático, Estados Unidos
Brucella canis Caninos Cosmopolita
Brucella ovis Oveja No hay casos humanos
conocidos
Brucella neotomae Roedores No se sabe que cause
enfermedades humanas
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Brucella Animales marinos, Informes de casos que

pinnipediae y Brucella ballenas, delfines, focas describen algunos casos
cetaceae humanos (principalmente
neurobrucellosis)
Características bioquímicas
 Catalasa positiva
 Hidrolizan la urea.
 Oxidasa positiva.
 Reducen nitratos a nitritos (excepto B. ovis)
 Producen hidrógeno sulfurado.
 Indol negativo
 No hidrolizan la gelatina ni lisan la sangre
 Reacción negativa al rojo de metilo.
 Temperatura óptima de crecimiento de 37°C.
 pH de crecimiento entre 6,0 a 7,0.
1.3 SIGNOS Y SÍNTOMAS

Brucelosis aguda: Periodo de incubación es variable entre 1 a 3 semanas, Los síntomas
incluyen debilidad, cefalea y dolor muscular o articular. Hay sudoración copiosa, sobre
todo durante la noche, precedida o acompañada de escalofríos. La esplenomegalia es
común y suele palparse el hígado. Aumento de temperatura vespertino. Si la
enfermedad es prolongada, la fiebre puede seguir un patrón ondulante.
Brucelosis crónica: Considerada así cuando persiste o recurre por un periodo de seis
meses o más. Síntomas de influenza recurrente, debilidad, cefalea, dolor muscular o
articular y sudoración.
1.4 ESTRUCTURA ANTIGÉNICA DE LA BARTONELLA
Como otras bacterias Gram negativas, la envoltura celular de los microorganismos

Brucella está formada por una membrana interna, membrana externa y un espacio
periplásmico intermedio que contiene algunas enzimas y proteínas relacionadas con el
transporte y un gel glicopeptidico denominado peptidoglicano responsable de la forma
e integridad osmótica de la bacteria.
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La membrana externa contiene fosfolípidos distribuidos asimétricamente, proteínas y

un lipopolisacarido (LPS), considerado el principal antígeno. Éste último incluye dos
tipos de complejos:
 Complejo liso de lipopolisacárído (S-LPS); constituido por el lípido A, el núcleo y

polisacárido 0
 Complejo rugoso de lipopolisacarido (R-LPS); carece de cadena 0 o esta reducida
a muy pocos reciduos.
Estos complejos lisos o rugosos se presentar de acuerdo a la clasificación revisada para
las cepas lisas o rugosas del género Brucella.
El factor de virulencia principal es el lipopolisacarido (LPS) de la pared celular del

microorganismo. Las cepas lisas que contienen S-LPS son más virulentas y resistentes
a la muerte intracelular por leucocitos polimorfonucleares. Además, el género Brucella
puede sobrevivir y multiplicarse en monocitos del sistema retículoendotelial (SRE), la
localización en el SRF puede explicar las manifestaciones clínicas de la infección como
linfoadenopatías, hepatoesplenomegalia y las complicaciones óseas.
El LPS es el principal antígeno que participa en las pruebas ordinarias: pruebas de

aglutinación y de fijación de complemento. Los LPS situados en la superficie y algunos
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antígenos proteínicos interviene en las pruebas diagnósticas y en la actividad protectora

de vacunas. Los haptenos NH y poli B relacionados con los LPS, se usan en la prueba
de inmunodifusion radial para diferenciar los animales infectados de los inmunizados.
Se producen reacciones serológicas cruzadas, entre las especies lisas de Brucella y

Escherichia coli 0:116 y 0:117. Francisella tularensis, el grupo salmonella N(0:30) de
Kauffman White, Stenetrophomonas (Pseudomonas) maltophilia, Vibrio cholerae y
Yersinia enterocolitica 0:0. Estas reacciones cruzadas se atribuyen a la similitud de
antígenos lipopolisacaridos superficiales de estas bacterias y porque la mayoría se
caracterizan por mostrar títulos, pudiendo diferenciarse por pruebas complementarias.
1.5 FISIOPATOLOGÍA
Después de ingresar al cuerpo humano, el patógeno se traslada al sistema linfático para

replicarse en los nódulos linfáticos regionales. La diseminación hematógena, es
seguida por la colonización de la bacteria del sistema retículoendotelial: hígado, bazo
y médula ósea.
El mecanismo subyacente por el cual Brucella es capaz de ingresar y sobrevivir dentro

de las células fagocíticas, aún no es claro. En los macrófagos, Brucella parece estar
adaptada al ambiente hostil y, en principio, la base de la cronicidad de la infección por
Brucella, radica en la capacidad de la bacteria de permanecer prolongadamente en el
compartimiento fagosómico de la célula de defensa hospedera, antes de alojarse en el
retículo endoplásmico de la misma, donde continúa su replicación en un recinto más
favorable, y además, se protege de la acción de los antibióticos. Se han caracterizado
muchos componentes antigénicos de Brucella, sin embargo, el antígeno que domina la
respuesta de anticuerpos es el lipopolisacárido.
Las especies de Brucella son patógenas intracelulares facultativas, propiedad que las
mantiene protegidas de la acción de los antibióticos, y de los mecanismos efectores
dependientes de anticuerpos; esto justifica la naturaleza crónica de la infección ya que
son capaces de adherirse, penetrar y multiplicarse en una gran variedad de células
eucariotas tanto fagocíticas como no fagocíticas. Cuando estas bacterias ingresan al
organismo pueden ser fagocitadas por los polimorfonucleares (PMN) y macrófagos
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como parte de la inmunidad innata. Si no son eliminadas llegan por vía linfática a los
ganglios regionales correspondientes pudiendo desde allí invadir el torrente sanguíneo,
donde son fagocitadas por los PMN y macrófagos circulantes y transportadas, de esta
manera, a los diversos órganos donde pueden sobrevivir y multiplicarse dentro de las
vacuolas de los fagocitos circulantes y tisulares. Los mecanismos de ingreso de la
bacteria a estas células no están suficientemente aclarados aunque se presume que el
LPS y las proteínas de la membrana externa podrían participar en los mismos, mediante
receptores tipo manosa o integrinas, respectivamente. Las células de la placenta son
ricas en receptores de manosa y en un factor de crecimiento conocido como eritritol,
presente en tejidos placentarios animales, lo que explica la avidez de Brucella por los
mismos. La supervivencia de Brucella dentro de las células se ha asociado con la
síntesis de enzimas antioxidantes y a la producción de GMP (guanosina 5´monofosfato)
y adenina, que inhiben la fusión fagosoma-lisosoma, la desgranulación, la activación
del sistema mieloperoxidasa-haluro y la producción del TNF-α.
Respuesta Inmune
El ingreso de Brucella en el organismo induce la activación de los mecanismos de

defensa que se inician con la participación de algunos componentes de la inmunidad
innata, como el complemento (C), los neutrófilos y los macrófagos. La activación del
C por las vías clásicas y alterna juega un rol muy importante en la resistencia contra
bacterias gram negativas. Existen controversias en cuanto a la capacidad que posee el
LPS de Brucella de activar la vía alterna del C, sin embargo, la activación de la vía
clásica puede iniciarse con la presencia de bajas concentraciones de IgM e IgG anti-
LPS, lográndose de esta forma la lisis bacteriana. Los neutrófilos son las primeras
células del huésped que se ponen en contacto con Brucella. La opsonización de las
bacterias por anticuerpos y complemento facilita su fagocitosis. Como ya se ha
mencionado, Brucella es capaz de sobrevivir y multiplicarse dentro de los neutrófilos
durante el curso de la infección y de esta forma ser transportada a los tejidos linfoides.
Para que se produzca la muerte de las bacterias intracelulares es necesaria la
desgranulación de los gránulos de los neutrófilos, con la consiguiente liberación de
mieloperoxidasa. Se ha demostrado que Brucella posee mecanismos que inhiben esta
desgranulación y evitan así su destrucción. Los neutrófilos de las distintas especies
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animales reaccionan en forma diferente ante Brucella. Así, los neutrófilos de los
cobayos no son capaces de destruir las cepas lisas, mientras que la actividad bactericida
de los neutrófilos bovinos frente a estas cepas es mayor que la de los neutrófilos
humanos, no registrándose diferencias entre los dos últimos frente a las cepas rugosas.
Otras células que reaccionan ante la presencia de Brucella son los macrófagos. El
ingreso de la bacteria a los mismos se produce a través de la interacción entre la
molécula CD14 y el LPS. Esta interacción induce también la producción de IL-12 que
estimula las células NK y los linfocitos T colaboradores o helper (LTH) CD4+, que
secretan IFN-γ, favoreciendo el desarrollo de una respuesta inmune
predominantemente mediada por LTH1.Este subgrupo de linfocitos T estimula
fundamentalmente la respuesta de tipo celular y participa en forma directa en la
protección contra microorganismos intracelulares, ya que su amplio patrón de
citoquinas incluye IL 2, 3, 6, 12, TNF-α y sobre todo IFN-γ, esencial para la activación
de macrófagos. Una vez fagocitada la bacteria, los macrófagos poseen la capacidad de
destruirla inmediatamente, pero del mismo modo que ha sido descripto para los
neutrófilos, Brucella es capaz de inhibir estos mecanismos de destrucción. El hierro
presente en los macrófagos tiene un papel preponderante en la eliminación de los
microorganismos ya que cataliza una reacción metabólica destinada a incrementar la
producción de inter mediarios reactivos del oxígeno, fundamentales en la eliminación
de patógenos intracelulares. Los linfocitos también son impactados por distintos
antígenos de Brucella. Las proteínas de las bacterias son procesadas dentro de la célula
presentadora de antígenos y sus péptidos asociados a moléculas CMH clase I y II son
presentados a los LTH CD4+ y LT citotóxicos (LTC) CD8+. Estos últimos son capaces
de lisar macrófagos y otras células infectadas con Brucella. El LPS es considerado un
antígeno T independiente, capaz de activar a los linfocitos B (LB) sin la participación
de los LTH. Los primeros anticuerpos que se generan en el curso de una infección son
de clase IgM, seguidos de IgG e IgA, dependiendo de la especie animal. Pueden
aparecer, dentro de la clase IgG, anticuerpos bloqueantes o no aglutinantes, también
llamados asimétricos, en especial en infecciones crónicas, donde suelen alcanzar títulos
elevados. Para clarificar el rol de los anticuerpos que se originan durante la infección
se han realizado numerosos ensayos experimentales en ratones, demostrándose que
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anticuerpos anti LPS inyectados en forma pasiva han logrado protegerlos contra
infecciones posteriores. Por su parte, estudios efectuados en bovinos han demostrado
que una elevada concentración de IgG durante una infección activa resulta perjudicial
ya que inhibe la lisis complemento dependiente, promueve la fagocitosis de los
microorganismos e incrementa la localización intracelular y la diseminación hacia los
distintos tejidos
1.6 TRANSMISIÓN
La susceptibilidad a la infección depende del estado inmunitario y nutricional del
individuo, del tamaño y vía de penetración del inóculo y de la especie de Brucella.
Las vías de entrada de la bacteria son la oral o ingestión, la respiratoria o inhalación, la
de contacto directo e inoculación accidental.
La vía oral (o por ingestión), ingestión de productos a base de leche no pasteurizada
es la principal fuente de infección, se da por consumo de leche o alguno de sus
derivados como el queso, crema o mantequilla preparados con leche no pasteurizada,
como es el caso del queso de cabra que por ser abundante y barato se utiliza en la
preparación de consumo popular: elotes preparados, esquites, picaditas o chiles
rellenos. Estos productos que utilizan queso de cabra, elaborado de manera artesanal
en las áreas rurales, son expendidos y consumidos en las áreas urbanas. Estudiantes y
amas de casa son la población más afectada por el inadecuado control sanitario de estos
alimentos.
La vía respiratoria (o por inhalación), relacionada con el trabajo que se desempeñe,
se origina por la inhalación de material desecado muy contaminado: excretas, pelo y
polvo de los corrales, aerosoles formados al manipular brucelas vivas en el laboratorio
y por autoinoculación accidental durante el manejo de vacunas en el campo.
La vía de contacto directo, representa el grupo de alto riesgo, es la relación directa
con los productos del aborto que contienen millones de brucelas vivas que penetran
fácilmente a través de conjuntiva y de la piel maltratada, cortada o reblandecida, así
como por el contacto o manejo de vísceras, sangre y excretas de animales enfermos.
Otra vía de infección suele presentarse por inoculación accidental del patógeno.
1.7 PREVENCIÓN
10
La prevención de la brucelosis depende del control de la enfermedad en los animales

domésticos, principalmente a través de la vacunación masiva de los mismos. Aún no
existe vacuna para la inmunización en humanos; esto obliga a procurar medidas
protectoras de higiene y control de alimentos.
La vigilancia con fines de detección puede pasar por la realización sistemática de

pruebas serológicas y de análisis de la leche, con técnicas como la prueba del anillo en
leche. Estas medidas de vigilancia pueden resultar de gran ayuda en las campañas para
eliminar la enfermedad. También se practican análisis de animales concretos con fines
de comercio o de lucha contra la enfermedad. En las zonas donde la brucelosis es
endémica suele utilizarse la vacunación para reducir la incidencia de la infección.
Existen varias vacunas con virus vivos modificados.
Cuando se está cerca de lograr la eliminación de la enfermedad es preciso aplicar un

programa de pruebas diagnósticas y sacrificios sanitarios para erradicarla por completo.
La mejor manera de prevenir la brucelosis humana es luchar contra la infección en los
animales. La pasteurización de la leche de animales infectados fue en su día muy
importante para reducir los niveles de infección en las personas.
Debemos tener en cuenta las medidas necesarias para la “Toma y Remisión de

Muestras”:
 La prevalencia de la enfermedad se realiza por vigilancia serológica.

 En campañas de vacunación se tomará una muestra al azar en animales sin
antecedentes de vacunación.
 En hatos pequeños muestrear por lo menos 10 animales y en hatos mayores un 10%
de animales sin vacunar.
 Las muestras deben estar debidamente identificadas y antes de comenzar cualquier
prueba verificar que el material se encuentre en condiciones apropiadas para
trabajar.
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CAPÍTULO II: PRUEBAS DE LABORATORIO PARA DIAGNÓSTICO DE

BRUCELOSIS – MÉTODOS DIRECTOS
2.1 CALDO Y AGAR TRIPTOSA
La triptosa se recomienda en formulaciones de caldo y agar. La triptosa se usa en la

preparación del caldo triptosa y la base de agar triptosa, útil para la siembra de
brucella.
CALDO TRIPTOSA:
El caldo triptosa se utiliza para el cultivo de Brucella spp.El caldo triptosa se prepara
con triptosa y se recomienda para el cultivo y aislamiento de bacterias patógenas y
saprofitas. Históricamente, se consideraba necesario incluir extracto o infusión de
12
carne como suplemento nutricional en medios de cultivo. La triptosa fue desarrollada

mientras se estudiaban las necesidades de crecimiento de Brucella spp. Huddleson
encontró que los medios de triptosa eran iguales o superiores a los medios de infusión
de carne, proporcionando uniformidad para el cultivo y diferenciación de organismos.
El caldo triptosa se puede usar como un medio base completo o suplementado con
enriquecimiento, la adición de tiamina, dextrosa y sales de hierro aumentaron el
crecimiento de Brucella. La adición de agar al 0.1% al caldo triptosa puede aumentar
el crecimiento de aerobios y anaerobios en medios líquidos. Los medios triptosa se
recomiendan en métodos estándar para pruebas alimenticias.
INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
Se considera positivo cuando hay crecimiento bacteriano cambio de coloración más

oscuro con manchas blancas visibles.
AGAR TRIPTOSA:
El exitoso aislamiento de Brucella . apoya el uso de los medios de triptosa como

medios ricos de uso general.
INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
Se considera positivo cuando hay crecimiento bacteriano de colonias blanquecinas.
FUNDAMENTOS DE TRIPTOSA CALDO Y AGAR:
El agar y el caldo triptosa se prepara con triptosa, el cual es hidrolizado y a la vez tiene
un gran valor nutricional ya que es utilizado como un medio rico en nitrógeno,
vitaminas ,minerales y aminoácidos ,al igual que produce un balance osmótico, para
medios de cultivo microbiológicos de brucella.
2.2 TRIPTICASA SOYA

Es un medio utilizado, para brucelosis ya que favorece el desarrollo en general y
aislamiento de una gran variedad de microorganismos aerobios(como brucella) y
anaerobios facultativos y estrictos. Al ser su suplemento con sangre permite el
crecimiento de microorganismos exigentes y al igual se ve su reacción hemolítica.
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Fundamento
El medio que se emplea de tripticasa soya Agar para el cultivo de Brucella por
que contiene peptonas o triptonas a las que se adiciona extracto de levaduras, suero o
sangre para favorecer el crecimiento de estas bacterias. En el medio de cultivo la
tripteina y la peptona de soya aportan nutrientes ricos en péptidos, aminoácidos libres,
bases púricas y primidinas, minerales y vitaminas. La peptona de soya además es fuente
de hidratos de carbono que estimulan el crecimiento de diversos microorganismos. El
cloruro de sodio mantiene el balance osmótico y el agar es el agente solidificante.
Puede ser utilizado como base a la cual se suplementa con nutrientes o con
antimicrobianos, lográndose un medio enriquecido y selecto.
El agregado de 5-10% sangre ovina desfibrilada estéril promueve el desarrollo de

bacterias exigente en sus requerimientos nutricionales y la adecuada observación de las
reacciones de hemolisis con otras bacterias.
El agregado de extracto de levadura en concentración de 0.5% favorece el crecimiento

de Brucella.
La Interpretación de resultados Colonias de Brucella en agar tripticasa soya con 5%

de suero bovino, incubadas a 37° C por 72 h de manera aerobia. Se observan colonias
pequeñas y traslúcidas. En 6 días de se observan colonias de mayor tamaño y opacas.
2.3 PRODUCCION DE INDOL
Esta prueba se realiza para determinar la capacidad de las bacterias para producir indol
a partir del triptófano.
MEDIO DE CULTIVO Y REACTIVO
Caldo triptonado
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Disuelva los ingredientes, reparta en tubos y esterilice en autoclave 15 minutos a 121°C

(15 libras de presión).
Reactivo de Kovac
Se prepara disolviendo el aldehído en el alcohol y añadiéndole el ácido lentamente. Se

reparte en pequeñas cantidades y se almacena en el refrigerador cuando no esté en uso.
RESULTADOS
Una reacción positiva es indicada por la

aparición de un anillo rojo en la superficie del
medio (capa alcohólica).
2.4 AGAR BRUCELLA
Se usa para el cultivo de Brucella spp. Y otros microorganismos exigentes en un

entorno de laboratorio. Brucella Agar no está diseñado para usarse en el diagnóstico de
enfermedades u otras afecciones en humanos.
Brucella Agar se prepara según la fórmula APHA para Albimi Broth. Brucella Agar es
un medio de uso general para el cultivo de Brucella spp. Y microorganismos exigentes
que incluyen Streptococcus pneumoniae, Streptococcus viridans y Neisseria
meningitis. Con la adición de sangre, Brucella Agar se usa para determinar las
reacciones hemolíticas bacterianas. Brucella Agar se puede utilizar como base para el
aislamiento de Campylobacter spp.
Fundamento
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El agar Brucella se desarrolló para el cultivo de las especies de Brucella a partir de

muestras de diagnóstico tales como sangre o de alimentos y otros materiales
potencialmente contaminados. Brucella Agar se prepara según la fórmula APHA para
caldo de Albimi, que se utiliza para el aislamiento de las especies de Brucella4-7. BD
Brucella Agar with 5% Horse Blood es particularmente útil para el cultivo de todos los
microorganismos aerobios, microaerófilos y anaerobios más exigentes, incluidos los
estreptococos, neumococos, Listeria, Brucella, Neisseria meningitidis, Haemophilus
influenzae y Helicobacter pylori1,6-10. Este medio favorece el crecimiento de
microorganismos exigentes debido a su contenido de peptonas, dextrosa, extracto de
levadura y sangre. Las peptonas suministran nitrógeno orgánico. El extracto de
levadura es una rica fuente de vitaminas del complejo B. La glucosa se utiliza como
fuente de energía. La sangre de caballo aporta los factores X y V, requeridos para el
crecimiento de determinados organismos: por ejemplo, Haemophilus influenzae. Se
debe tener en cuenta que las reacciones beta-hemolíticas dependen del tipo de sangre
añadida. Por ejemplo, los enterococos que hemolizan sangre de carneo sólo muy
raramente producirán una beta-hemólisis bien visible en sangre de caballo.
Staphylococcus aureus, que por lo general es beta-hemolítico en sangre de carnero, a
menudo no será hemolítico en sangre de caballo. Los estreptococos beta-hemolíticos y
Haemophilus haemolyticus pueden diferenciarse mediante tinción de Gram en un frotis
preparado a partir de la colonia.
Sensibilidad:
En contraposición, son bastante sensibles al calor, así una suspensión diluida de

brucelas, se destruye rápidamente al ser sometida a la pasteurización o al exponerla a
temperaturas de 60° C por 30 minutos. Sin embargo, una suspensión densa es mas
difícil de inactivar y se debe de prolongar el tiempo de exposición al calor o someterla
a temperaturas mas elevadas. Brucella es muy sensible a la radiación ionizante y se
mueren con rapidez al exponerla a la luz ultravioleta. También son sensibles, a la
mayoría de los desinfectantes de uso común, a las concentraciones recomendadas.
Como sucede en otras bacterias, la susceptibilidad se reduce en presencia de materia
orgánica o a bajas temperaturas. El etanol, isopropanol, iodóforos, hipoclorito diluido
y los fenoles sustituidos son eficaces para desinfectar la piel expuesta a Brucella.
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Especificidad:
Los medios que se emplean para el cultivo de Brucella contienen peptonas o triptonas
a las que se adiciona extracto de levaduras, suero o sangre para favorecer el crecimiento
de estas bacterias. Existen medios comerciales, cuya formulación reúne estos
requisitos. Las muestras de sangre, médula ósea y de líquido cefalorraquídeo de
preferencia se inoculan en botellas con medio doble (Ruiz Castañeda modificado).
Cuando aparece crecimiento visible, en la superficie del agar a las 24 h de incubación,
se descarta la botella y se toma otro cultivo. Brucella se desarrolla al cabo de 4-5 días.
En algunos casos, la aparición de crecimiento es tardía (6 semanas).
Resultados:
Después de la incubación, la mayoría de las placas mostrarán un área de crecimiento

confluente. Dado que el procedimiento de extensión de la muestra es, de hecho, una
técnica de dilución, se depositan cada vez menos microorganismos en las áreas en que
se realiza. Por consiguiente, una o más de estas áreas presentarán colonias aisladas de
los organismos que contenga la muestra. Por otra parte, el crecimiento de cada
organismo podrá medirse semi-cuantitativamente basándose en el crecimiento ocurrido
dentro de las áreas en donde se extienden las muestras. Para el aislamiento e
identificación de Brucella, consultar las referencias
2.5 MEDIO DE RUIZ CASTAÑEDA

Este método de hemocultivo en brucelosis, requiere un medio de agar, que se deja
solidificar sobre una de las paredes o caras de una botella, en tanto que cierta cantidad
de caldo queda en el fondo de la misma. La ventaja de este medio doble consiste en la
facilidad con que se determina si un cultivo es o no positivo.
Los que han adoptado este método usan botellas rectangulares o cilíndricas, pero en
ambos casos ocurre con frecuencia que la capa de agar se desprende de la pared de la
botella, particularmente cuando el equipo se expone a manipulaciones bruscas. Debido
a este inconveniente, el método no ha tenido mucho éxito en laboratorios y clínicas que
no disponen de facilidades suficientes para preparar convenientemente el equipo.
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La fase sólida está compuesta por Agar Tripticasa de Soya y Agar- Agar. La fase
liquida está compuesta por caldo de Tripticasa de Soya, Adicionado de Sulfonato
Sódico de Polianetol (SPS). El SPS actúa como anticoagulante e inhibidor del
complemento, factores opsonizantes y leucocitos, los cuales de no ser inhibidos pueden
destruir los patógenos presentes en la muestra. Contiene además un 5% de Sacarosa, la
cual aumenta las posibilidades de aislamiento de microorganismos, evitando la ruptura
y disolución de las bacterias por alteración de la membrana celular bacteriana. El medio
de Ruiz - Castañeda es un medio ideal para microorganismos aerobios patógenos de
crecimiento fastidioso como también para microorganismos del género Brucella.
Fundamento
Cuando un paciente por causas diferentes sufre invasión del torrente circulatorio por
un microorganismo patógeno, se presenta un cuadro clínico febril agudo que debe ser
diagnosticado, identificando el agente causal con el objeto de establecer un tratamiento
adecuado sobre una clara evidencia etiológica. Este procedimiento requiere el uso de
un sistema que permita cultivar la muestra, en este caso sangre colectada
asépticamente, ofreciéndole al posible agente etiológico amplias posibilidades de
crecimiento.
2.6 EXAMEN MICROSCÓPICO

Una vez observado el crecimiento en el medio difásico o cuando el aparato automático
de hemocultivo detecta un posible crecimiento, la simple tinción de Gram permite
hacer el diagnóstico presuntivo de la enfermedad. Brucella spp presenta unas
características tintoriales especiales: aunque no es una bacteria ácido-alcohol
resistente, no sufre decoloración con ácidos débiles. Así mismo, también la tinción de
Gram es peculiar: si el tiempo de exposición al alcohol-acetona es muy breve (simple
arrastre por el porta del decolorante, en vez de tiempos de decoloración más
prolongados), presenta una decoloración irregular, pudiendo observarse en la misma
muestra la coexistencia de pequeños cocobacilos gramnegativos y grampositivos. No
es extraño, en contra de los que se cree, tener un diagnóstico presuntivo de brucelosis
por hemocultivo en dos o tres días.
2.7 SUBCULTIVO Y ASPECTO COLONIAL
18
El subcultivo del medio difásico o del frasco procedente del aparato automático, en
medio con agar-sangre o agar-chocolate, muestra el crecimiento, al cabo de 48 horas,
de pequeñas colonias brillantes, de diferente tamaño y de color miel claro. Si no se
observan cuidadosamente las placas, en casos con crecimiento de escaso número de
colonias, se puede falsear erróneamente algún diagnóstico. Tras la tinción de Gram de
estas colonias para observar su aspecto característico, se realizará la reacción de la
oxidasa (positiva) y aglutinación con suero específico frente a Brucella, suficiente para
identificar el aislamiento.
2.8 REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)
Dada la extrema sensibilidad que muestra la detección de DNA bacteriano madiante
PCR en las distintas muestras estudiadas, es muy probable que en los próximos años
se aplique la PCR a muestras de enfermos con sospecha de brucelosis, permitiendo el
diagnóstico de la enfermedad con criterios de certeza en aquéllos casos en los que hoy
no podemos dar una respuesta precisa.
CAPÍTULO III: PRUEBAS DE LABORATORIO PARA DIAGNÓSTICO DE

BRUCELOSIS – MÉTODOS INDIRECTOS
3.1 PRUEBA DE AGLUTINACIÓN EN TUBO ESTÁNDAR
Desde hace mucho tiempo es la prueba más utilizada. Es sencilla, sensible y específica.
Puede realizarse en tubo o en placa de microtitulación y al igual que Rosa de Bengala
detecta anticuerpos para el LPS. Mide globalmente anti- IgG e IgM.
Se realiza enfrentando diferentes diluciones del suero problema con una suspensión de
brucelas formolizadas a una concentración preestablecida y estandarizada.
La actividad aglutinante de un suero esta ligada a inmunoglobulinas de las clases IgM,

IgG e IgA, especialmente a IgM. Los anticuerpos aglutinantes hacen su aparición muy
pronto y alcanzan su título más elevado rápidamente. En la enfermedad aguda son ya
frecuentes títulos muy superiores a 1/160 - 1/320 (100-200 UI/mL), casi siempre
superiores a 1/512 en la primera muestra,
19
Títulos débilmente positivos (< 1/80) no permiten el diagnóstico de enfermedad activa

ya que pueden ser consecuencia de un simple contacto con el microorganismo o
sensibilización. Muchos individuos que viven en zonas endémicas o que practican
profesiones relacionadas con cierto tipo de ganado presentan estos títulos.
 Utilizado para el diagnóstico in vitro de la brucelosis humana y animal

 El antígeno utilizado es una suspensión de células de Brucella abortus inactivadas
por calor
 Es llamada también prueba lenta en tubos al necesitar 48 horas para la lectura de las
reacciones de aglutinación.
 Método para corroborar los resultados de otras pruebas serológicas
Lectura de la prueba realizada
La lectura se realiza sobre un fondo negro con una luz que atraviesa los tubos. Las
determinaciones se basan en la claridad turbidez de la mezcla y en la firmeza de los
grumos al agitar suavemente los tubos.
Aglutinación Completa:
El líquido de la mezcla de suero – antígeno aparece claro con una sedimentación de

grumos al final del tubo, que al agitarlo suavemente se suspenden en el líquido.
Aglutinación Incompleta:
La mezcla suero - antígeno se presenta parcialmente clara, que al agitar suavemente

el tubo aparece una leve suspensión de grumos.
Aglutinación Negativa:
La mezcla a suero - antígeno aparece turbia, a una suave agitación no aparecen

grumos.
Interpretación de resuItados
En sueros humanos se considera como título positivo una dilución 1/200. Un título de
l/100 es considerado sólo como presuntivo.
20
3.2 MERCAPTOETANOL
Prueba selectiva que detecta solamente la presencia de IgG. Se basa en que los
anticuerpos IgM se degradan debido a la acción de ciertos compuestos que contienen
el radical tiol, tales como el 2- mercaptoetanol. Las moléculas de IgG, en cambio no
sufren un efecto que altere su actividad para las reacciones aglutinantes. En el hombre
esta prueba se debe incorporara en el diagnóstico de rutina. La prueba 2-
mercaptoetanol es útil para detectar infecciones crónicas de humanos o animales
3.3 PRUEBA DE COOMBS

Es de gran interés para el diagnóstico de la brucelosis crónica. Se utiliza para demostrar
la presencia de anticuerpos aglutinantes y no aglutinantes, fundamentalmente IgG. El
suero de Coombs (inmunoglobulina humana) se encargaría de facilitar la aglutinación
de los anticuerpos no aglutinantes del suero problema, fijados a la suspensión
antigénica de B. abortus y aporta, en 48 h, una información complementaria de gran
utilidad. El título obtenido es, por ello, como mínimo el de la aglutinación y
generalmente es mucho más elevado, tanto más cuanto mayor es el tiempo de evolución
de la enfermedad. Pueden persistir en ocasiones de forma prolongada y con titulación
elevada, incluso en pacientes con tratamiento adecuado y buena evolución clínica. Hay
que citar como posibles falsos positivos las reacciones cruzadas con Vibrio cholerae,
Francisella tularensis y Yersinia enterocolítica.
3.4 ROSA DE BENGALA

Prueba tamiz o de «screening» llamada también de la tarjeta o «card test». Es una
técnica rápida de aglutinación en porta para la detección de anticuerpos anti-Brucela
en sueros animales y humanos. Es una suspensión de células de Brucella abortus
cultivadas en fermentación, inactivadas por calor y teñidas de color rosa púrpura.
El antígeno rosa de bengala contiene 8% de células de Brucella abortus, solución salina
fenolada al 0,5% y colorante rosa de bengala. Evidencia principalmente IgG, los
resultados se obtienen los 4 minutos de hecho el procedimiento.
Fundamento
21
La prueba de Rosa Bengala o prueba del antígeno tamponado de Brucella, es una

técnica rápida de aglutinación en porta para la detección de anticuerpos anti-Brucella
en sueros animales y humanos. La suspensión bacteriana es reactiva tanto con
anticuerpos IgG como IgM, siendo los primeros detectados más precozmente
(infecciones sub-clínicas) y por un período más largo de tiempo (fase crónica) que con
el procedimiento convencional de tubo. La determinación se efectúa ensayando la
suspensión tamponada (pH 3,6) de Brucella coloreada con Rosa Bengala frente a los
sueros problema. La presencia o ausencia de aglutinación visible es indicativa de la
presencia o ausencia de anticuerpos en las muestras ensayadas.
Composición de los reactivos
Reactivo: Rosa Bengala. Suspensión bacteriana de B. abortus, tamponada a pH 3,6 y
coloreada con Rosa Bengala. T+, Xi, C R: 24/25-34-35
Control positivo: Brucella. Suero animal anti-Brucella con una actividad aglutinante
superior a 100 UI/mL.
Control negativo: Suero animal con una actividad aglutinante inferior a 10 UI/mL.
Resultado
El resultado de la lectura de diagnóstico se informa como positivo o negativo. Las
reacciones positivas presentan grumos de aglutinaciones que puede ser grandes o
pequeños y las negativas tienen ausencia de éstos.
En animales especialmente que nunca fueron vacunados, la reacción positiva es un
indicador de infección muy probable. Se recomienda la prueba de 2-mercaptoetanol
como prueba confirmatoria (cuyo título positivo es considerado 1/25) o la prueba de
fijación de complemento.
Esta prueba usada como tamiz sumada a otras complementarias permiten su aplicación
como prueba de diagnóstico y de vigilancia epidemiológica.
3.5 PRUEBA DE HUDDLENSON

Antígenos febriles, es un término aceptado generalmente como referencia a
suspensiones bacteriana, representativas de un numero de especies de microorganismos
patogénicos para el hombre, y que van acompañadas de un cuadro febril persistente.
Incluidos dentro de estos microorganismos, encontramos los géneros. Salmonella,
22
Brucella, Francisella, Leptospira y Rickettsia. Grumbaum y Widal, fueron los primeros

en introducir técnicas inmunológicas para la determinación cuantitativa de aglutininas,
en pacientes con fiebre tifoidea. Luego estas técnicas se extendieron a otros
microorganismos, como la Brucella abortus.
USO AL QUE ESTA DESTINADO

Para la determinación de aglutininas anti-Brucella, por aglutinación rápida en placa.
FUNDAMENTO DEL METODO

Cuando un organismo invade el huésped, éste responde a ese estimulo antigénico, con
la producción de anticuerpos. Estos anticuerpos (aglutininas), presentes en el suero del
enfermo, reaccionan con la suspensión antigénica de Brucella abortus, produciendo una
aglutinación macroscópica. Estos antígenos febriles son suspensiones estandarizadas
de bacterias.
ELEMENTOS DEL SISTEMA

Provisto
Antígeno: 5 ml de suspensión de Brucella abortus (cepa 1119-3), lista para usar. Esta
suspensión contiene aproximadamente de 1.5 al 6 % v/v de gérmenes en solución
fisiológica fenolada y colorante como cristal violeta y verde brillante para obtener la
coloración final del antígeno. Estable 2 años en heladera entre 2-10ºC.
Suero Control Positivo: 1 ml. de suero control, listo para usar, con aglutininas anti-
Brucella abortus. Este suero contiene 1 gr/l de azida sódica. Estable 2 años en la
heladera entre 2-10º C. (únicamente en equipo con controles).
Suero control negativo: 1 ml. de suero control, listo para usar, libre de aglutininas
anti-Brucella abortus. Este suero contiene 1 gr/l de azida sódica. Estable 2 años en la
heladera entre 2-10º C (únicamente en equipo con controles) No provisto  Solución
Fisiológica.
PROCEDIMIENTO
Todo el material de vidrio deberá estar perfectamente limpio y libre de detergentes.
Llevar a temperatura ambiente los reactivos y los sueros a ensayar, agitar
23
adecuadamente la suspensión antigénica antes de usar. Sobre una placa de vidrio

colocar:
SUERO 80ul 60ul 40ul 20ul 5ul

ANTÍGENO 1gts. 1gts. 1gts. 1gts. 1gts.
DILUCIÓN 1/20 1/40 1/80 1/160 1/320
Mezclar con varilla de vidrio o madera, empezando por la dilución mayor. Balancear
con movimientos circulares entre 1 a 3 minutos, observar sobre fuente luminosa con
fondo oscuro, la presencia o no de aglutinación. En caso de que hubiere aglutinación
en todas las diluciones, efectuar una dilución 1/10 con solución fisiológica y efectuar
nuevamente la técnica. El resultado deberá multiplicarse por 10.
EXPRESION DE LOS RESULTADOS
Negativo: Ausencia de aglutinación.
Positivo: Suero reactivo (Indicar dilución).
Interpretación: en caso de obtener títulos significativos (1/40,1/80), es importante el

control del paciente a través de una curva de aglutinación, que se efectúa sobre los
resultados obtenidos con determinaciones seriadas. En sueros de enfermos, (fase
aguda) pueden encontrarse títulos de 1/320 o mayores. Para el titulo se considera la
última dilución que da aglutinación.
3.6 ELISA
La técnica de ELISA es sensible y específica para la detección de estos anticuerpos
tipo IgM frente a Brucella. Con una sensibilidad de 89% y especificidad de 100%.
Fundamento del método:
24
Método de ELISA basado en la

reacción de los anticuerpos de la
muestra con el antígeno unido a la
superficie de poliestireno. Las
inmunoglobulinas no unidas por
reacción con el antígeno son
eliminadas en el proceso de lavado.
En un paso posterior la globulina
anti-humana reacciona con el complejo antígeno-anticuerpo, y la que no se une es
eliminada por los lavados; la unida reacciona con el sustrato (TMB), para dar una
reacción coloreada azul, que cambia a amarillo tras la adición de la solución de parada.
Toma de muestra:
La sangre debe extraerse en condiciones asépticas mediante técnicas de venipuntura
por personal experimentado. Se recomienda el uso de técnicas estériles o asépticas para
evitar la contaminación de la muestra. Los sueros deben mantenerse refrigerados entre
2 y 8ºC si se van a procesar dentro de los 7 días siguientes a la toma, pero si el
procesamiento se va a prolongar deben congelarse a -20ºC, evitando las congelaciones
y descongelaciones innecesarias. No utilizar sueros hiperlipémicos, hemolizados o
contaminados. Los sueros que presenten partículas pueden ser clarificados por
centrifugación. Pueden utilizarse muestras de suero o plasma indistintamente.
Protocolo de validación por el usuario:

Cada ensayo debe utilizar control positivo, negativo y cut off. Su utilización permite la
validación de la prueba y el equipo.
Las densidades ópticas (D.O.) de los controles deben estar en los rangos siguientes. En
caso contrario se desechará la prueba.
CONTROL D.O.
Control positivo >0,9
Control negativo < 0,5
25
Control CUT OFF > 0,55

< 1,5
Interpretación de resultados:
INDICE INTERPRETACIÓN
<9 Negativo
9 - 11 Dudoso
> 11 Positivo
Calcular la media de las D.O. del suero cut off.

Índice de anticuerpos = (D.O. de la muestra / media de D.O. del suero cut off) x 10
Las muestras con resultados dudosos deben ser vueltas a analizar y/o solicitar una
nueva muestra para confirmación de los resultados. Las muestras con índices inferiores
a 9 se considera que no tienen anticuerpos específicos frente a Brucella de tipo IgM.
Las muestras con índices superiores a 11 se considerarán que tienen anticuerpos
específicos frente a Brucella de tipo IgM.
3.7 ENZIMOINMUNOANÁLISIS
Con estas técnicas podemos detectar la presencia de los anticuerpos específicos que
seleccionemos (IgG, IgM o IgA), con unos valores excelentes de sensibilidad y
especificidad. El antígeno absorbido sobre placas de poliestireno es,
fundamentalemente, el lipopolisacárido de brucelas en fase lisa. Los anticuerpos IgM,
por su rápida desaparición son valorables, pero no puede olvidarse que los anticuerpos
IgG pueden persistir en sujetos curados. Aunque permiten conocer con una mayor
precisión el perfil de las inmunoglobulinas en el curso de la enfermedad, tampoco
ofrecen la posibilidad de establecer un criterio para discernir entre curación y evolución
a cronicidad.
26
3.8 INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA Y FIJACIÓN DE

COMPLEMENTO
Presentan una mayor complejidad técnica sin aportar nada a los métodos anteriormente
descritos, por lo que no suelen utilizarse.
CONCLUSIONES
 La brucelosis es una infección originada por una bacteria denominada Brucella, En el

mundo el género más frecuente que afecta al ser humano es la Brucella melitensis,
transmitida por animales, sobre todo ovejas y cabras, por medio de la leche que es
consumida sin higienizar.
 La clínica es muy variada, siendo la presentación más frecuente la forma de enfermedad
aguda, parecida a un cuadro gripal, que en algunas ocasiones se puede localizar en
27
algunos órganos, en estos casos lo habitual es la aparición de una sacroileítis. Solo un

5% de los casos recae, y en menor porcentaje se cronifican, el diagnóstico definitivo es
su aislamiento en hemocultivos, pero si se sospecha la existencia de la infección.
 Se deben solicitar pruebas serológicas como Coombs, Rosa de Bengala y ELISA, el
pronóstico es bueno, y la mejor manera de luchar contra esta infección es vacunando al
ganado susceptible y procurando el consumo de leche higienizada.
RECOMENDACIONES
1. Con relación al control de infección en animales:

- Diagnostico precoz
- Inmunización y planes de control de los animales infectados
- Recordar que los perros y cerdos no se vacunan
- Se debe mantener cuarentena de animales según especie
- Realizar la castración de perros positivos
- No alimentar a los perros y otros animales con restos de abortos y animales
muertos para interrumpir la cadena de transmisión.
28
2. Con relación a la prevención de la exposición:

- Informar a la población general acerca del riesgo de manipular productos de
animales potencialmente infectados
- Informar a la población la importancia de acumulación de restos y desechos
animales en zonas próximas a las viviendas.
- Mantener una adecuada protección individual con equipos de protección durante
actividades como asistir partos, realizar tactos o manipular tejidos animales
- Lavar las manos antes y después de realizar actividades de riesgo
- Adherirse a los planes de vacunación del ganado bovino y caprino según región.
3. Con relación a la seguridad de los alimentos:

- Evitar la ingestión de leche y derivados lácteos no pasteurizados
- Evitar la ingestión de carne, vísceras, sangre o productos similares mal cocidos.
4. Medidas preventivas de trabajadores de laboratorios:

- Aislamiento geográfico
- Control de acceso
- Evitar la recirculación de aires mediante extractores
- Presión de aire (presión negativa)
- Ropas protectoras: mandiles manga larga, cuello y puños estrechos
- Mascarillas descartables y respirador N°95
- Propipetas: evitan contaminación a mucosas
- Guantes: evitan penetración de microorganismos por heridas o abrasiones de la
piel
- Asas: no deben exceder los 5cm de longitud para minimizar las vibraciones.
- Uso de desinfectantes
- Descontaminación del material con autoclave: 121°C a 15 lbs de presión >15mm
- Alcohol al 70%
- Yodo 0.075 gr/L
- Hipoclorito de sodio para material de autopsias
29
- Luz ultravioleta: se recomienda 10 uw/cm en laboratorios.
BIBLIOGRAFÍA
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Brucelosis en el Perú – 1988 En: Anales del Seminario Nacional de Zoonosis y
Enfermedades de Transmisión Alimentaria, Ministerio de Salud – Programa Nacional de
Control de Zoonosis, Julio 1989 Lima-Perú
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Científica No. 564, 16ª. Ed. Washington, OPS, 1997
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1): 56-57-ISSN 0325-7541
 Elberg, S.S. (Ed.). A guide to the diagnosis , treatment, and prevention of human
Brucellosis. World Health Organization. VPH/81.31 rev 1, 1981.
31

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PRUEBAS DE LABORATORIO PARA EL

ORTEGA PALOMINO, JACKELINA

Se conoce con el término brucelosis al conjunto de enfermedades ocasionadas, tanto en el

1.1 DEFINICIÓN DE BRUCELOSIS

Organismo Reservorio de animales Distribución geográfica

Brucella Animales marinos, Informes de casos que

1.3 SIGNOS Y SÍNTOMAS

1.4 ESTRUCTURA ANTIGÉNICA DE LA BARTONELLA

Como otras bacterias Gram negativas, la envoltura celular de los microorganismos

La membrana externa contiene fosfolípidos distribuidos asimétricamente, proteínas y

 Complejo liso de lipopolisacárído (S-LPS); constituido por el lípido A, el núcleo y

El factor de virulencia principal es el lipopolisacarido (LPS) de la pared celular del

El LPS es el principal antígeno que participa en las pruebas ordinarias: pruebas de

antígenos proteínicos interviene en las pruebas diagnósticas y en la actividad protectora

Se producen reacciones serológicas cruzadas, entre las especies lisas de Brucella y

Después de ingresar al cuerpo humano, el patógeno se traslada al sistema linfático para

El mecanismo subyacente por el cual Brucella es capaz de ingresar y sobrevivir dentro

El ingreso de Brucella en el organismo induce la activación de los mecanismos de

La prevención de la brucelosis depende del control de la enfermedad en los animales

La vigilancia con fines de detección puede pasar por la realización sistemática de

Cuando se está cerca de lograr la eliminación de la enfermedad es preciso aplicar un

Debemos tener en cuenta las medidas necesarias para la “Toma y Remisión de

 La prevalencia de la enfermedad se realiza por vigilancia serológica.

CAPÍTULO II: PRUEBAS DE LABORATORIO PARA DIAGNÓSTICO DE

2.1 CALDO Y AGAR TRIPTOSA

La triptosa se recomienda en formulaciones de caldo y agar. La triptosa se usa en la

carne como suplemento nutricional en medios de cultivo. La triptosa fue desarrollada

Se considera positivo cuando hay crecimiento bacteriano cambio de coloración más

El exitoso aislamiento de Brucella . apoya el uso de los medios de triptosa como

Se considera positivo cuando hay crecimiento bacteriano de colonias blanquecinas.

FUNDAMENTOS DE TRIPTOSA CALDO Y AGAR:

2.2 TRIPTICASA SOYA

El agregado de 5-10% sangre ovina desfibrilada estéril promueve el desarrollo de

El agregado de extracto de levadura en concentración de 0.5% favorece el crecimiento

La Interpretación de resultados Colonias de Brucella en agar tripticasa soya con 5%

2.3 PRODUCCION DE INDOL

MEDIO DE CULTIVO Y REACTIVO

Disuelva los ingredientes, reparta en tubos y esterilice en autoclave 15 minutos a 121°C

Se prepara disolviendo el aldehído en el alcohol y añadiéndole el ácido lentamente. Se

Una reacción positiva es indicada por la

2.4 AGAR BRUCELLA

Se usa para el cultivo de Brucella spp. Y otros microorganismos exigentes en un

El agar Brucella se desarrolló para el cultivo de las especies de Brucella a partir de

En contraposición, son bastante sensibles al calor, así una suspensión diluida de

Después de la incubación, la mayoría de las placas mostrarán un área de crecimiento

2.5 MEDIO DE RUIZ CASTAÑEDA

2.6 EXAMEN MICROSCÓPICO

CAPÍTULO III: PRUEBAS DE LABORATORIO PARA DIAGNÓSTICO DE

3.1 PRUEBA DE AGLUTINACIÓN EN TUBO ESTÁNDAR

La actividad aglutinante de un suero esta ligada a inmunoglobulinas de las clases IgM,

Títulos débilmente positivos (< 1/80) no permiten el diagnóstico de enfermedad activa

 Utilizado para el diagnóstico in vitro de la brucelosis humana y animal

Lectura de la prueba realizada

El líquido de la mezcla de suero – antígeno aparece claro con una sedimentación de

La mezcla suero - antígeno se presenta parcialmente clara, que al agitar suavemente

La mezcla a suero - antígeno aparece turbia, a una suave agitación no aparecen

3.3 PRUEBA DE COOMBS

3.4 ROSA DE BENGALA

La prueba de Rosa Bengala o prueba del antígeno tamponado de Brucella, es una

3.5 PRUEBA DE HUDDLENSON

Brucella, Francisella, Leptospira y Rickettsia. Grumbaum y Widal, fueron los primeros

USO AL QUE ESTA DESTINADO