PRACTICA N°5

CORTE EN MICRÓTOMO

I. INTRODUCCION

En estas páginas dedicadas a las técnicas histológicas vamos a describir los procedimientos
experimentales necesarios para obtener secciones tenidas y listas para observar al
microscopio partiendo de tejidos mediante la necropsia de un animal. Por tanto,
dedicaremos espacios al corte de los tejidos.
La mayoria de las técnicas histológicas van encaminadas a preparar el tejido para su
observación con el microscopio, bien sea este óptico o electrónico. Ello es debido a que la
composición de los tejidos, salvo contadas ocasiones, no tienen contraste ni colores
permitan diferenciar sus estructuras de una manera clara mediante la observación directa
con los microscopios.
Por ello hay procesar las muestras, primero para que no se deterioren y después para
resaltar sus estructuras y poder estudiarlas en detalle.
En esta etapa, los tejidos y la parafina integran un solo bloque que, posee la dureza y la
consistencia suficientes para obtener secciones delgadas y transparentes.

Las técnicas histológicas positívales son aquellas en las que las células mueren durante el
proceso, pero las
Características morfológicas y moleculares que poseían en estado vivo se conservan lo
mejor posible, lo que depende del tipo de técnica.

II. MARCO TEORICO

Las secciones delgadas o “cortes” se obtienen utilizando instrumentos mecánicos diseñados

para que en forma más o menos automática, seccionen el bloque de parafina en cortes
delgados y de grosor uniforme. Los instrumentos se denominan “micrótomos”

Los micrótomos se clasifican de acuerdo a la manera como se desplaza el bloque que

contiene el tejido incluido; así, existen:
a) Micrótomo de rotación tipo Minot.
Mediante una manivela circular denominada volante, el mecanismo que sujeta al bloque de
parafina se desplaza frente al filo de la navaja, de arriba hacia abajo y viceversa en un
movimiento vertical.
b) Micrótomo de deslizamiento. El movimiento que se realiza para obtener los cortes es
horizontal, es decir de atrás hacia adelante y viceversa. Generalmente el mecanismo que
sujeta al bloque de parafina es el que se desplaza y a la navaja permanece estática.
Los micrótomos tipo Minot son los de uso más frecuente en cualquier laboratorio donde se
realiza técnica histológica, especialmente cuando los tejidos están incluidos en parafina.
Los micrótomos de deslizamiento, en cambio, se emplean cuando los tejidos están
incluidos en celoidina o cuando la inclusión en parafina contiene porciones voluminosas de
tejidos y órganos.
Los micrótomos tipo Minot permiten obtener secciones delgadas, del orden de 4 a 7µm de
espesor. Producen cortes seriados, es decir, cuando se obtiene un corte, éste queda adherido
por su borde anterior al borde posterior del que lo precedió; formándose de esta manera una
cinta de cortes que va descendiendo por la superficie anterior de la navaja. Los cortes
seriados se emplean cuando se desea realizar reconstrucciones tridimensionales del órgano
procesado, cuando se requieren comparar secciones vecinas, del tejido u órgano, coloreadas
por diversas técnicas de tinción o cuando se hace el estudio microscópico topográfico en
embriones y fetos. Existen dos condiciones indispensables que garantizan la obtención de
secciones delgadas, uniformes y seriadas:

a) Que la deshidratación, impregnación e inclusión hayan sido realizadas correctamente.

b) El empleo de una navaja o cuchilla muy bien afilada y asentada y que el filo de la misma
ofrezca la inclinación adecuada hacia la superficie del bloque

III. OBJETIVOS

 Conocer el funcionamiento y uso correcto del micrótomo de rotación.

 Obtener cortes de tejidos fijados e incluidos en parafina en rangos de 2 a 15 micras.
 Realizar el montaje de los cortes histológicos en láminas porta objetos.
 Aprender cometiendo errores, no desanimarnos al primer intento.

IV. MATERIALES

 Bloques de parafina con

tejidos incluidos
 Albumina de Mayer
 Laminas porta objeto
 Lápiz diamante marcador
 Micrótomo
 Baño María
 Horno
V. PROCEDIMIENO PARA CORTE EN MICROTOMO

1. Obtenida la Inclusión los moldes se llevan al micrótomo para el corte del tejido, en
finas laminillas; el espesor de los cortes es determinado por el investigador, lo
recomendable son cortes de 2 a 15 micras.

a) Inclusiones en parafina b) Formamos una pirámide trunca

para facilitar el corte

c) Sostenemos el cubo en el micrótomo d)alineamos la cuchilla para comenzar

 e)pasamos con hielo para ayudar al corte f)corte del tejido, en finas laminillas

2. Las láminas obtenidas en el corte se recogen en placas Petri, a través de una

espátula y pinzas, luego colocan en baño María para lograr el extendido de las
láminas.

a) Recogemos las lamina b)colocamos a baños María a50°C

3. Extendidas las muestras, se extraen del baño María con porta objetos que
previamente ha sido recubierto con una capa de Albumina de Mayer. De esta
manera quedaran adheridas las muestras, las placas deberán estar debidamente
rotuladas con lápiz de diamante.
a) Recubrimos con una capa de b) Extraemos las muestras en un
albumina de Mayer portaobjeto rotulado

4. Desparafinado: los portaobjetos en los cortes se llevan a un secador de tejido o a un

horno a la temperatura de 50 °C, durante un tiempo determinado (4 a 6 horas), en el
fin de separarla parafina del tejido.

a)Des parafinado a 50 °C controlando de Los porta objetos puestos verticalmente

vez en cuando la temperatura para que la parafina evapore

c)Limpiamos los residuos del micrótomo d)Reciclamos la parafina descartada

 5. Una vez realizada la desparafinacion se procede con la coloración.

VI. CONCLUSIONES

Las características tisulares y celulares finas se observan con los microscopios. Sin
embargo, con estos aparatos solo se pueden observar muestras de tejido que tengan un
grosor muy pequeño, ya que de no ser así hay problemas de difusión y penetración de la
luz en el caso de los microscopios ópticos. Podemos decir que cuanto más delgada
queramos hacer una sección de tejido más endurecido ha de estar dicho tejido antes de
seccionarlo. La dureza de los tejidos depende de sus características de la fijación que
hayamos realizado y sobre todo del material en el que hayamos incluido dicho tejido.

VII. RESULTADOS

Nuestros cortes lo realizamos cuidadosamente a las medidas entre un rango de 4 a 5 µm

realizando 4 muestras de tejidos: tejido renal, tejido hepático, tejido cardiaco, y tejido
vegetal.

VII. RECOMENDACIONES

 Tener cuidado con la parafina ya que es toxico, usar mascarilla a la hora de la

manipulación.
 Controlar mucho la temperatura del horno así evitar un mal desparafinado.