HONGOS Y VIRUS

2) V o F y justificar todas
a) las recomendaciones para un cultivo de hongos son 37°C 24 hs.
Falso, la temperatura óptima oscila entre 25-35°C (menos que en bacterias). Su pH óptimo entre
5.5-7.5 (generalmente prefieren pH ácido). Además se incuban por 7 días porque tardan más en
desarrollarse que las bacterias.
b) la función del micelio vegetativo es la reproducción.
Falso, el micelio vegetativo provee anclaje, sostén y nutrición mientras que el aéreo es el que se
encuentra en contacto con el aire y sirve para la reproducción.
c) las características macro y microscópicas de un cultivo de hongos no son útiles para
determinar su identidad.
Es imposible identificar hongos unicelulares en base a las características macroscópicas
(tamaño y apariencia de colonias) y microscópicas. Para tal fin se recurre a los caracteres
bioqcos.
Es posible identificar un hongo miceliar a través de los caracteres macro y microscópicos.
d) las levaduras son microorganismos con cloroplastos.
Falso, son eucariotas quimioheterótrofas y no realizan fotosíntesis, por ende no tienen
cloroplastos.
e) la tinción verde de malaquita sirve para ver esporas fúngicas.
Falso, es para esporas bacterianas.
Las esporas de los hongos son para reproducción, mientras que las esporas bacterianas son
una estructura de resistencia para soportar condiciones de bajos nutrientes o altas
temperaturas. Esto se debe a que su estructura es más rica en calcio y con mayor proporción de
peptidoglicano en la pared, lo que le otorga mayor resistencia. Por esto mismo al emplear la
tinción con verde de malaquita se calienta previamente para aumentar la fluidez de la pared y
que se permita el ingreso de colorante, al enfriarse el colorante no puede salir y me permite ver
la espora.
f) el virus es un parásito intracelular obligado
Verdadero, sólo es activo dentro de la célula del huésped porque necesita la maquinaria
metabólica para la síntesis de proteínas, cápside y replicación del material genético (controla
la maquinaria metabólica para su replicación).

Dimorfismo fúngico: capacidad de un hongo de variar de levaduriforme (unicelular) a miceliar

(pluricelular) o viceversa, a respuesta a cambios en el ambiente como pH, nutrientes,
temperatura etc.
a- En microscopía óptica se pueden visualizar bacterias y virus.
b- Los hongos miceliares se reproducen por fisión binaria.

BACTERIAS
1) Cuadro de bacterias, levaduras y micobacteria (te daban nombres y tenias que llenar
 dominio, gram, ribosoma, genoma y componente ppal de la pared).

E.coli Staphyloco Cándida Mycoplasma Bacilos ácido

ccus aureus Albicans pneumoniae alcohol resistente
(Micobacteria)

Tamaño Más grande que

las procariotas

Dominio Bacteria Bacteria Eukarya Bacteria Bacteria

Gram Bacilos G - Cocos G + Se tiñe de No se tiñe mediante No corresponde

violeta pero Gram. (Se usa la tinción de
como la pared Ziehl-Neelsen)
es diferente la
tinción no dice
nada.

Ribosomas 70s (50+30) 70s (50+30) 80s (40+60) 70s (50+30) 70s (50+30)

Genoma En gral un Múltiples

cromosoma cromosomas
circular único y lineales con
desnudo. histonas
(asociado a
proteínas).

Componente Peptidoglicano Peptidoglicano Quitina No tiene pared Peptidoglicano con

ppal de la ácido micólico
pared

Membrana Fosfolípidos y Fosfolípidos, Con esteroles (poco

proteínas. proteínas y común en bacterias)
Algunas tienen ergosterol. para estabilizar la
hopanoides. membrana. Cómo
colesterol que
obtienen del medio.

Porinas Si No ? No Si

Cápsula Algunas pueden tener No.

(estructura facultativa).

1) Verdadero o Falso y justificar las falsas:

a) Una célula levaduriforme típica tiene DNA libre, organelas recubiertas por membranas,
subunidades ribosomales 30S y no tienen esteroles en su membrana.
Falsa. Las levaduras presentan DNA en núcleo asociado a proteínas, y si bien presenta
organelas recubiertas por membranas, las subunidades ribosomales son 40+50s y tienen
ergosterol en la membrana.
b) Los micoplasmas tienen pared celular compuesta por peptidoglicano, bla bla.
Falso, no tienen pared.
c) Clamidias, Micobacterias, Rickettsias y Protozoos pertenecen al dominio Eukarya.
Falso, no todas pertenecen a ese dominio, sólo Clamidias y Protozoos.
Las Micobacterias son bacterias que en la pared de peptidoglicano presentan tmb ácido micólico
(lípidos complejos) que las hace resistentes a la decoloración y las impermeabiliza.
Se aplica la tinción de ácido alcohol resistentes o Ziehl-Neelsen (tinción diferencial) donde se
usa el colorante rojo carbofucsina sobre un extendido fijado y se calienta por varios minutos;
luego se enfría y lava con agua para luego tratar con ácido-alcohol (HCl-etanol), un decolorante
que elimina el rojo de las que no son ácido alcohol resistentes.
Se usa como contracolor el Azul de metileno.

1) Diferencia entre la estructura de gram negativa y positiva

Gram + Gram -

Pared celular Presente (Gruesa 20-80 nm) Presente (delgada)

Funciones:
-Es la responsable
de la forma y rigidez
de la célula
- Permite resistir
diferencias de
presión osmótica
- Impide la entrada
de cierto tipo de
moléculas a pesar de
no ser una verdadera
barrera de
permeabilidad.

Peptidoglicano (NAM)--L-Ala--D-Glut--L-Lys--D-Ala (NAM)--L-Ala--D-Glut--Meso-DAP--D

Polímero de NAM y Los tetrapéptidos se unen a través -Ala unidos por enlace peptídico
NAG enlazados por de un puente de pentaglicina entre entre D-Ala y Meso-DAP
enlace glucosídico β D-Ala y L-Lys
1,4 formando capas
que se unen a través Si bien es más simple desde un
de tetrapéptidos para punto de vista estructural, tmb es
mantenerse fijas. más resistente.

Ácido Teicoico y Presenta. Anclan la pared a la Ausente

Lipoteicoico membrana citoplasmática

Membrana externa Ausente Presente y asimétrica

(lipopolisacáridos, porinas, proteínas
y fosfolípidos).
Está adherida al peptidoglicano
mediante lipoproteínas de anclaje
(de Brown).
 LPS No tiene Tiene. Composición: Polisacárido O,
núcleo polisacárido, Lípido A del
lado interno

Cápsula Puede tener Puede tener

funciones:
-Ayuda a la bacteria
da resistir a la
fagocitosis de las
células del SI
- Interviene en la
fijación de la bacteria
a su hospedador
-Resistencia a
desecación

Porinas No Si, hacen que actúe como tamiz

molecular

Periplasma No Si, hay enzimas hidrolíticas,

(espacio proteínas que regulan el transporte
periplasmático) celular, proteínas de unión y
proteínas involucradas en la
respuesta quimiotáctica

Esporas: Las bacterias gram POSITIVAS pueden formar una estructura de gran resistencia
denominada endospora. Se desarrollan dentro de las células bacterianas vegetativas para
proteger al ADN. Son resistentes a situaciones estresantes ambientales como UV, calor,
desinfectantes químicos etc. En el ambiente permite la supervivencia de los MO cuando los
nutrientes son escasos.
La endospora es una célula inactiva y altamente resistente para preservar el material genético
de la célula en situaciones estresantes.
Se tiñen con verde de malaquita previo calentamiento para aumentar la fluidez de la pared.
Posee una cápsula con flagelos y fimbrias, luego una membrana externa compuesta por
fosfolípidos, LPS, proteínas de membrana, porinas. Luego una capa delgada de pared celular de
peptidoglicanos que se une a la membrana por lipoproteínas de anclaje. Posee espacio
periplasmático y membrana interna de fosfolípidos y proteínas. No tienen colesterol.

Cápsula: Protección
Pared celular: Da forma y rigidez a la célula. Permite resistir diferencias de presiones
osmóticas, impide la entrada de cierto tipo de moléculas.
Pelos o fimbrias: Adherencia a superficies
Flagelos: Motilidad
Memb plasmática: Protección, barrera de permeabilidad selectiva, detección de señales
ambientales
La candida albicans es una bacteria eucarionte. Si bien la célula posee varias diferencias, como
núcleo, organelas etc, comparando las envolturas, la pared celular poseen quitina, mientras
que la E coli es de peptidoglicanos, no posee membrana externa, la membrana también tiene
fosfolípidos, proteínas y ergosterol mientras que al E coli no tiene colesterol sino hopanoides.

MEDIOS DE CULTIVO
 Medios / Complejo Selectivo Diferencial Observaciones Usos
Características

Sabouraud Químicamente No, No pH óptimo para hongos

indefinido. “universal”.
Peptonas
(proteína
hidrolizada) y
glucosa.

Czapek No. Químicamente

Sales varias definido.
(aportan iones) Se exactamente lo
y sacarosa que tiene.
(fuente de C,
O, N).

TSA Si No Tiene NaCl que Cultivo de bacterias

Tiene peptonas mantiene la cuyos requerimientos
osmolaridad. nutricionales se
desconocen.
Obtención de cultivos
puros.
Recuento en placa.

TSB Si No No tiene agar que Amplificación de

es lo que solidifica muestras.
los medios de Confección de curvas
cultivo. de crecimiento.
Diferenciar
microorganismos
según su dependencia
al O2.

Agar salado Complejo, tiene Si. Si. Crecimiento Gram

manitol peptona. Alta Cc de El rojo de positivas
Chapman NaCl hace fenol es el halotolerantes.
que sólo indicador de
crezcan las pH y frente a
halófilas y la
halotolerantes. fermentación
No crecen de manitol
Gram contenido en
negativas. el medio se
ven amarillas
las colonias
fermentadoras

Levine Complejo, tiene Si. Si. Útil para

peptona. Eosina y azul Contiene enterobacterias
de metileno, lactosa y las (bacilos G-)
inhiben fermentadoras
crecimiento hacen que
de Gram +. disminuya el
 pH y que
precipite el
colorante.

Agar Sangre Si No Gracias a la Medio Sirve para organismos

sangre enriquecido. muy exigentes
permite Contiene infusión nutricionalmente
diferenciar de músculo de (fastidiosos).
entre MOs corazón y una vez
que producen esterilizado se
hemólisis. agrega sangre
Hemolisinas ovina.
alfa, beta y
gamma..

Agar Cetrimide Complejo. El cetrimide MgCl y K2SO4

favorece el estimulan
crecimiento formación de
de pigmentos.
pseudomonas
.

Agar Mc Complejo Enterobacterias Fermentadoras

Conkey (tiene de lactosa se
peptonas). ven en color
rosa

Caldo Mc Enterobacterias Tiene bilis de buey Se usa para enriquecer

Conkey (sales biliares), enterobacterias
sólo sobreviven
enterobacterias

Caldo TSB + NaCl Se usa para enriquecer

hipersalado S. aureus.

Agar Citrato Químicamente CitNa única Colorante azul de

definido. fuente de bromofenol, vira
Carbono. con la
También fermentación de
tiene una sola citrato. Pero no es
fuente de diferencial porque
Nitrógeno. no crecen las que
no lo fermentan.

2) Si se desea trabajar con un MO microaerófilo, quimioheterótrofo y auxótrofo para

arginina, cuales son las características que se debe tener en el medio y bajo qué
condiciones se
debe cultivar.
Microaerófilo: Tolera el oxígeno y lo requiere pero en una concentración menor que los
aerobios estrictos. Se utiliza una cámara donde se controle la cc de aire
Quimioheterótrofo: La fuente de carbono proviene de compuestos orgánicos como
extracto de carne.
Auxótrofo: Sólo es capaz de proliferar en un medio de cultivo si a este se la ha añadido
arginina (en este caso) xq no es capaz de sintetizarla.

Factor de crecimiento:​ Son compuestos orgánicos necesarios para el MO (tmb pueden ser
precursores) pero que éste no los puede sintetizar. Son necesarios agregar al medio de cultivo
8) Se desea evaluar la presencia de S. aureus, al microscopio se observaron bacilos G - ,
detallar el procedimiento.

1. Enriquecimiento: Se toma una porción de la muestra y se la incuba en TSB enriquecido con

alta concentración de ClNa (caldo hipersalado). Crecerán G+.
2. Luego del tiempo necesario de incubación, tomo una alícuota con un ansa y la cultivo en
un medio agar salado manitol (Chapman). Con el manitol logro diferenciar las fermentadoras de
las no fermentadoras.
3. Luego de incubar el tiempo necesario a la temperatura adecuada, se toma una colonia de
color amarillo ya que el S. aureus fermenta manitol, generando productos ácidos que viran el
indicador de rojo a amarillo.
4. Se siembra esa colonia sobre TSA por agotamiento de superficie en estría y se lo incuba el
tiempo necesario para obtener un medio puro.
5. Identificación: Se realizan llaves dicotómicas de lo más general a lo más
específicos. Tinción de gram (debería dar +) luego se observa la forma (deberían ser
cocos). Luego se realizan pruebas bioquímicas: Catalasa, coagulasa, DNAsa.

CRECIMIENTO
3) Graficar curva de crecimiento de una bacteria termófila aerobia en un medio con
agitación a 56°C, 37°C y 8°C. En aquella con mayor velocidad de crecimiento, indicar las
distintas fases.
Las bacterias termófilas son aquellas que se desarrollan a temperaturas superiores a 45ºC. (40-80°C)
Mesófilos: (15-45°C)

Podemos suponer que el gráfico corresponde a la temperatura de 56°C y que la pendiente de la fase
log sería menor a 37°C y casi planchada a 8°C.
 Fase Características

Fase de latencia -Es una fase de ​intensa actividad metabólica​ (síntesis

(lag, de adaptación)
(periodo de adaptación para
sintetizar sin crecimiento neto)
de enzimas, de ribosomas, de ATP, etc.) pero hay ​escasa
o nula división celular​.
-Es necesario tener en cuenta que no siempre se
observa: ​a)​ es muy evidente cuando los microorganismos
sembrados son viejos, han sido refrigerados o cuando la
muestra se extrae de un medio significativamente
diferente del de cultivo; ​b)​ es muy poco evidente cuando
el medio de la muestra y el de cultivo se asemejan en
composición.

Fase exponencial -La ​velocidad​ de crecimiento de los microorganismos es

(log) máxima​ (mínimo tiempo de generación (lo que tarda un
MO en duplicar su número)) y ​constante​.
-La ​actividad metabólica​ es ​máxima​.
-La sensibilidad a condiciones adversas (radiación,
penicilinas, etc.) es máxima.
-Es la fase en la cual la población de microorganismos es
la más uniforme desde el punto de vista químico y
fisiológico, razón por la cual es muy utilizada en la mayor
parte de los estudios.
-La pendiente de esta fase se relaciona con la velocidad
de crecimiento.

Fase estacionaria -El número total de microorganismos viables permanece

relativamente constante ya que la muerte compensa a la
división celular.
-Factores responsables de la muerte celular: a) limitación
de nutrientes; b) limitación de O​2​ para los organismos
aerobios estrictos c) acumulación de productos tóxicos.

Fase de muerte -Se alcanza cuando los factores responsables de la

muerte priman por sobre los procesos de división celular.
-Al igual que la fase log, esta fase es exponencial.

3) Nombrar 3 factores que afecten la fase de latencia

1. Relacionados al medio pH, actividad del agua, presión osmótica

2. Relacionados al MO: temperatura, oxígeno molecular
3. 1 + 2 : potencial redox
Cómo se estandariza un inóculo?
Cuando confeccionamos una curva de crecimiento graficamos log UFC/ml = (f) t y nos permite
observar como es el comportamiento y sobre todo cómo se desarrolla un MO en un determinado
medio. Para poder graficar dichos parámetros es necesario que tomemos alícuotas de muestra
a diferentes tiempos, frenemos el crecimiento con sc fisiológica y realizamos diluciones seriadas
de eso para poder sembrar en extensión en placa, incubar y hacer el recuento al otro día (las
diluciones se realizan para poder hacer un recuento con valor estadístico y después mediante
un cálculo se deriva a la concentración de la muestra original).
Paralelamente a esto podemos ir midiendo la DO en función del tiempo y graficarlo;
obtendremos una curva de crecimiento pero que quedará detenida en la fase estacionaria sin
observarse una fase de muerte ya que éste método de medición no distingue entre viables y no
viables a menos que ocurra una lisis.
Relacionando DO con log UFC/ml podemos ​estandarizar el inóculo​ lo que en futuros ensayos
nos permite realizar un seguimiento de la curva de crecimiento sin necesidad de esperar las 24
hs de incubación para poder visualizar las UFC en las placas.
3) Graficar comparativamente la curva de crecimiento que se obtiene al hacer crecer un
microorganismo mesófilo quimioheterótrofo anaerobio facultativo y uno mesófilo
aerotolerante en estas dos condiciones:
- a 35°C con agitación vigorosa
- a 4°C con agitación vigorosa
A 4 °C no se observa crecimiento de mesófilos; el anaerobio facultativo a 35°C con agitación
tiene mayor pendiente porque como usa oxígeno a través de la respiración genera más ATP y
por lo tanto más energía comparando con la fermentación (sin O2) y por eso se reproduce más
rápido.
Aerobio obligado: Requieren el oxígeno.
Microaerófilo: Requieren el oxígeno pero en concentraciones menores.
Anaerobio estricto: no tolera el O2 y muere en su presencia.
Anaerobio facultativo: Si tienen disponibilidad de oxígeno (lo prefiere) realizan respiración
aerobia pero en caso de que no lo haya pueden realizar fermentación.
Aerotolerante:Toleran el oxígeno pero no lo requieren ni lo utilizan.

ESTERILIZACIÓN
5) Cómo preparar y esterilizar: tubos con TSB, placas con agar sangre, jeringas de
plástico, placas con TSB + ATB.
Esterilizar: eliminar o destruir toda la forma de vida microbiana (incluyendo virus y esporas).
Un producto es estéril cuando la probabilidad de que un MO viable este presente es = o menor
a 1 en un millón (SAL).
No existe un método universal, la elección se relaciona con la compatibilidad del material.
Atributos de un agente esterilizante: actividad biocida contra todos los MO; alto poder de
penetración, compatible con un amplio rango de materiales; que permita ctrl y monitoreo de las
variables del proceso y que no sea tóxico para el operador, paciente o ambiente.
También se busca que sea rápido, fácil y barato.
 Método Mecanismo de Variables Puede No puede
acción esterilizarse esterilizarse

Calor seco Acción oxidante Tiempo y Materiales Materiales

(en estufa del aire seco que temperatura. termoresistentes termosensibles
120min, 160°C) circula por (El tiempo Material de Productos
(el aire conduce circulación corre a partir vidrio acuosos
menos el calor forzada (las de que se Instrumental Plásticos
que el vapor) corrientes de aire alcanza la quirúrgico
se originan por temperatura) Polvos
dispositivos Aceites
mecánicos). Talco

Calor húmedo a Desnaturalización Tiempo, Materiales Materiales

presión superior de proteínas de temperatura y termoresistentes termosensibles
a la normal los MO como presión. Soluciones aq Sustancias
(15min, 1atm, consecuencia de Medios de oleosas (genera
121°C) una liberación de cultivo emulsión)
energía de calor Acero inoxidable Talco y polvos
latente de Vidrio (luego lo (se humedecen)
vaporización del tengo q secar) Instrumental
vapor de agua Gomas cromado
saturado. Material textil Artículos
electrónicos

Radiaciones Efecto directo: Intensidad de Materiales

ionizantes (rayos radiólisis de la radiación, termolábiles
x o gamma) moléculas distancia, Jeringas y
(es muy cara) biológicamente fuente emisora agujas
esenciales y tiempo. Implantes
Efecto indirecto: Productos
radiolisis de agua biomédicos
Las mutaciones Atb
matan el MO

Radiaciones no Radiación UV - Aire, áreas que

ionizantes forma dímeros de requieren bajo
(es poco timina, generando nivel de
penetrante) daño permanente contaminación
en DNA MO, Desinfección de
llevándolos a la aire
destrucción en hospitales,
laboratorios y
cabinas de
seguridad
biológica.
 Filtración Membrana porosa Velocidad de Líquidos y gases
esterilizante (0,22 flujo. termosensibles
micrometros) Soluciones de
proteínas, Atb,
Vitaminas.

Ventajas Desventajas

Óxido de etileno Inactiva a los MO Concentración Compatible con Tiempos

(En cámara de por alquilación de del gas diversos prolongados del
óxido) proteínas y ácidos Tiempo de productos proceso,
nucléicos. exposición médicos y requiere
Temperatura materiales aireación de los
Humedad termosensibles materiales antes
relativa de la como guantes y de su uso ya
cámara placas de petri. que es tóxico.
Posee alta Inflamable,
penetrabilidad, explosivo y
es eficiente, no cancerígeno;
es corrosivo y requiere
es económico. controles de
ventilación y
emisiones y ctrl
de la salud del
personal.

Plasma de
peróxido de
hidrógeno

Formaldehído en
fase vapor +
vapor de agua

Métodos físicos
Métodos químicos
Tubos con TSB: Tubos en calor seco (estufa); TSB calor húmedo a sobrepresión en autoclave.
Placas con agar sangre: Placas de petri con óxido de etileno, TSA con esterilización por calor
húmedo a sobrepresión en autoclave. La sangre está estéril y una vez esterilizado el TSA, se
funde, se mezcla con la sangre y se vuelca en las placas estériles de forma aséptica.
Jeringas de plástico: Radiación ionizante u óxido de etileno.
20 placas de Petri con TSA suplementado con 100ug/ml de ampicilina: placas con óxido de
etileno, TSA en autoclave, ampicilina por filtración esterilizante.
Tubo con buffer fosfato salino: Autoclave, esterilización con calor húmedo a sobrepresión.
Variables tiempo y temperatura.
Solución acuosa de gentamicina: Filtración esterilizante. Variables: Flujo.
Pipetas de vidrio: Esterilización por calor seco en estufa. Tiempo y temperatura.
CIRCUITO DE MATERIALES EN EL LABORATORIO:
1) Material limpio ACONDICIONAMIENTO (para mantener la esterilidad y no interferir con el
agente esterilizante).
2) Material acondicionado ESTERILIZACIÓN (por medio de un proceso efectivo que elimine los
MO presentes y compatible o sea que no altere las propiedades FQ del material).
3) Material estéril USO O ALMACENAMIENTO.
4) Material contaminado (si no es reutilizable se desecha como residuo patológico)
ESTERILIZACIÓN O DESCONTAMINACIÓN (para desechar como residuo domiciliario, por lo q
el método no necesariamente debe ser compatible, o para reutilizar).
1).

4)Verdadero o falso
a) La esterilización por calor seco requiere menos tiempo y menor temperatura que la
esterilización a vapor saturado a presión superior a la normal.
Falso, la sobrepresión hace que se requiera menos tiempo ya que se alcanzan mayores
temperaturas.
b) Los indicadores biológicos son utilizados para controlar la esterilización de un
elemento.
Falso, se usan para control del ciclo de esterilización . Se coloca una carga microbiana muy
resistente (esporas muy resistentes al método) junto con el resto del material a esterilizar
(representan un desafío para el proceso). Luego del proceso, se ponen en un caldo, se incuba
y, si hay viabilidad, el colorante vira e indica que la esterilización no fue adecuada. Se requieren
controles:
a. Control de viabilidad: No se esteriliza, luego de incubar debe virar el indicador.
b. Control de esterilización: se esteriliza junto con el material a esterilizar. NO DEBE VIRAR
c. Control del medio: no tiene esporas. Tiene medio y no se esteriliza. Es el control negativo. Es
para evaluar si el medio tenía microorganismos.
Todo esto permite inferir la esterilidad de los materiales esterilizados.

Controles del proceso de esterilización: indicadores que certifican que el proceso se llevó a cabo
de forma satisfactoria.
Químicos: (V) integrador t, p, °T; (I) externos (cintas); (III) uniparámetro; (IV) multiparámetro (t y
°T).
Físicos: sensores del equipo (manómetro, termómetro).
DESINFECCIÓN
8) Verdadero o falso
a) Los únicos parámetros que modifican la efectividad de un desinfectante son el tiempo
de exposición y la concentración
Falso, modifican la sensibilidad del MO:
Tiempo de contacto: a mayor tiempo de contacto, mayor efecto desinfectante.
Carga microbiana: a menor carga menor tiempo para llegar al eje x (a pesar de que la pendiente
es la misma ya que se trata del mismo MO).
pH del medio
Temperatura: a mayor temperatura, mayor eficiencia (gralmente).
El estado de la bacteria (si está en forma de espora o no).
Presencia de materia orgánica/sustancia interferente: se distribuye la actividad del desinfectante
entre ambos (consumo del ppio activo, ya que los desinfectantes no son selectivos); además se
adsorbe el ppio activo y no queda disponible para actuar sobre el MO.
c) El compuesto activo del hipoclorito de sodio es el ion hipoclorito que clora proteínas y
las desestabiliza.
Falso, es el ácido hipocloroso. Oxida o clora.
Desinfección: 0,1% de hipoclorito 10-30 min.
Descontaminación: parto de una carga de MO mucho mayor (ej un trapo de piso); uno 0,5% de
hipoclorito 30-60 min.
El detergente no es desinfectante, no mata sino que solo remueve por barrido disminuyendo la
carga MO a niveles seguros.
5) Graficar comparativamente la curva de muerte obtenida al someter a 10^6 bacterias
vegetativas de cierta especie y por otro lado a 10^6
esporas de la misma especie al mismo proceso de
desinfección por 20 minutos.
La pendiente de la bacteria vegetativa es mayor que la de
la espora, por lo que llega al eje x en menos tiempo.

4) Para hipoclorito de sodio al 2% los datos de UFC/ML inicial para E.coli y S.

aureus era el mismo 1.10^8 , te daban el D para uno de ellos y te decía que E.coli
reducía su UFC inicial a 1.10^3 en 10 min. Te pedía graficar ambas curvas y
calcular el D de E.coli, después te pedía que expliques brevemente cómo actúa la
lavandina.
El D (tiempo de reducción decimal) (tiempo que tarda en reducir un logaritmo la carga
microbiana y es proporcional a la pendiente) corresponde a un cierto método con parámetros
establecidos (para un determinado MO en esas condiciones).
Hipoclorito de sodio: El hipoclorito de sodio necesita mezclarse con agua para ser activo y
formar ácido hipocloroso (+ Na+ OH-), el mismo es inestable por eso no se comercializa en esta
presentación. El envase está protegido de la luz para evitar la fotooxidación, el pH es alrededor
de 8. El blanco de acción son macromoléculas y DNA. Oxida grupos funcionales de estas
macromoléculas, clora y oxida proteínas y genera ruptura del DNA. Es de alto nivel e irritante.
Independientemente del mecanismo de acción o del blanco molecular, se desencadenan los sig
eventos:
1) Interacción entre el agente y el MO
2) Penetración de las envolturas microbianas
3) Acción sobre los blancos

Los MO pueden generar resistencia a la acción del desinfectante por alteración del blanco
molecular, inactivación del agente por reacción covalente o enzimática, formación de biofilms,
alteración de la membrana externa (disminución de porinas) y bombas de eflujo.

Agente Blanco Mecanismo Espectro Usos Toxicidad

molecular de acción

Etanol Membrana y Daña la Intermedio Desinfección, Irritante,

Se usa al 70% macromoléculas membrana (Micobact, antisepsia y inflamable
ya que en esta (la disuelve), virus conservación
Cc la desestabiliza desnudos,
efectividad es proteínas hongos,
mayor porque celulares. bacterias
sino se El -OH puede vegetativas y
evapora y no reaccionar virus
alcanza el con grupos envueltos).
tiempo funcionales
necesario. de
macromolec.

Halógenos Grupos Oxidación y Alto (incluye Desinfección Irritante

Comp clorados funcionales de halogenación además de de
o iodados. macromoléculas. de grupos los anteriores superficies,
(ejemplo funcionales a las potabilización
hipoclorito) de esporas). de agua,
macromoléc. desinfección
de alto nivel.

Aldehídos Pared celular Se une a Alto

(glutaraldehído grupos NH2
) de la pared
inhibiendo la
función de
transporte de
electrones.

Idoforos Restos Ioda y oxida Alto espectro Antisepsia Irritante

(iodopovidona) azufrados de grupos quirúrgica Mancha
proteínas, ácidos funcionales.
nucleicos y
ácidos grasos

Peróxidos Oxida grupos Alto Limpieza de

funcionales heridas.
ANTIBIÓTICOS
7) Cuadrito de ATB: solo dos ATB, beta-lactámicos (te daban los ejemplos y tenías que
completar con el nombre de la familia) y macrólidos. Ejemplos, blanco molecular,
bioproceso que afecta y un ejemplo de mecanismo de resistencia.

FAMILIA EJEMPLO ESPECTRO BLANCO MECANISMO/EFECTO RESISTENCIA

Polimixina Colistina Reducido (G-) Membrana Bactericida lítico, Cambio en la

externa desestabiliza MP expresión de
fosfatidiletanolamina
(PL de ME)

β -Lactámicos Penicilina Reducido (G+) PBPs (las Bactericida lítico, análogo β -Lactamasa
Ampicilina (no ingresa por inhibe) a D-Ala-D-Ala, debilita la Modificación del
Cefalosporina carga). malla por inhibición de la blanco.
transpeptidación (Micoplasma es
(fragilidad Osm). resistente
natural).

Glicoproteínas Vancomicina Reducido (G+) D-Ala-D-Ala Bactericida lítico. Modificación del

(no ingresa por Inhibe la transpeptidación. blanco.
volumen). (Micoplasma y G-
son resistentes
naturales).

Aminoglucósidos Gentamicina Amplio. Subu 30s Bactericida lítico. Natural

(No tiene Inhibe ensamble de (anaerobia y
efecto sobre subunidades y genera un anaerobia
anaerobias corrimiento en el marco facultativa en
porque ingresa de lectura. ausencia de O2).
por un Genera proteínas Inaccesibilidad al
potencial de M anómalas (permiten el blanco,
dependiente ingreso de más Atb y eso Alteración del
de O2). genera la lisis). blanco.
Inactivación
enzimática del
Atb.

Tetraciclina Doxicilina Amplio (incluye Subu 30s Bacteriostático. Modificación del

micoplasma). Inhibe la unión del ARNt blanco.

Macrólidos Eritromicina Reducido (tmb Subunidad Bacteriostático, inhibe la Modificación del

Sintéticos de amplio si 50s (-23s) translocación durante la sitio blanco.
son sintéticos) elongación. Bombas de
eflujo.
Modificación
enzimática del
Atb.

Cloranfenicol Amplio Subu 50s Bacteriostático. Bomba de eflujo.

Inhibe uniones peptídicas. Modificación del
blanco.

Quinolonas Ciprofloxacina Amplio Topoisomerasa Bactericida. Inactivación y

II (G-) y IV (G+)
Genera el modificación del
superenrrollamiento del blanco.
DNA e inhibe la síntesis.
 Rifamicina Amplio RNApol Bactericida. Modificación del
(subu beta) Inhibe la transcripción. blanco.

Inhiben la síntesis de la pared

Inhiben la síntesis de proteínas
Inhiben la síntesis de DNA/RNA
De amplio espectro (sintéticos)
8) a) cuadro de antibióticos: betalactámicos y macrolidos.

Blanco Proceso Resistencia Resistencia

molecular bioquímico natural adquirido
inhibido

Betalactámicos Transpeptidasa; Síntesis de la Sobreexpresión Adquisición de

carboxipeptidasa pared de una PBP de un plásmido que
(PBPs) baja afinidad codifique para
(ejemplo: PBP 5) una PBP con
baja afinidad
para el ATB pero
sí para el
D-Ala-D-Ala;
B-lactamasa

Macrólidos Subunidad 50s Síntesis proteica Bacilos gram Modificación de

negativos (no la subunidad 50s
atraviesa la
membrana
externa):
eritromicina

b) Graficar la curva de muerte que se obtiene al agregar un antibiótico Beta lactámico a

un cultivo de E coli en crecimiento que no posee resistencia. Hacer dos gráficos, uno de
microorganismos viables y otro de microorganismos totales.
c) Lo mismo para macrolidos.

GENÉTICA

Las microdeleciones o microinserciones producen cambio del marco de lectura.

Teniendo en cuenta que las mutaciones puntuales son reversibles, se denomina r​ evertiente a
una cepa en la que se ha restaurado el fenotipo salvaje u original debido a una segunda
mutación. Los revertientes se clasifican en:
Revertientes del mismo sitio
 · la segunda mutación ocurre en el mismo sitio que la primera
· también se denominan "revertientes verdaderos"
se restaura el genotipo

Revertientes de otro sitio

· la segunda mutación ocurre en un sitio diferente que la primera
· también se denominan "mutaciones supresoras"
​no se restaura el genotipo

7) Test de ames (describir las cepas que se usan) y definir mutación, mutación con
cambio de sentido, sin sentido, retardo fenotípico y mutación supresora.

Test de ames es un ensayo en el cual se evalúa el potencial mutagénico de una sustancia

mediante las reversiones que esta produce en determinadas condiciones. La observación de
revertantes indicaría la potencialidad mutagénica o carcinogénica de las drogas ensayadas.
Se utilizan cepas de ​Salmonella Thyphimurium​ auxótrofas de histidina (es decir his-), la TA100
que presenta una sustitución puntual en el gen y la TA98 que tiene una deleción puntual. Ambas
cepas también presentan mutaciones en la síntesis de LPS (gen rfa) lo que permitirá que el
mutágeno ingrese, microdeleción en el gen uvrB (lo que genera que sea bio- tmb) e impedirá
que se repare por este sistema y presentan el plásmido pKM101 que codifica para la DNA pol V
que tiene alta tasa de error.
Mutación: Es cualquier cambio heredable en la secuencia de bases del genoma de un
organismo. Este cambio del genotipo puede o no generar un cambio en el fenotipo.
Es una de las fuentes más importantes en la variabilidad. Una mutación puede ser
perjudicial, beneficiosa (brindar ventajas selectivas) o ninguna.
Es importante remarcar que un cambio fenotípico no siempre es consecuencia de un cambio
genotípico.
Mutación silenciosa: Hay un cambio en la secuencia de ADN, hay un cambio en la
secuencia del mRNA pero no hay cambio en la secuencia de aa de la proteína que se
expresa. Generalmente son un cambio en la tercera base de un codón. No hay cambios
en el fenotipo.
Mutación con cambio de sentido: Hay un cambio en la secuencia de DNA que produce
un cambio en la secuencia del RNAm generando un cambio en la secuencia de la
proteína que se expresa. Sin embargo, esta proteína sigue siendo funcional. El fenotipo
puede ser o no afectado.
Mutación sin sentido: Hay un cambio en la secuencia de DNA que produce un cambio en la
secuencia del RNAm y por ende un cambio en la secuencia de la proteína de manera
que la traducción concluye tempranamente y se sintetiza la proteína de forma
incompleta.
Mutación supresora: Es una segunda mutación que ocurre en un sitio distinto al de la
primera mutación. Se revierte el fenotipo pero no el genotipo
Retardo fenotípico: tiempo en el cual una bacteria expresa la mutación.

9) Se quiere obtener una cepa mutante Leu+ his- desde una muestra de E. coli protótrofa.
Esquematizar todos los pasos a seguir.
No sé por qué aclara Leu+.
 1) Tubo con bacterias protótrofas le agrego mutágeno.
2) Para aumentar el número de las mutadas en his, paso a medio líquido sin histidina y con
ATB. Como las auxótrofas para histidina no se pueden multiplicar, el ATB ataca a las no
mutadas en fase exponencial.
Al agregar el agente mutagénico en el primer tubito va a haber mayor proporción de células no
mutadas y es por eso que después enriqueces la muestra en un medio con un ATB, sin histidina
y sin leucina; se van a dividir las cepas que no presentan la mutación siendo éstas susceptibles
al Atb.
3) Siembro en medio con histidina, incubo.
Luego de que tratas la muestra con Atb sembrar en un medio de cultivo que tenga histidina y
leucina para que las mutantes puedan crecer.
4) Usando “sello” paso las colonias que desarrollaron a medio sin histidina, incubo.
5) Por diferencia entre colonias crecidas, puedo elegir en el primer medio las que son
auxótrofas.

El tamaño del halo de inhibición de desarrollo variará en base a los siguientes parámetros o
variables:
Concentración de la droga
Sensibilidad bacteriana
Coeficiente de difusión de la droga
Tiempo y temperatura de incubación
pH y composición del medio
Profundidad del medio
Tamaño del inóculo

CONJUGACIÓN

Tenías una E.coli con resistencia a un aminoglucósido y pedía hacer un ensayo que
permita saber si la resistencia provenía de la conjugación del plásmido.

8) Qué mecanismos de transferencia de genes existen, elegir uno y explicar

detalladamente.
Mecanismo Dadora Receptora Exogenote Destino

Transformación Se lisa para En estado de DNA desnudo: DNA CROMOSOMAL

ceder el competencia: con cromosómico, Transformación exitosa​:
material capacidad de plasmídico ó viral. [si hay un elevado % de
genético. captar el ADN el ADN es viral, el homología y se recombina
desnudo. Natural o proceso se denomina por RecA. SE GANA
artificial (MgCl2) transfección] INFORMACIÓN POR
SUSTITUCIÓN.
Transformación no exitosa:
las enzimas de restricción
degradan. NO SE GANA
INFORMACIÓN.

DNA PLASMÍDICO
Replicación autónoma:
queda por fuera del
cromosoma.
Transformación exitosa:​ el
plásmido se integra, NO hay
sustitución. No se necesita
gran homología.
Transformación no exitosa:
degradación por enzimas de
restricción.

Transducción Bacteria con Bacteria con ADN cromosomal. -Degradación por enzimas de
generalizada receptor para receptor para el Plásmidos restricción
el fago, que se fago
infectó y - Recombinación homóloga
realizó ciclo (por adn cromosomal)
lítico. - Replicación autónoma del
plásmido

Transducción Bacteria con Bacteria con Genes adyacentes al -Degradación por enzimas de
especializada receptor para receptor para el sitio de inserción del restricción
fago que fago ADN viral -Recombinación homóloga
realiza ciclo SON GENES (por las secuencias del DNA
lisogénico y ESPECÍFICOS. cromosomal) o específica del
luego ciclo sitio (dada por la secuencia
lítico del fago)

Conjugación F+ (célula con F- (para plásmidos Plásmido F, plásmido -Degradación por enzimas de
el plásmido del mismo grupo F’ o genes restricción
conjugativo); F’ de cromosomales -Recombinación homóloga
(célula con incompatibilidad) -Replicación autónoma
plásmido -Recombinación específica
conjugativo del sitio
que contiene
genes
cromosomales)
; Hfr (célula
 con plásmido
conjugativo
integrado en el
cromosoma
bacteriano)

Exogenote Destino del exogenote

F+ x F- Plásmido F -Degradación por las enzimas

de restricción
-Recombinación específica
del sitio (episoma, se integra
al DNA cromosomal)
- Replicación autónoma del
plásmido

F’ x F- Plásmido F’ -Degradación por enzimas de

restricción
-Replicación autónoma del
plásmido
-Recombinación (homóloga o
específica del sitio)

Hfr x F- Genes cromosomales -Degradación

-Recombinación homóloga
(mediada por RecA)

Mecanismos de transferencia horizontal de genes: Las secuencias de DNA se modifican

constantemente por mutaciones, deleciones, inserciones, etc. Entre estos existe la transferencia
de genes.
Elementos del movilona: plásmidos, profagos, transposones, etc.

Transformación
Es la captación de DNA desnudo por parte de una célula receptora. El DNA libre proviene de un
dador que sufrió lisis celular y puede ser de origen cromosómico, plasmídico o viral. Si es viral,
el proceso se llama transfección.
Estado de competencia: el receptor debe estar en estado de competencia (estado con
capacidad de captar DNA desnudo). El estado de competencia puede ser natural expresando
proteínas superficiales capaces de ligar DNA o artificial como la E.coli. Para inducir un estado
de competencia a E.coli, se aumenta la permeabilidad de la pared celular lo que se puede hacer
por un tratamiento con CaCl2 + shock térmico, electroporación etc.
Unión del DNA: El DNA transformante primero de una de forma reversible y luego de forma
irreversible a la superficie del MO receptor. El DNA libre generalmente está fragmentado.
Existen
proteínas de unión al DNA en la superficie de la bacteria y proteínas específicas dentro de la
misma.
Incorporación del DNA: en el caso de G+, actúan endonucleasas a nivel de la membrana
citoplasmática para degradar una de las cadenas del DNA transformante, mientras que la otra
ingresa al interior de la célula y se une a proteínas.. En el caso de los G-, ambas cadenas del
DNA ingresan al interior de la célula.
Destino del exogenote:
DNA desnudo cromosomal
Transformación exitosa: el exogenote tiene gran homología con el endogenote y puede
recombinar gracias a RecA “recombinación homóloga” (hay sustitución de DNA).
Transformación no exitosa: enzimas de restricción degradan el exogenote.
DNA desnudo plasmídico
Si el exogenote es plasmídico, la replicación es autónoma. El plásmido se integra en el DNA (no
hay sustitución) y el conjunto pasa a llamarse episoma, no se requiere un amplio grado de
homología y el MO gana información.

Transducción
Se da por medio de un fago.
FAGO: virus que infecta bacterias.
Tanto la célula receptora como la dadora deben presentar receptores para fagos. Puede ser de
dos tipos: generalizada o especializada.
En la generalizada, el fago realiza un ciclo lítico sobre la célula dadora (utiliza la maquinaria de
la célula para replicarse, al aumentar el número de fagos se lisa la célula y salen). Al formarse la
cápside del virus puede englobar DNA de la bacteria (cromosómico o plasmídico) en lugar de
material genético del virus y al infectar una nueva célula le lleva material genético de la primera
(y puede transferir cualquier gen).

En la especializada el fago realiza primero un ciclo lisogénico y luego uno lítico.

Ciclo lisogénico: el material genético del virus se integra al cromosoma (como profago) gracias
al proceso de recombinación específica de sitio (la bacteria adquiere inmunidad contra fagos del
mismo tipo) y ante una causa externa se puede inducir un ciclo lítico. Se produce una escisión
incorrecta y se lleva genes cromosomales adyacentes al sitio de inserción hacia una célula
receptora.

En la generalizada, las partículas de transducción contienen genes cromosomales o

plasmídicos, NO contiene DNA del fago. En la especializada, la partícula de transducción
contiene genes del fago y genes cromosomales adyacentes al sitio de inserción del fago.
Tanto en la especializada como en la especifica, el destino del exogenote
puede ser: degradación por enzimas de restricción, recombinación homóloga.
La diferencia está en que en la generalizada, puede haber replicación autónoma de los
plásmidos y en la especializada recombinación específica de sitio.

Graficar fago T4 y describir en pasos el ciclo

Es un fago virulento (produce siempre un ciclo lítico y luego de replicarse se libera lisando la
célula hospedadora).
La inyección del material genético se da gracias a una lisozima viral que produce un agujero en
la superficie bacteriana.
Las bacterias tienen diferentes mecanismos que les permiten ser resistentes a la acción de los
bacteriófagos: Modificación o ausencia del receptor del virus, restricción y modificación del DNA
(mediante enzimas de restricción y metilación post replicativa del DNA: sistema de
restricción-modificación). Aunque algunos virus son capaces de burlar estas defensas.
Fago λ : Es un fago atemperado que puede dirigirse a un ciclo lítico o lisogénico (donde se frena
el ciclo lítico y el material genético del fago se integra al de la célula hospedadora pudiéndose
replicar con el genoma bacteriano; el genoma bacteriano aumenta de tamaño).
La integración al genoma es dirigida (no azarosa).

Los fagos poseen como material genético ARN simple cadena. ​FALSO. Existen de
doble y simple cadena de ADN y ARN.
Los fagos participan en la transferencia de resistencia a antimicrobianos.​ Verdadero.
Se los suele utilizar en las técnicas de transferencia de genes como transducción.
En el ciclo lítico, los fagos se incorporan al genoma bacteriano.​ FALSO. En el ciclo
lisogénico se incorporan.

Conjugación:​ Transferencia de genes por contacto entre célula dadora y receptora. La célula
dadora tiene el plásmido F (F+) y la receptora F-. El plásmido o factor F conjugativo contiene
genes tra que están relacionados con la síntesis del pili sexual, contracción etc; secuencias de
inserción, Ori V (origen de replicación autosómica) y OriT lugar donde el plásmido se abre para
ser transferido.
Bacteria F+, el factor F está como plásmido de replicación autónoma y sólo pueden transferirse
genes plasmídicos.
Bacteria Hfr: bacteria macho en la cual el factor F está integrado en el cromosoma bacteriano
(se puede integrar de muchas formas lo que marca un diferencia con el fago lambda) y puede
transferirse además de los genes plasmídicos, genes cromosomales. Se sigue comportando
como un plásmido conjugativo pero se transfieren genes cromosomales y no plásmidos.
Bacteria F´: El factor F está como plásmido de replicación autónoma pero posee algún gen
bacteriano. Se obtienen a partir de una Hfr cuya recombinación ha sido aberrante. Se transfieren
fragmentos de genoma bacteriano.

7) Se tiene una cepa de Klebsiella pneumoniae resistente a beta lactámicos y se quiere

saber si dicha resistencia se encuentra codificada en un plásmido conjugativo.
Esquematizar los pasos a seguir y describir claramente
- las características de la cepa dadora y de la cepa receptora
- los medios utilizados
- los controles a efectuar
1) Evalúo que la resistencia se encuentre en un plásmido y no en el cromosoma por medio
de una transformación.
2) Elijo una cepa receptora que presente resistencia a otro Atb diferente al de la cepa
dadora.
Características cepa dadora: la célula dadora se la denomina masculina o F+ y presenta el
plásmido F mientras que la receptora o femenina es F- (sin plásmido). El plásmido F contiene
los genes tra que están relacionados con la síntesis del pili sexual, contiene dos orígenes de
replicación el oriV (origen de la replicación autónoma del plásmido) y oriT (lugar donde el
plásmido se abre para ser transferido desde F+ a F-).
3) Se toma una ansada de la cepa ​Klebsiella pneumoniae​ en estudio y se la siembra en un
medio TSA con MgCl2 en un área circular de aproximadamente 2cm de diámetro. Tomar una
cepa de ​Klebsiella p.​ que se sabe que no es resistente a ampicilina y si por ejemplo al Ácido
nalidíxico y sembrarla sobre la cepa anterior. Incubar a 37°C durante dos horas. Luego tomar
una ansada de esa mezcla dadora-receptora y sembrar en estrías en un medio TSA con
ampicilina y Ácido nalidíxico por 24hs 37°C. Si el plásmido es conjugativo, deberían crecer.

Controles
1. Medio TSA con ácido nalidíxico. Sembrar dos estrias. Una con cada cepa. Debería
crecer solo la célula receptora.
2. Medio con Ampicilina. Debería crecer solo la célula dadora
3. Medio con Ampicilina+ácido no crece ninguna.

10) Cómo modificaría el halo de inhibición de un ATB.

Parámetros a tener en cuenta:
Espesor del medio de cultivo
Concentración del inóculo inicial
Concentración de Antibiótico
Composición del medio
7) La sustancia mutagénica D, dio 50 revertantes (igual que el control positivo) , y el
número de revertantes dio igual que el control negativo (creo que decía 10).
A) Qué puede inferir acerca de la sustancia?
B) Una microdeleción en el operón bio +, puede revertirse con el uso de un agente
mutagénico que sustituye una base por otra? Justifique

TAXONOMÍA

Identificación: Proceso de determinar que un aislamiento particular pertenece a un

taxón reconocido. El taxón son grupos de organismos con características particulares.
Clasificación: Organización de los organismos en taxones en función de sus semejanzas
o de su parentesco evolutivo.

Especie: rango taxonómico básico y el más importante.

Una especie es un conjunto de cepas que comparte el 70% o más de homología DNA-DNA con
un 5% o menos de Tm.
Tipificar una cepa significa identificar por debajo del nivel de la especie. No poseen
nomenclatura oficial estandarizada y pueden distinguirse por algunas características especiales
o distintivas.

Taxonomía clásica: mide características fenotípicas y se vale de ellas para la agrupación. De

aquí surgen los esquemas o llaves dicotómicas.
Taxonomía polifásica: es la taxonomía que se aplica en la actualidad ya que integra
distintos datos genotípicos, fenotípicos y filogenéticos.

Taxonomía molecular: incorpora análisis de ácidos nucleicos como %GC e hibridación del DNA.

Nomenclatura: sistema binomial formado por género y epíteto específico, ambas partes
determinan la especie.

Para identificar tengo que partir siempre de un cultivo puro.

9) 2 criterios genotípicos y 2 criterios fenotípicos para pseudomonas (la que vimos en tp).
Criterios genotípicos:
Tamaño del genoma
Perfiles de reestricción
%GC: Es el porcentaje de guanina-citocina que tiene un ácido nucleico. Puede ser detectado
directamente por HPLC o indirectamente calentando el material genético, midiendo la
absorbancia a 260nm determinando el parámetro Tm. El %GC no varía más del 3% dentro de
especies bien definidas y no más de un 10% dentro géneros bien definidos.

Hibridación DNA DNA: Sirve para definir especies; consiste en tomar las muestras de DNA que
se desean comparar, calentarlas para romper los puentes de H y observar luego el grado de
apareamiento con otra hebra marcada radiactivamente. Las cepas pertenecen a una misma
especie cuando presentan por lo menos 70% de homología DNA DNA.
Secuenciación del RNAr 16s: criterio utilizados para dividir las especies en 3 dominios. Es un
buen cronómetro evolutivo xq está presente en todos los organismos, la función es siempre la
misma, no varía mucho con el paso del tiempo.

Criterios fenotípicos: directamente relacionadas con la naturaleza y la actividad de las enzimas y

proteínas (que al ser productos génicos proporcionan una comparación indirecta con el genoma)
Información morfológica:
Forma, tamaño y color.
Tinciones
Presencia de cilios o flagelos
Forma y localización de endosporas.
Información fisiológica y metabólica:
Fuente de C y N
Fuente de energía
Productos de fermentación
Proteínas expresadas y marcadores taxonómicos (composición de ácidos grasos, de
peptidoglicano, etc).
Rango de Ph y temperatura óptimo.
Comportamiento frente al oxígeno
Sensibilidad a ciertos antibióticos.
Info ecológica:

Variación fenotípica en diferentes condiciones ambientales.

Cultivo de cepas de ​Serratia marcescens p ​ igmentada y otra no productora de pigmento en
agar nutritivo incubadas a distintas temperaturas por 24hs.
Se observó que la cepa wild type expresa el gen productor del pigmento a 30 grados pero
no lo hace a 37, es decir, varía el fenotipo a diferentes temperaturas aunque no se
modifique el genotipo.
Por otro lado la cepa no productora de pigmento posee igual fenotipo a las diferentes
temperaturas e igual fenotipo que la wild type a 37 grados aunque no comparten el mismo
genotipo entre cepas.

Pseudomonas aeruginosa en medios agar nutritivo y agar Cetramide incubadas a 37 grados

por 24 hs.
El medio Cetramide es un medio con muchos cationes y poco hierro, es por éste motivo que
en dicho medio la bacteria estimula la expresión del gen de productos sideróforos que
captan hierro. Dicho gen comparte promotor con el gen productor de pigmento y al estimular
la expresión del mismo, podemos observar también la producción de pigmento.
En el medio nutritivo, no observamos producción de pigmento.

De los experimentos realizados para evidenciar la variación fenotípica en diferentes

condiciones ambientales concluímos que puede modificarse el fenotipo si el microorganismo
se encuentra en medios o a temperaturas diferentes ya que puede inducirse o inhibirse la
acción de una enzima particular.

10) Que es tipificación y cual es su utilidad? Mencione 2 ejemplos y fundamente.

Tipificar una cepa determinada significa identificar por debajo del nivel de la especie. Primero
debe haber una identificación.
Método del genoma completo
MLST
La tipificación se realiza por métodos moléculas, serológicos.

5) Técnicas bioquímicas y taxonomía

Especie: es el rango taxonómico más básico, y el más importante. [luego viene género,
familia,(...), dominio]. Los dominios son tres: Eukarya, Bacteria y Archaea.

Taxonomía: Es la ciencia que se ocupa de la clasificación. En microbiología no es una ciencia

estática sino que se va redefiniendo con los avances. La taxonómica incluye 3 áreas o
competencias:
a. La clasificación: organizar los organismos en grupos según sus parentescos evolutivos.
b. La nomenclatura: se ocupa de asignar nombre a los grupos taxonómicos de acuerdo a
ciertas normas. Por ejemplo. E.coli, la E es la especie y coli por el epitelio.
c. La identificación: proceso de determinar que un aislamiento en particular pertenece a
un grupo taxonómico reconocido. La secuencia ADNr 16s de la subunidad 30s de las
bacterias fue el criterio utilizado para definir el último esquema de los 3 dominios.
Archaea, Bacteria y Eukarya.
La especie es el rango taxonómico más básico pero más importante. Una especie es un
conjunto de cepas que comparten el 70% o más de homología DNA-DNA con menos de un
5% de delta Tm
Tipificar una cepa determinada significa identificar por debajo del nivel de la especie.

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

6) Llega una muestra y al hacer un gram se ven sólo cocos positivos. Esquematizar todos
los pasos a seguir para identificar si en la muestra hay E. coli
1. Enriquezco en un caldo McConkey. La bilis de buey estimula el crecimiento de bacterias
coliformes e inhibe el crecimiento de Gram +.
2. Tomo una alícuota con un ansa y lo siembro en un medio de cultivo Levine por agotamiento
de superficie en estrías. El medio levine es un medio selectivo y diferenciador. La combinación
de eosina y azul de metileno inhibe el desarrollo de G+ (selectividad) y posee lactosa que
permite diferenciar células fermentadoras de las no fermentadoras de lactosa. Las colonias
fermentadoras (E.coli) generan colonias negras azuladas con un brillo metálico. Las no
fermentadoras son incoloras. Se incuba a una temperatura y tiempo adecuado (37°C, 24hs).
3. Tomo una colonia fermentadora con un ansa y la siembro en un medio TSA para asi obtener
un medio de cultivo puro (repique). Criterio de cultivo puro: homogeneidad macro y microscópica
en un medio no selectivo.
4. Llaves dicotómicas de los mas general (tinción gram) a lo más específico, terminando en
pruebas bioquímicas.
5. ​Pruebas bioquímicas para Bacilos G -​:
Nombre
TSI (agar hierro-triple azúcar)
(el agar pico de flauta se
inocula pinchando en
profundidad)
Es tiempo dependiente, ya
que los resultados pueden
variar.
Citrato
Demuestra la capacidad de
las bacterias de metabolizar
citrato.
Prueba de la OXIDASA
Prueba de la UREASA
(detecta la enzima que
degrada la urea produciendo
CO2 y NH3.
LIA: lisina, hierro y glucosa
Componentes
1% de lactosa y sacarosa y
0.1% de glucosa. Contiene
rojo de fenol que vira según
el pH.
Tiene tmb sulfato amónico
ferroso (a partir del cual
algunas enterobacterias
pueden producir SH2 y
peptona (solo la usa en
aerobiosis y alcaliniza el
medio)
Citrato como única fuente de
carbono y fosfato de amonio
como única fuente de N2.
Únicamente las bacterias
capaces de metabolizar el
citrato crecen. Se genera una
fuerte alcalinización del
medio viran el indicador(azul
de bromotimol) a azul (La
E.coli no crece quedando el
medio de color verde).
Carbono sólo en Citrato,
Nitrógeno sólo en amonio.
Azul de bromotimol, pH 6,9
(verde)
Sustrato + 02 + citocromo.
Urea, rojo de fenol, pH 6,9
(amarillo).
Púrpura de bromocresol
(amarillo), hierro y lisina.
Observaciones
Evalúa la ​producción de
ácido sulfhídrico​, que de ser
positiva la reacción implica el
ennegrecimiento del medio
de cultivo por formación de
sulfuro de hierro.
Fermentación de azúcares:​ Si
no fermenta es todo rojo color
del medio, si fermenta
glucosa se ve el pico alcalino
(rojo por el uso de peptonas)
y el fondo amarillo (ácido); si
fermenta glucosa y lactosa
y/o sacarosa se ve todo
amarillo.
Producción de gas:​ si se
observa desprendimiento del
agar
La fermentación de amonio
alcaliniza el medio y se
observa AZUL. Ensayo
positivo <=> azul +
observación de crecimiento
(si no hay crecimiento puedo
tener falso positivo por
alcalinización del medio por
contaminación) => la bacteria
fermenta citrato
Coloración ROSA, presencia
de la citocromo c-oxidasa
Coloración ROJA, por
alcalinización del medio por
la formación de NH3
(reacción positiva).
(E. coli da negativo)
Si hay LISINA
DECARBOXILASA: positivo
VIOLETA por alcalinización
del medio
Si hay LISINA

SIM: sulfhídrico, indol,
movilidad.
Rojo de metilo -
Voges-Proskaver
MIO: movilidad, indol, ornitina
Catalasa (todos los
estafilococos son catalasa +)
(streptococcus dan negativa)
Coagulasa
Peptonas, citrato de amonio,
agar
TUBO 1: rojo de metilo
TUBO 2: NaOH y naftol
Púrpura de bromocresol
(amarillo)
Rvo de Kovacs para evaluar
indol.
Es importante contar con
cultivos control.
DESAMINASA: el medio se
mantiene ácido, se observa
rojo en la parte superior por
formación de complejo con el
Fe y amarillo en la parte
inferior.
Si hay formación de ácido
sulfhídrico hay formación de
un precipitado negro en el
fondo del tubo.
Si los microorganismos
tienen movilidad hay un
desplazamiento de la línea
de siembra.
TUBO 1: positivo ROJO
fermentación ácida de
glucosa
TUBO 2: positivo ROJO,
fermentación neutra de la
glucosa
Positivo VIOLETA,
alcalinización por presencia
de ornitina decarboxilasa.
Positivo para INDOL: anillo
negro, presencia de enzima
triptofanasa.
La catalasa es una enzima
que poseen la mayoría de las
bacterias aerobias y que las
protege frente al peróxido de
H2. La actividad de esta
enzima se detecta añadiendo
unas gotas de peróxido de
hidrógeno sobre las colonias
del MO en un portaobjetos; el
resultado es positivo si se
observa la formación de
burbujas en el momento.
Staphylococcus aureus se
diferencia de otras especies
de estafilococos por la
presencia de la enzima
coagulasa que es capaz de
transformar fibrinógeno en
fibrina. La presencia de la
misma se evidencia en un
tubo de ensayo por la
formación de un coágulo.
DNAsa
Se siembra a partir de un
cultivo puro el MO en estudio
sobre el agar y se incuba en
anaerobiosis 24-48hs en
anaerobiosis 35-37°C
Medio con agar, ácido
dexosirribonucleico, agua
destilada. Revelado con: HCL
1N
Detección de enzimas
desoxirribonucleasas.
El DNA se encuentra polimerizado
y de encontrarse la enzima se
hidroliza. Frente al agregado de
HCl el DNA hidrolizado presenta
transparencia (halo claro) mientras
que el polimerizado precipita.

Pruebas para identificar microorganismos G+

PATOGENIA
10) Clasificación de exotoxinas según su actividad biológica.
Algunas características: son producidas por la célula y liberadas al medio, G+ y G-, naturaleza
proteica, no generan fiebre, se pueden neutralizar con antitoxinas.
Toxinas tipo A-B: el dominio B tiene que ver con el reconocimiento de una porción receptora y el
dominio A es el de actividad biológica.
Toxina colérica, diftérica y tetánica. Dos mecanismos de acción: inhibición de la síntesis proteica
y la alteración de la transducción de señales (toxina colérica)
Toxinas formadoras de poros: son disruptores de membrana. Alfa toxina por ejemplo.
Son toxinas citolíticas, producen la muerte de la célula hospedadora.
Toxina superantigénica: toxina del síndrome del shock tóxico: El antígeno no es procesado por
la célula fagocítica sino que se pega al TCR por unión no específica y activa a los LT generando
un proceso inflamatorio sistémico.

9) Definir especie bacteriana, factor de virulencia, superantígeno, serotipo.

Especie bacteriana: es el rango taxonómico más básico pero más importante. Una
especie es un conjunto de cepas que comparten el 70% o más de homología DNA-DNA,
con un 5% o mentos de deltaTm.
Factor de virulencia: es toda estrategia que hace que un microorganismo sea exitoso a
la hora de producir una enfermedad. Se pueden o no expresar en forma constante. Son
productos de la expresión de genes de virulencia. No es esencial. La
virulencia de varios MO se compara según su DI50. Se clasifican en a, los que
promueven la colonización y la sobrevida en el hospedador y b, los que producen daño
en el hospedador

Factores de virulencia
Adhesinas fimbriadas: adherencia a células de de la mucosa a través de fimbrias que rodean a
toda la bacteria.
Adhesinas no fimbriadas: unión estrecha a células de la mucosa
Invasinas: generan fagocitosis forzada por células no fagocíticas. Producen reordenamiento de
actina para que puedan fagocitar.
Flagelos bacterianos: permiten movilizarse.
Sideróforos: captan hierro.
Cápsula: previenen la fagocitosis, reducen la activación del complemento.

10) V o F, justificar todas

a) las exotoxinas de liberan cuando la bacteria se lisa.
Falso, las endotoxinas se liberan cuando la bacteria Gram negativa se lisa. Son
lipopolisacáridos. Por otro lado, las exotoxinas son proteínas producto del metabolismos celular
de tanto Gram positivas como negativas y la célula las libera al exterior SIN LISIS.
b) las invasinas provocan reordenamientos del citoesqueleto de actina en células no
fagociticas.
Verdadero, las invasinas provocan la fagocitosis forzada de células normalmente no fagocitícas.
Provocan el reordenamiento de los filamentos de actina para que puedan fagocitar.
c) la toxina colérica es un superantígeno.
Falso, es una exotoxina de tipo AB. El dominio A le da la actividad biológica tóxica y el dominio
B es el que es reconocido por el receptor de la célula huésped
d) Los sideróforos sirven para invadir al huésped.
Falso. Los sideróforos son quelantes de hierro. La captación se produce porque la bacteria
necesita hierro y además dejan al organismo con bajas concentraciones de hierro.

e) Escherichia coli enterohemorrágicas liberan verotoxinas.

Verdadero​, ​producen daño en las células del huésped.

Ciclo celular E.coli:

o Ciclo celular se define como la secuencia de eventos, perfectamente coordinados en tiempo y
espacio, que ocurre desde la formación de una nueva célula hasta la siguiente formación celular
o Ocurren los siguientes eventos:
Aumento ordenado de la masa y longitud: es un evento ordenado continuo
Replicacion de DNA: iniciación elongación y terminación. LA REPLICACIÓN SÓLO OCURRE
CUANDO SE ALCANZA UN TAMAÑO ADECUADO, UN TAMAÑO UMBRAL.
Segregación del DNA a ambos extremos de la célula
Formación de un septum, intervención del divisoma y separación.

Ciclo celular levadura:

o Reproducción asexual
Brotación: se forman pseudohifas cuando el brote no se puede separar. Sobre la célula parental
se forma un brote en la superficie externa. Cuando el brote se alarga, el núcleo de la célula
parental se divide y un núcleo migra al interior del brote. El material de la pared celular se
deposita entre el brote y la célula parental y luego ocurre la división.

Fison: Se divide de modo uniforme para producir dos células nuevas. Durante la fisión, la célula
parental se alarga su núcleo se divide y se producen dos células hijas.

o Reproducción sexual

Cuáles son los dos mecanismos mediante los cuales obtiene energía una bacteria
anaerobia facultativa en ausencia de oxígeno? Cuales son los aceptores finales de
electrones en cada caso? En cuál de los dos procesos se obtiene mayor cantidad de atp?
Respiración aeróbica o anaeróbica. La respiración es el proceso redox en el que el dador de
electrones puede ser un compuesto orgánico o inorgánico, pero el receptor de electrones final
es un compuesto inorgánico.
o Respiración aeróbica: Se produce en aerobiosis, el aceptor final de electrones es el oxígeno
molecular. Se da en tres etapas: oxidación del piruvato, ciclo de Krebs, y la cadena respiratoria
obteniéndose 36 o 38 ATP.
o Respiración anaeróbica: Se produce en anaerobiosis, el aceptor final de electrones es otro
compuesto inorgánico (nitrato,sulfato,carbonato).Si la bacteria es anaerobia estricta, el aceptor
final son los carbonatos y sulfatos. Si la bacteria es anaerobia facultativa, el aceptor final son los
nitratos.

Fermentación: se refiere a la obtención de energía en ausencia de oxígeno. 2 a 4 ATP.

Compuestos orgánicos generan piruvato en anaerobiosis. Productos finales ácidos,
dependiendo la fermentación, alcoholes y CO2 y H2. Ocurre en el citoplasma.

Cómo realizar un recuento de viables de Staphylococcus sp. en 1 gramo de carne

molida?
NO SE HACE ENRIQUECIMIENTO Se pesa 1 gramo de carne, se tritura y se la pone en un
recipiente con un volumen definido, por ejemplo 30 ml, de solución estéril. Para el recuento se
utiliza la técnica de recuento en placa, en la cual se cuentan el número de UFC. Suponiendo que
cada colonia proviene de una célula viable, el número de colonias es proporcional al número de
microorganismo viables.
A esa solución fisiológica con la muestra, se le deben realizar diluciones seriadas (1 exp-1,
1exp-2…1exp-6) ya que al momento de contar, las placas que se utilizan para el recuento son
aquellas que contienen entre 30 y 300 UFC.
Tubo 1: Se toma 1 ml y se agrega a 9 ml de sc fisiológica y HOMOGENEIZAR siempre.
(dilución 10exp-1)
Tubo 2: se toma 1 ml del tubo 1 y se agregan a 9 ml de sc fisiológica estéril (dilución
10exp-2)
Tubo 3: se toma 1 ml del tubo 2 y se agrega a 9 ml de sc fisiológica estéril (dilución
10exp-3)
Tubo 4: se toma 1 ml del tubo 3 etc etc..
Tubo 6: se toma 1 ml del tubo 5 y se agrega a 9ml de sc fisiológica estéril (dilución
10exp-6)
De cada tubo se toma 1 ml y se siembra en un agar CHAPMAN, medio selectivo para el
crecimiento de S.aureus (por duplicado), con la ayuda de la ansa de vidrio se esparce
homogéneamente por el medio. Se incuba por 2 días a 37°C y luego se cuentan las
colonias. Para los cálculos que siguen se deben tomar en cuenta sólo aquellas diluciones
en la cuales las UFC estén entre 30 y 300. Por ejemplo, si solo en la placa proveniente del
tubo 3 hay colonias entre 30 y 300, por ejemplo 120 y 180 (porque se hace por duplicado)
los cálculos son los siguientes:

(120+180)/2= 150 UFC.

150UFC x 1exp3 (inversa de la dilución) / 1ml (alícuota sembrada) = 1.50 exp 5 UFC/ml de
la muestra original.
En la muestra original,según este ejemplo, hay 30ml. Entonces hay 4.50 exp6 UFC en esos
30ml. Esas 4.50exp6 UFC están en ese gramo de carne molida.