BACTERIOLOGÍA 1 Pag.

1 USAMEDIC 2018

LOS SERES VIVOS

BACTERIOLOGIA
• DOMINIOS
Dr. Juan Vega Bazalar • BACTERIA
• ARCHAEA
Medicina Interna
• EUKARYA
HNGAI

USAMEDIC

DOMINIOS
LOS SERES VIVOS
• DEFINICION
– Conjunto de átomos y moléculas que forman
una estructura material muy organizada y
compleja que se relaciona con el medio
ambiente y que tienen la capacidad de
desarrollar las funciones básicas de la vida.
– La propiedades básicas de un ser vivo son:
organización, homeostasis, irritabilidad,
metabolismo, desarrollo y reproducción.

LOS SERES VIVOS

LOS SERES VIVOS
• DEFINICION
– La materia que compone los seres vivos esta • REINOS
formada en un 95% por 4 bioelementos – REINO ARCHAEABACTERIA
(átomos) que son el carbono, hidrógeno, – REINO EUBACTERIA
oxígeno y nitrógeno a partir de los cuales se – REINO PROTISTA
forman las biomoléculas. – REINO FUNGI
– Existen 2 tipos de biomoléculas: – REINO PLANTAE
• Orgánicas: glúcidos, lípidos, proteínas y ácidos – REINO ANIMALIA
nucleicos.
• Inorgánicos: agua, sales minerales y gases.

LOS SERES VIVOS REINOS

• CATEGORIAS TAXONOMICAS

DOMINIO
REINO
FILO
CLASE
ORDEN
FAMILIA
GENERO
ESPECIE
SUBESPECIE
BACTERIOLOGÍA 1 Pag. 2 USAMEDIC 2018

LOS SERES VIVOS ROBERT HOOKE

• DOMINIO BACTERIA
– REINO
• EUBACTERIA
• DOMINIO ARCHAEA
– REINO
• ARCHAEABACTERIA
• DOMINIO EUKARIA
– REINOS
• PROTISTA
• FUNGI
• PLANTAE
• ANIMALIA

LOS SERES VIVOS

LOS SERES VIVOS
• PROCARIOTICOS
• TIPOS DE CELULAS – BACTERIAS
– CIANOBACTERIAS
– CELULAS PROCARIOTICAS
– ARQUEOBACTERIAS
• DOMINIO BACTERIA
• DOMINIO ARCHAEA • EUCARIOTICOS
– PROTOZOOS
– CELULAS EUCARIOTICAS
– HONGOS
• DOMINIO EUKARIA
– PLANTAS
– ANIMALES

LOS SERES VIVOS

CARACTERISTICA CEL. BACTERIANA CELULA HUMANA
PROCARIOTICA EUCARIOTICA
DNA/MEMB. NO SI
NUCLEAR
DIVISION MITOTICA NO SI

DNA ASOCIADO A NO SI
HISTONAS
Nº CROMOSOMAS UNO MAS DE UNO

ORGANELAS CON NO SI
MEMBRANAS
TAMAÑO RIBOSOMA 70 S 80 S

PARED CELULAR SI NO
PEPTIDOGLICANO

EL MUNDO MICROBIANO CELULA PROCARIOTICA

Clasificación Woese et. al. 1977

REINO CELULA
EUBACTERIA PROCARIOTICA BACTERIAS
ACTINOMICETOS
ARCHAEBACTERIA PROCARIOTICA BACTERIAS

PROTISTA EUCARIOTICA PROTOZOOS

FUNGI EUCARIOTICA HONGOS

PLANTAE EUCARIOTICA PLANTAS

ANIMALIA EUCARIOTICA ARTROPODOS

MAMIFEROS
HOMBRE
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CELULA BACTERIANA LOS SERES VIVOS

• TAXONOMIA

BACTERIA (D)
EUBACTERIA (R)
PROTEOBACTERIA (P)
GAMMAPROTEOBACTERIA (C)
ENTEROBACTERIALES (O)
ENTEROBACTERIACEAE (F)
ESCHERICHIA (G)
E. COLI (E)

CELULA EUCARIOTICA
LOS SERES VIVOS

• RESUMEN: LOS PARASITOS SON:

– ORGANISMOS UNI O PLURICELULARES
– CELULAS EUCARIOTICAS
– PERTENECEN AL DOMINIO EUKARIA
– REINO PROTISTA O ANIMALIA

CELULA EUCARIOTICA
LOS SERES VIVOS
• TAXONOMIA

EUKARIA (D)
PROTISTA (R)
SARCOMASTIGOPHORA (P)
ZOOMASTIGOPHOREA (C)
DIPLOMONADIDA (O)
HEXAMITIDAE (F)
GIARDIA (G)
INTESTINALIS (E)

LOS SERES VIVOS LOS SERES VIVOS

• RESUMEN: LAS BACTERIAS SON: • RESUMEN: LOS HONGOS SON:

– ORGANISMOS UNICELULARES – ORGANISMOS UNI O PLURICELULARES
– CELULAS PROCARIOTICAS – CELULAS EUCARIOTICAS
– PERTENECEN AL DOMINIO BACTERIA – PERTENECEN AL DOMINIO EUKARIA
– REINO EUBACTERIA – REINO FUNGI
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LOS SERES VIVOS ANTONIE VAN LEEUWENKOEK

• TAXONOMIA

EUKARIA (D)
FUNGI (R)
ASCOMYCOTA (P)
HEMIASCOMYCETES (C)
SACCHAROMYCETALES (O)
SACCHAROMYCETACEAE (F)
CANDIDA (G)
ALBICANS (E)

BACTERIOLOGIA
Estafilococo aureus
LOS SERES VIVOS

• SER HUMANO
– ORGANISMOS PLURICELULARES
– SON CELULAS EUCARIOTICAS
– PERTENECEN AL DOMINIO EUKARYIA
– REINO ANIMALIA

BACTERIOLOGIA
LOS SERES VIVOS Eschericha coli

• TAXONOMIA

EUKARIA (D)
ANIMALIA (R)
CHORDATA (P)
MAMMALIA (C)
PRIMATES (O)
HOMINIDAE (F)
HOMO (G)
SAPIENS (E)
AAU (SE)

BACTERIOLOGIA
EL MUNDO MICROBIANO Vibrio cholerae

• MICROBIO
– MICRO : PEQUEÑO
– BIOS : VIDA
• MICROBIOLOGIA
– MICRO : PEQUEÑO
– BIOS : VIDA
– LOGOS : CIENCIA
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BACTERIOLOGIA BACTERIOLOGIA
Mycobacterium tuberculosis
• 1.- Glicocalix: está compuesta de polímeros
2.- Pared celular: separa a la bacteria del medio
que la rodea.
3.- Periplasma: espacio entre la pared celular y
membrana citoplasmática.
4.- Membrana citoplasmática: separa el
citoplasma de la pared celular.
5.- Citoplasma: es una solución coloidal que
contiene elementos nucleares, inclusiones
citoplasmáticas (vacuolas, vesículas, etc.) y
ribosomas.
6.- Flagelos: nacen en el citoplasma y son
estructuras de locomoción.
7.- Fimbrias o pili: formaciones piliformes que
nacen en el citoplasma.

BACTERIOLOGIA BACTERIOLOGIA
Treponema pallidum
• BACTERIAS : Glicocalix
– Compuesto por polisacáridos y en menor
proporción por polipéptidos. Se une en
forma laxa a la pared celular. Tiene la
capacidad de fijar agua y evita la
resequedad celular.
– Si está organizado en una estructura
definida y está firmemente adherido a la
pared celular se llama cápsula de lo
contrario se llama capa mucilaginosa
– Funciones: Protección, adherencia,
material de reserva, factor de virulencia
(opsonización y fagocitosis)

BACTERIOLOGIA CAPSULA – GLICOCALIX - BIOPELICULA

• BACTERIAS: Características
– No poseen Membrana Nuclear
– Poseen un solo cromosoma circular
– No poseen organelas rodeadas por membranas
– Presentan Pared Celular de Peptidoglicano
– Membrana citoplasmática formada por bicapa
de fosfolípidos y proteínas
– Sus membranas no contienen esteroles
– Reproducción por división binaria
– Los ribosomas son 70S formados por
subunidades 30S y 50S
– Tamaño de 0.5 – 5 micras
– La mayoría son de vida libre

CELULA BACTERIANA BACTERIOLOGIA

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BACTERIOLOGIA
• Bacterias Gram (-)
• BACTERIAS: Pared celular
– No se encuentra en la célula humana
– Componente principal: peptidoglicano
• N-acetil murámico y N-acetil glucosamina
• Pentapéptidos
• Síntesis en el citoplasma
– Pared rígida que da forma a la bacteria
– Falla en su estructura causa la lisis
BACTERIOLOGIA
– Presencia de membrana externa
• Lipopolisacárido
– Porción lipídica A
– Porción polisacárido (Antígeno O)
• Canales formado por porinas
• Proteínas receptoras de nutrientes
– Capa delgada de peptidoglicano
– Presencia del espacio periplásmico
– Membrana citoplasmática

BACTERIOLOGIA BACTERIAS GRAM (-)

• Bacterias Gram (+)

– Pared celular
• Capa gruesa de peptidoglicano
• Presencia del polisacárido ácido teicoico
• Presencia de proteínas de superficie
– Membrana citoplasmática

BACTERIAS GRAM (+) ESTRUCTURA DEL LIPOPOLISACARIDO

BACTERIOLOGIA BACTERIOLOGIA
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BACTERIOLOGIA
Membrana citoplasmática
BACTERIOLOGIA
• Treponema palidum
• Mycobacterias
• Clamidias
• Ricketsias
• Mycoplasma pneumoniae

BACTERIOLOGIA
BACTERIOLOGIA
Membrana citoplasmática
Mycoplasma

BACTERIOLOGIA
• BACTERIAS: Citoplasma
• BACTERIAS: Membrana citoplasmática
– Es una bicapa fosfolípidos 20-30%
– Contiene diversas proteínas 50-70%
– Funciones:
• Barrera osmótica
• Transporte
• Transducción de energía
• Biosíntesis
• Centro de replicación del DNA
• Punto de anclaje para los flagelos
BACTERIOLOGIA
– Fluido que contiene sustancias disueltas y
partículas en suspensión como los ribosomas
– El 80% del citoplasma es agua y el resto esta
dado por ácidos nucleicos, carbohidratos,
proteínas, lípidos, iones orgánicos,
compuestos de bajo peso molecular y
partículas.
– Los ribosomas se encuentran libres en el
citoplasma o adheridos a la membrana
citoplasmática
– Gránulos: sirven como material de reserva.
Ejm volutina que es reserva de alta energía en
la forma de metafosfato polimerizado

BACTERIOLOGIA BACTERIOLOGIA
• BACTERIAS: Citoplasma
– Nucleoide: Es el área del citoplasma en la cual
se encuentra localizado el DNA. El DNA de las
células procarióticas en una molécula simple
circular y contiene alrededor de 2000 genes
– Plásmidos: Son extracromosomales. Son
moléculas DNA circulares de doble cadena
que son capaces de replicar independiente del
cromosoma bacteriano.
– Transposomas: Son piezas de DNA. Tienen
genes que pueden codificar enzimas que
inducen resistencia a ATB, toxinas o enzimas
metabólicas que pueden causar mutaciones.
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BACTERIOLOGIA
• BACTERIAS: Flagelos
– Flagelos: Filamentos helicoidales que se
extienden desde el citoplasma a través de la
pared celular. Son los responsables de los
movimientos de las bacterias en los líquidos.
Tienen tres partes cuerpo basal, gancho y
filamento. El filamento está compuesto de una
proteína llamada flagelina. Los flagelos funcionan
como un “sacacorcho”
BACTERIOLOGIA
• BACTERIAS: Fimbrias
– Formaciones piliformes no helicoidales, no
tiene relación con el movimiento
– Suelen ser mas cortos, mas delgados y mas
numerosos que los flagelos
– Nacen de la citoplasma sin embargo no se
conocen que posean estructuras de anclaje a
la célula
– Están formados por subunidades de una
proteína llamada pilina
– Tienen por función la adherencia y tiene que
ver en la reproducción sexual de las bacterias

BACTERIOLOGIA
Flagelos BACTERIOLOGIA
REPRODUCCION DE LAS BACTERIAS

• ASEXUAL :
– DIVISION BINARIA
• SEXUAL O PARASEXUAL:
– CONJUGACION
– TRANSDUCCION
– TRANSFORMAION

BACTERIOLOGIA BACTERIOLOGIA
Flagelos REPRODUCCION DE LAS BACTERIAS
• ASEXUAL : BIPARTICION

BACTERIOLOGIA BACTERIOLOGIA
REPRODUCCION DE LAS BACTERIAS
Flagelos
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BACTERIOLOGIA BACTERIOLOGIA
División N. gonorrhoeae TRANSFERENCIA DNA - BACTERIAS

BACTERIOLOGIA
TRANSFERENCIA DNA - BACTERIAS

BACTERIOLOGIA
• REPRODUCCION PARASEXUAL
– CONJUGACION
TRANSFORMACION
– TRANSDUCCION
– TRANSFORMACION

BACTERIOLOGIA BACTERIOLOGIA
TRANSFERENCIA DNA ENTRE LAS BACTERIAS
• Crecimiento y muerte de las bacterias
CONJUGACION – Las bacterias reproducen por división binaria
– Las bacterias tienen un crecimiento exponencial
• Nº de células 1 2 4 8 16
• Exponencial 20 21 22 23 24
– El tiempo de duplicación de una bacteria varía de
especie a especie y depende además de la
cantidad de nutrientes, la temperatura, el pH y
otros factores ambientales

BACTERIOLOGIA
TRANSFERENCIA DNA - BACTERIAS
BACTERIOLOGIA
TRANSDUCCION • Ciclo de crecimiento de las bacterias
– Fase de Retardo: El microbio se adapta al
nuevo medio. Hay gran actividad metabólica,
las bacterias están madurando pero no hay
división celular. Se produce síntesis de RNA
– Fase logarítmica: Crecimiento exponencial.
Ocurre la duplicación celular. Los ATB B-
lactámicos actúan durante esta fase
– Fase estacionaria: Los nutrientes esenciales
empiezan a desaparecer y productos tóxicos
causan un crecimiento lento hasta que el Nº de
células nuevas = Nº de células muertas
– Fase de muerte: Fase marcada por una
declinación en el Nº de bacterias viables. Las
bacterias se quedan sin nutrientes y mueren.
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BACTERIOLOGIA
BACTERIOLOGIA
• DIAGNOSTICO BACTERIOLOGICO
– Métodos directos
• Observación directa (Microscopia)
• Identificación por pruebas bioquímicas
• Aislamiento en medios especiales (Cultivos)
• Determinación de antígenos (Técnicas inmunológicas)
• Determinación de ácidos nucleicos (Técnicas
moleculares)
– Métodos indirectos
• Detección de anticuerpos (Técnicas inmunológicas)

BACTERIOLOGIA
• Tipo de metabolismo bacteriano
– Respiración: Combustión de un sustrato con la BACTERIOLOGIA
liberación de electrones e hidrógeno que son
transferidos a un aceptor final mediante una
reacción redox. Si el aceptor final es el oxígeno
hablamos de respiración aerobia y si es otro • DIAGNOSTICO BACTERIOLOGICO
compuesto (inorgánico como nitratos, sulfatos ó – Métodos directos
CO2) distinto hablamos de respiración anaerobia
– Fermentación: Oxidación incompleta de un • Observación directa (Microscopia)
compuesto orgánico (azúcar) en ausencia de
oxígeno dando lugar a formación de ácido
pirúvico y luego usualmente a ácido láctico.

BACTERIOLOGIA COLORACION DE GRAM

• Relaciones de las bacterias con el Pasos Método Gram(+) Gram(-)
oxígeno:
– Aerobios (estrictos): Dependen del O2 para
sobrevivir. Poseen un sistema transportador de Colorante Violeta de Se tiñe de Se tiñe de
electrones cuyo aceptor final es el oxígeno. básico genciana violeta violeta
Ejm: Mycobacterias, Pseudomonas sp. Mordiente Lugol Permanece Permanece
– Anaerobios estrictos: Solo crecen en ausencia violeta violeta
de oxígeno. Utilizan una atmósfera de CO2, H2 y
N2.Ejm: clostridium, propionibacterium Decoloración Alcohol 95% Permanece Se decolora
– Anaerobios aerotolerantes: Pueden crecer en ó alcohol violeta
presencia o ausencia de O2 pero no lo utilizan acetona
para su metabolismo (metabolismo es siempre Contraste Fucsina o Permanece Se tiñe de
fermentativo) safranina violeta rosa

COLORACION DE GRAM
BACTERIOLOGIA
Cristal violeta
Lugol
Alcohol acetona
• Relaciones de las bacterias con el Safranina

oxígeno:
– Anaerobios facultativos: No precisan de O2
para crecer pero lo hacen mejor en su
presencia. Pasan de metabolismo respiratorio
a fermentativo o viceversa. Ejm.
Enterobacterias
– Microaerófilos: Crecen mejor a bajas
tensiones de O2 (Menor del 12%) y altas
tensiones de CO2. Ejm Campilobacter
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COLORACION DE ZIEHL NEELSEN MORFOLOGIA

Pasos Método A. A. R. No A. A. R.

Colorante Fucsina Se tiñe de Se tiñe de

básico rojo rojo
Mordiente Calor Permanece Permanece
rojo rojo
Decolaración Alcohol Permanece Se decolora
clorhídrico rojo
Contraste Azul de Permanece Se tiñe de
metileno rojo azul

• DIAGNOSTICO BACTERIOLOGICO
COLORACION ZIEHL NEELSEN – Métodos directos
• Identificación por pruebas bioquímicas
• Técnicas bioquímicas:
– Reacción de oxidasa: Demuestra presencia de sistema
citocromo-oxidasa. Distingue enterobacterias (-) de
Pseudomonas (+)
– Reacción de catalasa: Es capaz de hidrolizar el
peróxido hidrógeno (H2O2) en H2O y O2. Distingue
Estreptococos (-) de estafilococo y listeria (+)
– Reacción de coagulasa: evalúa la capacidad de
coagular el plasma mediante la enzima coagulasa.
Diferencia E. aureus del resto de estafilococos
– Prueba del Indol: metaboliza el triptofano produciendo
Indol. Diferencia los distintos tipos de Enterobacterias
– Prueba de ureasa: Hidroliza la urea y produce amonio.
Son ureolíticas: K. pneumoniae, Proteus spp., H. pylori,
Brucela, Mycobacterias

• DIAGNOSTICO BACTERIOLOGICO
– Métodos directos
BACTERIOLOGIA • Aislamiento en medios especiales (Cultivos)

• Cultivos:
• BACTERIAS: Morfología – Medios de cultivo
– Cocos • Básicos: Son medios ricos en nutrientes que
permiten crecimiento de la gran mayoría de bacterias.
– Bacilos Se utilizan en la siembre primaria de las muestras
– Helicoidales clínicas. Ejm. Agar común, agar sangre y agar
• Vibrio chocolate. Agar Saboraud (hongos)
• Espirilo • De enriquecimiento: Están desarrollados para
• Espiroqueta recuperar bacterias exigentes en sus requerimientos
nutricionales. Usualmente son medios líquidos. Ejm:
– Pleomórficas BHI (infusión de cerebro-corazón), caldo selenito
(Enterobacterias), Ruiz-Castañeda (Brucela)

MORFOLOGIA BACTERIOLOGIA
• Cultivos:
– Medios de cultivo
• Selectivos: Selecciona a determinados
gérmenes mediante factores físicos o
químicos. Contienen sustancias como
cloruro de sodio, sales biliares, antibióticos.
Ejm. Loeffler (C. diptheriae), Thayer Martin
(N. gonorrae), Mc Conckey (bacterias gram - )
• Diferencial: permite crecer distintos
gérmenes y diferenciarlos. Casi siempre la
diferencia se da por el color de las colonias.
Ejm. Agar manitol (Estafilococos), Mc
Conckey (Enterobacterias). Agar SS
(Salmonela, Shiguela)
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BACTERIOLOGIA BACTERIOLOGIA
• Saben alguna respuesta?
– Cual es el mejor momento para tomar un hemocultivo?
– Cuantos hemocultivos se recomienda tomar en 24 horas?
– Cuanto tiempo puede permanecer una muestra de orina al medio
ambiente antes de ser analizada? Se puede refrigerar la orina?
– Para tomar una muestra de esputo deberían lavarse los dientes y
hacerse un enjuague bucal antes de tomar la muestra?
– Cuanto tiempo puede permanecer una muestra de heces al medio
ambiente antes de ser analizada? Se pueden refrigerar las heces?
– Cuando se dice que una muestra de esputo es adecuada?
– Cual es el mejor método para diagnóstico de infección por catéter
venoso central?
– Cada cuanto tiempo se debe cambiar una sonda vesical?
– Cada cuanto tiempo se debe cambiar una sonda nasogástrica?
– Cada cuanto tiempo se debe cambiar una vía periférica?
– Cada cuanto tiempo se debe cambiar un catéter venoso central?

Sistemas automatizados de cultivos

BACTERIOLOGIA
Sistema automatizados de Hemocultivos
• Cultivos:
– Cultivos de sangre
– Cultivo de catéteres venosos centrales
– Cultivos de orina Sistema de
detección de
– Cultivos de secreciones respiratorias desarrollo
– Cultivos de abscesos y heridas bacteriano
– Cultivos del LCR
– Cultivo de heces
– Cultivos de secreción faríngea
– Cultivo de secreciones genitales Sistema automatizados de cultivo de
Micobacterias

Sistemas de identificación y sensibilidad

BACTERIOLOGIA
• Cultivos de sangre: Hemocultivos
– Definición: Cultivo microbiológico de la sangre.
– Tipos:
• Manuales: Contiene 0.025-0.05% poliatenol sulfato sodio.
• Semiautomatizados: Lisis-centrifugación para hongos,
micobacterias, bartonelas y brucelas, CVC.
• Automatizados: Detectan CO2 del metabolismo
bacterias. Bactec 9240, BacT/Alert Microbial detection Alta exactitud y precisión
system, ESP Culture System, BacT/Alert 3d
– Toma de muestra: Control de calidad certificado
• Cantidad: 2-3 muestras de sangre/24 horas.
Sistemas computacionales en línea
• Volumen: Variable. Relación 1:5 a 1:10.
• Momento toma: 2.5-0.5 h antes pico febril, pico febril. Disminución de la laboriosidad
– Organismos aislados con mayor frecuencia:
• E. aureus, P.aeruginosa, E. coli, K. pneumoniae y E. Disminución tiempos de respuesta
pneumoniae.
Alto costo

BACTERIOLOGIA
BACTERIOLOGIA
• IMPORTANCIA DEL VOLUMEN DE SANGRE
CULTIVADA
Independientemente de la edad del paciente y del
método de hemocultivo, es la variable más importante
en lo concerniente a la sensibilidad.
Baron, E; Weinstein, M; Dunne, W; Yagupsky, P; Welch, D; Wilson, D.
Cumitech Blood Cultures IV. 2005
Arpi,M, Eur Jclin Microbiol Infect Dis, 8, 1989.
Cockerill,F. Clin Infect Dis, 38, 2004.
Hall,M. J Clin Microbiol, 3. 1976
Ilstrupt,D; washington,J. Diagns Microbiol Infect Dis, 1. 1983
Li,J. J Clin Microbiol, 32. 1994.
Mermel,L; Maki,D. Ann Intern med, 119. 1993.
Plord,J. J Clin Microbiol, 22. 1985
Sandven,P. Acta pathol Microbiol Scand, 89.1981
Tenney,J. J Clin Microbiol, 15. 1982
Washington,J. CRC Press, 1978.
BACTERIOLOGÍA 1 Pag. 13 USAMEDIC 2018

BACTERIOLOGIA
HEMOCULTIVOS. IMPORTANCIA DEL
VOLUMEN

40

30

% DE
FALSOS (-)20

10

0
10 20 30
VOLUMEN DE SANGRE

BACTERIOLOGIA BACTERIOLOGIA
• MOMENTO DEL HEMOCULTIVO
• Bacteriemia persistente: en cualquier momento. Ej.
endocarditis, infecciones intravasculares, fiebre tifoidea
y brucelosis durante la primera semana
• Bacteriemia intermitente: una hora antes del pico febril.
La gran mayoría infecciones (neumonía, infección
urinaria, infección intrabdominal)
• Bacteriemia transitoria: generalmente autolimitada y
benigna. Ej. Procedimientos dentales, urológicas o
endoscopias

BACTERIOLOGIA
BACTERIOLOGIA

BACTERIOLOGIA
• Cultivos de catéter central:
• NUMERO DE HEMOCULTIVOS
• En sepsis: Se debe tomar dos o tres muestras de lugares
diferentes en un lapso de diez minutos.
• En endocarditis aguda: Obtener tres muestras de tres
lugares diferentes en un lapso de 1 a 2 horas.
• En endocarditis subaguda: Obtener tres muestras de tres
lugares diferentes a intervalos de al menos quince
minutos. Si el cultivo es negativo a las 24 horas, obtener
tres muestras más.
• En fiebre de origen desconocido: Obtener dos o tres
muestras de lugares diferentes con diferencia de una hora
o más entre una y otra muestra. Si el cultivo es negativo a
las 24 horas, obtener dos a tres muestras más.
BACTERIOLOGIA
– Definición: Cultivo microbiológico de la sangre.
– Métodos diagnósticos:
• No conservadores (requieren retiro del catéter)
– Cultivos cualitativos:
» Cultivo de 5 cm distales de la punta catéter.
» S:100% y E: <50% en el diagnóstico de bacteriemia relacionada
al CVC
– Cultivos semicuantitativos:
» Método descrito por Maki.
» Es el método de referencia para diagnóstico de infección
relacionada a catéter venoso central
» Técnica: Rodar 5 cm del extremo distal del catéter en una placa
de agar sangre 4 veces hacia adelante y hacia atrás y se incuba
durante 24 horas a 370C.
» Se considera como criterio de colonización significativa ≥ 15
UFC por placa.
» S: 100% y E: 76% en el diagnóstico de bacteriemia relacionada
al CVC
» Solo recupera los microorganismos de la superficie externa del
catéter por lo que su máxima utilidad es en los catéteres de
corta duración (con menos de 10 días de permanencia)
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BACTERIOLOGIA
BACTERIOLOGIA
• Cultivos de catéter central:
– Métodos diagnósticos:
• No conservadores (requieren retiro del catéter)
– Cultivos cuantitativos:
» Método de flash, barrido o irrigación descrito por Cleri et al: Se
realiza un lavado de la superficie interna del catéter con un
volumen establecido de caldo nutritivo. Se considera positivo si
existe un desarrollo microbiano > 103 UFC/ml. S:100% y E:92%
para diagnóstico de bacteriemia por CVC.
» Método cuantitativo simplificado descrito por Brun-Buisson et al:
Se considera positivo si existe un desarrollo microbiano > 103
UFC/ml. S:97.5% y E:88% para diagnóstico de bacteriemia por
CVC.
» Sonicación descrito por Scheretz et al: Se considera positivo si
existe un desarrollo microbiano > 1000 UFC/segmento del catéter.
S:93% y E:94% para diagnostico de bacteriemia por CVC.
– Resumen: Un meta-análisis realizado por Siegman-Igra et al demostró
que los métodos cuantitativos son mejores que los semicuantitativos
en el diagnóstico de bacteriemia relacionado al CVC ya que presentan
una S: 94% y E: 92% contra S: 85% y E: 85%

BACTERIOLOGIA
• Cultivos de catéter central:
– Métodos diagnósticos: • Cultivos de orina: Urocultivo
• Conservadores (no requieren retiro del
catéter)
– Hemocultivo cuantitativo: Se debe extraer una
muestra de sangre periférica inicialmente y otra a
través del catéter (retrocultivo) con jeringas
heparinizadas. Es positivo cuando el recuento
del retrocultivo es > 100 UFC/ml o 5-10 veces
mayor que el hemocultivo de sangre periférica.
– Cultivo superficial
– Cultivo semicuantitativo de la conexión
– Citocentrifugacion con tincion posterior con
anaranjado de acridina
– Tiempo diferencial de los hemocultivos
BACTERIOLOGIA
– Definición: Cultivo microbiológico de la orina.
– Toma de muestra:
• Preferencia orina de la mañana.
• Paciente debe abstenerse orinar 3 horas antes examen.
• Paciente no debe tomar mucho líquido antes examen.
• Tomar la parte media de la orina.
• Volumen: 25-50 ml.
• Niños que no controlan micción: cateterismo, punción
suprapúbica, estar al acecho. Bolsa colectora en niños
pequeños cambiar cada 30 minutos.
• Portadores sonda vesical: muestra se toma en la unión
sonda con el catéter de la bolsa colectora.

BACTERIOLOGIA
BACTERIOLOGIA
• Cultivos de orina: Urocultivo
– Medios de cultivo:
• Agar sangre (cocos) y Agar Mac Conckey
(enterobacterias), Agar nutritivo, Agar Cled (Agar con
cisteína y lactosa deficientes en electrolitos).
– Procesamiento muestra:
• Incubación 35-37 ºC por 24-48 horas.
• Debería ser procesada máximo 2h post-obtención.
Puede ser guardada refrigeración 4ºC no > 18 horas
– Organismos aislados con mayor frecuencia:
• E. coli, Klebsiela, Proteus, Enterobacter, Enterococo y
P. aeruginosa, C. albicans.
– Organismos contaminantes más frecuentes:
• E. coagulasas negativos, Difteromorfos, Coliformes,
Bacillus, Estreptococos alfa hemolíticos

BACTERIOLOGIA BACTERIOLOGIA
• Cambio de catéter venoso central:
– 1.- Evaluar el sito de punción diariamente ( en cada turno) a través
de la palpación (inflamación), observación del sistema de fijación,
debe permanecer limpio y seco. No cambiar el sistema de fijación si
no hay signos evidentes de infección. Si hay sospecha de
inflamación y/o infección cambiar el sistema de fijación y observar
directamente el sitio de punción.
– 2.- Retirar o cambiar el catéter si existen signos de flebitis (calor
,dolor, rubor o eritema y si se palpa la vena) infección o mal
funcionamiento del catéter,
– 3.- Si hay signos de sepsis o shock séptico en ausencia de otra
fuente de infección (se retira y se realiza el cultivo
semicuantitativo)
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BACTERIOLOGIA
• Cultivos de secreciones respiratorias:
– Definición: Cultivo de secreción proveniente de los
bronquios y alveolos.
– Esputo:
• Moco: plasma, agua, electrolitos y mucina.
• Otros componentes: detritus celulares, secreciones
nasales, secreciones salivales y flora cavidad oral.
– Toma de muestra:
• Inducción de la tos, lavado bronquial, cepillado bronquial,
aspirado transtraqueal, toracocentesis , biopsia pulmón y
aspirado gástrico.
• Preferencia muestra de la mañana con paciente ayunas.
• Buena muestra: > 25 L y < 10 CE x campo (aumento X 100).
• Se puede guardar nevera por 24 horas. (> tiempo agregar
20cc de alcohol 50% y conservar a medio ambiente)
– Medios de cultivo:
• La muestra se vierte en agar sangre, Lowestein-Jansen,
Agar Saboraud ó medios para anaerobios
BACTERIOLOGIA
• Cultivos de heces:
– Son realizados principalmente en casos de
enterocolitis
– Examen directo de heces: coloración de azul
de metileno y coloración gram (estafilococo,
clostridium o campilobacter)
– Medios especiales como Mack Conkey ó agar
azul de metileno-eosina para crecimiento de
salmonella, shiguella
– El Campilobacter es cultivado en medios que
contienen antibióticos como el agar Skirrow en
una atmósfera que contiene 5% de O2 y 10%
de CO2

BACTERIOLOGIA
• Cultivos de secreciones respiratorias:
– Informe Coloración Ziehl-Neelsen:
• No se encuentran BAAR en
100 campos observados
• Se observan 1-9 BAAR en
100 campos observados
• Se observan 10-99 BAAR en
100 campos observados
• Se observan 1-10 BAAR x c
en 50 campos observados
• Se observan > 10 BAAR x c
en 20 campos observados
BACTERIOLOGIA
• Cultivos de faringe:
– Son usados primariamente para detectar la
presencia de E. beta hemolítico del grupo A (E.
pyogenes)
Negativo – También cuando se sospecha de difteria,
faringitis gonocócica y cándida
N0 exacto de – El raspado debería incluir no sólo la faringe
bacilos en 100 campos posterior sino también las amígdalas
Positivo (+) – El material es inoculado en plato de agar
sangre
Positivo (++) – Si colonias de E. beta hemolítico son halladas
después de las 24 horas se usa un disco de
Positivo (+++)
Bacitracina para determinar si es del grupo A

BACTERIOLOGIA BACTERIOLOGIA
• Cultivos de heridas y abscesos: • Cultivos de secreciones genitales:
– Una gran variedad de gérmenes se encuentran – Se realiza principalmente en pacientes con
en las heridas y abscesos descarga genital o contactos asintomáticos de
un paciente con ETS
– Los gérmenes más frecuentes en abscesos de – El más importante patógeno es la N. gonorrae.
cerebro, pulmón y abdomen son los Medio Thayer Martin
anaerobios (B. fragilis) y cocos gram + (E. – Examen directo con microscopio de campo
aureus y E. pyogenes) oscuro son útiles para diagnóstico de T.
– Infecciones de herida operatoria son pallidum
usualmente por E. aureus – Clamidia trachomatis no crece en medios
– Infecciones por heridas abiertas-traumáticas artificiales sino en células viva. Cultivo de
son por C. perfringes células humanas o saco vitelino de huevos
embrionados. El hallazgo de inclusiones
– Infecciones por mordedura de perro o gato intracitoplasmáticas en la coloración de
son por P. multócida y mordedura humana son Giemsa o la presencia de anticuerpos
por anaerobios de la boca fluorescentes es diagnóstica.

BACTERIOLOGIA BACTERIOLOGIA
• Cultivos de LCR • Cambio de sonda vesical:
– Plástico c/7 días
– Se realiza cuando se sospecha de meningitis
– Látex c/21 días
– Los gérmenes que se aíslan con mayor – Látex con capa silicona c/30 días
frecuencia son E. pneumoniae, H. influenza y
– Silicona c/2-4 meses
N. meningitidis, Criptococo
– Se realiza coloración gram y Ziehl Neelsen y • Cambio de sonda nasogástrica:
Tinta china. – Polietileno c/7-14 días
– La muestra se vierte a un plato de agar sangre – Poliuretano c/2-3 meses
o agar chocolate. Hematina y NAD se agregan – Silicona c/3-6 meses
para favorecer crecimiento de H. influenza • Cambio de vía periférica:
– Tests inmunológicos se pueden realizar para – Cambiar cada 72-96 horas (3-4 días)
detectar la presencia de antígenos capsulares – En pacientes pediátricos, no cambiar el catéter venoso periférico
(test aglutinación látex) hasta completar el tratamiento EV a menos que ocurra una
complicación( flebitis, filtración).
BACTERIOLOGÍA 1
• DIAGNOSTICO BACTERIOLOGICO
– Métodos directos
• Determinación de antígenos (IF, EIA,
Test aglutinación, inmunocromatografía)
• Técnicas inmunológicas:
– Cuando el organismo no puede ser cultivado
Ejm. Sífilis, virus hepatitis
– Cuando el organismo es peligroso de cultivar.
Ejm ricketsias
– Cuando las técnicas de cultivo no están
disponibles. Ejm. VIH, EBV
– Cuando el crecimiento del organismo toma
mucho tiempo. Ejm. Mycoplasma
BACTERIOLOGIA
• Técnicas inmunológicas:
– Técnicas que usan anticuerpos para
identificar el microorganismo (Método
directo)
– Técnicas que usan antígenos
conocidos para detectar anticuerpos
en el suero del paciente (Método
indirecto)
BACTERIOLOGIA
• Técnicas inmunológicas:
– Técnicas que usan Ac conocidos
• Reacción de hinchazón de la cápsula
(Reacción Quellung): E.pneumoniae, H.
influenza grupo B, N. meningitidis grupo A y C
• Test de aglutinación látex: Para determinar el
antígeno capsular de H. influenza, N.
meningitidis, estreptococos grupo B,
• EIA: Para determinar antígeno del E. grupo A,
L. pneumophila serotipo 1, E. pneumoniae, C.
trachomatis, toxinas bacterianas (C. difficile,
E. coli).
BACTERIOLOGIA
• Técnicas inmunológicas:
– Técnicas que usan Ac conocidos
• Inmunocromatografía: Para demostrar
antígeno en orina para Legionela serotipo 1 y
E. pneumoniae
• ELISA: detectar una amplia variedad de
bacterias, virus y hongos
• Test de Ac fluorescentes: detectar una amplia
variedad de bacterias, virus y hongos
Pag. 16 USAMEDIC 2018
• DIAGNOSTICO BACTERIOLOGICO
– Métodos directos
• Determinación de ácidos nucleicos
(Técnicas moleculares)
• Técnicas moleculares:
– Sondas genéticas
• Son fragmentos de ADN o ARN que tienen estructura
complementaria entre sí para formar secuencia de
doble cadena.
• Se uso inicialmente para identificacion gonococo, C.
trachomatiss y luego fue usado para la identificación
de hongos y mycobacterias
– Reacción en cadena de la polimerasa (Técnica de PCR)
• Consiste en amplificar in vitro una secuencia
previamente conocida de ADN o ARN de un
organismo hasta hacerlo fácilmente detectable. Muy
sensible. Se usa para diagnóstico de la casi mayoría
de microorgansimos.
• DIAGNOSTICO BACTERIOLOGICO
– Métodos indirectos
• Detección de anticuerpos (IF, EIA, WB, etc)
• Técnicas inmunológicas:
– Técnicas que usan Ag conocidos:
• Tests de aglutinación en tubo o en lámina:
– Suspensiones de bacterias standard. La mas alta
dilución capaz de aglutinar a la bacteria es el título
• Tests serológicos para sífilis
– Test no treponémicos: cardiolipina-lecitina colesterol
– Test treponémicos: T. pallidum
• Test de aglutininas frias:
– Glóbulos rojos se aglutinan en el frío. Infecciones
Mycoplasma
BACTERIOLOGIA
– Mecanismos de resistencia bacteriana
• Evitar el ingreso del ATB
• Inactivación enzimática del ATB
• Eflujo activo del ATB
• Modificación o protección del sitio
blanco del ATB
• Falla en la activación del ATB
BACTERIOLOGIA
• Evitar el ingreso del ATB
– Porinas de la membrana externa
• Constituyen una barrera al ingreso de ATB
• No son selectivas por lo cual puede inducir
resistencia a más de un tipo de ATB
• Ejm. Resistencia a glicopéptidos
– Disminución de la captación ATB en la
membrana citoplasmática
• Algunos ATB requieren un transportador
presente en la membrana citoplasmática
• Ejm. Resistencia a aminoglucósidos
BACTERIOLOGÍA 1 Pag. 17 USAMEDIC 2018

BACTERIOLOGIA
• Inactivación enzimática del ATB
– Enzimas que rompen la estructura del ATB
• Producción de B-lactamasas, esterasas
• Ejm. Resistencia a ATB B-lactámicos,
macrólidos
– Enzimas que permiten agregar grupos
químicos al ATB y lo inactivan
• Enzimas que permiten agregar grupos fosforil,
adenil y acetil. Ejm. Resistencia a
aminoglucósidos, cloranfenicol
BACTERIOLOGIA
• Bacterias: Dominio: Bacteria, Reino:
Eubacteria,Phylum = 27
– “Acidobacteria” – “Actinobacteria” – “Aquificae”
– “Bacteroidetes” – “Chlamydiae” – “Chlorobi” –
“Chloroflexi” – “Chrysiogenetes” –
“Cyanobacteria” – “Deferribacteres” –
“Deinococcus-Thermus” – “Dictyioglomi” –
“Fibrobacteres” – “Firmicutes” – “Fusobacteria”
– “Gemmatimonadetes” – “Lentisphaerae” –
“Nitrospira” – “Planctomycetes” –
“Proteobacteria” – “Spirochaetes” –
“Synergistetes” – “Tenericutes” –
“Thermodesulfobacterias” – “Thermomicrobia” –
“Thermotogae” – “Verrrucomicrobia” – “Bacterias
no clasificadas”

BACTERIOLOGIA
BACTERIOLOGIA
• Eflujo activo del ATB
– Bomba presente en el citoplasma de la célula • Clasificación Bacterias
bacteriana que elimina ATB del intracelular – Coloración gram:
– Se encuentra presente tanto en bacterias • Cocos gram (+)
Gram (+) como Gram (-)
• Cocos gram (-)
– Ejm. Resistencia a tetraciclinas, macrólidos,
quinolonas y estreptograminas • Bacilos gram (+)
• Bacilos gram (-)

BACTERIOLOGIA
• Modificación o protección del sitio blanco del
ATB
– Modificación de las PBPs COCOS GRAM POSITIVOS
• Ejm. Resistencia a penicilinas
– Modificación de D-Ala-D-Ala por D-Ala-D lactato
• Ejm. Resistencia a glicopéptidos • ESTAFILOCOCOS
– Protección de ribosomas
• Ejm. Resistencia a tetraciclinas
• ESTREPTOCOCOS
– Metilación del rRNA
• Ejm. Resistencia a macrólidos, estreptograminas y
lincosaminas
– Mutación que alteran la afinidad de la subunidad
B de la DNA girasa por el ATB
• Ejm. Resistencia a quinolonas

ESTAFILOCOCOS
• Estafilococos coagulasa positivos
BACTERIOLOGIA – E. aureus
• Estafilococos coagulasa negativos
• Falla en la activación del ATB – E. epidermidis - E. saccharolyticus
– Mutación en el gen que da lugar a la – E. saprophyticus - E. xylosus
elaboración de flavodoxina – E. hominis - E. auricularis
• Ejm. Resistencia a metronidazol – E. haemolyticus - E. simulans
– E. warneri - E. schleiferi
– E. lugdunensis - E. caprae
– E. capitis - E. pasteuri
– E. cohnii
BACTERIOLOGÍA 1 Pag. 18 USAMEDIC 2018

ESTAFILOCOCOS
ESTAFILOCOCOS • E. aureus produce:
• Enzimas:
– Catalasa, coagulasa, fibrinolisina, hialuronidasa,
ESPECIE COAGULASA HEMOLISIS CARACTERISTICAS termonucleasas, estafiloquinasas, bacteriocinas,
penicilinasas y ADNasas.
E. Aureus + Beta Flora nasal • Toxinas:
Flora cutánea – Citotoxinas: Hemolisinas alfa, beta, gamma, delta
Colonias amarillas – Enterotoxina: Hay 6 tipos inmunológicas A-F
E. epidermidis - Ninguna Flora cutánea – TSST-1: es un superantígeno que ocasiona la
Colonias blanca liberación de IL-1, IL-2 y FNT
– Exfoliatina: toxina epidermolítica que actúa como
una proteasa que desdobla los desmosomas y
E. saprofíticus - Ninguna Resistente separa la epidermis de la capa de células
Novobiocina granulares. Hay 2 toxinas A y B.
– PVL (Panton Valentine Leucocidin): Toxina que
produce necrosis de piel, partes blandas y pulmón
(neumonía hemorrágica severa).

ESTAFILOCOCOS
• Propiedades importantes:
– Son cocos gram (+), no móviles, no formadores
de esporas y usualmente producen catalasa.
– E. aureus forma colonias amarillas y produce B-
hemólisis en agar sangre. > 90% de E. aureus
contienen plásmidos que codifican B-lactamasas
– Se encuentran primariamente en la flora humana
normal. Coloniza vestíbulo nasal, piel dañada,
axilas, región inguinal, recto y perineo.
– E. aureus coloniza la vagina. Niñas post-
menarquia 5-15%. Alcanza 30% durante la
menstruación.
– E. aureus coloniza un 60% de los adultos en
forma intermitente y 20-30% tienen colonización
persistente (diabéticos, UDE, HIV, pacientes
diálisis) y 30% no son portadores.

ESTAFILOCOCOS
• Propiedades importantes:
– E. aureus tiene algunos componentes importantes
pared celular:
• Proteína A: Es un factor de virulencia. Se une a la
porción Fc de la inmunoglobulina. Previene la
activación del complemento. Propiedades
antifagocitarias
• Acido teicoico (polimeros fosfato poliribitol): Media
la adherencia a la célula
• Muchos E. aureus tienen una microcápsula que tiene
función antifagocítica.
• El peptidoglicano tiene propiedades parecida a
endotoxina que puede estimular la secreción de
citoquinas por macrófagos, activación del
complemento y la cascada de coagulación.
• Resistencia meticilina por la presencia gen mecA
codifica unión penicilina a proteína 2a.

ESTAFILOCOCOS ESTAFILOCOCOS
• Estafilococo aureus
– Invasión tisular
• Piel y mucosas
– Foliculitis, forunculosis, abscesos, impétigo, tromboflebitis,
infección de herida operatoria, antrax ó carbunco,
botriomicosis.
• Partes blandas
– Celulitis, mastitis y absceso mamario, hidradenitis supurativa,
bursitis séptica, artritis séptica, piomiositis tropical.
• Huesos
– Osteomielitis.
• Neumonía (CAMRSA, HAP, VAP, HCPA) y empiema
• Endocarditis
• Meningitis post-operatoria, meningitis o cerebritis asociado a
bacteremia/endocarditis
• Absceso epidural o paraespinal
• Infecciones asociadas a catéteres y prótesis
BACTERIOLOGÍA 1 Pag. 19 USAMEDIC 2018

BOTRIOMICOSIS
ESTAFILOCOCOS

• Estafilococo aureus
– Producción toxinas
• Intoxicación alimentaria (enterotoxinas)
• Síndrome de piel escaldada (Enfermedad de Ritter)
(Toxina Exfoliatina A o B dirigida estrato granuloso)
– Forma localizada (Impétigo Buloso)
– Forma generalizada
• Síndrome de shock tóxico (Toxina 1 o exotoxinas B
y C)

ESTAFILOCOCOS
ABSCESO MAMARIO
INFECCIONES
FOLICULITIS

Absceso
PIOMIOSITIS TROPICAL

FORUNCULO

IMPETIGO OSTEOMIELITIS
BULOSO

CARBUNCO
BACTERIOLOGÍA 1 Pag. 20 USAMEDIC 2018

SINDROME DE PIEL
NEUMONIA
ESCALDADA

TAC ABSCESO PULMONAR

SINDROME SHOCK TOXICO
EMPIEMA

ENDOCARDITIS ESTAFILOCOCOS

• Estafilococo epidermidis
– Infecciones de catéteres endovenosos
– Infecciones de implantes protésicos
– Peritonitis en pacientes con peritoneo-diálisis
– Infecciones asociadas a válvulas de derivación ventrículo-
peritoneales
– Osteomielitis post-esternotomía
– Causa de sepsis en neonatos
– Endoftalmitis post-cirugía ocular
• Estafilococo saprofíticus
– Infección urinaria en mujeres jóvenes sexualmente activas

ESTAFILOCOCOS -
ESTAFILOCOCOS
INTOXICACIONES

SINDROME DE
• Diagnóstico:
PIEL ESCALDADA – Coloración gram
– Cultivos
– Reacción Novobiocina: E. epidermidis es sensible
y E. saprofíticus resistente
– No son útiles tests serológicos ni test de piel
• Tratamiento:
– Mupirocina, Penicilinas, Cefalosporinas,
Macrólidos, Quinolonas, Rifampicina,
Aminoglucósidos, Glicopéptidos, Oxazilidinonas,
Estreptograminas, Daptomicina
BACTERIOLOGÍA 1 Pag. 21 USAMEDIC 2018
BACTERIOLOGÍA 1 Pag. 22 USAMEDIC 2018