RE-10-LAB-264 MICROBIOLOGIA I (ODO) v1 PDF

GUÍAS DE PRÁCTICA MICROBIOLOGÍA I
Código de registro: RE-10-LAB-264 Versión 1
UNIVERSIDAD PRIVADA
DEL VALLE
ODONTOLOGIA
MICROBIOLOGIA I
GUÍA PRÁCTICA DE LABORATORIO

UNIVERSIDAD PRIVADA DEL VALLE

CARRERA ODONTOLOGIA
INDICE
Práctica N° 1: Normas básicas de bioseguridad en el laboratorio de Microbiología
Práctica Nº 2: Materiales e instrumentos de laboratorio empleados en Microbiología
Práctica N° 3: Medidas de desinfección y esterilización en un consultorio
odontológico
Práctica N° 4: Recolección de muestras para análisis microbiológico oral.
Práctica N° 5: Inmunología: técnicas inmunológicas, hipersensibilidad, vacunas
Práctica Nº 6: Virus. Métodos de diagnóstico y antivirales
Práctica Nº 7: Hongos. Métodos de diagnóstico y antifúngicos
Práctica Nº 8: Parásitos. Métodos de diagnóstico y antiparasitarios

COMPETENCIAS ESPECÍFICAS A SER EVALUADAS EN LA CLASE PRÁCTICA

DE MICROBIOLOGIA I
SABER
SABER SER
HACER
EVALUACI
ÓN Calidad
Desarro
Revisión y de trabajo
DE llo de la
aplicación (mapas, Disciplina NOT
práctica
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ESTUDIANTE PUNT
0 - 9 0-3 1 1 1 15 15 30
S AJE

SERVICIOS DE LABORATORIO
LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA I
PRÁCTICA N° 1
NORMAS BASICAS DE BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO DE

MICROBIOLOGIA
1. CONOCIMIENTO TEORICO REQUERIDO:

Las medidas de seguridad en laboratorios son un conjunto de medidas preventivas
destinadas a proteger la salud de los que allí se desempeñan frentre a los riesgos propios
derivados de la actividad, para evitar accidentes y contaminaciones tanto dentro de su
ámbito de trabajo, como hacia el exterior. En ese entendido la OMS se dio a la tarea de
estudiar estos riesgos y clasificar a los laboratorios, para luego dar recomendaciones en
lo que se refiere a normas de bioseguridad. Los laboratorios se clasifican en :
Nuestro laboratorio se encuentra en el grupo de riesgo 1, nivel básico, en este nivel la

OMS recomienda que es necesario para minimizar riesgos :
➢ El Símbolo internacional de peligro biológico debe estar colocado en las puertas de

los lugares donde se manipulen microorganismos que puedan resultar patógenos al
humano.
➢ Sólo podrán entrar a las zonas de trabajo el personal autorizado.
➢ Las puertas del laboratorio deben mantenerse cerradas.
➢ No se autoriza la entrada de niños en las zonas de trabajo del laboratorio.
Protección personal:
➢ Se usarán en todo momento batas o guardapolvos especiales para el trabajo de
laboratorio.
➢ Se usarán guantes protectores apropiados para todos los procedimientos que pueden
entrañar contacto directo o accidental con sangre, líquidos corporales y otros
materiales potencialmente infecciosos. Una vez utilizados los guantes, se retiraran
de forma aséptica y a continuación se lavarán las manos.
➢ El personal y los estudiantes se lavaran las manos después de manipular muestras
y antes de salir del laboratorio.
➢ Se usarán lentes y caretas de seguridad para protección de los ojos y el rostro de
salpicaduras, impactos y fuentes de radiación ultravioleta artificial.
➢ Está prohibido usar las prendas protectoras fuera del laboratorio.
➢ Debe usarse calzado cerrado, prohibido entrar con sandalias.
➢ Está prohibido comer, fumar o beber en el laboratorio.
➢ No debe almacenarse comida para consumo humano en el laboratorio.
Procedimientos:
➢ Está estrictamente prohibido pipetear con la boca.
➢ No se colocará ningún material en la boca.
➢ Todos los procedimientos técnicos se practicarán de manera que se reduzca al
mínimo la formación de aerosoles .
➢ Todos los derrames, accidentes y exposiciones reales o potenciales a materiales
infecciosos se comunicarán al supervisor del laboratorio. Se mantendrá un registro
escrito de estos accidentes e incidentes.
➢ Se elaborará y seguirá un procedimiento escrito para la limpieza de todos los
derrames.
➢ Los líquidos contaminados deberán descontaminarse ( por medios químicos o
físicos) antes de eliminarlos por el colector de saneamiento.
Zonas de trabajo del laboratorio:

➢ El laboratorio se mantendrá ordenado, limpio y libre de materiales no relacionados
con el trabajo.
➢ Las superficies de trabajo se descontaminarán después de todo derrame de material
potencialmente peligroso y al final de cada jornada de trabajo.
➢ Todos los materiales, muestras y cultivos contaminados deberán ser
descontaminados antes de eliminarlos o de limpiarlos para volverlos a utilizar.
➢ Las ventanas que puedan abrirse estarán equipadas con rejillas que impidan el paso
de artrópodos.
Clasificación de los residuos:

➢ Desechos generales o comunes son aquellos que no presentan un riesgo adicional
para la salud humana y el ambiente y que no requieren de un manejo especial como
papel, cartón, plásticos, restos de alimentos.
➢ Desechos peligrosos o especiales son aquellos que presentan un riesgo para la
salud humana y el ambiente y que requieren de un manejo especial como sangre
y hemoderivados, fluidos corporales, cultivos de agentes infecciosos, vacunas
vencidas, cajas de petri, placas de frotis, órganos, tejidos, partes corporales.
➢ Desechos cortopunzantes agujas, hojas de bisturí, hojas de afeitar, objetos de vidrio
y cortopunzantes desechables.
➢ Desechos especiales frascos de antibióticos y sachett de medicamentos
2. COMPETENCIA (S)
• Identifica y aplica las normas básicas de bioseguridad en laboratorio de
microbiología en relacion con su contexto
• Investiga la metodologías correctas para la eliminación de los residuos generados
en el laboratorio y la solucion de problemas.
• Aplica la metodología correcta para la eliminación de los residuos generados en
el laboratorio microbiología.
3. MATERIAL, REACTIVOS Y EQUIPOS

• Manual de Higiene y seguridad en Microbiología.
• Normas de bioseguridad.
4. TECNICA O PROCEDIMIENTO
• Trabajo colaborativo en equipos
5. TIEMPO DE DURACION DE LA PRACTICA

100 Minutos
6. MEDICION, CALCULOS Y GRAFICOS
No aplica en esta practica
7. CUESTIONARIO
1. Realizar un mapa conceptual sobre normas de bioseguridad.
2. Esquematizar un mapa cognitivo en forma personalizado de manejo de residuos.
3. Mencione las barreras quimicas, fisicas, biologicas de proteccion personal
4. Clasifique los residuos.
Residuos Infeccioso Cortopunzante Comunes

Jeringa con sangre
Hojas de bisturí
Cajas petri
cultivadas
Papel de escritorio
Tiras reactivas de
orina
Frasco con muestra
Aguja hipodérmica
PRÁCTICA NO. 2
MATERIALES E INSTRUMENTOS DE LABORATORIO

EMPLEADOS EN MICROBIOLOGIA
1. CONOCIMIENTO TEORICO REQUERIDO
El trabajo en un laboratorio de Microbiología es significativamente diferente al de otros

laboratorios, requiriendo de unos cuidados especiales ya que se debe trabajar en
condiciones que se evite la contaminación del operario, de las muestras y del ambiente.
Por todo ello es necesario reconocer cada uno de los materiales que son utilizados en
laboratorio de Microbiología y reconocer el uso que se le da en el mismo. Es cierto que
muchos materiales se comparten con otros laboratorios, sin embargo en microbiología
se le da un uso especial porque el objetivo es diferente. Ejemplo: el caso de un
mechero, que se utiliza para esterilizar.
2. COMPETENCIA (S)
• Describe y dibuja el material empleado en las prácticas de microbiología
• Reconoce el uso correcto del material y equipo en las prácticas de
microbiología, para la soluccion de problemas que se presentan en el campo
de trabajo del profesional.
3. MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS

Entre los materiales que se suelen emplearse con mayor frecuencia en el laboratorio de
microbiología se encuentran:
 Portaobjetos(10)
 Cubreobjetos (10)
 Tubos de ensayo (10)
 Tubos de Hemólisis o Kant(10)
 Cajas Petri (5)
 Asas bacteriológicas (4)
 Matraces erlermeyer 250 ml (3)
 Pipetas de 10 ml(2)
 Lavadores o Frascos lavadores(2)
 Gradillas(3)
 Varillas de tinción(2)
 Goteros (3)
 Probetas de 100 ml (2)
 Bastones o Varillas de vidrio(2)
 Espátula de Drigalski(2)
 Pinzas de traspaso anatómicas punta roma o diente de raton (4)
Entre los instrumentos que se suelen encontrar en el laboratorio de microbiología se

encuentran:
 Microscopios(6)
 Centrifugas(1)
 Autoclave (1)
 Hornos de calor seco (Estufas)(1)
 Incubadoras(1)
 Baños de agua o maria (1)
 Cámara de anaerobiosis (1)
 Refrigeradores (1)
 Mecheros de alcohol (2)y gas(4)
 Balanzas(2)
➢ Trabajo en grupos pequeños.
➢ Descripción ordenada de cada uno de estos y realizar el correspondiente
dibujo.
➢ Procedimientos de lavado, secado y protección de los mismos.
➢ Señalar los usos de cada uno de los materiales a utilizar en el laboratorio de
Microbiología.

100 Minutos
El estudiante graficara material e instrumental empleado en Microbiologia
7. CUESTIONARIO
1.- Indique el uso y realice el dibujo que falta de cada uno de los materiales e
instrumentos
MATERIALES USOS DIBUJO
Portaobjetos
Cubreobjetos
Tubo de ensayo
Tubos de hemolisis
Caja petri
Pipetas graduadas
Vasos de precipitado
Vidrio de reloj
2.- ¿Qué otros tipos de materiales e instrumentos de laboratorio utilizados en

Microbiología se pueden añadir a los ya enunciados?
3.- Esquematicé un microscopio e identifique sus partes.
4.- Cite tipos de microscopios empleados en el diagnóstico microbiológico.

PRÁCTICA NO. 3
MEDIDAS DE DESINFECCION Y ESTERILIZACIÓN EN UN

CONSULTORIO ODONTOLOGICO
Un aspecto importante en el control de las infecciones son los principios que rigen la
limpieza, desinfección y esterilización. Evitar la transmisión de microorganismos
potencialmente patógenos ya sea entre enfermos, del personal sanitario a los pacientes o
a la inversa es una prioridad en todos los centros sanitarios. Por lo que es indispensable
conocer estos conceptos para entender mas claramente en que momento usamos
desinfectantes, antisépticos o esterilizantes.
ESTERILIZACIÓN: Es un proceso por el que se eliminan todas las formas de vida

microbiana (Microorganismos patógenos y no patógenos), incluso las esporas
bacterianas, se logra por medios físicos y químicos (Oxido de Etileno).
DESINFECCIÓN: Es un proceso por el que se destruyen microorganismos patógenos,

pero no siempre todos los microorganismos y esporas, se logra mediante métodos
químicos. Cuando la sustancia quimica es aplicada sobre superficies u objeto
inanimados ( mobiliario, equipamiento, instrumental) se denomina Desinfectante y
cuando es empleada sobre objetos animados (piel y mucosas) recibe el nombre de
Antiseptico.
ASEPSIA: significa ausencia o privación de todos los gérmenes patógenos o no.
ANTISEPSIA : es la creación de un medio disgenesico que obra por destrucción de los

microorganismos o impidiendo su desarrollo. Lograr una buen asepsia y antisepsia es
fundamental para cualquier procedimiento bacteriológico o quirúrgico básico como
curaciones de heridas, quemaduras, suturas etc. Se debe hacer lo posible para evitar
contaminación microbiana que llegaría a perjudicar al paciente así como el éxito en la
identificación del microorganismo causante de infección. La antisepsia por su baja
toxicidad se utiliza para la destrucción de microorganismos presentes en las superficie
cutaneomucosa ( piel, heridas, mucosas, manos).
SUSTANCIAS QUIMICAS EMPLEADAS EN ASEPSIA Y ANTISEPSIA

De acuerdo con las especificaciones de la FDA las sustancias que se utilizan como
agentes anti-microbianos son:
Alcoholes + glicerina: La mayoría de las soluciones con base alcohólica utilizan
isoprophanol, etanol, n-propanol o combinaciones de dos productos en concentraciones
de 65 al 90%. Posee el tiempo de inicio acción más rápido; no sirve para eliminar la
suciedad.
Clorhexidina: Preparaciones de gluconato de clorhexidina, en concentraciones del 0.5
al 1.0%. Posee un periodo de inicio acción intermedio y un efecto residual prolongado;
Seis (6) horas. Se inhibe por surfactantes no iónicos, aniones inorgánicos y orgánicos.
Clorhoxylenol: Sustancia fenólica con un sustituto halógeno su eficacia es buena
aunque su mayor fortaleza esta en su poca absorción a través de la piel. Su
concentración debe estar entre 0.3 y 3.75%.
Yodo: Es reconocido como un excelentes antiséptico pero puede genera irritación de la

piel. Las soluciones yodadas se presentan como una alternativa pero requieren una
concentración de 8% en jabones y del 10% en soluciones desinfectantes.
Triclosán: Sustancia no iónica que al ser integrada en jabones en concentración de 0.2

al 2% actúa como antimicrobiano.
Alcoholes: Alcohol etílico y isopropilico, muestran una actividad antimicrobiana rápida

de amplio espectro contra bacterias virus y hongos. Actividad optima cuando se
diluyen con agua al concentraciones de 60 a 90%.
Soluciones cloradas: hipoclorito de sodio suelen utulizaerse a una solucion entre el 1 %

y el 2% con un tiempo de desinfeccion de 10 a 30 minutos. Presentan una serie de
incovenientes, como su poder corrosivo para los metales, perder actividad en presencia
de materia organica y deteriorarse con rapidez, por lo que deben reemplazarse
semanalmente.
Formaldehido: Es inflamable e incoloro. Se alcanzan niveles de actividad biocida con

un solucion acuosa al 8%. Es bastante irritante para la piel, ojos ylas vias respiratorias,
puede dañar determinados materiales.
Glutaraldehido: Se suele emplear en solucion acuosa al 2%, amortiguada a pH

alcalino, generalmente se suminstra con dos componentes, los cuales al mezclarse
activan el producto, la solucion activada tiene una vida media de 14 a 30 dias.
Desinfecta en 15 a 30 minutos y esterilizacion se obtiene en 7 a 10 horas dependiendo
de la formulacion. El contacto con los ojos
LAVADO DE MANOS
Lavado Higiénico: Es el que se realiza diariamente de forma casera, disminuye la flora
transitoria (flora que se adquiere por contacto con objetos contaminados). Se realiza con
agua y jabón.
Lavado Antiséptico: Elimina la flora transitoria y disminuye la flora residente (flora que
habita normalmente en piel). Se emplea solución jabonosa antiséptica, cepillo y agua.
Solo se cepillan las manos.
Lavado Quirúrgico: Elimina la flora transitoria y disminuye la flora residente (flora que
habita normalmente en piel). Se emplea solución jabonosa antiséptica, cepillo y agua. Se
cepilla el antebrazo y el codo.
METODOS DE ESTERILIZACION
Incineración
Flama directa
Calor seco
(fuego)
Aire caliente
(estufa)
Vapor de agua
Ebullición
Calor húmedo
Metodos fisicos
Pasteurización
Tindalización
Rayos UV
Radiaciones
Rayos Gamma
Filtración
Métodos químicos Oxido de etileno
CONTROLES DE ESTERILIZACION
Estos controles son necesarios para cerciorarnos de la correcta esterilización del
material:
➢ Controles Físicos: Son los más simples y menos precisos. Ej: Termómetro,
Manómetro, Reloj.
➢ Controles Químicos: Son más precisos. Son cintas que cambian de color con la
correcta esterilización.
➢ Controles Biológicos: Son los más exactos, pero lleva más tiempo realizarlos.
Son bolsas selladas que contienen microorganismos. Estas bolsas se colocan
conjuntamente con el material a esterilizar, y luego de finalizado el proceso de
esterilización se cultivan.
FACTORES QUE INTERVIENEN EN LA DESINFECCION

Los factores que intervienen en la desinfección son:
 La Temperatura
 El tipo de microorganismo
 La concentración del Antiséptico o Desinfectante
 La presencia de Materia Orgánica
 El Tiempo
 El pH
 La Naturaleza de la superficie a desinfectar
2. COMPETENCIA(S)
• Identifica las características de esterilización, desinfección, asepsia y

antisepsia, que se presentan en el campo de trabajo del profesional
• Reconoce los métodos de esterilización y su aplicación dependiendo el caso
clinico y asume procedimientos de solucion.
• Explica como intervienen los factores ambientales en la desinfección, a
traves de la solucion de problemas.
• Realiza asepsia de las manos por medio del lavado y cepillado usando
técnicas adecuadas.
• Realiza la esterilización del material bacteriológico por flameado.
• Realiza la limpieza y preparación de la piel o lugar en el cual se desee
realizar una toma de muestra bacteriológica o un procedimiento quirúrgico
básico, en la solucion de casos clinicos
3. MATERIAL, REACTIVOS Y EQUIPOS
 Autoclave de Chamberland (1)

 Alcohol al 60% (50 ml)
 Mechero Bunsen (3)
 Asas bacteriológicas (4)
 Pinzas diente de raton (2)
 Cajas Petri (15)
 Papel madera o papel sábana (2 pliegues)
 Hilo de caña ( 2 m)
 Tubos con tapa de rosca (10)
 Algodón (50g)
 Frasco Scoth 250 (4)
 Jabón desinfectante
 Cepillo de uñas (2)
➢ Trabajo en grupos pequeños
Aire caliente
Esto se realiza en los Hornos Pasteur a temperaturas superior a los 180ºC por hora y
media. Se pueden esterilizar pipetas, varillas de vidrio, espátulas de vidrio, material
metálico como tijeras, pinzas, polvos termoestables, etc.
Calor húmedo
Para esto se utiliza el autoclave.

Se debe colocar agua en el fondo de la caldera. Acomodar el material en la cesta
metálica. Adaptar la tapa y ajustar los tornillos para asegurar el cierre hermético del
autoclave. Verificar si el orificio de escape está abierto. Encender el autoclave y
calentar hasta la salida de un chorro continuo de vapor de agua por la válvula de escape,
(para eliminar el aire residual). Cerrar la válvula de escape.
Cuando se alcance la Temperatura deseada por ejemplo 121ºC, regular la temperatura
del autoclave, manteniendo la misma por 15 a 20 minutos. Concluida la esterilización,
apagar el autoclave y dejar enfriar espontáneamente. Esperar que la presión del
manómetro marque 0. Abrir la válvula de escape para asegurarse de que no hay presión
en el autoclave.
Abrir el autoclave y retirar el material esterilizado. Dispensar los medios de cultivo en
el material de laboratorio.
En autoclave se pueden esterilizar: material de vidrio, materiales metálicos, medios de
cultivos, sustancias oleosas liquidas, pijamas médicos, hisopos de algodón, etc.
Ebullición
Tomar un recipiente y llenar con agua, proceder a colocar el material que se desee
esterilizar ejemplo: agujas y jeringas de vidrio, pinzas, mangos de bisturí, etc.
Dejar hervir el agua por 30 minutos. Posteriormente apagar y dejar enfriar.
Esterilización del material por ebullicion
Colocar en recipiente agua ¾ y agregar el material que se va esterilizar. El material como
por ejemplo: jeringas, sondas, agujas y material de metal, debe ser esterilizados en un
recipiente y se deja hervir. Una vez que llegó a la temperatura de ebullición dejar el
material 20 minutos y posteriormente se sacará el mismo con una pinza.
Lavado de manos
Proceder al lavado de manos con agua y jabón antiséptico y con cepillo de uñas, refregarse
en forma ordenada el dorso, la palma, los dedos, las uñas así como el antebrazo. Se repite
por 3 minutos.
Enjuagar el jabón con abundante agua haciendo que esta escurra de las manos hacia los
codos. Repetir tres veces.
Enjuagar las manos con alcohol y dejar que se evapore.
Manejo del Instrumental
Desinfeccion el instrumental que sale de la cavidad oral del paciente esta
potencialmente contaminado por ello, hay que desinfectarlo antes de cualquier
manipulacion posterior durante 30 minutos en glutaraldehido al 2%
Limpieza dspues de la desinfeccion. Se limpia el instrumewntal para retirar residuos.
Puede hacerse con cepillos.
Lavado se lava con agua, se seca y se prepara para esterilizar
Esterilizacion empleado el vapor de agua a presion de vapor
Almacenamiento despues de la esterilizacion, el material se almacena, preferentemente
embolsado, en cajas dentales
100 minutos

No aplica a esta practica
7. CUESTIONARIO
1. ¿Cuál mecanismo de acción del calor sobre los microorganismos?

2. ¿De qué forma se esterilizarían mejor los siguientes materiales
MATERIAL MÉTODO DE TIPO DE OTROS
ESTERILIZACIÓN CALOR- (ESPECIFIQUE)
TIEMPO
Pipeta vidrio
Caja petri de vidrio
Medios de cultivo
solido
Guantes
Jeringas
desechables
Ropa quirúrgica
Pinzas quirúrgicas
tijeras
Hojas de bisturí
Mango de bisturí
Asa bacteriológica
Sala de quirófano
3. ¿Como intervienen cada uno de los factores implicados en la desinfección?
4. Desde su punto de vista cual es la importancia del lavado de manos.
5. Diferencia entre desinfectante y antiseptico
6. Ejemplos de desinfectantes y antisepticos de uso odontológico

PRÁCTICA NO. 4
RECOLECCION DE MUESTRAS PARA ANALISIS MICROBIOLOGICO

ORAL
La actividad que desarrolla el laboratorio de microbiología está orientada esencialmente

al diagnóstico microbiológico de las enfermedades infecciosas. Una parte importante de
esa actividad consiste en el aislamiento, la identificación y la determinación de la
sensibilidad a los antimicrobianos de los microorganismos causales de estas
enfermedades. Otra parte importante de la actividad de un laboratorio de microbiología
consiste en la detección de anticuerpos, antígenos y ácidos nucleícos en diversas
muestras (sangre, líquidos estériles, orina, etc.), técnicas que resultan muy útiles en el
diagnóstico precoz de determinadas enfermedades infecciosas. La gran diversidad de
muestras clínicas y de métodos diagnósticos aplicables, son dos aspectos que
diferencian el laboratorio de microbiología de otros laboratorios clínicos.
Por tanto es necesario tener un protocolo que permita la adecuada manipulación de

muestras que serán enviadas a otro laboratorio y los resultados obtenidos estarán,
estrechamente relacionados con el éxito del informe final.
INDICACIONES PREVIAS A LA RECOLECCION DE MUESTRAS.

Si el paciente recolectara la muestra las instrucciones deberán ser claras (Mejor si son
por escrito).
 La muestra deberá ser representativa del proceso infeccioso.
 Recolección de la muestra debe realizarse en frasco esteril.
 Etiquetar correctamente las muestras.
 Una vez recolectada la muestra deberá ser llevada al laboratorio lo más rápido
posible.
 Toda muestra deberá manejarse como si fuera potencialmente patógena.
 En primer lugar, la muestra clínica a ser tomada representa una porción o
cantidad de material biológico que es sometida a pruebas para determinar la
presencia o ausencia de microorganismos específicos. Es importante destacar
que para la toma de una muestra deben tenerse en cuenta los siguientes
requisitos: ser seleccionada del área afectada, con el fin de aislar e identificar los
agentes etiológicos del proceso infeccioso; obtener una cantidad adecuada, para
realizar las diferentes pruebas diagnosticas; evitar arrastrar flora microbiana que
habita normalmente en piel y mucosas; y debe ser tomada antes de administrar
antimicrobianos al paciente. Después de realizar la toma de la muestra, esta debe
ser rotulada con el nombre del paciente, número historia clínica, fecha, y origen
de la misma. Esta información debe corresponder con los datos de la orden de
solicitud del estudio microbiológico.
 Finalmente, la muestra debe ser enviada inmediatamente al laboratorio, pues
existen factores que pueden modificar la composición inicial, tales como:
temperatura, humedad y algunas sustancias que producen los microorganismos
que pueden inhibir el crecimiento de otros. Si se sospecha de la existencia de
microorganismos aerobios o anaerobios en el proceso infeccioso, las muestras
pueden ser transportadas al laboratorio por diversos procedimientos. Sobre este
punto es importante recordar que la mayor parte de los microorganismos
asociados a las enfermedades de la cavidad bucal son anaerobios facultativos o
anaerobios estrictos, esta premisa deberá tenerse en cuenta a la hora de efectuar
el transporte de muestras al laboratorio, ya que deben tomarse en cuenta ciertas
precauciones, como por ejemplo, el uso de medios de transporte especiales que
permitan la viabilidad de los microorganismos hasta ser sembrados en los
medios de cultivo selectivos.
 Por lo tanto, los procedimientos para la toma y transporte de muestras, son
considerados determinantes en la calidad del análisis, en los resultados obtenidos
y, por consiguiente, en el éxito de la terapia a instaurar. Por estas razones, se
sugiere que cada vez que se desee tomar una muestra en cavidad bucal para un
diagnóstico microbiológico, debe informarse previamente al laboratorio, de
manera de coordinar con el especialista, la metodología a seguir en el estudio.
 Una vez llegada la muestra al laboratorio, se procede a realizar el examen
microscópico directo, la siembra en medios de cultivos apropiados, y la
identificación de los microorganismos en estudio.
 El examen microscópico directo de las muestras obtenidas de la cavidad bucal
permite orientarnos hacia la morfología predominante: cocos, bacilos,
espiroquetas, así como para conocer la existencia de hongos y protozoarios, y si
se trata de microorganismos Gram negativos o Gram positivos. Aunque, se ha
recomendado realizar de forma rutinaria estudios microscópicos directos, el
valor de los mismos, en las enfermedades infecciosas bucales, es bastante
limitado. No obstante, conviene precisar que se trata de un método fácil, sencillo
y económico para cualquier laboratorio.
 La siembra de las muestras obtenidas de la cavidad bucal en medios de cultivo
selectivos, es el procedimiento más adecuado para establecer la etiología de los
procesos infecciosos. No obstante, es conveniente indicar que se trata de una
metodología compleja, laboriosa y que necesita de personal especializado. Es
conveniente señalar que el aislamiento y purificación de algunos
microorganismos anaerobios no es fácil de obtener; sin embargo, en los últimos
años se han desarrollado medios selectivos y suplementos específicos con los
que puede favorecerse el aislamiento de anaerobios de interés en la cavidad
bucal.
 La identificación de los microorganismos aislados y purificados, se inicia con el
examen microscópico previa coloración y la observación macroscópica de las
colonias, seguido del análisis a través de pruebas bioquímicas convencionales o
por pruebas rápidas que incluyen sistemas microbioquímicos y enzimáticos
manuales o automatizados, que permiten la identificación definitiva.
 En laboratorios de microbiología especializados, la identificación de
microorganismos de la cavidad bucal, también se realiza por pruebas de
cromatografía gas-líquido, inmunofluorescencia directa, ELISA y sondas de
ADN. Estas pruebas han sido utilizadas para detectar especies de
Porphyromonas, Prevotella, Streptococcus, Fusobacterium, Candida, entre
otros microorganismos. En general, para la identificación se utilizan métodos de
trabajo complejos, cada uno de los cuales tiene sus ventajas, pero también
limitaciones. Sin embargo, independientemente de la técnica de identificación
que se utilice, los microorganismos en estudio, deben ser aislados y purificados
previamente en medios de cultivos adecuados.
 La determinación de la sensibilidad de los antibióticos y quimioterápicos, se
realiza una vez identificados los microorganismos, por procedimientos
especiales in vitro. Para ello se utiliza el método más adecuado, según el tipo de
microorganismo, como lo indica el Comité Nacional para Estándares de
Laboratorio Clínico (N.C.C.L.S).
 Si bien es cierto, que el trabajo y la responsabilidad que implica realizar un
diagnóstico microbiológico es grande, la satisfacción al tener los resultados es
mayor y gratificante.
 Conviene señalar finalmente, que el diagnóstico microbiológico es una
herramienta importante que puede ser utilizada por el Odontólogo para estudiar,
conocer e investigar la etiología microbiana de las enfermedades infecciosas de
la cavidad bucal. No obstante, la clave del diagnóstico microbiológico, v
INMUNOLOGIA – VIROLOGIA
Algunas pruebas virológicas pueden realizarse en laboratorios de hospitales grandes,
pero la mayor parte se llevan a cabo en centros de referencia especializados.
Las muestras requeridas pueden ser:
• Sangre coagulada para serologia
• LCR
• Heces
• Fluido de vesículas
Debe recogerse sangre para serologia durante la fase aguda de la enfermedad y despues
de un intervalo de 10 dias.
MICOLOGIA
El diagnostico micologico requiere la identificación de hongos de importancia clínica,
estos incluyen los dermatofitos, levaduras y los mohos, algunos de los cuales son ahora
reconocidos como agentes importantes de las infecciones sistémicas en pacientes
imnunocomprometidos.
Las muestras requeridas para micosis superficiales son:
• Piel (raspado con hoja roma)
• Uñas ( corte)
• Pelo (corte)
• Las micosis progundas o invasivas precisan cultivo sanguineo y/o tejidos
blandos (para cultivo e histologia). Candida albicans pueden crecer en
botellas de cultivo sanguineo aeróbico estandar.
2. COMPETENCIA (S)
• Emplea y describe métodos y técnicas para la obtención adecuada de muestras

para el diagnóstico microbiológico.
• Conoce los diferentes medios de transporte y técnicas de envío de muestras al
laboratorio microbiológico.
• Realiza una solicitud correcta para el examen microbiológico, relacionado con el
campo de trabajo del profesional.

 Guantes (2 pares)
 Jeringas 5ml y agujas (5)
 Tubos de hemólisis (10)
 Tubos de eppendorf (10)
 Gradillas para tubos de hemolisis (3)
 Algodón (50 g)
 Alcohol (40 ml)
 Ligaduras (3)
 Micropipetas volumen variable (3)
 Puntillas (20)
 Centrifuga (1)
 Baño maria (1)
Trabajo en grupos pequeños

200 Minutos
No aplica a esta practic
7. CUESTIONARIO
1. En un paciente con sospecha de fiebre reumática, que muestras requiere y que

exámenes solicita y por que?
2. Complete el cuadro:
ENFERMEDAD MUESTRA METODO DE
DIAGNOSTICO
Herpes labial
Hepatitis infecciosa
Hepatitis serica
Dengue
Gastroenteritis viral
SIDA
Mononucleosis
infecciosa
Gastritis
Fiebre tifoidea
Cisticercosis cerebral
3. Elabore una orden de laboratorio para extracción de una muestra para un examen
microbiológico
PRÁCTICA NO. 5
INMUNOLOGIA. TÉCNICAS INMUNOLÓGICAS, HIPERSENSIBILIDAD,

VACUNAS
Una infección provoca respuesta inmunológica dirigida contra uno o mas antígenos. En
general se genera una respuesta humoral y celular y la medición de una u otra puede ser
la base para diagnosticar una infección.
La inmunidad celular (Mediada por LiT), puede medirse o valorarse por
hipersensibilidad dérmica. La inmunidad Humoral (mediada por anticuerpos), en las
infecciones intervienen principalmente dos inmunoglobulinas IgG (Infecciones
crónicas) e Ig M (Infecciones agudas).
El estudio de la inmunología, es un área amplia que cubre la investigación y aplicación
clínica, se refiere a antígenos, anticuerpos y funciones de defensa del huésped mediada
por células, en especial en lo que se refiere a la inmunidad y enfermedad.
Una vez que el microorganismo ha ingresado y ha establecido el sitio primario de
infección, se propagan de manera directa a través de los tejidos o por medio del sistema
linfático a la corriente sanguínea. Esta infección puede ser transitoria o persistente.
Ante esta situación se genera una respuesta inmune de defensa, que según el tipo de
antígeno se producen anticuerpos de diferente especificidad. La reacción de antígeno y
anticuerpo da lugar al complejo antígeno-anticuerpo el cual es revelado por alguna
técnica inmunológica. Es así que en una infección también se puede detectar el
inmunocomplejo utilizando estas técnicas que poseen una ventaja; el tiempo de
realización es menor al de las técnicas de cultivo tradicional. Es necesario remarcar que
en otros casos es imprescindible el cultivo.
USOS DE LAS TECNICAS INMUNOLOGICAS

 Diagnosticar infecciones
 Identificar microorganismos
 Tipificar sangre para bancos de sangre
 Tipificar tejidos de trasplantes
 Cuantificar inmunoglobulinas, Hormonas, Marcadores tumorales
TECNICAS INMUNOLOGICAS
Reacción de Precipitación: Se forma un inmunocomplejo que con el tiempo aumenta
de tamaño, volviéndose insoluble en el medio dando lugar a un precipitado. Estas
reacciones de precipitación se pueden llevar a cabo en dos medios:
Medios Líquidos: En donde el anticuerpo se encuentra en solución. Ej: Reacción de
VDRL
Medios Gelosados: Aquí el antígeno o anticuerpo esta en un soporte (agar-agar,
agarosa, poliacrilamida). Ej: IDRS (inmunodifusión radial simple, que sirve para
cuantificar IgM, IgD, IgG, IgA, IgAs
Reacción de Aglutinación: Aquí el antígeno esta en forma de partícula. Puede ser:
Aglutinación directa: El antígeno particulado insoluble es aglutinado por el anticuerpo.
Ej: Huddleson y Widal
Aglutinación Indirecta: Aquí se emplean transportadores a los que se adhiere en la
superficie el antígeno particulado insoluble. Esos transportadores pueden ser:
Partículas de Látex: como ejemplo encontramos: Reacción de Proteína C reactiva,
factor reumatoideo, Determinación de Grupo sanguíneo y factor, HCG, etc.
Hematíes: En este caso la técnica recibe el nombre de Hemoaglutinación, Ej: HA para

Chagas, HA para Toxoplasmosis. Tambien podemos tener
Inhibición de la Hemoaglutinación: Ej: AELO (Antiestreptolisina O)
Hemoaglutinación Reverso pasiva: Donde a los hematíes se adhiere el anticuerpo. Ej:
Hepatitis
Reacción de Inmunofluorescencia: Se basa en la fluorescencia que emiten
determinadas sustancias y se observa en un microscopio especial de fluorescencia. Ej:
TIF Toxoplasmosis (Test de inmunofluorescencia para Toxoplasmosis), TIF Chagas
Reacción de Radioinmunoanálisis: En esta reacción el antígeno se marca con un
radioisotopo. Ej: Hormonas, IgE, Marcadores tumorales, HIV, Hepatitis
Reacción de Enzimoinmunoánalisis: Se emplea una enzima como marcador que actúa
sobre un sustrato que desarrolla color. Ej: Hormonas, IgE, Marcadores tumorales, HIV,
Hepatitis
Pruebas cutáneas: la hipersensibilidad dérmica ofrece ciertas ventajas al determinar
con facilidad y rapidez la respuesta inmunológica (celular) del individuo a la exposición
previa a los agentes infecciosos. Ej: Virus de Herpes simple
Las reacciones de hipersensibilidad pueden ser de diferentes tipos. Gell y Coombs, en
1963, las clasificaron en cuatro: hipersensibilidades tipo I, II, III y IV. La
hipersensibilidad tipo I, o inmediata, es aquella que está mediada por anticuerpos tipo
IgE. La tipo II, o citotóxica, está mediada por anticuerpos citotóxicos. La tipo III es una
hipersensibilidad por inmunocomplejos. La tipo IV está mediada por células.
Alergia o Hipersensibilidad denota un estado en el cual una respuesta inmunitaria
desencadena reacciones exageradas o inapropiadas que son nocivas para el huésped.
Son típicas en un individuo dado, después del primer contacto con un antígeno o
alergeno. El primer contacto (que ocurre al principio de la vida del individuo) es un
hecho preliminar necesario e induce a la sensibilización a ese alergeno (antígeno
especifico) y es así como los siguientes contactos con dicho antígeno desencadenaran
una respuesta hipersensible.
Esta respuesta anómala, exagerada o inapropiada, da lugar a una reactividad de la que
deriva lesión tisular u orgánica de grado variable. Como ya lo mencionamos se
describen cuatro tipos de reacciones de Hipersensibilidad: Tipo I (Inmediata o
Anafilactica), Tipo II (Por Citotoxica), Tipo III (Por Complejo Inmunitario) y Tipo IV
(Retardada).
La Hipersensibilidad Tipo I se manifiesta por reacciones tisulares a los minutos que el
alergeno se combina con el anticuerpo compatible en las personas que previamente se
han sensibilizado frente a el. Esta hipersensibilidad esta mediada principalmente por
IgE. La unión de la IgE fijadas a las superficies de los mastocitos y el Alergeno
desencadena la reacción de hipersensibilidad, por la liberación de mediadores
vasoactivos (Histamina, Serotonina, Prostaglandinas, Tromboxanos, etc)( ver
figuras)ejemplos choque anafiláctico por inyección de fármacos y picaduras de
insectos, cuadros de alergia como fiebre del heno y asma.
La hipersensibilidad tipo II: son reacciones medidas por la interacción de anticuerpos
IgG e IgM preformados con antígenos presentes en la superficie celular y otros
componentes tisulares. Activando al sistema del complemento, ejemplos reacciones
transfusionales, miastenia gravis, eritroblastosis fetal, anemia hemolítica autoinmune,
Sx de Goodpasture.
La hipersensibilidad tipo III: son reacciones producidas por la existencia de
inmunocomplejos (IgG) circulantes que al depositarse en los tejidos provocan
activación de la fagocitosis y daño tisular por activación del complemento, como sucede
en lupus eritematoso sistémico, enfermedad del suero, reacción de Arthur, artritis
reumatoidea.
La hipersensibilidad tipo IV son reacciones de hipersensibilidad celular o mediada por
células, causadas por linfocitos T sensibilizados al entrar en contacto con el antígeno
especifico, pudiendo producir una lesión inmunológica por efecto tóxico directo o a
través de la liberación de sustancias solubles como las linfocinas. Como en la prueba de
la tuberculina o reacción de Mantoux, dermatitis de contacto, rechazo de tejidos
trasplantados, enfermedad de addison.
En el intento de encontrar protección real contra las enfermedades infecciosas que
diezmaban pueblos enteros a hecho que el hombre con el tiempo des cubra un medio de
protección. Los datos más antiguos son del siglo VII, cuando budistas indios ingerían
veneno de serpiente con el fin de ser inmune a sus efectos.
El pueblo chino desde el siglo X practicaba la variolización con el fin de inocular el virus
de la viruela de un enfermo a una persona susceptible.
Las vacunas fueron descubiertas en 1771, por Edward Jenner, a partir de experimentos
que realizaba con gérmenes del a viruela que atacaba a la vaca, pero que a los trabajadores
de las granjas hacia inmunes hacia esta enfermedad.
De ahí proviene su nombre, de la palabra latina vacca y este invento fue el inicio de todo
un programa de inmunizaciones que ha permitido prevenir muchas enfermedades
mortales o incapacitantes y evitar grandes epidemias.
La inmunización o vacunación es una forma de activar al sistema inmune, expone a las
personas a una cantidad muy pequeña y muy segura de algunos agentes infecciosos
(microorganismos vivos atenuados o muertos o sus fracciones antigénicas ) causantes de
enfermedad. Esta exposición ayuda al sistema inmune a reconocer y crear defensas contra
esa enfermedad de forma eficiente. El individuo genera su propia respuesta inmune frente
a un estímulo antigénico.
Debido al beneficio que causan las vacunas, existe a nivel mundial un programa
ampliado de vacunación (PAI) liderado por la OMS. En Bolivia el PAI funciona desde
el año 1979, en ese entonces la cobertura de menores de un año no alcanzaba ni al 20%.
Actualmente el incremento de la cobertura de vacunación en muy bueno, alcanzando
por ejemplo un 98% con la vacuna antisarampionosa y un 93% con la BCG. En 1994 se
ha certificado la erradicación de la poliomielitis en la América, en Bolivia el último
caso registrado ocurrió en 1987.
El programa ampliado de inmunizaciones de segunda generación, en Bolivia ,ha
introducido nuevas vacunas en el esquema tradicional. Se reemplazó la vacuna DPT con
la pentavalente y la antisarampionosa fue remplazada por la tripe viral que inmuniza
contra sarampión, rubéola y parotiditis.
2. COMPETENCIA (S)
• Identifica las pruebas serológicas empleadas en el diagnóstico microbiológico,

para la soluccion y toma desiciones en el campo de trabajo
• Realiza e interpreta la determinación de grupo y factor sanguíneo.
• Realiza e interpreta la determinación de proteína C reactiva.
• Analiza el fundamento de las pruebas serológicas, de acuerdo a las situaciones de
campo de trabajo del profesional
• Identifica los diferentes tipos de hipersensibilidad y su relacion con el campo de
trabajo del profesional
• Realiza la prueba de hipersensibilidad a la penicilina, de acuerdo a los pacientes
y la toma de decisiones
• Interpreta los resultados de la prueba, y toma desiciones en el campo de trabajo
del profesional
• Conoce otras pruebas empleadas en el diagnostico microbiológico, de acuerdo a
las situaciones de campo de trabajo del profesional

 Portaobjetos (15)
 Guantes (2 pares)
 Lancetas (10)
 Algodón (20 g)
 Alcohol (30 ml)
 Reactivo de Grupo y Factor sanguíneo (1 kit)
 Mondadientes (30 )
 Micropipetas de volumen variable (3)
 Microplaca para aglutinacion
 kit de Ig A secretora
➢ Trabajo en grupos pequeños

➢ Determinación de Grupo y Factor
➢ Determinación de Ig A secretora

300 Minutos
No aplica a esta practica
7. CUESTIONARIO Y ACTIVIDADES:
1. Dibuje los tipos de ELISA, explique brevemente el fundamento y ¿cuál su

utilidad para el diagnóstico?
2. En qué consiste y la utilidad del inmunoblot o Western Blot.
3. Explique el fundamento de la Reacción de polimerasa en cadena y sus
aplicaciones.
4. Cite la diferencia entre las pruebas de PCR y PCR latex.
PRÁCTICA NO. 6
VIRUS. METODOS DE DIAGNOSTICO Y ANTIVIRALES
Los métodos utilizados para reconocer las infecciones por virus humanos pueden
clasificarse en DIRECTOS e INDIRECTOS, según persigan demostrar la presencia
del virus o de alguno de sus constituyentes (antígeno o genoma viral) o bien la respuesta
de anticuerpos específicos por parte del huésped en el curso de la infección.
Gran parte de las técnicas utilizadas en el diagnóstico clínico se basan en pruebas

serológicas que identifican anticuerpos específicos frente a diversas proteínas
antigénicas. Sin embargo, existen circunstancias en las cuales son necesarias pruebas
que detecten precozmente la infección viral (tratamientos específicos, medidas
profilácticas, etc.).
En algunas infecciones virales es posible detectar la presencia de antígenos virales

previamente al desarrollo de la seroconversión, siendo esta prueba la única evidencia de
la exposición al virus cuando no existe aumento de los niveles de anticuerpos
circulantes (pacientes inmunodeprimidos).
Igualmente la detección del genoma viral puede favorecer la precocidad del diagnóstico
viral y su confirmación. En la última década se han desarrollado una serie de técnicas
para el diagnóstico viral basadas en la detección de ácidos nucleicos. De ellas la
Reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es la más utilizada.
En el momento actual, la tendencia en el diagnóstico virológico consiste en emplear

nuevas y más sensibles tecnologías de detección de antígenos y de investigación de
ácidos nucleicos con el propósito de lograr un diagnóstico viral más rápido. El
desarrollo de quimioterapia antiviral efectiva es responsable de esta tendencia que hace
de la identificación rápida, sensible y específica de los virus, una necesidad.
I. METODOS DE DIAGNOSTICO VIRAL:
• Confirmar el diagnostico clinico

• Seleccionar un tratamiento adecuado
• Monitorizar la evaluacion de la enfermedad
• Hacer un seguimiento epidemiologico de la enfermedad
Los métodos utilizados para reconocer las infecciones por virus humanos pueden
clasificarse
DIRECTOS. Demostracion de la presencia de los virus en la muestra clinica:

• Inoculacion en animales de experimentacion
• Inoculacion en huevos embrionarios
• Inoculacion en cultivos celulares
• Deteccion del virus en la muestra
INDIRECTOS. Demostracion de la presencia de anticuerpos especificos en el suero
• ELISA ( Infecciones agudas Y Infecciones cronicas )

• INMUNOFLORESCENCIA
• RADIOINMUNOENSAYO
• REACCION DE LA POLIMERASA EN CADENA
• FIJACION DE COMPLEMENTO
• INMOBLOTTING
• INHIBICION DE LA HEMAOAGLUTINACION
Las Hepatitis virales son enfermedades generalizadas que afectan primariamente al

hígado. Estos virus producen una inflamación aguda del hígado que trae como
consecuencia una enfermedad clínica caracterizada por fiebre, síntomas
gastrointestinales tales como nauseas y vómitos e ictericia. Independientemente del tipo
de virus, durante la enfermedad aguda se observan lesiones histopatológicas idénticas.
Caracteristi Hepatitis A Hepatitis B Hepatitis C Hepatitis D

Hepatitis
ca E
Nombre “Infecciosa “Suero” No A no B Agente delta Enterico
común ” no A no
B
Estructura Picornavir Hepadnaviru Flavivirus, Tipo viroide, Norovir
us, capside, s, envoltura, envoltura, envoltura us,
ARN ADN ARN ARN capside
circular ARN
Transmisió Fecal-oral Parenteral, Parenteral, Parenteral, Fecal-
n sexual sexual sexual oral
Inicio Brusco Insidioso Insidioso Brusco Brusco
Incubación 15-20 días 45-160 días 14-180 días 15-64 días 15-50
días
Gravedad moderada Ocasionalme Subclinica, Coinfección moderad
nte grave cronicidad por VHB, a
70% ocasionalme
nte grave
Mortalidad < 0.5% 1 a 2% Aprox 4% elevada 1 a 2%
Cronicidad No Si Si Si No
Enfermeda Ninguna Carcinoma Carcinoma Cirrosis, Ninguno
des hepatocelula hepatocelu hepatitis
asociadas r primario, lar fulminante
cirrosis primario,
cirrosis
Diagnostico Síntomas e Síntomas y Síntomas y ELISA anti -----------
IgM anti- titulos en ELISA VHD --
VHA suero de anti-VHC
HBsAg,
HBeAg IgM
anti-HBc
Fuente: Murray
II. Virus de la inmunodeficiencia HIV
El virus de inmunodeficiencia adquirida forma parte del género Lentivirus. Estos

constituyen un grupo dentro de la familia Retroviridae. Desde su ingreso a la célula
hospedadora, la cadena simple de ácido ribonucleico (ARN) viral comienza su
transformación en una doble cadena de ácido desoxirribonucleico (ADN) por acción de
la enzima transcriptasa inversa que forma parte del virus. La integrasa y otros cofactores
actúan para que el ADN del virus se fusione con el ADN de la célula hospedadora a
través de la transcripción en el genoma de la célula que aloja al virus. De esta manera, la
célula queda infectada por el virus. Después de este proceso, los lentivirus reaccionan
de dos maneras posibles: puede ocurrir que el virus entre en latencia mientras la célula
infectada continúa en funciones, o bien, que el virus comience a replicarse activamente
y libere viriones capaces de infectar otras células.
Existen dos tipos del VIH, llamados VIH-1 y VIH-2.
Transmisión:
 Transmisión sexual: relaciones sexuales sin condón con personas que viven con
el VIH-SIDA.
 Transmisión a través de sangre y productos de sangre contaminados con el virus,
o herirse con instrumentos cortopunzantes infectados (vía parenteral o sanguínea).
Este vía incluye entre otras cosas transfusiones de sangre o productos de sangre,
uso de agujas contaminadas y tatuajes.
 Transmisión vertical de una madre que vive con el VIH a su hijo a través de la
placenta durante el embarazo, durante el parto o en la lactancia a través de la leche
materna (vía perinatal o materno-infantil).
No se transmite el VIH por:

 Compartir baños con otras personas o con personas que viven con el VIH-SIDA
 Compartir alimento y utensilios de cocina con otras personas o con personas que
viven con el VIH-SIDA
 Picadura de insectos
 Por compartir vida social
 Por compartir el ambiente del trabajo
 Abrazos, apretón de manos, besos
 Abrazar, besar o cuidar de una persona que vive con el VIH-SIDA
a) Diagnóstico de las infecciones causadas por hongos:
Además del cultivo en Agar de Sabouraud (ya comentado anteriormente) se puede realizar
una observación al microscopio, que se da sobre todo cuando se realiza la inspección de
hongos filamentosos, viéndose hifas (en las que miraremos el grosor, tabiques, ángulo de
las ramificaciones) y cuerpos fructíferos (lugar de formación de esporas del hongo).
También se pueden realizar test bioquímicos, utilizando sobretodo hidratos de carbono o
compuestos nitrogenados para identificar levaduras, test inmunológicos, que detectarán
antígenos específicos de algunas especies de hongos, e identificaciones genéticas mediante
reacciones en cadena de la polimerasa.
b) Diagnóstico de las infecciones virales
Se realiza mediante la detección de antígenos en sangre y cultivos celulares, aunque

también por la serología con detección de anticuerpos (teniendo en cuenta que una persona
infectada va a sintetizar anticuerpos frente al virus que le ataca).
En los posibles cultivos, observaremos los ya conocidos efectos citopáticos y no debemos

olvidar las identificaciones genéticas mediante reacciones en cadena de la polimerasa y las
identificaciones por microscopía electrónica, aunque sean raramente usadas en la clínica.
Diagnóstico:
Detección de anticuerpos por Elisa. Un resultado positivo debe ser corroborado con
Westen blot o Reacción de Polimerasa en cadena. El Elisa posee un periodo de ventana de
3 meses (periodo en el cual el virus esta en el paciente y no puede ser detectado en el
laboratorio) por ello ante un accidente con un elemento cortante o relación sexual insegura
se deberá corroborar un nuevo test a los 3 meses.
2. COMPETENCIA (S)
•Identifica los métodos de diagnostico para las enfermedades virales y su relacion

con el campo de trabajo del profesional.
• Diferencia las características clínicas básicas de algunas enfermedades virales y
toma desiciones en la forma de intervencion clinica.
• Elige adecuadamente el método diagnósticos correspondiente para cada
enfermedad viral, y toma desiciones en el campo de trabajo clinico
.
Data display.
Trabajo en grupos pequeños con socialización.

300 Minutos
No aplica
7. CUESTIONARIO
1 Mecanismos de accion de los antivirales
2 Medidas preventivas para la hepatitis A
3 Mencione a los microorganismos oportunista del VIH.
PRÁCTICA NO. 7
HONGOS: METODOS DE DIAGNOSTICO Y ANTIFUNGICOS
Las infecciones fúngicas se denominan micosis y en general pueden dividirse en:

infecciones superficiales (que afectan piel, uñas, cuero cabelludo o membranas
mucosas) y sistémicas (que afectan tejidos mas profundos y órganos).
Muchos de los hongos que pueden producir micosis viven en asociaciones con humanos
como comensales, o están presentes en el ambiente; pero, hasta tiempos recientes, las
infecciones superficiales graves eran relativamente raras y las sistémicas eran muy
raras (al menos en zonas relativamente climáticas frías y templadas). En estas zonas una
infección fúngica normalmente consiste en un pie de atleta o candidiasis oral o vaginal
que producen molestias, pero apenas significan un riesgo para la vida.
Sin embargo, en los últimos 30 años ha habido un constante aumento en la incidencia de
infecciones fúngicas sistémicas secundarias graves. Uno de los motivos es la utilización
generalizada de antibióticos de amplio espectro que eliminan o merman poblaciones
bacterianas no patógenas que normalmente compiten con los hongos. Otro es el
aumento en el número de pacientes con una respuesta inmune reducida debido al SIDA
o a la acción de fármacos inmunodepresores o antineoplásicos; esto ha conllevado un
aumento del predominio de infecciones oportunistas, es decir infecciones por hongos
que normalmente son inocuos o que se eliminan rápidamente en personas
inmunocompetentes.
Clasificación de las micosis:
Micosis sistémicas.
 Candidiasis sistémica oportunista
 Meningitis
 Endocarditis criptocosica
 Aspergilosis pulmonar oportunista
 Mucormicosis rinocerebral
 Blastomicosis
 Histoplasmosis
 Coccidiomicosis
 Paracoccidiomicosis
Micosis superficiales pueden clasificarse en:

 Dermatomicosis ( piel, pelo, uñas causados por dermatofitos) los mas
comunes tiñas
 Candidiasis superficial (boca, vagina o piel)
Mecanismos de acción de los antimicóticos
TRIAZOLES
Fluconazol Oral, IV Inhibe a Buena penetración en el

Lanosterol 14 alfa SNC. Espectro limitado
desmetilasa (levaduras)
dependientes del
Intraconazol Oral, IV Citocromo P450, Amplio espectro,
mayor absorción inconstante.
especificidad de
Voriconazol Oral, IV unión a la enzima Amplio espectro,
diana incluso levaduras y
formas miceliales.
Posaconazol, En fase de investigación

Ravuconzol clinica.
ALILAMINAS
Naftifina Topica Inhibición de Terbinafina posee

escualeno amplio espectro y actua
Terbinafina Topica y epoxidasa en forma sinergica con
oral otros antifungicos
ANTIMETABOLITOS
Flucitosina Oral Inhibición de la Se emplea en

síntesis de ADN y combinacón con
ARN anfotericina B y
fluconazol, su toxicidad
y resistencia son
problematicas
IMIDAZOLES
Ketoxonazol, bifonazol, Oral, Inhibe enzimas Ketoconazol tiene un

clotrimazol, econazol, tópica lanosterol 14 alfa espectro relativamente
miconazol, tioconazol desmetilasa amplio y se asocia con
dependientes del problemas de toxicidad
citocromo P450
POLIENOS
Anfotericina B IV, tópica Se une a Amplio espectro,

ergosterol y toxicidad muy elevada
provoca daño
Anfotericina B IV oxidativo directo Amplio espectro, menor
liposomal a la membrana toxicidad, caro
Nistatina Oral y Formulación lisosomal

topica en fase de investigación
EQUINOCANDINAS
Caspofungina, IV Inhibición de la Se ha aprobado su

anidulafungina, síntesis de utilización en
micafungina glucanos en la candidiosis invasiva y
pared celular del aspergilosis sistemica
hongo
INHIBIDORES DE
LA SÍNTESIS DE
QUITINA
Nikomicina Z IV Inhibición de Fase de investigación

síntesis de quitina clinica
de la pared celular
del hongo
OTROS
Amorolfina, variados variados

griseofulvina, tolnaftato
Fuente: Murray
Indicaciones de los antifúngicos:
Enfermedad Fármacos
Infección sistémica
Candidiasis sistémica Anfotericina; flucitosina,
fluconazol
Criptococosis (meningitis)
Aspergilosis sistémica Anfotericina; itraconazol
Blastomicosis Anfotericina; itraconazol
Histoplasmosis Anfotericina; itraconazol
Coccidiomicosis Anfotericina; itraconazol;
fluconazol
Paracoccidiomicosis
Anfotericina; itraconazol;
Mucormicosis
fluconazol
Esporotricosis diseminada
Anfotericina; itraconazol;
fluconazol
Anfotericina; flucitosina
Anfotericina; itraconazol
Infecciones superficiales
Dermatomicosis
Pie de atleta Un azol tópico o itraconazol oral
Tiña cutánea Un azol tópico o itraconazol oral;
terbinafina oral
Itraconazol oral
Tinea capitis
Terbinafina oral, amorolfina
Onicomicosis
tópica.
Candidiasis
Piel
Un azol tópico, nistatina tópica
Boca
Un azol o nistatina tópica,
fluconazol oral.
Vagina Un azol tópico, fluconazol oral.

Candidiasis mucocutánea crónica Fluconazol, ketoconazol.
2. COMPETENCIA (S)
• Comprende las principales infecciones fúngicas que se presentan en el

campo de trabajo del profesional
• Identifica los fármacos antifúngicos en las principales infecciones fúngicas,
que se presentan en el campo de trabajo del profesional
 Laminas teñidas mohos (5) y levaduras (5)
 Aceite de inmersión ( 5 ml)
 Microscópios (8)
 Agar patata dextrosa (10g)
 Frascos Scot 250 ml (2)
 Espatula (2)
 Hornilla (1)
 Balanza (1)
 Autoclave (1)
 Cajas petri (10)
 Acido tartarico (3g)
 Hidroxido de potasio al 10 % (5ml)
 Cubreobjetos(10)
➢ Trabajo en grupos pequeños .
➢ Observación en microscopio de las láminas teñidas.
200 Minutos
No aplica
7. CUESTIONARIO
1- Indicar los principales mecanismos de acción de:
Fármaco Mecanismo de acción
Azoles
Nistatina
Terbinafina
Flucitosina
Anfotericina
2.- Cite el tratamiento incluya medicamento, via de administración , tiempo de

tratamiento y complicaciones, de las siguientes micosis:
Vía de Tiempo de
Patología Medicamento Complicaciones
administración tratamiento
Pie de atleta
Pitiariaisis
Tiña corporis
Rubeola
Tiña capis
Histoplasmosis
Onicomicosis
Esporotricosis
Criptococosis
Mucormicosis
Candidiasis oral
Carbunco
PRÁCTICA NO. 8
PARASITOS: METODOS DE DIAGNOSTICO Y ANTIPARASITARIOS

El diagnóstico de las infecciones parasitarias puede realizarse por métodos directos o
parasitológicos y métodos indirectos. Los métodos directos o parasitológicos son
aquellos que nos perimitenn observar el parasito o alguna de sus formas de transmisión
que comprende:
• Examen directo macroscópico y microscópico del parasito o de muestras
biológicas que lo contengan ya sea en freco o mediante tinciones.
• El cultivo
• Inoculación experimental
Los métodos indirectos generalmente son serológicos, permiten poner de manifiesto
la respuesta frente al parasito
Protozoarios Flagelados
Son seres unicelulares muy móviles y por ello tienen distintos habitat, se movilizan por
seudopodos tenemos a las Entamoeba, pueden estar en su forma activa o trofozoitica y
su forma latente o quística dependiendo de las condiciones del medio que las rodea, se
reproducen por fisión binaria, son multinucleadas y tienen numerosas vacuolas
citoplasmáticas
2. COMPETENCIA (S)
• Identifica los métodos de diagnóstico para las enfermedades parasitarias en
relación a su campo profesional
• Reconoce las principales características de los protozoarios que afectan la cavidad
oral
• Reconoce los distintos antiparasitarios para el tratamiento de patologías orales
 Cubreobjetos (15)
 Gotero (3)
 Solucion de lugol (15 ml)
 Solucion fisiologica (10 ml)
 Palillos de preparacion (20)
 Microscópios (8)
Cada alumno trabajara con un microsocpio, luego preparara muestra fresca de heces y
saliva con solucion fisiologica y otra muestra conservada con solucion de lugol y
siguiendo normas de uso enfocara una muestra fresca y otra conncetrada para evaluar la
estructura interna de las formas de los parasitos.
300 minutos
No aplica
7. CUESTIONARIO
1- Elaborar un mapa conceptual de los protozoarios

2- Indicar los principales mecanismos de acción de los antiparasitarios.
3- Medidas preventivas para infecciones parasitarias.

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GUÍAS DE PRÁCTICA MICROBIOLOGÍA I

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GUÍA PRÁCTICA DE LABORATORIO

UNIVERSIDAD PRIVADA DEL VALLE

Práctica N° 1: Normas básicas de bioseguridad en el laboratorio de Microbiología

Práctica Nº 2: Materiales e instrumentos de laboratorio empleados en Microbiología

Práctica N° 3: Medidas de desinfección y esterilización en un consultorio

Práctica N° 4: Recolección de muestras para análisis microbiológico oral.

Práctica N° 5: Inmunología: técnicas inmunológicas, hipersensibilidad, vacunas

Práctica Nº 6: Virus. Métodos de diagnóstico y antivirales

Práctica Nº 7: Hongos. Métodos de diagnóstico y antifúngicos

Práctica Nº 8: Parásitos. Métodos de diagnóstico y antiparasitarios

COMPETENCIAS ESPECÍFICAS A SER EVALUADAS EN LA CLASE PRÁCTICA

UNIVERSIDAD PRIVADA DEL VALLE

NORMAS BASICAS DE BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO DE

1. CONOCIMIENTO TEORICO REQUERIDO:

Nuestro laboratorio se encuentra en el grupo de riesgo 1, nivel básico, en este nivel la

➢ El Símbolo internacional de peligro biológico debe estar colocado en las puertas de

Zonas de trabajo del laboratorio:

Clasificación de los residuos:

3. MATERIAL, REACTIVOS Y EQUIPOS

5. TIEMPO DE DURACION DE LA PRACTICA

Residuos Infeccioso Cortopunzante Comunes

MATERIALES E INSTRUMENTOS DE LABORATORIO

1. CONOCIMIENTO TEORICO REQUERIDO

El trabajo en un laboratorio de Microbiología es significativamente diferente al de otros

3. MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS

Entre los instrumentos que se suelen encontrar en el laboratorio de microbiología se

5. TIEMPO DE DURACION DE LA PRACTICA

MATERIALES USOS DIBUJO

2.- ¿Qué otros tipos de materiales e instrumentos de laboratorio utilizados en

4.- Cite tipos de microscopios empleados en el diagnóstico microbiológico.

MEDIDAS DE DESINFECCION Y ESTERILIZACIÓN EN UN

1. CONOCIMIENTO TEORICO REQUERIDO:

ESTERILIZACIÓN: Es un proceso por el que se eliminan todas las formas de vida

DESINFECCIÓN: Es un proceso por el que se destruyen microorganismos patógenos,

ASEPSIA: significa ausencia o privación de todos los gérmenes patógenos o no.

ANTISEPSIA : es la creación de un medio disgenesico que obra por destrucción de los

SUSTANCIAS QUIMICAS EMPLEADAS EN ASEPSIA Y ANTISEPSIA

Yodo: Es reconocido como un excelentes antiséptico pero puede genera irritación de la

Triclosán: Sustancia no iónica que al ser integrada en jabones en concentración de 0.2

Alcoholes: Alcohol etílico y isopropilico, muestran una actividad antimicrobiana rápida

Soluciones cloradas: hipoclorito de sodio suelen utulizaerse a una solucion entre el 1 %

Formaldehido: Es inflamable e incoloro. Se alcanzan niveles de actividad biocida con

Glutaraldehido: Se suele emplear en solucion acuosa al 2%, amortiguada a pH

Métodos químicos Oxido de etileno

FACTORES QUE INTERVIENEN EN LA DESINFECCION

• Identifica las características de esterilización, desinfección, asepsia y

3. MATERIAL, REACTIVOS Y EQUIPOS

 Autoclave de Chamberland (1)

➢ Trabajo en grupos pequeños

Para esto se utiliza el autoclave.

6. MEDICION, CALCULOS Y GRAFICOS

1. ¿Cuál mecanismo de acción del calor sobre los microorganismos?

Caja petri de vidrio

3. ¿Como intervienen cada uno de los factores implicados en la desinfección?

4. Desde su punto de vista cual es la importancia del lavado de manos.

5. Diferencia entre desinfectante y antiseptico

6. Ejemplos de desinfectantes y antisepticos de uso odontológico

RECOLECCION DE MUESTRAS PARA ANALISIS MICROBIOLOGICO

1. CONOCIMIENTO TEORICO REQUERIDO

La actividad que desarrolla el laboratorio de microbiología está orientada esencialmente

Por tanto es necesario tener un protocolo que permita la adecuada manipulación de