Manual de Practicas Gabinete 2019 Ver 0

UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS
(Universidad del Perú, DECANA DE AMÉRICA)

FACULTAD DE MEDICINA
ESCUELA PROFESIONAL DE TECNOLOGÍA MÉDICA
ÁREA: LABORATORIO CLÍNICO Y ANATOMÍA PATOLÓGICA
DEPARTAMENTO ACADÉMICO DE TECNOLOGÍA MÉDICA
SECIÓN: LABORATORIO CLÍNICO Y ANATOMÍA PATOLÓGICA
Manual de Prácticas de Gabinete

CURSO
Medicina Transfusional y Banco de Sangre
AUTOR:
Dr(c), Mg, Lic TM. José Antonio Paredes Arrascue
2019
Manual de Prácticas 2019

Medicina Transfusional – Escuela Profesional Tecnología Médica – Facultad de Medicina – U.N.M.S.M.
INTRODUCCIÓN
Es impresionante apreciar cómo ha crecido y expandido el desarrollo de la Medicina

gracias al soporte fundamental del Banco de Sangre y la Medicina Transfusional
gracias a los avances Tecnológicos, metodológicos, analíticos y de diagnóstico.
Los Tecnólogos Médicos somos los únicos profesionales de la Salud formados y
preparados para hacerse cargo de gran parte del trabajo de un Servicio de
Transfusión, y por lo tanto debemos estar atentos para que en el quehacer diario
prever todas y cada una de las eventualidades que pudieran suceder en los procesos,
y elevando al máximo las medidas a seguir para que su producto, tanto obtenido como
transfundido, cumpla los máximos criterios de seguridad transfusional.
Esta Labor, si bien es cierto suena bien y es alentadora, demandará del profesional
haber obtenido ciertas competencias durante su formación en el campo; y siendo el
presente curso de Medicina Transfusional y Banco de Sangre, el colofón de su
formación en el área, y correspondiéndonos a nosotros, los profesores del curso
cumplir con los objetivos del mismo, es nuestra misión completar las competencias
que requieren los futuros TECNÓLOGOS MÉDICOS DEL BANCO DE SANGRE. Para
ello, nos hemos propuestos complementar la formación basada en competencias de
nuestros alumnos, haciendo de la parte práctica del curso, un valioso aliado,
mejorando las prácticas, ampliando algunas e implementando nuevas.
Los Autores

Índice
Prácticas
Nº 1 Estandarización del Trabajo en Inmunohematología 5

Lectura e interpretación de la reacción Antígeno-Anticuerpo en tubo 9
Nº 2 Control de Calidad de equipos, centrífuga de serología, y de 13

microhematocrito
Calibración de Centrífugas de Serología
Calibración de Centrífuga de Microhematocrito
Nº 3 Control de Calidad de Reactivos 17

Estudio de la Especificidad
Determinación de la Avidez
Titulación
Puntaje– Score
Modelo de Ficha de Control de Reactivos
Nº 4 Determinación de Grupos Sanguíneos ABO y sistema Rh. 26

Prueba Globular, inversa y determinación de subgrupos
Nº 5 Fenotipificación de otros Grupos Sanguíneos 30
Nº 6 Prueba de Antiglobulina Directa 33
Nº 7 Prueba de Compatibilidad 38
CASO CLINICO
Nº 8 Prueba de Antiglobulina Indirecta - Investigación de Anticuerpos 43
Nº 9 Identificación de Aloanticuerpos 54
Nº 10 Realización de técnicas Especiales - Técnica de Elución 61
Anexos
A.1 Métodos Potenciadores: Albúmina, enzimas, Polietilenglicol y LISS 64
A.2 Microaglutinación en tarjetas de gel: Principio, composición, tipos y 69

patrones de lectura
A.3 Determinación de los Grupos Sanguíneos ABO/Rh en recién nacidos 73

con la prueba de Antiglobulina Humana Directa (en tarjetas de gel).
Procedimiento e Interpretación de resultados.
Manual de Prácticas 2019 3

A.4 Prueba Directa, Indirecta de Antiglobulina, Identificación de 77

Anticuerpos y Prueba de compatibilidad en Tarjetas de Gel BioRad:
Procedimiento e interpretación de resultados.
A.5 Titulación de Anticuerpos para la detección temprana de la 85

Enfermedad Hemolítica del recién Nacido: Procedimiento de la
Prueba e interpretación de resultados.
A.6 Elución por congelación y descongelación de Lui: Principio y 88

utilización
A.7 Técnica de Adsorción: Principio, uso e interpretación. 89
A.8 Separación de los glóbulos rojos autólogos de los transfundidos por 91

centrifugación simple: Principio y uso.
Talleres
T.1 Discrepancias en la determinación de grupo sanguíneo 94
T.2 Selección de Donantes 99
T.3 Control de calidad en Inmunoserología 105
T.4 Casos de Inmunohematología 107

PRACTICA # 1
ESTANDARIZACIÓN DEL TRABAJO EN INMUNOHEMATOLOGÍA
OBJETIVOS
La presente práctica tiene por finalidad:
• Iniciar al estudiante en el trabajo del laboratorio de Inmunohematología.
• Determinar las concentraciones adecuadas de las suspensiones de células para
su trabajo, así como la forma correcta de procesar las pruebas.
• Diferenciar un resultado positivo de uno negativo.
• Estandarizar la lectura y cuantificación correcta de resultados.
Muestras
Cada grupo de trabajo, contará con:
• Dos frascos gotero con muestras de sangre rotuladas como
o MUESTRA α (alfa)
o MUESTRA β (beta)
• Un frasco gotero rotulado como REACTIVO 1.
MATERIALES
• Tubos de vidrio, de 12 x 75
• Pipetas Pasteur de vidrio, chupón de goma
• Solución Salina Fisiológica
• Piseta de plástico
• Placas de vidrio
• Baquetas de vidrio, plástico o descartables.
• Lápiz de cera.
• Papel parafinado (Parafilm)
EQUIPO
• Centrífuga de serología
• Aglutinoscópio

Fig. 1. Reactivos utilizados en la práctica de “Estandarización del trabajo de Inmunohematología”.

Imágenes tomadas de la catedra del curso de Medicina Transfusional TM UNMSM
PROCEDIMIENTO
I.- Determinación en placa:

• En una placa de vidrio, aplicar por duplicado una gota de la muestra α y rotular
cada una como prueba y testigo por separado.
• Añadir a la primera (“prueba”) una gota del Reactivo 1.
• Añadir a la segunda (“testigo”) una gota de solución salina Fisiológica.
• Mezclar “muestra” con “reactivo”, con la ayuda de una baqueta, en un área no
mayor de 1 x 2 cm.
• Levantar la placa de la mesa y aplicar movimientos ondulatorios, hasta por 30
segundos.
• Anotar su resultado teniendo en cuenta la nota adjunta
PRUEBA TESTIGO
Muestra α 1 gota 1 gota
Reactivo 1 1 gota
SSF 1 gota
Mezclar con ayuda de una baqueta y

luego aplicar movimientos ondulatorios

Repetir el mismo esquema con la MUESTRA β
NOTA: La suspensión de hematíes de los frascos de muestras es homogénea,

ligeramente traslúcida, al interactuar con el reactivo, si hay una reacción POSITIVA
los hematíes se aglutinarán, por lo tanto el aspecto de la suspensión, en la placa
de vidrio cambiará a grumos (o agregados) de hematíes en un medio liquido
transparente. En caso de no haber reacción (NEGATIVO) la suspensión se
mantendrá homogénea como al inicio.
II.- Determinación en tubo

Basal:
• Rotular 2 tubos de vidrio 12 x 75 como “muestra α”; rotular el primero como
“prueba” y al segundo como “testigo”, agregar a cada uno una gota de la
muestra.
• Añadir al primero dos gotas del Reactivo 1
• Añadir al segundo dos gotas de Solución Salina.
• Centrifugar a 3500 rpm por 15 segundos.
• Retirar los tubos y leer las reacciones, anotar sus resultados.
NOTA: La formación de un botón de células en el fondo del tubo, persistente a los

suaves intentos de resuspensión, indicará una reacción positiva, si este botón se
disgrega debido al movimiento suave, la reacción se considera negativa.
PRUEBA TESTIGO
Muestra α 1 gota 1 gota
Reactivo 1 2 gotas
SSF 2 gotas
Centrifugar a 3500 r.p.m por 15 seg
Lectura
Repetir el mismo esquema con la MUESTRA β

Preparación I
Empacado de hematíes
➢ Colocar 20 gotas de la muestra α en un tubo de vidrio 12 x 75, rotularlo como

tal; con la ayuda de la piseta de plástico y sin tocar las paredes del tubo, agregar
Solución Salina Fisiológica, hasta 5 mm del borde del tubo, colocar un parafilm
y mezclar por inversión. Hacer lo mismo con la muestra β.
➢ Centrifugar a 3,500 r.p.m por 2 minutos.
➢ Con la ayuda de una pipeta Pasteur y un bulbo de goma, aspirar todo el
sobrenadante, sin levantar los hematíes (células lavadas).
➢ Con la ayuda de una pipeta Pasteur, transferir una gota de las células lavadas,
a un nuevo tubo, añadir 19 gotas de Solución Salina Fisiológica, rotular
adecuadamente: suspensión de trabajo.
➢ Con esta preparación repetir los 5 pasos del procedimiento anterior (basal) y
tomar nota de sus observaciones.
Preparación II
➢ Transferir una gota de la suspensión de trabajo al 5% a un tubo debidamente

rotulado
➢ Adicionar 4 gotas de Solución Salina.
➢ Tomando esta nueva suspensión repetir los mismos 5 pasos del procedimiento
basal, y tomar nota de sus observaciones.
CUESTIONARIO
1. ¿Qué volumen tiene una gota de la suspensión de trabajo?
2. ¿Qué puede comentar de los resultados obtenidos en placa con la muestra α y
la muestra β?
3. ¿Cuál es la concentración de la preparación I, y cual la de la preparación II?
4. ¿Qué puede comentar de los resultados de la determinación en tubo Basal?
5. ¿Qué puede comentar de los resultados obtenidos con la Preparación I, tanto
con la MUESTRA α, así como con la MUESTRA β?
6. ¿Qué puede comentar de los resultados de la determinación con la preparación
II?
7. ¿Qué función cumple la prueba testigo?
8. ¿Cuáles serían sus conclusiones?

LECTURA E INTERPRETACION DE LA REACCIÓN ANTÍGENO-ANTICUERPO

EN TUBO
El resultado final de la reacción antígeno-anticuerpo, puede manifestarse bajo la

forma de hemólisis o aglutinación; ambas deben ser descritas en forma precisa.
Los pasos a seguir son los siguientes:
✓ Observar el sobrenadante para detectar la hemólisis total o parcial.
✓ Si esta es negativa, desprender suavemente el botón de células para precisar
si existe aglutinación.
✓ Anotar tubo en mano la aglutinación o hemólisis.
✓ Una escala recomendada para la lectura de la aglutinación es la siguiente:
➢ 4 + Un botón sólido de glóbulos rojos y fondo claro.

➢ 3 + Un grumo grande y varios muy pequeños, o varios grumos grandes y
fondo claro.
➢ 2 + Varios grumos grandes y muchos grumos de tamaño pequeño, fondo
limpio (sin glóbulos rojos libres).
➢ 1 + Grumos pequeños y muchos glóbulos rojos libres (fondo turbio).
➢ ½ + Escasos grumos muy finos, fondo turbio.
➢ Negativo.
➢ HP Hemólisis parcial.
➢ HT Hemólisis total.
Fig. 2. Aglutinaciones en tubo de 1+ hasta 4+. Imágenes tomadas de la

catedra del curso de Medicina Transfusional TM UNMSM

OBJETIVO
• El alumno deberá aprender a diferenciar diferentes grados de reacción en tubo.
Muestra
• Dos frascos gotero con muestras de sangre rotuladas como:
• MUESTRA α y
• MUESTRA Ɣ (gamma)
• Un frasco gotero rotulado como REACTIVO 1.
• Un frasco gotero rotulado como REACTIVO 2
MATERIAL
• Pipetas pasteur de vidrio, chupón de goma
• Lápiz de cera.
Equipo
• Aglutinoscópio
Fig. 2.1 Reactivos utilizados en la práctica de “Lectura e interpretación de la reacción antígeno-

anticuerpo en tubo”. Imágenes tomadas de la catedra del curso de Medicina Transfusional TM
UNMSM

PROCEDIMIENTO
1. En un tubo de vidrio 12 x 75, colocar una gota de Glóbulos rojos al 5% de la
MUESTRA α, rotularlo como 1.
2. Agregar 2 gotas del REACTIVO 1.
3. En otro tubo de vidrio 12 x 75, rotulado como 3, dispensar una gota de hematíes
del frasco gotero MUESTRA Ɣ (el cual ya se encuentra al 5%)
4. Agregar a este segundo tubo 2 gotas del REACTIVO 2.
5. Centrifugar a 3500 rpm x 15 seg.
6. Retirar los tubos de la centrífuga, leer e interpretar el resultado.
7. Tomar nota de sus resultados.
α Ɣ
Muestra α al 5% 1 gota
Reactivo 1 2 gotas
Muestra λ 1 gota
Reactivo 2 2 gotas
Centrifugar a 3500 r.p.m. por 15 segundos
Lectura
OBSERVACIÓN IMPORTANTE:
Para una correcta interpretación de la reacción, se deberá leer individualmente
cada tubo, para ello se cogerá de la boca del mismo con los dedos índice y pulgar,
y aplicándole muy ligeros movimientos rodando la boca del tubo sobre la yema de
los dedos que lo están sujetando, se intentará desprender el botón que siempre se
deberá formar aunque la reacción fuese negativa, una vez desprendido todo rastro
de hematíes del fondo del tubo, se le dará un ligero impulso en forma horizontal,
esto para permitir que la suspensión de hematíes se homogenice sobre la superficie
del tubo; recién en este momento es que se deberá interpretar el resultado. Nunca
volver a centrifugar el mismo tubo, ni agitarlo muy bruscamente.

PRACTICA 1
DETERMINACION
EN PLACA
DETERMINACION DETERMINACON
DETERMINACION
EN TUBOS DE EN TUBO DE
EN TUBOS
PREPARACION 1 PREPARACION 2
VERIFICACION DE
GRADOS DE
AGLUTINACION
PRECAUCIÓN:
Tener en cuenta que tanto las muestras como los reactivos empleados en la
preparación del material de la presente práctica, son de origen humano, a partir
de muestra de donantes de sangre, que sin bien es cierto han sido tamizadas
para las enfermedades hemotrasmisibles, deberán tratarse tomando todas las
medidas de bioseguridad necesarias, ya que se tratan de muestras de origen
humano.
CUESTIONARIO
1. ¿Qué diferencias encuentra entre las lecturas de los resultados de los tubos 1 y
3?
2. ¿Qué pasa cuando al tubo se le aplica movimientos muy bruscos?
PRÁCTICA # 2
CONTROL DE CALIDAD DE EQUIPOS, CENTRÍFUGA DE SEROLOGÍA, Y
DE MICROHEMATOCRITO.
CALIBRACIÓN DE CENTRÍFUGAS DE SEROLOGÍA
Como parte de un sistema de Control de Calidad,

se deberá asegurar la óptima obtención de
productos y/o resultados, garantizando un
adecuado funcionamiento de los equipos que se
utilizan para tal fin.
La centrífuga serológica utilizada en
Inmunohematología, deberá tener como propiedad
poder alcanzar su máxima velocidad de 3500 rpm
a los 5 segundos de haber sido puesta en marcha
y a su vez, luego de mantenerse en esa velocidad
el tiempo pre fijado en el temporizador, deberá
desacelerar (frenar) y detenerse completamente
en un lapso de 10 segundos.
Además, la intensidad de la centrifugación deberá ser lo suficiente como para que
siempre se forme un botón de hematíes que se mantenga como tal en una reacción
débil así como para no permitir que haya falsos resultados positivos por
aglomeración de los mismos.
MUESTRAS
• Suspensión de hematíes de Muestra 1 al 5 %, considerarlos como control
POSITIVO.
• Suspensión de hematíes de Muestra 2 al 5%, considerarlos como control
NEGATIVO
• Frasco gotero con Reactivo 2

Fig. 2.3 Reactivos utilizados en la práctica de “Control de calidad de equipos, centrífuga de serología,
y de microhematocrito”. Imágenes tomadas de la catedra del curso de Medicina Transfusional. UNMSM
MATERIALES
• Pipetas Pasteur de vidrio, chupón de goma
• Lápiz de cera.
EQUIPO
• Aglutinoscópio
PROCEDIMIENTO
1. Preparar dos series de tubos de vidrio 12 x 75 mm, de 5 tubos cada una, la
primera rotularla como POSITIVO, la segunda como NEGATIVO.
2. Agregar una gota de las células respectivas (muestra 1: positiva; muestra 2:
negativa), y dos gotas del frasco gotero Reactivo 2 a cada serie, justo
inmediatamente antes de centrifugar.
3. Se centrifugan los tubos por parejas, positivo y negativo.
4. El primer par comenzando por 10 Segundos, se lee, se anota y se descarta.
5. A continuación, se hace lo mismo con cada par aumentando en 5 segundos.
POSITIVO NEGATIVO
Muestra 1 al 5% 1 gota
Muestra 2 al 5% 1 gota
Reactivo 2 2 gotas 2 gotas
Centrifugar por parejas a 3500 r.p.m. comenzando por 10 segundos
Anotar resultados según tabla adjunta
Repetir los pasos anteriores, ir incrementando el tiempo cada vez.
• Se evalúa por cada tiempo:

a. Delimitación del botón
b. Facilidad de desprendimiento
c. Grado de aglutinación resultante
d. Sobrenadante libre de hematíes.
• Los resultados que se vayan obteniendo se anotan en la hoja de trabajo
dispuesta para el efecto.
Criterios de Control 10” 15” 20” 30” 45”

+ - + - + - + - + -
Liquido sobrenadante claro
Botón celular claramente definido
Células fácilmente resuspendidas
Reacciones negativas bien definidas
Grado de aglutinación para positivos
INTERPRETACIÓN
El tiempo óptimo de centrifugación es el tiempo más corto necesario para cumplir
estos criterios:
1. La aglutinación en los tubos positivos es tan fuerte como se determina al
preparar los reactivos.
2. No hay aglutinación ni ambigüedad en los tubos negativos.
3. El botón celular está claramente delineado y el borde se observa bien
definido, no velloso.
4. El líquido sobrenadante es claro.
5. El botón de células se resuspende fácilmente.
6. De acuerdo con los resultados obtenidos se escoge el tiempo mínimo en el
cual el tubo POSITIVO resulte un botón bien delimitado, fácil de desprender,
con una aglutinación clara (1+) y el sobrenadante libre de hematíes; y el
NEGATIVO presente un botón nítido, que se disgregue fácilmente.

CALIBRACIÓN DE CENTRÍFUGA DE MICROHEMATOCRITO
PRINCIPIO
• Las centrífugas usadas para determinación de micro hematocrito, como todo
equipo de laboratorio, deberá comprobarse su tiempo óptimo de trabajo: al
recibirlas, después de repararlas y si no hay un programa calendarizado de
aseguramiento de la calidad por lo menos una vez por año.
• Su temporizador y la velocidad deben comprobarse cada 3 o 4 meses.
• Un método de calibración que proporciona vigilancia de calidad y permite
seleccionar el tiempo óptimo de centrifugación consiste en examinar muestras
idénticas de suspensión de hematíes dentro, por debajo y por encima de la gama
aceptable de hematocrito.
• El tiempo mínimo en que ocurre la máxima concentración se selecciona entonces
para uso rutinario.
MATERIAL
• Centrífuga de micro hematocrito a estandarizar
• Capilares de micro hematocrito
• Plastilina
• Muestra de sangre anti coagulada (EDTA).
• Tabla de lectura de micro hematocrito.
PROCEDIMIENTO
1. Homogenizar cuidadosamente las muestras de sangre.
2. Llenar dos capilares de hematocrito, con la muestra de sangre anti coagulada
hasta 1 cm del borde del capilar y sellarlos con plastilina.
3. Colocarlos en la centrífuga de micro hematocrito y centrifugar durante 2
minutos.
4. Al leer, observar el color de los hematíes empacados y del plasma. La columna
de los hematíes ha de ser uniforme, el plasma trasparente y la línea de
delimitación entre ambos, nítida.
5. Medir y registrar cada hematocrito.
6. Repetir los 5 pasos anteriores, incrementado los tiempos de centrifugación de
minuto en minuto hasta llegar a 10 minutos. Comparar los valores del
hematocrito de cada muestra en los diferentes tiempos de centrifugación.
Tiempos de centrifugación
2’ 3’ 4’ 5’ 6’ 7’ 8’ 9’ 10’
Muestra Anti coagulada
INTERPRETACIÓN
Para uso rutinario, seleccionar el tiempo de centrifugación más corto que dé la lectura
más baja.

PRACTICA # 3
CONTROL DE CALIDAD DE REACTIVOS
INTRODUCCIÓN
El aseguramiento de la calidad en el Banco de
Sangre incluye la confianza en que lo que
estamos tratando de identificar en un hematíe sea
realmente reconocido por el reactivo que estamos
usando. Es decir, que el reactivo este
verdaderamente funcionando. Para ello en
nuestro Banco de Sangre deberemos establecer
un programa, o un protocolo de Aseguramiento de
Calidad de reactivos, el que se debería repetir
mínimo cuando ingrese un nuevo reactivo o un
nuevo lote del mismo.
Al controlar un reactivo debe estudiarse:
• Especificidad
• Potencia
• Avidez
• Título
OBJETIVOS
• Dar las pautas mínimas al estudiante del Control de Calidad de Reactivos en el
laboratorio de Inmunohematología.
• Determinar la Potencia y la Especificidad de un reactivo.
• Plantear un modelo de ficha de control de calidad
MATERIAL
• Cronómetro
• Baño María a 37ºC
• Centrífuga de Serología.
• Aglutinoscopio.
• Reactivos comerciales Anti A, Anti B, Anti D
• Viales con hematíes al 5 % A1 Rh neg, B Rh neg, O Rh Positivo
• Viales con hematíes A1, B, y O al 40% en plasma homólogo.
• gradilla
• Pipetas Pasteur, chupón de goma
• Placa de vidrio
• Baquetas de vidrio.
• Lápiz de cera.

ESTUDIO DE LA ESPECIFICIDAD
La especificidad es la propiedad que tienen los anticuerpos (contenidos en un

reactivo) de reaccionar tan solo y únicamente con los glóbulos rojos que tienen en
común los correspondientes determinantes antigénicos que generaron la
producción del respectivo anticuerpo.
PROCEDIMIENTO
Marcar 3 series de tres tubos cada una, con los siguientes rótulos: A, B, D, Adicionar
los reactivos y glóbulos en gotas de acuerdo al siguiente esquema:
Nota: al ser una prueba en tubo, las células deberán trabajarse al 5%, ya están en
un frasco gotero.
A A A B B B D D D
Anti A 1 gota 1 gota 1 gota
Anti B 1 gota 1 gota 1 gota
Anti D 1 gota 1 gota 1 gota
Hematíes A1(-) 1 gota 1 gota 1 gota
Hematíes B (-) 1 gota 1 gota 1 gota
Hematíes O (+) 1 gota 1 gota 1 gota
Centrifugar 3500 r.p.m durante 15 segundos
Lectura
Resultado
INTERPRETACIÓN
Se considera específico cuando el anticuerpo reacciona con su respectivo antígeno,

el cual se evidencia por la presencia de aglutinación. Las reacciones inesperadas
se consideran inespecíficas, las que serán estudiadas mediante técnicas
inmunohematológicas.
DETERMINACIÓN DE LA AVIDEZ
La avidez determina la velocidad (rapidez) de la reacción (fijación) del anticuerpo

con su respectivo antígeno, de esta manera un anticuerpo será más ávido por su
antígeno cuanto más rápido reaccione con este, de igual manera un anticuerpo
tendrá una pobre avidez cuando el tiempo que demore en unirse a su antígeno sea
mayor.
Se evalúa midiendo el tiempo que tardan en aparecer aglutinados de 1 mm

cuadrado en reacciones efectuadas en láminas portaobjetos.

Fig. 2.4 Hematíes al 40 % utilizados en la práctica de “Control de Calidad de Reactivos”.

Imágenes tomadas de la catedra del curso de Medicina Transfusional UNMSM
PROCEDIMIENTO
1. En una lámina de vidrio (o portaobjeto) desengrasada colocar 1 gota del

reactivo a probar.
2. Colocar 1 gota de hematíes (al 40%) específicos para el reactivo a un
centímetro de distancia de la gota de antisuero.
3. Con una baqueta mezclar haciendo un círculo que no sea mayor a 2 cm. de
diámetro. Todo el procedimiento será a temperatura ambiente.
4. En el preciso instante en que se pone en contacto los hematíes y el antisuero
disparar el cronómetro.
• Realizar movimientos de vaivén (haciendo un "ocho" en el aire) hasta que
comiencen a formarse aglutinados de 1 mm2, parar el cronómetro.
5. Anotar el tiempo transcurrido en segundos.
6. Repetir la prueba con la misma muestra, la diferencia no deberá ser mayor
de 3 segundos, en caso contrario deberá repetirse hasta asegurar los
resultados.
INTERPRETACIÓN
El tiempo de reacción menor establece una gran avidez del anticuerpo por su
respectivo antígeno.
Tiempos de 9 a 12 segundos son óptimos.

TÍTULO
La titulación es un método semicuantitativo, que se emplea para estimar la
concentración de Anticuerpos en muestras de suero o comparar la intensidad de la
expresión antigénica en distintas muestras de Glóbulos Rojos (Potencia).
Las aplicaciones habituales de los estudios de titulación son:
1. Estimar la actividad de los Anticuerpos en gestantes aloinmunizadas para

establecer si y cuando efectuar investigaciones invasoras más complejas del
estado del feto.
2. Definir la especificidad de los Auto Anticuerpos
3. Caracterizar los Anticuerpos con Títulos Altos y escasa avidez (HTLA), rasgos
comunes de aquellos contra los Antígenos de los sistemas Knops, Chido-
Rogers y JMH.
4. Observar el efecto de los reactivos sulfhídrilos sobre el comportamiento de los
Anticuerpos, para reconocer la clase de la Inmunoglobulina M o
Inmunoglobulina G
5. Evaluar y hacer el seguimiento del tratamiento inmunosupresor en pacientes
con Anemia hemolítica Autoinmune, PAD +, en cuyo caso, de ser efectivo el
tratamiento, la intensidad y cantidad de Ac presente iría disminuyendo.
Para titular antisueros se hacen diluciones seriadas en Solución Salina Fisiológica

(Reactivo Anti A y/o Anti B), albúmina al 6% (para el caso del Anti D), LISS (Low
Isotonic Saline Solution) u otro diluyente apropiado.
En caso de titular hematíes Coombs Directo positivo, se diluye el reactivo de

Coombs poli específico con solución salina fisiológica y luego se enfrenta a los
hematíes Coombs directo positivos previamente lavados 3 veces.
Las titulaciones se harán por duplicado y se aceptarán los resultados si la diferencia

de título obtenida no excede de una dilución.
PROCEDIMIENTO
Se evaluará el Reactivo Anti A.
1.- Rotular 10 tubos 12 x 75 según la tabla siguiente
2.- Colocar los reactivos en el orden que aparecen y seguir las indicaciones de la
tabla adjunta.
Dilución 1 2 4 8 16 32 64 128 256 512
SSF 2 gotas 2 gotas 2 gotas 2 gotas 2 gotas 2 gotas 2 gotas 2 gotas 2 gotas
Reactivo 2 gotas 2 gotas

Mezclar y pasar 2
gotas
Hematíes 1 gota 1 gota 1 gota 1 gota 1 gota 1 gota 1 gota 1 gota 1 gota 1 gota
Mezclar por agitación
Centrifugar 3500 r.p.m por 15 Seg.
Resultado
El titulo está determinado por la inversa de la mayor dilución del suero que da una
reacción mayor o igual a 1 (+)
PUNTAJE – SCORE
Es una forma de cuantificar la intensidad y la potencia de un anticuerpo, con la

finalidad de poder hacer comparaciones, entre dos títulos consecutivos luego de un
intervalo de tratamiento, de tal manera de poder verificar si por causa del
tratamiento se ha logrado disminuir la intensidad (menor reacción) de la respuesta
Para lo cual, en una titulación, se asigna un puntaje a cada intensidad (en cruces)
de cada tubo, las que al final se suman dando el Score de dicho título.
EQUIVALENCIA
Aglutinación
Puntaje
(Cruces)
4+ 12
3+ 10
2+ 8
1+ 5
+/- 2
0 0

REACTIVO MONOCLONAL Vs REACTIVO POLICLONAL
Fig. 3. Monoclonal versus policlonal antibody production – a single clone of cells used to produce monoclonal cells. Multiple clones produce
an antibody “blend” of antibody molecules. “IMMUNOHEMATOLOGY FOR MEDICAL LABORATORY TECHNICIANS” Cap 2
Reagents and Methods Used for Inmunohematology Testing. Pag. 33

FICHA DE CONTROL DE REACTIVOS
I. ASPECTOS FISICOS
1. Nombre del Reactivo :

2. Marca :
3. Lote :
4. Fecha de caducidad :
5. Volumen :
6. Color :
a. Del Reactivo (Antisuero) :
b. De la Etiqueta:
c. Del Tapón (bulbo y rosca) :
7. Aspecto: ( ) Transparente ( ) Ligeramente Turbio

( ) Turbio ( ) Presencia de partículas
( ) ……………...
8. Almacenamiento :
a. Temperatura :
b. Equipo :
9. Equipo o Instrumento:
10. Instructivo o inserto :
11. Procedencia o
Tipo de Adquisición:
II. ASPECTOS TECNICOS:
1. AVIDEZ:
Tiempo de inicio de aglutinación (a): Segundos

Tiempo de inicio de aglutinación (b): Segundos
Tiempo de inicio de aglutinación (c): Segundos
(Promedio): Segundos

2. ESPECIFICIDAD:
Hematíes
Hematíes Hematíes Hematíes Hematíes
REACTIVO “A2”
“A1” “B” “O” “D” Positivo
(Opcional)
Anti-A
Lectina A1
Anti-B
Anti-AB
(Opcional)
Anti-D
3. TITULO DEL ANTISUERO:
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
Dilución 0 1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 1/256 1/512 1/1024 1/2048
Intensidad
Puntaje
TITULO :
PUNTAJE (Score):
4. HEMOLISIS: ………………………………………………………...
5. AGLUTINACIONES ………………………………………………………….
INESPECIFICAS:
Se aíslan gérmenes:
SI ( ) NO ( )
6. Control Microbiológico:
Gérmenes aislados:
……………………………………………………….
III. CONCLUSIONES Y OBSERVACIONES:
.............................................................................................................................
.............................................................................................................................
RESPONSABLE: Lic. TM………………………...................................................

Potencia y Avidez requerida para antisueros ABO
Título (potencia) Avidez (segundos)

Antisuero Célula
en estudio usadas
policlonal monoclonal policlonal Monoclonal
A1 128 dils 256 dils 10 – 12 3–4
A2 64 dils 128 dils 15 – 20 5–6

Anti A
A1B 64 dils 128 dils 20 – 30 5–6
A2B 64 dils 64 dils 20 – 30 5–6
A1 128 dils 256 dils 10 – 12 3–4
Anti AB A2 64 dils 128 dils 15 – 20 5–6
B 128 dils 256 dils 10 – 12 3–4
Anti B B1 A1B 128 dils 256 dils 10 - 12 3–4
Potencia y Avidez requerida para antisueros Anti D
TITULO Avidez
Tipo de Reactivo (GR R1r)
CIS 37oC Segundos
IgM (monoclonal) 64 dils 128 – 256 dils 5 – 10
IgM + IgG (monoclonal blend) 32 – 64 dils 128 dils 10 – 20
IgG monoclonal 128 – 256 dils 15 – 20
IgG policlonal 32 dils 60

PRACTICA # 4
DETERMINACIÓN DE GRUPOS SANGUÍNEOS ABO Y FACTOR Rh
PRUEBA GLOBULAR, INVERSA Y DETERMINACIÓN DE SUBGRUPOS

• Determinar el grupo sanguíneo ABO, así como su confirmación mediante la
prueba inversa.
• Determinación del Factor Rh, así como su comprobación en los sujetos D
débiles.
• Uso de Lectinas.
MATERIAL Y EQUIPO
• Baño María
• Tubos con anticoagulante (EDTA, Citrato trisódico, heparina, oxalato, etc.)
• Jeringas descartables de 3cc.
• Agujas descartables 20 x 1
• Lancetas descartables
• Pipetas Pasteur,
• Bulbo de goma
• Placa de vidrio
• Ligadura de jebe, algodón, alcohol al 70%.
• Baquetas de vidrio.
• Reactivo anti A, anti B, anti D, Lectina Anti A1, Lectina H
• Reactivo de Anti Globulina Humana.
• Células A1 al 5 %, Células A2 al 5 %, Células B al 5 %, Células O al 5 %
• Lápiz de cera.
PROCEDIMIENTO
I.- Determinación en placa:
1. Tomar muestra a un voluntario en un tubo con EDTA. Usarla como muestra de

trabajo
2. Dispensar tres gotas de la muestra de trabajo sobre una placa de vidrio.
3. Aplicar una gota de cada Reactivo (Anti A, Anti B, Anti D) sobre cada gota de
sangre, mezclar con la ayuda de una baqueta.
4. Aplicar a la placa cierto movimiento de vaivén (describir un “8” en el aire) para
ayudar la mezcla, Visualizar la aglutinación, que manifestará una reacción
positiva.
5. Anotar su resultado
También se puede procesar a partir de sangre obtenida directamente del pulpejo

de dedo.
II.- Determinación en tubo
1. A partir de las muestras problemas (proporcionados por la cátedra) se procederá

a obtener suspensiones de trabajo uniformes al 5%, tal como se indicó en la
primera práctica.
2. Rotular 3 tubos con el nombre o número de la muestra, además rotular “A”, al
primero, “B” al segundo y “D” al tercero.
3. Agregar a cada tubo marcado, una gota del reactivo que corresponda.
4. Agregar una gota de nuestra suspensión de hematíes al 5 % a cada tubo.
5. Centrifugar a 3,500 r.p.m. el tiempo previamente establecido para la lectura
directa.
6. Retirar los tubos, proceder a leer y anotar sus resultados.
COMPROBACIÓN DEL Rh (Variante Du)
Una aparente reacción negativa en la placa o en el tubo que contiene

el Anti “D”, no nos garantiza que los hematíes no posean antígeno D,
podríamos estar frente a una muestra que contenga un “D débil” o un
“D Parcial” y necesariamente se deberá comprobar la ausencia de
este Antígeno en los hematíes:
1. Para la comprobación del Rh en el tubo anterior, se deberá
adicionar un tubo que servirá de control, al cual se le agrega una
gota de la suspensión de hematíes al 5%, y una gota del propio
suero del paciente, y se le rotula como AC (autocontrol).
2. Incubar ambos tubos (D y AC) en Baño María (37ºC) 15 a 30
minutos.
3. Lavar ambos tubos cuatro (4) veces con solución salina,
decantando completamente después de cada lavado. Luego del
último, el tubo deberá ser colocado invertido sobre papel
absorbente para la total eliminación de la Solución Salina.
4. Agregar a cada tubo 2 gotas de Anti Globulina Humana, resuspender.

directa.
6. Leer y anotar los resultados.
INTERPRETACIÓN
• Una reacción negativa en ambos tubos (“D” y “AC”), nos estará demostrando
que la muestra estudiada no posee antígeno D.
• Una reacción positiva en el tubo problema y negativa en el tubo control, nos
estaría demostrando la presencia del antígeno D en la muestra, en tan poca
cantidad que no pudo ser visualizada en la prueba directa.
• Una reacción positiva en el tubo problema y positiva en el “AC” nos estaría
indicando la sensibilización de los hematíes con autoanticuerpo, invalidando la
prueba confirmatoria.
PRUEBA INVERSA:
• Marcar 2 tubos como “A1”, “B”.

• Colocar en cada tubo 2 gotas del suero o plasma proveniente del paciente
problema.
• Agregar a cada tubo correspondiente una gota de Glóbulos A1, Glóbulos B.
• Centrifugar los tubos a 3,500 r.p.m. el tiempo previamente establecido para la
lectura directa.
• Leer hemólisis o aglutinación en los tubos, graduando en cruces.
Plantilla para anotar sus resultados:
P. GLOBULAR P. INVERSA
Muestra Resultado
ANTI A ANTI B ANTI D Cel A1 Cel B
LECTINA Anti A1
• Rotular dos tubos como A1 y A2

• Agregar una gota de Células al 5% según como corresponda.
• Adicionar una gota de Lectina Dolichos biflorus a cada tubo.
• Centrifugar a 3,500 r.p.m. el tiempo previamente establecido
para la lectura directa.
• Leer. La aparición de grumos indicará una reacción positiva,
es decir GR A1.

VERIFICACIÓN DE SUSTANCIA H
• Rotular 3 tubos como A1, A2 y uno como O

• Agregar a cada uno 1 gota de las respectivas células al 5%.
• Adicionar 1 gota de la Lectina Ulex europaeus a cada uno
de los tubos.
• Incubar a To Ambiente 5 minutos
• Centrifugar a 3,500 r.p.m. el tiempo previamente establecido
• Leer. La aparición de grumos indicará una reacción positiva,
es decir presencia de sustancia H.
• Comprobar la diferente intensidad de reacción entre los 3
tubos.
CUESTIONARIO
1.- ¿Cuál es el fin de la determinación inversa del grupo sanguíneo?

2.- Establezca ventajas y desventajas de la determinación de grupos sanguíneos
en placa y en tubo.
3.- ¿Cuál es la importancia de llegar hasta la fase de Antiglobulina humana en la
determinación del factor Rh?
4.- ¿Cuál es la importancia de usar el autocontrol?
5.- ¿Cuál es el origen de los anticuerpos usados en cada uno de los reactivos
usados en la práctica?
6.- Explique y/o esquematice la interacción de las lectinas y sus sitios blancos.

PRACTICA # 5
FENOTIPIFICACIÓN DE OTROS GRUPOS SANGUÍNEOS
• Identificar el fenotipo de los diferentes

grupos sanguíneos, además del ABO y
el Rh
• Aprender a diferenciar el procedimiento
entre un Reactivo monoclonal y un
Suero de origen humano.
• Entrenamiento en procedimientos de
Fenotipificación que lleguen hasta la
fase de Antiglobulina Humana.
• Identificar el fenotipo de los glóbulos
rojos de los estudiantes voluntarios.
Muestras
Cada grupo de trabajo, contará con dos variedades de muestras de sangre:
• El primero, lo conformarán las muestras provenientes de cada uno de los
miembros del grupo.
• El segundo, conformado por las muestras problemas proporcionadas por la
cátedra para la práctica.
MATERIAL Y EQUIPO
✓ Baño María a 37 oC
✓ Tubos con anticoagulante (EDTA)
✓ Jeringas descartables de 3cc.
✓ Agujas 20 x 1, descartables
✓ Tubos de vidrio, de 12 x 75
✓ Pipetas Pasteur, chupón de goma
✓ Solución Salina Fisiológica
✓ Piseta de plástico
✓ Ligadura de jebe, algodón, alcohol al 70%.
✓ Baquetas de vidrio.
✓ Reactivo anti C, anti E, anti c, anti e, de origen humano y monoclonal
✓ Sueros anti K, k, Jka, Jkb, Fya, Fyb, M, N, S, s, Dia, entre otros.
✓ Antiglobulina Humana (Reactivo de Coombs)
✓ Papel parafinado (Parafilm)

PROCEDIMIENTO
1. A partir de las muestras problema, se procederá a obtener suspensiones de

trabajo uniformes al 5%, tal como se indicó en la primera práctica.
2. Rotular tubos con el nombre o número de la muestra y además rotular con el
símbolo del antígeno a identificar.
3. Identificar en el reactivo, la procedencia del mismo. Si este es monoclonal o es
de origen humano.
Procedimiento con reactivos monoclonales:
directa.
4. Retirar los tubos, y proceder a leer, anotar sus resultados.
Procedimiento con reactivos en los que se usa fase de Coombs:
3. Agregar dos gotas de albumina bovina al 22%.
4. Agitar e incubar en Baño María a 37o C por 15 a 30 minutos

5. Lavar 3 veces con SSF, luego de la última lavada decantar sobre papel
absorbente.
6. Agregar dos gotas de Antiglobulina Humana (AGH)
directa.
8. Retirar los tubos, y proceder a leer, anotar sus resultados.
INTERPRETACIÓN
• Una reacción positiva nos indicará presencia del antígeno correspondiente al

antisuero, una reacción negativa indicaría ausencia del antígeno.
• En sistemas que comparten alelos, es frecuente hallar el alelo “a”, el “b” o los
dos (heterocigotos), tener cuidado con fenotipos que arrojen negativo para
ambos alelos, podría indicarnos alguna deficiencia en el proceso.
CUESTIONARIO
1. ¿Qué utilidad tiene conocer el fenotipo del glóbulo rojo?

2. ¿Porque algunos antisueros necesitan llegar hasta la fase de Coombs y otros
no?
3. ¿En qué casos se puede presentar ausencia de ambos alelos?
4. ¿Por qué algunas presentaciones comerciales no incluyen antígeno Dia?
5. ¿se debería fenotipificar a todos los donantes o pacientes?

PRÁCTICA # 6
PRUEBA DE ANTIGLOBULINA DIRECTA

(TEST DE COOMBS DIRECTO)
CASO CLÍNICO DE LABORATORIO: Usted está laborando en el Banco de Sangre
del Hospital de Yanahuara, y recibe la siguiente solicitud, acompañada de un tubo
con muestra de sangre anticoagulada con EDTA:
HOSPITAL DE YANAHUARA
Servicio de Inmunohematología
Paciente: Julián Domínguez
No de H.C. 230806
Servicio: Hematología
Examen solicitado: TEST DE COOMBS DIRECTO
Justificación: paciente varón que cursa con anemia sintomática, se necesita

corroborar/descartar presunción diagnóstica
Arequipa, 9 de Agosto del 2019
…………………………..
Dr. Guerrero Farfán
C.M.P. 43210
FUNDAMENTO
La Prueba de Antiglobulina Directa (PAD,o Test de Coombs Directo), prueba muy
útil en el estudio de las Anemias Hemolíticas de tipo Inmune (auto y/o aloinmune);
tiene la finalidad de evidenciar la presencia de hematíes sensibilizados con
inmunoglobulinas o fracciones de complemento unidos a su membrana; para este
fin usa el reactivo de Anti-Globulina Humana policlonal que contiene: anti Ig G y
anti C3d; y la Anti-Globulina Humana monoespecífico el cual puede contener
anti-IgG o anti- IGA o anti-IgM o anti-C3co anti-C3d.
El test de Coombs directo es útil en las siguientes situaciones:

➢ Investigación de reacciones transfusionales.
➢ Diagnóstico de Enfermedad Hemolítica del recién nacido.
➢ Diagnóstico de anemias hemolíticas autoinmunes e inducidas por
medicamentos.
MATERIALES
✓ Suero de Coombs (poliespecífico o monoespecífico, IgG y

monoespecífico C3d).
✓ Muestra de sangre problema (rotulada como COOMBS
DIRECTO)
✓ Tubos de 10 x 75
✓ Pipetas Pasteur.
✓ Solución Salina 0.85%.
✓ Gradilla.
✓ Centrífuga.
PROCEDIMIENTO
1. A partir de la muestra problema obtener una suspensión al 5%

2. Colocar una gota de hematíes al 5% en un tubo rotulado.
3. Lavar cuatro veces con solución salina 0.85% y decantar la
solución salina después del último lavado.
4. Agregar 2 gotas de Antiglobulina Humana (Coombs)
Poliespecífica
5. Centrifugar a 3 500 r.p.m. el tiempo previamente establecido
6. Leer y Anotar sus resultados.
LECTURA E INTERPRETACIÓN
Una prueba de Coombs directa negativa se demuestra por la

ausencia de aglutinación; eliminando de esta manera la posibilidad
de hematíes sensibilizados por cualquiera de los mecanismos arriba
descritos. Se reporta como prueba de Coombs directa negativa
(Coombs D negativo).
La prueba de Coombs directa positivo se demuestra por la presencia

de aglutinación en la lectura final de la prueba la cual debe ser
reportada en cruces.
El reporte debe especificar test de Coombs directo positivo (Coombs
D positivo).
COOMBS DIRECTO MONOESPECÍFICO (Tubo)
Un resultado POSITIVO, indica la presencia de Inmunoglobulina IgG, o C3d o de

ambas, siendo necesaria la subsiguiente elucidación de la especificidad de la
prueba, para lo cual se repite por duplicado todo el procedimiento anterior hasta
que en el paso 4 se agrega a un tubo Antiglobulina IgG y al segundo tubo Globulina
anti C3d
Tubo 1 Tubo 2
GR al 5% 1 gota 1 gota
Anti IgG 2 gotas
Anti C3d 2 gota
Centrifugar a 3500 r.p.m por 15 seg
Lectura
Interpretación
TUBO
TARJETA
TARJETA

Fig 4. Indirect Antiglobulin Test

A. Positive result = Antibodies present in the plasma attach to specific antigen on the red cell. The antihuman globulin serum attaches
to the antibodies on the red blood cells and produced a bridging effect. Agglutination is the positive result.
B. Negative result = Antibodies in plasma are not specific for antigens on red cells. No antibodies attach to cells. The antihuman globulin
serum has no antibodies to bridge.
“IMMUNOHEMATOLOGY FOR MEDICAL LABORATORY TECHNICIANS” Cap 2 Reagents and Methods Used for
Inmunohematology Testing.. Pag 42
TEORIA DE LOS COMPLEJOS INMUNES
Fig 5. The “Inmune complex” theory. Drug and antibodies from inmune complexes. Imnune complexes bind nonspecifically to RBCs and
Manual de complement.
activate Prácticas 2019 RBCs are destroyed intravasculary (via complement mediated hemolysis) or extravascularly (via macrophages).
IMMUNOHEMATOLOGY PRINCIPLES & PRACTICE. Cap Autoimmune Hemolytic Anemias And Drug-Induced Inmmune Hemolytic Anemia. Pag. 309
PRACTICA #7
PRUEBA DE COMPATIBILIDAD
CASO CLINICO
Usted recibe la siguiente solicitud acompañada de una muestra de sangre

anticoagulada con EDTA:
Hospital EsSalud Paciente: Yarihuaman Mendoza Elizabeth

No de H.C. 240906
Departamento de Patología Clínica Servicio: Gastroenterología
SOLICITUD DE COMPONENTES SANGUINEOS
Componente solicitado: Paquete Globular
Cantidad: 3 unidades
Grupo Sanguíneo: O Rh positivo
Hematocrito/Hb: 18%
Motivo/Justificación: Hemorragia Digestiva Alta.
Observaciones: Paciente mujer de 57 años
Se solicita, realizar pruebas de Compatibilidad para su transfusión
Arequipa, 19 de Septiembre del 2019
………………………………
Dr. Advíncula Soto
C.M.P. 43210

El personal de atención del Banco de Sangre recepciona la solicitud y le indica al

personal del piso solicitante que regrese dentro de 60 minutos para recoger los
componentes solicitados.
Es un conjunto de procedimientos, verificaciones, pruebas y comprobaciones pre-
transfusionales que tienen el objetivo de asegurar que los eritrocitos a transfundir
a un paciente tengan un periodo de sobrevida aceptable y que no haya una
destrucción significativa de los propios hematíes del receptor.
Para llevar a cabo este objetivo la prueba de compatibilidad comprende:
➢ Tipificación ABO y Rh del donante y del receptor.
➢ Prueba de compatibilidad.
PRUEBA CRUZADA MAYOR

La prueba cruzada mayor consiste en el enfrentamiento in vitro de glóbulos rojos
del donante frente al suero o plasma del paciente receptor, manifestando su
compatibilidad cuando no hay indicios de aglutinación y/o hemólisis.
La prueba de compatibilidad tiene la finalidad de:
➢ Verificar finalmente la compatibilidad ABO entre el donante y receptor.
➢ Demostrar la presencia de anticuerpos de significación clínica.
MATERIALES
✓ Gradilla.
✓ Tubos de 12x75.
✓ Solución salina 0.85%.
✓ Centrífuga.
✓ Lámpara de luz intensa con magnificador.
✓ Albúmina 22%.
✓ Baño María.
✓ Antiglobulina humana AHG. Poliespecífica
✓ Muestra de la paciente Yarihuaman Mendoza Elizabeth, consistente en un tubo
con sus glóbulos rojos y otro tubo con su plasma.

✓ Tubos con muestras de 3 bolsas de sangre correspondientes a las unidades 1;

2 y 3 rotulados supuestamente como O Rh Positivos
PROCEDIMIENTO
Fase I
1. Comprobación de grupos sanguíneos, del receptor como de las unidades;

puede ser por el método en placa o en tubo.
Fase II
2. Preparar suspensiones al 5% en solución salina partir de cada uno de las 3
unidades a ser compatibilizadas (lavados previamente por lo menos dos
veces para eliminar el anticoagulante).
3. Rotular tres tubos 12 x 75 con el nombre del receptor y el número de unidad
de sangre a compatibilizar, añadir 1 gota de la respectiva suspensión de
hematíes al 5 %
4. Añadir 2 gotas de suero del receptor.
5. Centrifugar a 3500 r.p.m. el tiempo previamente establecido para la lectura
directa.
6. Observar el sobrenadante para observar la presencia o no de hemólisis.
Resuspender gentilmente el botón de hematíes bajo la lámpara y examinar
inmediatamente buscando la presencia de aglutinación. Anotar los
resultados.
Fase III
7. Adicionar a cada tubo dos gotas de albúmina al 22%.
8. Centrifugar a 3500 r.p.m. el tiempo previamente establecido para la lectura
directa.
9. Incubar el tubo a 37°C por 15 minutos.
10. Centrifugar a 3500 rpm el tiempo previamente establecido para la lectura
directa.
11. Repetir el paso 6.
Fase IV
12. Lavar las suspensiones 3 veces con solución salina 0.85% y decantarla al
terminar el lavado.
13. Añadir dos gotas del reactivo Antiglobulina humana poli especifica. Mezclar.
14. Centrifugar a 3500 rpm el tiempo previamente establecido para la lectura
directa.
15. Leer desprendiendo suavemente el botón y anotar los resultados.
LECTURA
La presencia de hemólisis o aglutinación en cualquiera de las fases de la prueba
cruzada evidencia incompatibilidad entre el donante y receptor; debiendo tomar en
cuenta las características del anticuerpo (frío o caliente).
El reporte debe especificar unidad Incompatible. Siendo importante especificar
la reacción en cruces.
INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
Un resultado negativo en la prueba de compatibilidad, es decir en ausencia de
aglutinación significaría una Prueba Compatible.
La unidad de sangre del donante es compatible con la del receptor por tanto
asegura una sobrevida de los hematíes óptima para el receptor.
En caso contrario, un resultado positivo, es decir, en presencia de

aglutinación significaría una Prueba Incompatible.
Posiblemente se puede dar por las siguientes razones:
1. Fenotipaje ABO incorrecta.

2. Presencia de aloanticuerpos del receptor contra los glóbulos rojos del donante.
3. Presencia de autoanticuerpos.
4. Anormalidades en el suero del paciente
5. Contaminantes del sistema.
6. Errores técnicos.

Fig 6. Check the compatibility on the pack against the patient’s wristband (reproduced with
permission from McClelland 2007)
CUESTIONARIO
1.- ¿Qué situaciones urgentes existen para la prueba de compatibilidad?
2.- ¿Qué factores podrían alterar la prueba de compatibilidad, originando resultados

falsamente positivos o falsamente negativos?

PRÁCTICA #8
PRUEBA DE ANTIGLOBULINA INDIRECTA

INVESTIGACIÓN DE ANTICUERPOS
TEST DE COOMBS INDIRECTO
Ud. se encuentra rotando en la sección de INMUNOHEMATOLOIGÍA del Banco

de Sangre del Hospital Almanzor Aguinaga Asenjo de la ciudad de Chiclayo y
recibe:
• Una muestra de sangre con anticoagulante (la cual llamaremos MUESTRA
“A”) y la siguiente solicitud
Paciente: Juana Pérez M

Hospital EsSalud
No de H.C. 240906
Departamento de Patología Clínica
Servicio: Ginecología
EXAMEN SOLICITADO: Test de Antiglobulina Indirecta
Justificación: Gestante de 16 semanas, de grupo sanguíneo O Rh NEGATIVO,

segundo embarazo, no perdidas. Primer Bebé eutócico, nacido hace 5 años de
grupo sanguíneo O Rh positivo, no recibió RHOGAM.
Lima,11 de Septiembre del 2018
………………………………
Dr. Advíncula Soto
C.M.P. 43210
Por otro lado, resolver el caso de la paciente Yarihuaman Mendoza Elizabeth, que
llamaremos MUESTRA “B” para quién el día de ayer solicitaron preparar 3
unidades de sangre por Hemoglobina baja debido a una Hemorragia digestiva, de
las cuales 2 resultaron incompatibles, aun habiéndose comprobado que tanto el
paciente como las 3 unidades eran de grupo O Rh positivo (pruebas de
compatibilidad de la semana pasada).

FUNDAMENTO
La Prueba de Antiglobulina Indirecta

(PAI), o test de Coombs Indirecto
consiste en la investigación de la
presencia de Aloanticuerpos en
suero o plasma de un paciente,
mediante la demostración de la
sensibilización in vitro de eritrocitos
de fenotipo conocido.
El suero o plasma a investigar se
enfrenta con un panel de células
procedentes de donantes seleccionados con fenotipo conocido, diferentes entre sí,
que presentan en combinación, toda la variedad de antígenos sanguíneos (Screen
Cells: células detectoras, “células pantalla”), de tal manera que puedan ayudar a
diferenciar la especificidad del anticuerpo implicado; una reacción de aglutinación
y/o hemólisis evidenciaría la presencia de aloanticuerpos (anticuerpos irregulares)
en la muestra investigada, requiriendo la realización de un posterior estudio de
identificación de la especificidad de los aloanticuerpos y de esta manera poder
brindar una terapia transfusional adecuada para cada caso.
MATERIALES
✓ Gradilla.
✓ Tubos de 12x75.
✓ Solución salina 0.85%.
✓ Centrífuga de serología.
✓ Lámpara de luz intensa con magnificador.
✓ Albúmina 22%.
✓ Baño María.
✓ Antiglobulina humana AHG.
✓ Células detectoras I y II (células pantalla)
✓ Células identificadoras (células panel)
✓ Plasma y glóbulos rojos dela paciente Juanita Sánchez: MUESTRA A.
✓ Plasma y glóbulos rojos de la paciente Yarihuaman Mendoza MUESTRA B

PROCEDIMIENTO
(Realizar tanto para la muestra A como para la B)
1. Se identifica los tubos de acuerdo al paciente o muestra

2. Rotular tres tubos de 12 x 75mm como “I”, “II”, “III” y AC (autocontrol).
3. Dispensar en cada tubo 2 gotas del suero a investigar.
4. Dispensar 1 gota de células detectoras (pantalla) según como corresponda
en cada tubo y una gota de una suspensión de glóbulos rojos al 5% del
receptor al tubo del autocontrol.
5. Agitar los tubos y centrifugar a 3500 rpm.el tiempo previamente establecido
para la lectura directa (CI)
6. Leer y anotar en cruces la reacción en cartillas que especifique cada fase.
7. Reposar a temperatura ambiente por 15 minutos. Centrifugar y leer (TA).
8. Dispensar dos gotas de albúmina bovina 22%. Centrifugar y leer (ALB).
9. Incubar 15 a 37º C todos los tubos
10. Centrifugar. Leer hemólisis o aglutinación en cada tubo anotando los
resultados (37oC).
11. Lavar los tubos cuatro (4) veces con solución salina fisiológica. Después del
último lavado decantar completamente la solución salina fisiológica.
12. Dispensar dos gotas de reactivo de Antiglobulina humana (Coombs)
13. Mezclar. Centrifugar. Leer aglutinación o hemólisis en cada tubo. Anotar los
resultados (AGH).
LECTURA
La presencia de hemólisis o de aglutinación evidencia la presencia de
Aloanticuerpos (anticuerpos irregulares). La positividad de la prueba de Coombs
indirecta debe ser reportada en cruces para cada fase, tomando en cuenta las
características de reacción del anticuerpo, pudiendo identificar, un anticuerpo frío o
un caliente.
C.I. T. Amb Alb 37oC AGH CCC
Células I
Células II
Células III
Autocontrol
INTERPRETACIÓN
• Una reacción positiva indica que un anticuerpo está presente en el suero en

estudio.
• Si no hay autoanticuerpo y el anticuerpo está dirigido hacia un determinante
antigénico ausente sobre sus propios hematíes, este pudo producirse como
resultado de una transfusión previa o embarazo.
• Un anticuerpo que reacciona con todas las células de prueba incluyendo las
propias células puede estar presente en una anemia hemolítica adquirida.
• Un resultado positivo de Coombs Indirecto nos indica la detección de un
Aloanticuerpos, el paso siguiente sería identificar este anticuerpo.
Fig. 7. POTENCIAL ZETA “IMMUNOHEMATOLOGY FOR MEDICAL LABORATORY

TECHNICIANS”. Cap 1 Basic Immunology. Pag 19

PREPARACIÓN Y USO DE CÉLULAS CONTROL DE COOMBS
El reactivo de Células Control de Coombs (CCC) es una suspensión de hematíes

sensibilizados in vitro con IgG (anti D) en concentración sub-aglutinante, es decir
que el suero anti D ha sido diluido de tal manera que no llegan a aglutinar
directamente. Estas células son usadas para confirmar la validez de las pruebas en
las cuales se ha utilizado Antiglobulina humana.
Después de una reacción negativa en una prueba de Antiglobulina, adicione una
gota del reactivo de Células Control de Coombs al mismo tubo; si la prueba inicial
fue realizada adecuadamente el suero de Coombs no debe inactivarse o
neutralizarse; y por consiguiente el resultado de esta prueba control será
obligatoriamente positivo luego de una segunda centrifugación.
Las reacciones negativas después de la adición del control de Coombs
invalidan los resultados de la prueba inicial, puesto que de ser así evidencia que no
ha habido AGH libre suficiente para aglutinar las CCC.
Preparación de Células de Control de Coombs:
1. Seleccione un volumen (1 mL) de G.R. O Rh positivo, lave 5 veces con SSF.

2. Diluya el paquete de G.R. al ½ (medio) con SSF.
3. Prepare una dilución al 1/12 de anti-D en SSF.
4. Mezclar un volumen de G.R. con un volumen de anti-D diluido.
5. Incube a 37°C por 60 min. Mezclando suavemente cada 15’.
6. Lave 4 veces con SSF y diluya al 5%.
Nota: Las Células Control de Coombs deberá ser probado antes de su uso,
como parte del control de calidad.

TUBOS POSITIVO NEGATIVO
Células Control Coombs 1 gota 1 gota
Antiglobulina 2 gotas --
SSF -- 2 gotas
Centrifugar el tiempo y velocidad establecidos para Coombs
Reactividad 2 – 3 cruces 0
TÉCNICA DE CONTROL EN LAS PRUEBAS
1. Agregue 1 gota de Células Control de Coombs a cada tubo que presente

reacción negativa después de la adición del suero de Coombs.
2. Centrifugar con el tiempo y velocidad establecidos para Coombs
3. Valorar los resultados en cruces
INTERPRETACIÓN
• Reacciones de 2 a 3 cruces deben ser las esperadas

• Reacción negativa invalida la prueba; esto indicaría que la prueba no se
realizó adecuadamente y hubo neutralización del Anticuerpo anti IgG

Fig. 8. ANTIGRAM DE ANTIGENOS DE CELULAS DETECTORAS (PANTALLA)

CELULAS “PANTALLA”
I II III
Hematíes
Fenotipo ≠ ≠
Fenotipo
Célula I
Rh Kell Duffy Kidd P MN Lutheran

D C c E E K k Fya Fyb Jka Jkb P1 M N S s Lua Lub
I + + + 0 + 0 + + 0 0 + + + + + 0 0 +
De igual manera se deberá tener en cuenta para la representación esquemática de

los fenotipos de las células II y III de acuerdo a la descripción del fabricante.
INTERACCIÓN Ag-Ac
I/II/III Anticuerpos
Antígenos antieritrocitarios
IgG/IgM
Fya (+)
Hematíe
Anti Fy a sensibilizado
Jka (+)
Hematíe
a sensibilizado
Anti Jk
Lea (-)
Hematíe no
a sensibilizado
Anti Le
IgG
La aglutinación del
hematíe por tratarse de
Hematíe una IgG se podrá
sensibilizado evidenciar luego de la
utilización del reactivo de
Coombs
IgG
En las aglutinaciones de tipo IgM la aglutinación se evidencia a simple vista y no

hay la necesidad de usar la Antiglobulina humana.
Sea tubo o tarjeta la metodología empleada se deberá interpretar las aglutinaciones

de la siguiente manera.

INTERPRETACION DE LAS
AGLUTINACIONES
II
TUBO TARJETA
Para ambas metodologías la lectura de las células pantalla es:
Cuadro 1
Antiglobulina Indirecta I II III
O 0 0 1+
Células pantalla
Ejemplo 1: Si queremos determinar los posibles anticuerpos implicados en la

aglutinación de la prueba de Antiglobulina indirecta realizada (cuadro 1),
necesitamos descartar aquellos antígenos que no intervienen en las reacciones
valiéndonos del fenotipo de las células proporcionadas por el fabricante.
I II III
D C c E e K k Fya Fyb Jka Jkb P1 M N S s Lua Lub Dia

I + + + 0 + 0 + + 0 0 + + + + + 0 0 + 0
II + + 0 + + + + 0 + + 0 0 0 + 0 + + + 0
III + 0 + + 0 0 + + 0 + + 0 + 0 + + 0 + +
1.- Error frecuente:
Considerar inicialmente las reacciones positivas.

✓ Este método solo sugiere la presencia de un solo anticuerpos: anti-Dia, esto es

siguiendo el patrón reflejado en las reacciones que muestra el cuadro 1.
2.- ¿Cómo empezar?
✓ Considerar primero las reacciones negativas y el efecto de dosis que puedan

tener algunas células respecto a determinados antígenos.
3.- ¿Efecto de dosis?
Sucede cuando un individuo es homocigoto para el gen que codifica al antígeno.

Los glóbulos rojos que son de individuos heterocigotos, para el gen pueden
expresar menos antígenos y por lo tanto pueden reaccionar más débilmente o no
reaccionar con el anticuerpo débil correspondiente. Los Aloanticuerpos varían en
su tendencia a mostrar efecto de dosis. Muchos anticuerpos dirigidos contra
antígenos de los grupos sanguíneos Rh, Duffy, MNS y Kidd muestran este efecto.
E e e
Célula heterocigota Célula homocigota
La reacción entre Ag-Ab podría ser menor no Mayor cantidad de sitios antigénicos
evidenciándose reacción alguna a pesar de que favorecerían la reacción Ag-Ab
presentar el anticuerpo especifico dirigido
contra dicho antígeno
Teniendo en cuenta estos criterios obtendríamos las siguientes posibilidades:
✓ E, c, M y Dia

PRÁCTICA # 9
IDENTIFICACIÓN DE ALOANTICUERPOS
En la práctica anterior se llegó a detectar la presencia de Aloanticuerpos,

necesitamos ahora identificar estos anticuerpos. Para lo cual enfrentaremos cada
uno de las muestras de plasma a un panel con mayor cantidad de células las cuales
de igual manera que las células detectoras, son de fenotipo conocido.
El esquema de trabajo es el mismo que el del Coombs indirecto.
PROCEDIMIENTO
(Realizar tanto para la muestra A como para la B)
1. Se identifica los tubos de acuerdo al paciente o muestra

2. Rotular doce tubos de 12 x 75 mm en forma correlativa.
3. Dispensar en cada tubo 2 gotas del suero a investigar.
4. Dispensar 1 gota de células identificadoras según como corresponda en cada
tubo.

5. Agitar los tubos y centrifugar a 3500 rpm. el tiempo previamente establecido

para la lectura directa (CI)
6. Leer y anotar en cruces la reacción en cartillas que especifique cada fase.
7. Reposar a temperatura ambiente por 15 minutos. Centrifugar y leer (TA).
8. Dispensar dos gotas de albúmina bovina 22%. Centrifugar y leer (ALB).
9. Incubar 15 a 37º C todos los tubos
10. Centrifugar. Leer hemólisis o aglutinación en cada tubo anotando los
resultados (37oC).
11. Lavar las células de todos los tubos cuatro (4) veces con solución salina
fisiológica. Después del último lavado decantar completamente la S.S.F.
12. Dispensar dos gotas de reactivo de Antiglobulina humana (Coombs)
13. Mezclar. Centrifugar. Leer aglutinación o hemólisis en cada tubo. Anotar los
resultados (AGH).
LECTURA
La presencia de hemólisis o de aglutinación evidencia la presencia de

Aloanticuerpos (anticuerpos irregulares). La positividad de la prueba de Coombs
indirecta debe ser reportada en cruces para cada fase, tomando en cuenta las
características de reacción del anticuerpo, pudiendo identificar, un anticuerpo frío o
un caliente.
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
C.I.
To amb
Albúmina
37o C
Coombs
A continuación, leer los resultados con la tabla de antígenos del kit de células
pantalla e identificadoras usadas en la práctica.

Verificar que el
número de lote del
antigram coincida
con el lote que
figura en el
empaque de células
Fig 10. Antigen typing of the patient’s cells is performed and the results ate recorded on the panel sheet. The specific antigen typing result is recorded in
the blank space directly below the column of antigen typing results for the panel cells. “IMMUNOHEMATOLOGY FOR MEDICAL LABORATORY
TECHNICIANS”
Manual Cap 8 Antibody Screening and Antibody Identification. Pag 155
de Prácticas 2019
Fig. 11. PANEL DE CELULAS FICINADAS

TALLER SECO
TABLA DE ANTÍGENOS DE LAS CELULAS DETECTORAS E

IDENTIFICADORAS
PANOSCREEN
Lote: 20973 Fecha Vencimiento: 22/09/2017
D C c E e K k Fya Fyb Jka Jkb Lea Leb P1 M N S s

1 + + 0 0 + + + + + + 0 0 + + + + + +
2 + 0 + + 0 0 + 0 + + + + 0 0 + 0 + +
AC
PANOCELL
Lote: 20968 Fecha Vencimiento: 22/09/2017

1 + + 0 + 0 + + + 0 + 0 0 + + 0 + 0 +
2 + + 0 0 + 0 + + 0 0 + + 0 + + 0 + +
3 + 0 + + 0 0 + + + + + 0 + 0 + 0 + 0
4 + 0 + 0 + 0 + 0 0 + 0 0 + + 0 + 0 0
5 0 + + 0 + 0 + 0 + 0 + + 0 + + 0 0 +
6 0 0 + + + 0 + 0 + 0 + 0 + 0 0 + 0 +
7 0 0 + 0 + + + + 0 + + 0 + + + + 0 +
8 0 0 + 0 + 0 + + 0 + 0 0 + + + + 0 +
9 + + 0 0 + 0 + 0 + + 0 0 + 0 + + 0 +
10 + + 0 0 + + 0 + + + 0 0 + + + 0 + +
11 + 0 + + 0 0 + + + + 0 0 + + + 0 + +
12 0 0 + + + 0 + 0 + 0 + 0 + + 0 + 0 +
13 0 0 + 0 + 0 + + 0 + + + 0 0 0 + 0 +
14 0 0 + 0 + + + 0 0 + + + 0 + 0 + 0 +
15 0 0 + 0 + 0 + 0 0 + 0 + 0 0 + 0 + 0
16 0 + + + + 0 + 0 + + + 0 + 0 + + 0 +
Redacte un informe de los resultados y sus conclusiones, además, utilizando las

mismas plantillas e identifique usted, los Aloanticuerpos de los siguientes 5 casos
En cada caso los resultados corresponden a la última fase (Coombs)

CELULAS DETECTORAS
| DETECTORAS CELULAS IDENTIFICADORAS
I II AC 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16
CASO 1 2+ 0 0 4+ 0 0 0 0 0 3+ 0 0 4+ 0 3+ 0 0 0 0
CASO 2 3+ 0 0 3+ 3+ 4+ 0 0 3+ 3+ 4+ 4+ 3+ 0 0 4+ 3+ 3+ 0
CASO 3 2+ 4+ 0 0 0 2+ 0 4+ 4+ 0 0 4+ 2+ 2+ 4+ 0 0 0 4+
CASO 4 2+ 2+ 0 0 2+ 4+ 0 0 0 0 0 0 2+ 2+ 0 0 0 4+ 0
CASO 5 0 4+ 0 0 0 4+ 4+ 3+ 4+ 4+ 4+ 0 0 3+ 4+ 4+ 4+ 4+ 3+
En cada uno indique:
1. ¿Se llega a identificar algún anticuerpo?
2. ¿Qué pruebas adicionales necesitaría realizar

PRÁCTICA #10
REALIZACIÓN DE PRUEBAS ESPECIALES
TÉCNICA DE ELUCIÓN
El principio de todas las técnicas de elución

es interferir con todas las fuerzas de enlaces
no covalentes que mantienen unidos los
complejos antígeno-anticuerpo sobre la
superficie de los eritrocitos, obteniendo de
esta manera hematíes libres de anticuerpos
y/o suspensión de los anticuerpos que se
encontraban sensibilizando a los hematíes.
La membrana celular puede ser lesionada

físicamente por calor, ultrasonido,
congelamiento–descongelamiento,
detergentes o solventes orgánicos; o las
fuerzas de unión de los complejos antígeno
– anticuerpo pueden ser interrumpidas por
alteraciones en el pH o concentración de
sales.
Para la práctica vamos a emplear la Técnica

de Elución por calentamiento (de
Landsteiner y Miller). Este método ofrece
buenos resultados para eluir anticuerpos
anti - A y anti – B (de tipo Ig M), pero no es
recomendable para otros anticuerpos (alo y
auto anticuerpos de tipo IgG). Se aplica por
ejemplo en la EHRN por incompatibilidad ABO.
PROCEDIMIENTO
✓ Lavar el volumen de células en un exceso de salina por 6 veces. Después del

último lavado, conservar una alícuota de salina para investigar anticuerpos
libres. Si persisten, significa que los lavados no han sido suficientes y deben
practicarse lavados adicionales hasta que el residuo de salina no presente
anticuerpos.
✓ Empaquetar bien las células y agregarle igual volumen de albúmina bovina al

6%, la cual se prepara agregando 2 ml de albúmina al 30% para 8 ml de salina,
o 3 ml de albúmina al 22% para 8 ml de salina. Mezclar bien.

✓ Llevar al Baño María a 56º C durante 10

min. Mezclando periódicamente.
Centrifugar a altas velocidades por 5 min.
✓ Separar el sobrenadante rosado en un tubo

aparte e identificar el anticuerpo eluído.
ELUCIÓN
ELUCION
HEMATÍE HEMATÍE LIBRE ANTICUERPOS

SENSIBILIZADO DE ANTICUERPOS Suspendidos en el
CON ANTICUERPOS ELUATO

ANEXOS

A.1 MÉTODOS POTENCIADORES
ALBUMINA
Aunque la albumina se utilizó por muchos años como medio

potenciador, es probable que su participación en la promoción
de la captación de anticuerpos (estadio 1) sea escasa. Gran
parte del efecto atribuido a la albumina puede deberse a su
empleo en un buffer de baja potencia iónica.
La albumina podría influir en el segundo estadio de la
aglutinación, por reducción de la carga negativa neta de los
eritrocitos o alteración de la tensión superficial intercelular,
favoreciendo así la aglutinación de las células recubiertas de
anticuerpos. Se dispone de albumina sérica bovina en
solución al 22% o 33% y polimerizada.
ENZIMAS
Las enzimas proteolíticas más utilizadas en los laboratorios

de Inmunohematología son la bromelina, la ficina, la papaína
y la tripsina. Aunque estas enzimas potencian la aglutinación
mediada por algunos anticuerpos, desnaturalizan ciertos
antígenos eritrocitarios, en especial los M, N, S, Fya y Fyb.
Las enzimas proteolíticas disminuyen la carga superficial de
los glóbulos rojos por clivaje de las moléculas de ácido
siálico de las cadenas polisacáridas. El ácido siálico
contribuye mucho a la carga superficial negativa y a la
separación de las células suspendidas en un medio iónico.
Las enzimas descienden la potencial zeta de las células y,
además, las tornan menos hidrofílicas por reducción del
rechazo polar. El clivaje de las proteínas también incrementa
la tensión superficial entre las células, predisponiéndolas a
la aglutinación. El tratamiento enzimático lleva a la formación de espículas en los
glóbulos rojos y aumenta así el número potencial de puntos de contacto.
Todos los mecanismos que disminuyen la carga pueden potenciar la aglutinación,
y los eritrocitos pretratados con enzimas proteolíticas a menudo exhiben mayor
aglutinación en presencia de moléculas de IgG. Sin embargo, los pretratados con
neuroaminidasa no exhiben aumento de la aglutinación comparable. Esta diferencia
puede deberse a la actividad específica de las enzimas en los glóbulos rojos. Las
proteasas como la papaína, eliminan polipéptidos, mientras que las
neuroaminidasas son más específicas para el ácido siálico. Esta preferencia podría
afectar el acceso de los anticuerpos a los sitios antigénicos y la capacidad de ciertos
antígenos para agruparse en la membrana.

Fig. 12. INTERRUPCION DEL AC. SIALICO Y OTRAS ESTRUCTURAS EN LA INTERACCION

Ag-Ab
Fig. 13. ADICION DE ENZIMAS
Fig. 14. CLIVAJE Y DESTRUCCION DE ESTRUCTURAS QUE IMPIDEN LA

INTERACCION (Ac. Siálico/Ag sensibles a enzimas y otros)

Fig. 15. INCREMENTO DE LA INTERACCION

Ag-Ab
NOTA: Los glóbulos rojos son tratados inicialmente con la enzima y posteriormente
se agrega el suero o plasma del paciente al medio de prueba para observar la
aglutinación.

POLIETILENGLICOL
El PEG es un polímero lineal hidrosoluble que

se usa como aditivo para incrementar la
captación de anticuerpos. Elimina agua,
ocupa más espacio alrededor de los
eritrocitos y concentra los anticuerpos
promoviendo su incorporación y, en muchos
casos, potenciando la reacción. El reactivo
AGH de elección en las pruebas con PEG
suele ser el anti IgG, que evita algunas
reacciones falsas con agentes
poliespecíficos. En los procedimientos con
PEG los anticuerpos IgM, en especial los
sistemas ABO y Lewis, son poco o no
reactivos. Si se emplea una concentración
demasiada alta de PEG, las proteínas podrían
precipitar; el fibrinógeno o los niveles elevados de IgG también podrían provocar
precipitación. Estos precipitados podrían interpretarse de forma errónea como
reacciones positivas. El PEG podría utilizarse con LISS y en pruebas con eluidos o
sueros. El PEG puede potenciar muchos los autoanticuerpos reactivos en caliente
y por lo tanto, podrían ser desventajosos cuando se evalúan pacientes con anemias
hemolíticas autoinmunes. No debe centrifugarse el PEG con el suero en estudio y
los glóbulos rojos, porque los agregados inespecíficos podrían no dispersarse;
después de la incubación con PEG, se lavan las células con solución salina y luego
se efectúa la prueba de Antiglobulina.

LISS Y ADITIVOS LISS
El LISS, es un reactivo capaz de reducir la

fuerza iónica (alrededor de 0,03M) en
comparación con la capacidad de la solución
salina normal (alrededor de 0.17 M), acelera
notablemente la unión de los anticuerpos con
los glóbulos rojos. Las presentaciones más
comunes de LISS incluyen glicina u otras
sustancias no iónicas para evitar lisis de
glóbulos rojos en baja fuerza iónica. Los
reactivos LISS también pueden tener
albumina. No obstante, debido a que la lisis
continúa siendo una preocupación, la
mayoría de los operadores dispensan el LISS
en el momento en que establecen las
reacciones, en vez de utilizar glóbulos rojos
suspendidos en esta solución.
El aumento del volumen de suero empleado
en la prueba acrecienta la potencia iónica del sistema LISS-aditivo, y cualquier
variación de los volúmenes séricos especificados obliga a ajustar el de LISS u
obviarla. Por este motivo el uso del LISS en las titulaciones de rutina y algunas otras
pruebas es problemático. Cuando se utiliza LISS como aditivo, es esencial cumplir
con las instrucciones del fabricante.

A.2 MICROAGLUTINACIÓN EN TARJETAS
HEMATIES
ANTICUERPOS
GEL
MATR
IZ
Durante décadas hasta hoy en día las pruebas para evidenciar la reacción entre
anticuerpos de grupos sanguíneos con sus respectivos antígenos, en el Servicio de
Medicina Transfusional, han sido realizadas en tubos de vidrio o polímeros
descartables. El límite de estas radica en la subjetividad de interpretación en el caso
de reacciones débiles, incluso en manos de profesionales expertos. Es cuando en
la década de los ´80, el Dr. Yves Lapierre desarrolla y patenta el método de
Microtipificación en Gel (ID MICROTYPING SYSTEM) el cual revolucionó el trabajo
en los laboratorios de Inmunohematología.
PRINCIPIO
Exclusión en base al tamaño de los elementos reactantes que tienen lugar en el

seno de una matriz inmunológicamente inerte. Por lo tanto:
• Los hematíes no sensibilizados, en la fase de centrifugación de la prueba,
forman un “punto” o “botón” en la base del microtubo.
• Los hematíes que hayan sido aglutinados se distribuirán a lo largo de la
columna de gel.
• Según sea la intensidad de la reacción, los hematíes podrán ocupar la parte
superior de la columna de gel o dispersarse a lo largo de la misma.

MICROTUBOS: Pieza integral de 70 milímetros de largo por 53 milímetros de alto,

denominada “tarjeta” (ID-Card).
Cámara de Reacción: Extremidad superior ancha de

4mm de diámetro, la cual permite la incubación de los
reactantes.
Columna: Larga y estrecha, la cual permite en la fase

de centrifugación un contacto prolongado de los
hematíes con el gel.
Fondo: Sirve para evidenciar la formación del botón.
TARJETA DE GEL

TIPOS DE GEL
GEL NEUTRO GEL ESPECÍFICO ANTIGLOBULINA

HUMANA
PROCEDIMIENTO
• Primero se dispensará 50uL de la suspensión de hematíes al 1% en un
ángulo de pipeteo de 45°, apuntando la pared lateral de microtubo.
• Después, manteniendo la micropipeta en posición vertical y próxima a la
boca del microtubo, se verterá 25uL de suero o plasma en estudio.
Observación: En el caso de un gel específico, no habrá la necesidad de
administrar suero o plasma.
Incubación: 15 minutos a 37°C Centrifugación: 10 minutos a 85g
Observación: Las revoluciones por minuto (rpm) van a depender del tipo de centrifuga y
cabezal que utilice, ya que la fuerza “g” se expresa en “rpm”

EQUIPO CABEZAL RPM

ID-CENTRIFUGE 6S 6 TARJETAS 1175
ID-CENTRIFUGE 12II 12 TARJETAS 1030
ID-CENTRIFUGE 24S 24 TARJETAS 910
PATRONES DE LECTURA
Reacción 4+: Los hematíes

aglutinados forman una banda sólida
en la parte superior del gel.
aglutinados comienzan a dispersarse
por la columna del gel y se concentran
en el tercio superior.
aglutinados comienzan a dispersarse
por la columna del gel y se observan
en toda su longitud.
aglutinados se dispersan por el gel y
se concentran en el tercio inferior.
Reacción Negativa: Todos los hematíes atraviesan el gel y forman un botón celular
bien definido en el fondo del microtubo.
Doble población: Se caracteriza por una banda de hematíes aglutinados en la parte superior de
la columna de gel y un botón definido en el fondo del microtubo.
Tomado de “IMMUNOHEMATOLOGY FOR MEDICAL LABORATORY

TECHNICIANS”. Cap 1 Basic Immunology. Pag. 23

A.3 DETERMINACION DE LOS GRUPOS SANGUINEOS ABO/Rh EN RECIEN

NACIDOS CON LA PRUEBA DE ANTIGLOBULINA HUMANA DIRECTA (PAD)
INTRODUCCION
Los antisueros anti-A, anti-B y anti-AB son necesarios para la determinación de los
antígenos A/B en los hematíes humanos. Al nacer los antígenos A y B no están
totalmente desarrollados, las reacciones pueden ser más débiles que con la sangre
de adultos y a menudo no pueden identificarse los subgrupos.
El plasma de los adultos contiene anticuerpos contra los antígenos A y B ausentes

en sus propios hematíes. Estos anticuerpos aparecen después de los 4 o 6 meses
de vida. Por consiguiente, el grupo inverso no se debe realizar en el recién nacido.
Por esto, está indicado confirmar la determinación del grupo sanguíneo de los
recién nacidos a los 2 o 4 años, cuando los antígenos A y B estén totalmente
desarrollados.
El antígeno D, al igual que el D débil está totalmente desarrollados al nacer. En las

madres Rh negativas es indispensable determinar el antígeno D y D débil del recién
nacido.
La realización de la prueba de antiglobulina directa (PAD) en recién nacidos es una

determinación de rutina, ya que es importante saber si los hematíes de los recién
nacidos están sensibilizados con anticuerpos maternos intra-utero.
MATERIALES
✓ Tarjeta-ID DiaClon ABO/Rh Newborns.
✓ ID-Diluent 2: LISS modificado para la suspensión de hematíes.
✓ Punteras.
✓ Micropipeta
✓ ID-Centrifuga 24S
✓ Muestra de sangre anticoagulada en tubo de EDTA
PREPARACION DE LA MUESTRA DE SANGRE
Preparar una suspensión de hematíes al 1% en ID-Diluent 2 (LISS) como sigue:

Dejar que el diluyente alcance la temperatura de ambiente antes de su utilización:
1. Pipetear 500 uL de LISS en tubo limpio

2. Agregar 5uL de concentrado de hematíes o 20 uL de sangre total; mezclar
cuidadosamente.
La suspensión de hematíes puede utilizarse inmediatamente.

PROCEDIMIENTO
No usar las tarjetas que muestran signos de desecación, burbujas en el gel, sellado
defectuoso, gotas de gel en la parte superior de los microtubos o en la superficie
interior del aluminio de sellado.
1. Identificar la ID-Tarjeta con el número o nombre de identificación del donante o

del paciente.
2. Retirar la lámina de sellado solo de los microtubos que se vaya a utilizar
manteniendo la ID-Tarjeta en posición vertical.
3. Pipetear 50uL de la suspensión de hematíes en los 6 microtubos de la tarjeta-
ID.
4. Centrifugar la tarjeta-ID durante 10 minutos en la ID-Centrifuga
5. Leer y anotar las reacciones.
INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS
A) Principio
POSITIVO: Los hematíes aglutinados forman una línea roja sobre la superficie del
gel o están repartidos en el gel.
NEGATIVO: Sedimento compacto de hematíes en el fondo del microtubo
B) Reacciones de los grupos sanguíneos ABO
Anti-A Anti-B Anti-AB Grupo Sanguíneo

+ a ++++ Negativo + a ++++ A
Negativo + a ++++ + a ++++ B
+ a ++++ + a ++++ + a ++++ AB
Negativo Negativo Negativo O
C) Reacciones para Rh D
+++ a ++++ ± a ++* Negativo

Rh D Positivo Rh D débil Positivo Rh D Negativo
*Las reacciones débiles, las trazas o ±, deben estar sujetas a una amplificación del
estudio para distinguir entre los tipos D parciales y D débiles según la categoría de
la muestra que este siendo estudiada.
Los anticuerpos anti-D fueron seleccionados para que, SI reaccionen con la
variante DVI, algunas variantes DVI pueden reaccionar muy débilmente.
Importante: el microtubo ctl debe presentar una reacción negativa. Si el ctl es

positivo, la determinación del Rh no es válida. Repetir el test.

D) Reacciones para la prueba de Antiglobulina directa
Una reacción negativa indica la ausencia de anticuerpos detectables en los

hematíes del recién nacido.
Una reacción positiva (± hasta ++++) indica que los hematíes del recién nacido
están sensibilizados (hay anticuerpos fijados sobre la membrana de superficie de
los hematíes).
Observaciones
El control negativo (ctl) debe siempre presentar una reacción negativa. Si el control
negativo es positivo, proceder de la siguiente manera:
Lavar un mínimo de 3 veces los hematíes con solución salina fisiológica antes de
preparar la suspensión de hematíes al 1%.
Si el ctl permanece todavía positivo, no se puede asegurar la interpretación de
resultados del grupo sanguíneo ABO y Rh D y será necesario ampliar el estudio.
E) Limitaciones
a) Las tarjetas-ID que muestran burbujas de aire en el gel o gotas en la parte
superior de los microtubos y/o de la lámina de sellado, deben ser centrifugadas
antes de usarlas.
b) La contaminación bacteriana o de otro tipo de los materiales empleados, puede
provocar resultados falsos positivos o falsos negativos.
c) Los restos de fibrina en la suspensión de los eritrocitos puede aprisionar algunas
células no aglutinadas, formando así una fina línea rosada sobre la superficie
del gel, mientras que después de la centrifugación la mayor parte de los
hematíes forman un sedimento compacto en el fondo del microtubo.
d) La observación estricta de los métodos y la utilización del equipo recomendado
es imprescindible. El equipo deberá ser controlado regularmente según las
normas de una “Good Labor Practise” (GLP).
e) La utilización de diluyentes distintos al ID-Diluent 2 para las suspensiones de
hematíes puede modificar los resultados.
f) Suspensiones de hematíes muy concentrados o muy diluidas pueden causar
resultados anómalos.

DETERMINACIÓN DE GRUPOS SANGUÍNEOS EN TARJETA-ID

NEWBORNS

A.4 PRUEBA DIRECTA, INDIRECTA DE ANTIGLOBULINA, IDENTIFICACIÓN

DE ANTICUERPOS Y PRUEBA CRUZADA EN TARJETAS DE GEL BIO-RAD
INTRODUCCION
Los reactivos de Antiglobulina humana (AHG) poliespecíficos se utilizan de modo habitual

para la detección e identificación de Aloanticuerpos, pruebas de compatibilidad y prueba
directa de Antiglobulina (DAT).
La función más importante del reactivo AGH poliespecífico es detectar la presencia de IgG.
La importancia del anticomplemento en el reactivo AGH es discutible, puesto que son
bastante poco frecuentes los anticuerpos que sólo son detectables por su capacidad de
fijación del complemento. Sin embargo, la actividad anti-C3d es importante para la prueba
de antiglobulina directa (PAD) en la investigación de la anemia hemolítica autoinmune
(AHAI). Un resultado positivo de la PAD indica generalmente que los eritrocitos están
recubiertos in vivo con inmunoglobulina, complemento, o ambos.
Los microtubos de la tarjeta ID-Card ˝LISS/Coombs˝ contienen AGH poliespecífica para su

uso en detección de identificación de anticuerpos, pruebas cruzadas y prueba PAD. Para la
prueba de Antiglobulina indirecta (PAI) se hacen innecesarios procedimientos laboriosos de
lavado, ya que la suspensión de eritrocitos se añade al microtubo antes del plasma/suero, con
lo que crea una barrera sobre la suspensión de gel e impide la neutralización del AHG por
las proteínas IgG del suero.
La Antiglobulina humana anti-lgG incluida en la tarjeta ID-Card ˝LISS/ Coombs˝ no es

específica únicamente para las cadenas pesadas, por lo cual puede también reaccionar con
las cadenas ligeras kappa (k) y lambda (l) de las moléculas IgA e IgM.
La tarjeta ID-Card ˝LISS/Coombs˝ es apta para la prueba PAD, prueba de compatibilidad y

detección e identificación de anticuerpos con ˝ID-DiaCell˝ y ˝ID-DiaPanel˝.

MATERIALES
✓ Tarjeta ID-Card ˝LISS/Coombs˝ con 6 microtubos que contienen AGH

poliespecífica (anti-IgG de conejo y anti-C3d monoclonal, línea celular C139-9)
en la matriz de gel.
✓ ID-Diluent 2: Solución LISS modificada para suspensiones de eritrocitos.
✓ ID-DiaCell, ID-DiaPanel: Eritrocitos de prueba.
✓ Centrifuga de tarjetas.
✓ Punteras descartables.
✓ Micropipetas
MUESTRAS
Para un resultado óptimo, la determinación debe realizarse con una muestra recién
extraída, o cumpliendo la normativa local del laboratorio en cuanto a criterios de
aceptabilidad de las muestras. Preferiblemente, las muestras de sangre deben
recogerse utilizando citrato, EDTA o CPD-A como anticoagulante. También es
posible utilizar muestras recogidas en tubos sin anticoagulante. Cuando sea
necesario emplear suero en vez de plasma, el suero debe someterse a una
centrifugación a 1500 g durante 10 minutos antes de su uso, para evitar la presencia
de residuos de fibrina que podrían interferir con el patrón de reacción.
PREPARACIÓN DE LA MUESTRA DE SANGRE

a) Suspensión de eritrocitos para PAD o autocontrol
Prepare una suspensión de eritrocitos al 0,8% en ID-Diluent
2 del modo siguiente:
Deje que el diluyente alcance la temperatura ambiente
antes de utilizarlo.
1. Pipetee 1,0 mL de ID-Diluent 2 (LISS) en un tubo
limpio.
2. Añada 10 uL de sedimento de hematíes y agite
suavemente.
La suspensión de eritrocitos puede utilizarse
inmediatamente.
b) Suspensión de hematíes para la determinación de la
prueba cruzada: Preparar una suspensión de hematíes al 0,8% con ID-Diluent
2 según el procedimiento siguiente. Use directamente la sangre total de un
segmento de la tubuladura de la bolsa de sangre, añada 20 uL de sangre a 1,0
mL de ID-Diluent2.
c) Plasma o suero para prueba de Antiglobulina indirecta (PAI) Cuando las
muestras no vayan a analizarse inmediatamente deben conservarse a 2-8 °C
después de la separación (véase también ˝Material de las muestras˝) durante
un máximo de 48 horas, y después a -20 °C según los criterios/directrices
locales/nacionales.

PROCEDIMIENTOS DE LA PRUEBA
No usar las ID-Tarjetas que muestren signos de desecación, burbujas en el gel,

sellado defectuoso, gotas de gel o de sobrenadante en la parte superior de los
microtubos o en la superficie interior del aluminio de sellado.
I. PRUEBA DE ANTIGLOBULINA DIRECTA (DAT)
1. Marque los microtubos correspondientes de la tarjeta ID-Card ˝LISS/ Coombs˝

con el nombre o número del paciente o el donante.
2. Retirar la lámina de sellado sólo de los microtubos que se vayan a utilizar
3. Pipetee 50 μL de la suspensión de eritrocitos en el microtubo correspondiente.
4. Centrifugue la tarjeta ID-Card durante 10 minutos en la ID-Centrifuge.
5. Lea y registre los resultados.
PRUEBA DE ANTIGLOBULINA DIRECTA
II. DETECCIÓN DE ANTICUERPOS (PAI)
Emplee eritrocitos de prueba listos para usar ˝ID-DiaCell˝.

Deje que los eritrocitos de prueba y las muestras alcancen la temperatura ambiente
antes de usarlos.
con el nombre o número del paciente o el donante.
3. Pipetee 50 μL de cada reactivo de eritrocitos en el microtubo correspondiente
(marcado con el correspondiente número de eritrocitos).
4. Si va a incluirse un autocontrol, pipetee 50 μL de la propia suspensión de

eritrocitos de la muestra en el correspondiente microtubo.
5. Añada 25 μL del plasma o suero del paciente o donante a cada microtubo.
6. Incube la tarjeta ID-Card durante 15 minutos a 37 °C en el ID-Incubator.
DETECCION DE ANTICUERPOS (MUESTRA PROBLEMA)
III. IDENTIFICACIÓN DE ANTICUERPOS (PAI)
Emplee los eritrocitos reactivos listos para usar ˝ID-DiaPanel˝. Deje que los
eritrocitos y las muestras alcancen la temperatura ambiente antes de usarlos.
1. Marque dos tarjetas ID-Card ˝LISS/Coombs˝ con el nombre o número del
paciente o el donante.
3. Pipetee 50 μL de cada tipo de eritrocitos ˝ID-DiaPanel˝ en los microtubos
correspondientes (marcados del 1 al 11).
4. Pipetee 50 μL de la propia suspensión de eritrocitos de la muestra en el
microtubo número 12 (autocontrol).
5. Añada 25 μL del plasma o suero del paciente o donante a cada uno de los 12
microtubos.

PANEL DE IDENTIFICACION DE ANTICUERPOS (MUESTRA PROBLEMA)
IV. PRUEBA DE COMPATIBILIDAD (PAI)

con el nombre o número del receptor y del donante.
3. Pipetee 50 μL de la suspensión de eritrocitos del donante en el microtubo
correspondiente.
4. Para el autocontrol, pipetee 50 μL de la propia suspensión de eritrocitos del
paciente en el microtubo correspondiente.
5. Añada 25 μL del plasma o suero del paciente a cada microtubo.

PRUEBAS DE COMPATIBILIDAD
INTERPRETACION DE RESULTADOS
A) Principio
Positivo: Los eritrocitos aglutinados forman una línea roja sobre la superficie del
gel o aparecen dispersos en el gel.
Negativo: Sedimento compacto de eritrocitos en el fondo del microtubo.
B) Reacciones para:
I. Prueba directa de Antiglobulina (PAD)
✓ Una reacción negativa indica la ausencia de anticuerpos IgG o componente

de complemento C3d detectables en los eritrocitos.
✓ Una reacción positiva (± a ++++) indica que los eritrocitos del paciente están
sensibilizados (eritrocitos recubiertos con anticuerpos IgG, C3d, o ambos).
II. Detección de anticuerpos
✓ Una reacción negativa indica la ausencia de anticuerpos irregulares detectables

en el suero o plasma del paciente o donante.
✓ Una reacción positiva indica la presencia de anticuerpos irregulares. Introduzca
las reacciones obtenidas en la tabla de antígenos. Compruebe que el número

de lote de los hematíes reactivo ˝ID-DiaCell I-II˝ o ˝ID DiaCell I-IIIII˝ corresponde
con el número de lote indicado en la tabla de antígenos.
✓ Según el patrón de las reacciones y la configuración de antígenos, puede
indicarse el tipo de anticuerpo presente. Realice las habituales pruebas
adicionales para identificar el anticuerpo.
✓ Una reacción positiva a uno o más tipos de eritrocitos y un autocontrol negativo
sugieren la presencia de un anticuerpo específico (véanse las Observaciones).
✓ Una reacción positiva a todos los eritrocitos y un autocontrol positivo pueden
deberse a reacciones no específicas.
✓ Si existe una reacción positiva a todos los eritrocitos del panel y un autocontrol
positivo, pero uno o más tipos de eritrocitos muestran una reacción positiva más
intensa que el autocontrol, deben realizarse pruebas adicionales en la muestra
del paciente para estudiar la posibilidad de un aloanticuerpo subyacente.
III. Identificación de anticuerpos
✓ Una reacción positiva indica la presencia de anticuerpos irregulares. Introduzca

las reacciones obtenidas en la tabla de antígenos. Verifique que el número de
lote de los eritrocitos ˝ID-DiaPanel˝ corresponde al número de lote indicado en
la tabla de antígenos.
✓ Según el patrón de las reacciones y la configuración de antígenos, el tipo de
anticuerpo presente puede identificarse en la mayoría de los casos (el
autocontrol debe dar resultado negativo).
✓ Una reacción positiva con todos los eritrocitos ˝ID-DiaPanel˝ y autocontrol
negativo puede deberse a reacciones no específicas o bien indicar la presencia
de un aloanticuerpo dirigido contra un antígeno de alta frecuencia.
✓ Una reacción positiva a todos los eritrocitos ˝ID-DiaPanel˝ y un autocontrol
✓ positivo pueden deberse a reacciones no específicas.
✓ El que exista reacción positiva a todos los eritrocitos ˝ID-DiaPanel˝ y el
autocontrol pero uno o más tipos de eritrocitos muestren reacciones más
intensas que el autocontrol puede indicar la existencia de un aloanticuerpo
subyacente, por lo que deberán realizarse estudios ulteriores.
✓ Una reacción negativa indica compatibilidad de la sangre del donante con el

receptor.
✓ Una reacción positiva indica incompatibilidad de la sangre del donante con el
receptor, debido a la presencia de anticuerpos dirigidos contra antígenos
existentes en los eritrocitos del donante. Deben realizarse estudios adicionales
para identificar la especificidad de los anticuerpos.
OBSERVACIONES
✓ Como en todos los procedimientos según las normas de buenas prácticas del
laboratorio, la sensibilidad de los procedimientos anteriores debe validarse
utilizando anticuerpos de potencia conocida.
✓ El reactivo de referencia DiaMed Anti-D permite realizar controles periódicos
para todos los procedimientos de detección de anticuerpos (véase el
correspondiente prospecto).
LIMITACIONES
a) Las ID-Tarjetas que muestren burbujas de aire o gotas de gel en la parte

superior de los microtubos y/o de la lámina de sellado, deben ser centrifugadas
antes de usarlas.
b) Se sabe que algunos fármacos dan lugar a reacciones positivas en pruebas con
antiglobulina humana.
c) También se ha referido que algunos estados patológicos pueden provocar
reacciones positivas en este tipo de pruebas.
d) Los eritrocitos que hayan pasado a ser poliaglutinables debido a una exposición
de un criptoantígeno, por ejemplo, antígeno T, tanto in vivo como in vitro, pueden
reaccionar con todos los sueros humanos. Estas reacciones deben investigarse
adicionalmente.
e) La contaminación bacteriana o de otro tipo de los materiales empleados, puede
provocar reacciones falsamente positivas o falsamente negativas.
f) Los restos de fibrina en la suspensión de eritrocitos pueden atrapar los hematíes
no aglutinados, de modo que aparezca una fina línea rosada en la parte superior
del gel mientras que la mayoría de los eritrocitos se encuentran en el fondo del
microtubo tras el centrifugado.
g) Es esencial atenerse estrictamente a los procedimientos y equipos
recomendados. El equipo debe comprobarse periódicamente según la
normativa de prácticas correctas del laboratorio (GLP).
h) El empleo de soluciones de suspensión distintas al ID-Diluent 2 puede modificar
las reacciones.
i) El uso de reactivos de eritrocitos distintos a ˝ID-DiaCell˝ o ˝ID-DiaPanel˝ puede
modificar los patrones de reacción.
j) Las suspensiones de eritrocitos demasiado concentradas o demasiado diluidas
pueden dar lugar a resultados aberrantes.

A.5 TITULACION DE ANTICUERPOS PARA LA DETECCION TEMPRANA DE

ENFERMEDAD HEMOLÍTICA DEL RECIÉN NACIDO
La titulación de anticuerpos es un
método semicuantitativo para
determinar la concentración de
anticuerpos en suero o plasma
materno. Se preparan diluciones
seriadas de plasma y se evalúa la
actividad de los anticuerpos. El
título es la inversa de la dilución
más alta de plasma o suero que
exhibe una reacción de 1+ (es decir,
dilución 1 en 128; titulo 128 dils),
Durante el embarazo, la titulación
de anticuerpos se realiza para
identificar a las mujeres con niveles
significativos de anticuerpos que
podrían llevar a enfermedad
hemolítica del recién nacido
(EHRN) y en el caso de los
anticuerpos en títulos bajos,
establecer un valor basal para
compáralo con ulteriores. La
titulación de los anticuerpos no anti-
Rh solo se efectúa después de
discutir con el obstetra la utilización Fig. 15. Color Plate C-5: Fetus and placenta. (From
Blood Group Antigens and Antibodies as Applied to
de los datos en el enfoque clínico Hemolytic Disease of the Newborn. Raritan, NJ:
del embarazo. El significado de los Ortho Diagnostics, Inc.; 1968, with permission.).
títulos se ha establecido IMMUNOHEMATOLOGY PRINCIPLES &
suficientemente solo para anti-D PRACTICE. Pag. 22
(utilizando una técnica con solución
salina)
MATERIALES
1. Baño María a 37°C
2. Reactivo Antiglobulina humana IgG (AGH-IgG)
3. Suspensión de glóbulos rojos D positivos (células R2R2)del 2% al 5%.
4. Muestra problema (suero o plasma)
5. Tubos de vidrio 12x75
6. Micropipetas y punteras
7. Centrífuga de Inmunohematología
8. Piseta de plástico
9. Solución salina NaCl 0.9%

Fig. 16. Color Plate C-6: Scheme of placental Fig. 17. Color Plate C-7: Separation of placenta
circulation. White arrows depict separate following delivery. Diagramportrays the rupture
routines of fetal and maternal circulations of placental vessels (villi) and connective tissues
within the placenta. Dotted lines represent allowing escape of fetal blood cells. Prior to
barrier. (From Blood Group Antigens and complete constriction of the open-end maternal
Antibodies as Applied to Hemolytic Disease of vessels, some fetal blood may enter maternal
the Newborn. Raritan, NJ: Ortho Diagnostics, circulation. (From Blood Group Antigens and
Inc.; 1968, with permission.). Antibodies as Applied to Hemolytic Disease of
IMMUNOHEMATOLOGY PRINCIPLES the Newborn. Raritan, NJ: Ortho Diagnostics,
& PRACTICE. Pag. 22 Inc.; 1968, with permission.).
PROCEDIMIENTO
1. Rotular 10 tubos 12 x 75 según la tabla siguiente.
2. Dispensar los reactivos en el orden que aparecen y seguir las indicaciones
de la tabla adjunta.
Tubo 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Dilución 1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 1/256 1/512
SSF 100ul 100ul 100ul 100ul 100ul 100ul 100ul 100ul 100ul 100ul
Muestra
100ul 100ul
problema
Mezclar y pasar
100ul*
hematíes 50ul 50ul 50ul 50ul 50ul 50ul 50ul 50ul 50ul 50ul
Mezclar por agitación, incubar por 1 hora a 37oC
Realizar lavados con SSF (X4)
Retirar el sobrenadante (evitar la pérdida de hematíes)
Dispensar 2 gotas de AGH-IgG
Centrifugar 3 500 rpm. x 15 Seg para lectura inmediata
Resultado
Puntaje
*Importante: cambiar de puntera luego de la mezcla en cada tubo.

Nota: El volumen del tubo No 10 quedará tal como está, con 200ul y permanecerá
como reserva por si el título del anticuerpo excede de la dilución del tubo 9 y habría
que continuar diluyendo la muestra.
3. Incubar en el baño María a 37°C por 45 minutos todos los tubos.

4. Lavar los hematíes 4 veces con solución salina. Decantar completamente
sacudiendo sobre un papel toalla o filtro en el último lavado.
5. Agregar 2 gotas del reactivo de AGH-IgG a todos los tubos, centrifugar 3500
rpm x 15 seg, leer y anotar los resultados.
RESULTADOS
El titulo se informa como la inversa de la dilución más alta que revela aglutinación
de 1+. Se considera que los títulos ≥16 (dicho valor puede variar según el
laboratorio) son significativos y podrían señalar la necesidad de monitorizar la
EHRN)

A.6 ELUCION POR CONGELACION Y DESCONGELACION DE Lui
PRINCIPIO
Cuando los glóbulos rojos se congelan, se forman cristales de hielo extracelular que
atraen agua de sus alrededores. Esto aumenta la osmolaridad del líquido
extracelular provocando entonces la salida de agua de los glóbulos rojos. Estos
glóbulos rojos se retraen, causando lisis. A medida que se alteran las membranas,
el anticuerpo se disocia.
Este método se usa principalmente para la investigación de la EHRN por
incompatibilidad ABO
MATERIALES
✓ Suspensión de glóbulos rojos lavados el 5%

✓ Solución salina fisiológica
✓ Tubos 12x75
✓ Centrifuga serológica
✓ Congeladora
PROCEDIMIENTO
1. Mezclar 0.5mL de glóbulos rojos con 3 gotas de solución salina fisiológica en un

tubo 12x75.
2. Tapar el tubo y rotarlo para recubrir las paredes con las células
3. Colocar el tubo en posición horizontal en la congeladora durante 10 minutos de
-6oC a -70oC
4. Retirar el tubo de la congeladora y calentar con agua corriente caliente.
5. Centrifugar durante 2 minutos a 3500 rpm
6. Transferir el sobrenadante a un tubo limpio y evaluar en paralelo con el
sobrenadante salino del último lavado.
A.7 TECNICA DE ADSORCION
PRINCIPIO
Los anticuerpos pueden extraerse del suero o plasma por adsorción a glóbulos
rojos portadores de los antígenos correspondientes. Cuando los anticuerpos se fijan
a los antígenos de membrana se separa el plasma de las células, los anticuerpos
específicos permanecen unidos a los glóbulos rojos.
Podría ser factible extraer estos anticuerpos por elución.
Las técnicas de adsorción son útiles en las siguientes situaciones:
✓ Separación de anticuerpos múltiples presentes en el plasma.

✓ Eliminación de la actividad de los autoanticuerpos para permitir la detección
de aloanticuerpos coexistentes.
✓ Eliminación de anticuerpos no deseados (a menudo anti-A y/o anti-B) de un
plasma que contiene anticuerpos apropiados para su empleo como
reactivos.
✓ Confirmación de la presencia de antígenos eritrocitarios específicos por su
capacidad de extraer los anticuerpos de la especificidad correspondiente, del
plasma ya caracterizado.
✓ Confirmación de la especificidad de un tipo de anticuerpos que solo pueden
adsorberse a los glóbulos rojos de un fenotipo de grupo sanguíneo en
particular.
La adsorción cumple con diversos objetivos en distintas circunstancias; no existe

un procedimiento único e ideal. La proporción de plasma/células habitual consiste
en un volumen de plasma y otro igual de glóbulos concentrados y lavados. Para
incrementar la captación de anticuerpos, puede aumentarse la proporción de
antígenos utilizando un volumen celular mayor. La temperatura de incubación debe
ser la de la reactividad óptima de los anticuerpos. El pretratamiento de los glóbulos
rojos con enzimas proteolíticas puede acrecentar la captación de anticuerpos y
reducir el número de adsorciones necesarias para la remoción completa. Como
algunos antígenos se destruyen por la acción de las proteasas, los glóbulos rojos
tratados no eliminan los anticuerpos contra estos antígenos.
Para separar mezclas de anticuerpos, la selección de glóbulos rojos del fenotipo
apropiado es fundamental y depende de la finalidad del procedimiento. Si no se
identificó ninguno de los anticuerpos séricos, podrían emplearse células poco
reactivas, porque se presume que solo reaccionan con un tipo de anticuerpos.
El fenotipo de la persona que sintetiza los anticuerpos sugiere qué especificidades
podrían existir y pueden elegirse entonces las células destinadas a separar esos
anticuerpos. Si se identificó uno o más tipos de anticuerpos, en general se eligen
células que carezcan de esos antígenos, para extraer solo un tipo. La adsorción
requiere un volumen de glóbulos rojos sustancial.

MATERIALES
➢ Plasma con los anticuerpos a adsorber.

➢ Glóbulos rojos con los antígenos correspondientes a la especificidad de los
anticuerpos a adsorber.
➢ Tubos 12 x 75 mm
➢ Baño María
➢ Solución salina fisiológica
➢ Centrifuga
PROCEDIMIENTO
1. Lavar los glóbulos rojos con SSF (x3)

2. Después del último lavado, centrifugar por lo menos 5 minutos a 1000 rpm y
eliminar el sobrenadante. La SSF podría extraerse tocando la masa de glóbulos
rojos con papel filtro.
3. Mezclar volúmenes apropiados de glóbulos rojos concentrados y plasma
(1mL/1mL) e incubar a 37oC durante 30 a 60 minutos.
4. Durante la incubación mezclar en forma periódica.
5. Centrifugar los glóbulos rojos durante 5 min a 1000 rpm.
6. Transferir inmediatamente el sobrenadante a un tubo limpio. Si se planea
preparar un eluato conservar los glóbulos rojos.
7. Evaluar una alícuota del plasma adsorbido, en lo posible con una alícuota
adicional de las células usadas en la adsorción, para verificar si se eliminaron
todos los anticuerpos.
INTERPRETACIÓN
Si la reactividad persiste, los anticuerpos no se eliminaron por completo. La

ausencia de reactividad significa que los anticuerpos se adsorbieron por completo.
Notas:
➢ La adsorción es más efectiva si el área de contacto entre los glóbulos rojos y el

plasma es amplia.
➢ La adsorción completa de los anticuerpos podría requerir adsorciones múltiples,
pero este procedimiento incrementa la probabilidad de dilución del suero y
atenuación de los anticuerpos no adsorbidos.
➢ Para repetir la adsorción se utiliza una nueva alícuota de células y no la de la
previa.
➢ En el caso de antígenos resistentes a las enzimas, es factible pretratar las
células adsorbentes para aumentar la captación de anticuerpos.

A.8 SEPARACION DE LOS GLOBULOS ROJOS AUTOLOGOS DE LOS

TRANSFUNDIDOS POR CENTRIFUGACION SIMPLE
PRINCIPIO
En general, los glóbulos rojos autólogos recientemente formados (neocitos) tienen

menor peso específico que los transfundidos y cuando se centrifuga la sangre en
un tubo de microhematocrito se concentran en la parte superior de la columna de
glóbulos rojos. Esto proporciona un método simple para recuperar glóbulos rojos
autólogos en una muestra de sangre de pacientes recientemente transfundidos.
Nota: Este procedimiento no es efectivo para separar los glóbulos rojos de

pacientes con hemoglobina S o esferocitosis.
MATERIALES
Glóbulos rojos de sangre entera de paciente transfundido anticoagulada con EDTA.

Centrifuga para microhematocrito
Solución salina fisiológica (SSF)
Tubos para hematocrito de vidrio, no heparinizados.
Plastilina
PROCEDIMIENTO
1. Lavar los glóbulos rojos tres veces con SSF, para el ultimo lavado centrifugarlos
a 1000 rpm durante 5 a 15 minutos. Retirar todo el sobrenadante posible sin
alterar la capa de blancos. Mezclar bien.
2. Llenar 10 tubos de microhematocrito hasta la marca de 60 mm, con los glóbulos
rojos lavados y mezclados.
3. Sellar el extremo de los tubos con plastilina.
4. Centrifugar los tubos en una centrifuga para microhematocrito durante 15 min.
5. Cortar los tubos a 5mm por debajo del extremo superior de la columna de
glóbulos rojos. Este segmento de 5mm contiene los glóbulos rojos circundantes
menos densos y por lo tanto, más recientes.
6. Colocar los tubos de microhematocrito cortados dentro de tubos más grandes
(10 0 12x75mm), colocar SSF, y mezclar bien para sacar los glóbulos rojos de
los tubos de microhematocrito.
7. Luego:
a. Centrifugarlos a 1000 rpm por 1 minuto y retirar los tubos de
microhematocrito vacíos
b. Transferir los glóbulos rojos suspendidos en SSF a un tubo limpio
8. Lavar tres veces los glóbulos rojos separados y resuspenderlos en la SSF al 2-
5% para ser estudiados

Notas:
➢ La separación es más sencilla si la muestra es obtenida 3 o más días después

de la transfusión, que poco después de la misma.
➢ Mientras se llenan los tubos de microhematocrito, es esencial mezclar bien los
glóbulos rojos concentrados.
➢ Las técnicas de separación solo son efectivas si los reticulocitos del paciente
son normales o elevados. En aquellos pacientes con producción inadecuada de
reticulocitos, en especial los transfundidos por anemia aplásica, no son útiles.
➢ Algunos antígenos podrían no expresarse tanto en los reticulocitos como en las
células más antiguas. La determinación de los antígenos E, e, c, Fy a, Jka y Ge
demanda particular atención.

TALLERES

T.1 DISCREPANCIAS EN LA DETERMINACIÓN DE GRUPO SANGUINEO ABO
Caso Nº1
Prueba Globular Prueba Inversa
Anti-A Anti-B Anti-AB A1 B O AC
0 0 1+ 0 3+ 0 0
El grupo celular del paciente es: ...............................................
Mediante la prueba inversa del paciente es:.................................................
Que pruebas adicionales haría Ud.: ............................................
Conclusión:.................................................................................
Caso Nº 2
4+ 2+ 44+ 0 4+ 0 0
Que pruebas adicionales haría Ud.: ...........................................
• La historia del paciente indica que estuvo hospitalizado debido a una severa infección
gastrointestinal.
Conclusión:................................................................
Caso Nº 3
3+ 0 4+ 1+ 4+ 0 0
Conclusión:.................................................................................
Caso Nº 4
4+ 0 4+ 0 4+ 3+ 0
Conclusión:................................................................................

Caso Nº 5
0 0 0 0 0 0 0

• Paciente de 6 años de edad, presenta infecciones recurrentes por bacterias y ha
desarrollado mal absorción intestinal. Se espera resultados de dosaje de Inmunoglobulinas.
Conclusión:................................................................................
Caso Nº 6
4+ 4+ 4+ 2+ 2+ 2+ 2+

• Paciente con lesiones óseas e hipercalcemia, presenta anemia crónica y al realizarle un
proteinograma presenta un pico anormal en la región de las gammaglobulinas.
Conclusión:................................................................................
Caso Nº 7
3+ 4+ 4+ 1+ 0 0 0

Conclusión:................................................................................
Caso Nº 8
0 0 0 4+ 4+ 4+ 0

Conclusión:................................................................................
Caso Nº 9

0 0 2+ 2+ 4+ 0 0
Conclusión:................................................................................
Caso Nº 10

4+ 4+ 4+ 2+ 0 2+ 0
Conclusión:................................................................................
Caso Nº 11

0 4+ 4+ 4+ 1+ 1+ 1+
Conclusión:................................................................................
Caso Nº 12

4+ 0 4+ 0 4+ 0 0
Conclusión:................................................................................

Caso Nº 13

0 1+ 1+ 4+ 1+ 0 1+
Conclusión:................................................................................
Caso Nº 14

R R R 4+ 4+ R R
R: Rouleaux

Conclusión:................................................................................
Caso Nº 15
Anti-A Anti-B Anti-AB Lect A1 Lect H A1 A2 B O AC
0 0 0 0 4+ H H H 0 0
H: Hemolisis
Conclusión:................................................................................
Caso Nº 16

DP DP DP - 1+ 4+ 3+ 4+ 0 0
Conclusión:................................................................................

Caso Nº 17
0 4+ 4+ 0 1+ 2+ 1+ 0 0 0
Conclusión:................................................................................
Caso Nº 18

1+ DP 0 1+ DP 1+ DP 4+ 4+ 3+ 4+ 0 0
DP: Doble Población

Conclusión:................................................................................

T.2 SELECCIÓN DE DONANTES (CASOS)
INSTRUCCIONES
A continuación, se plantean situaciones reales, que usted tendría que resolver en una
entrevista a donantes, el auditorio, separado en grupos previamente designado, deberá
discutir el caso y obtener una decisión, las cuales, al término del tiempo establecido, deberá
ser presentado al pleno del taller, serán sustentadas y discutidas por todos.
1. Mujer de 27 años que se ha sometido a tratamiento de acupuntura hace 5

meses.
2. Varón de 38 años que padece de Acromegalia.
3. Varón de 51 años que padece de adenoma de Próstata, sin tratamiento.
4. Varón de 48 años que confiesa ser alcohólico, de buen aspecto y semblante a
la entrevista.
5. Enfermera de 23 años que trabaja en Sala de Operaciones de un Hospital IV;
hace 4 meses sufrió una punción accidental con aguja que había sido usada en
un paciente.
6. Mujer joven, refiere tomar anticonceptivos y además haber tomado aspirina
antes de la entrevista
7. Mujer que sufre de alergia y toma antihistamínicos
8. Paciente que padece artritis reumatoide, sin medicación ni complicaciones
cardiacas ni renales.
9. Mujer que refiere tomar sales de oro por artritis reumatoide.
10. Mujer que sufre de Asma, utiliza inhalador y no ha sufrido de un ataque en los
últimos 3 meses.
11. Varón de 53 años que sin haber estado en régimen ni haber estado enfermo,
baja inexplicablemente de peso (5 Kg. en dos meses)
12. Varón de 38 años de edad quien refiere padecer de cálculo renal.
13. Mujer de 53 años de edad quien refiere haber sido operado hace 8 meses de
una “verruguita costrosa” la cual al estudio anatomopatológico resulto ser
Carcinoma epidermoide in situ.
14. Mujer de 48 años de edad quien refiere haber sido diagnosticada y tratada hace
4 años de Carcinoma de Células Escamosas del Cervix Uterino in situ.
15. Joven operado de apéndice.
16. Varón joven procedente de una provincia de Arequipa quien a la entrevista
refiere haber tenido un Chagoma hace 3 años.
17. Hombre de 30 años de edad, diabético insulino dependiente controlado.
18. Varón de 33 años de edad que refiere padecer de diarrea.
19. Varón que refiere haber donado Sangre en otro hospital hace 2 meses y se
presenta a su hospital para plaquetaféresis.
20. Varón de 35 años que refiere haber realizado una donación de riñón para su
hermana hace 3 años.
21. Joven, 17 años en Servicio Militar, no posee DNI, viene a donar uniformado sin
boleta de salida.
22. Varón de 23 años quien a la entrevista su firma no corresponde a la del DNI
presentado.

23. Mujer quien sufre de epilepsia, sin medicación y hace más de un año que no
sufre de ataques.
24. Varón que sufre de Gota y está siendo medicado adecuadamente.
25. Mujer de 27 años de edad, con 54 kg. de peso, quien dona para su mamá, que
se encuentra menstruando y con hemoglobina de 12.8 gr/dl.
26. Varón de 48 años, quien refiere padecer de hemorroides, con tratamiento local.
27. Varón que refiere haber tenido hepatitis a los 8 años de edad.
28. Varón joven Universitario, que refiere tener Herpes simple tipo I, sin tratamiento
y asintomático.
29. Mujer de 45 años de edad, quien a la entrevista admite padecer de Herpes
zoster, sin molestias.
30. Varón de 23 años quien narra que su madre le refiere que él fue prematuro,
nació amarillo y estuvo en incubadora.
31. Varón de 1.78 cm de altura, con 95 Kg. de peso, quien refiere sufrir de
Hiperlipidemia, al momento de la entrevista se encuentra sin tratamiento y sin
dietas.
32. Varón de 55 años de edad hipertenso toma Capoten y en la entrevista presenta
una presión de 130/90, se automedica con Alprazolan para dormir por
problemas laborales en los 2 últimos días.
33. Mujer joven de 25 años de edad quien refiere tener Hipertiroidismo, sin
tratamiento ni suplemento tiroideo.
34. Persona que recibió hormona del crecimiento el año 1982.
35. Mujer de 45 años de edad quien refiere haberle realizado una Laparoscopia
hace 8 meses.
36. Varón de 33 años natural de Tarapoto, quién refiere haber sufrido de
Leishmaniasis.
37. Mujer de 39 años quien refiere haber padecido de Leucemia.
38. Varón de 22 años quien al examen físico se le encuentra un Lipoma en la región
de la muñeca.
39. Varón de 48 años quien refiere padecer de Linfoma.
40. Mujer de 44 años quien refiere padecer de LES.
41. Mujer de 28 años, muy guapa y esbelta, quien a la minuciosa entrevista refiere
haberse hecho liposucción e implantación de prótesis de silicona siendo la
última intervención hace 5 meses.
42. Varón de 29 años natural de Amazonas, quien refiere haber tenido Malaria, hace
10 años.
43. Varón de 45 años que a la entrevista reconoce consumir Marihuana siendo la
última vez hace 4 semanas.
44. Mujer que sufre de migraña, medicada adecuadamente, actualmente no tiene
mayores molestias.
45. Varón que se medica con Micostatin vía oral desde hace 2 meses y cuyo
tratamiento es por 6 meses, por micosis ungueal.
46. Donante varón de 45 años que refiere tomar Litio por problemas maníaco
depresivo y que actualmente está estable sin crisis por más de 2 meses.
47. Varón que actualmente toma piroxicam por un dolor lumbar.
48. Varón que toma Tegison (para la psoriasis).
49. Mujer que actualmente toma Feldane, por un dolor de cabeza.
50. Varón que por su caída de cabello se encuentra tomando Proscar.
51. Varón de 37 años de edad, piloto de Aviación comercial que refiere tener prisa
pues su vuelo sale en cuatro horas.
52. Mujer de 25 años con secuelas de Polio (usa muletas).
53. Varón que al tomársele la pulsación se encuentra 58 latidos por minuto.
54. Joven de 22 años quien refiere haber padecido de PTI a los 10 años.
55. Varón de 45 años de edad procedente de Ancash, quechua hablante, quien
tiene como intérprete a su sobrino de 21 años.
56. Varón de 21 años de edad, que refiere hace 3 meses haber sido mordido por
perro, el cual estuvo en observación sin mayores indicios de rabia; no recibió
vacuna.
57. Varón de 43 años quien refiere haber tenido Sífilis durante su servicio militar
obligatorio.
58. Mujer joven quién refiere tener síndrome de Gilbert, aparentemente sana, sin
medicación.
59. Joven de 21 años que refiere haberse roto la cabeza por una caída jugando
fútbol se le practicó suturas, hace 3 meses.
60. Varón de 40 años procedente de Huancayo, quien a la entrevista refiere padecer
de Parasitismo intestinal por Taenia Solium.
61. Mujer de 38 años, con historia de TBC hace 10 años, y que siguió tratamiento
completo, de aspecto saludable al momento de la entrevista, que recuerda
haberse automedicado Rinatan la noche anterior, no refiere sentirse enferma el
día de la entrevista.
62. Mujer que padece de Trichomona Vaginalis, y hasta hace 15 días ha tomado
Flagyl.
63. Mujer de 24 años que recibe una vacuna contra la hepatitis B 10 días antes de
la entrevista, sin reacción a la vacuna asintomática o febril.
64. Madre joven quien refiere haber dado a luz hace 3 meses y le administraron
Rho Gam.
65. Hombre de 35 años de edad refiere haberse vacunado contra la fiebre amarilla
hace 7 días para futuro viaje a zona endémica.
66. Mujer vacunada contra la rabia post mordedura de perro bajo sospecha de rabia
hace 6 meses.
67. Donante procedente de Cajamarca, quien por seguridad ha recibido vacuna
contra Antrax hace 3 semanas y se encuentra asintomático.
68. Idem contra la difteria.
69. Varón de 25 años quien recibe vacuna contra las paperas hace 1 semana.
70. Mujer que no ha sido mordida por perro pero recibe vacuna hace un mes.
71. Varón que recibe hace 3 semanas vacuna contra la Rubella.
72. Mujer que recibe hace 3 semanas vacuna contra la Rubeolla.
73. Hombre de 23 años de edad, militar que estuvo de servicio en Madre de Dios,
se acerca a donar un mes después de su llegada, no presenta sintomatología
evidente y no refiere haber estado enfermo, a la inspección del antebrazo se
observa un tatuaje hecho hace 3 años.
74. Joven de 21 años que a la entrevista refiere haber sufrido una Violación sexual
hace 6 meses, ella se ha practicado los exámenes serológicos de descarte
encontrándose todos negativos.
75. Mujer de 37 años de edad quien se evidencia padecer de Vitíligo, no recibe
tratamiento.
76. Varón de 32 años que refiere ser “vagotónico”.

77. Hombre que viene a donar para su hermano, a la entrevista refiere haber salido
de la cárcel hace 5 meses.
78. Joven Universitario de 26 años, quien refiere que en el último año ha tenido 3
parejas sexuales, con la penúltima pareja estuvo hasta hace 6 meses y la última
desde hace 6 semanas; a la pregunta si usa algún tipo de protección responde
que “…sí, preservativo, siempre”. Se le difiere y comunica por Relación sexual
de Riesgo, a lo cual el donante responde: “¿aunque la última pareja haya sido
virgen? “
79. Mujer de 24 años que viene a donar para su mamá, refiere estar recién casada
(hace 3 meses) y que no tuvo relaciones sexuales con su novio hasta el día de
la boda.
80. Mujer de 45 años que se acerca a donar para la operación de su esposo, ya
había sido aceptada y en conversación previa a terminar la entrevista, al
evaluador se le ocurre preguntar ¿de qué lo operan a su esposo?,
respondiendo: …”le van a trasplantar un riñón”.
81. Mujer de 34 años de edad, O Rh negativo, casada, con un hijo y refiere haber
tenido “4 abortos”.
82. Hombre de 42 años, operado hace 5 años de aneurisma cerebral, se presenta
a donar para su mamá quien también será operada de aneurisma.
83. Varón que hasta hace 4 días ha estado tomando antigripal.
84. Varón de 35 años, refiere haber convulsionado de niño, sin poder dar más
información al respecto.
85. Varón que refiere inyectarse esteroides u hormonas para aumentar su masa
muscular.
86. Mujer que refiere haber tenido contacto con familiar con hepatitis viral hace 3
meses.
87. Varón quien refiere haber viajado a zona endémica de Malaria y haber
permanecido solo 20 días.
88. Varón que refiere haber estado 15 días en zona endémica de Dengue y no
presenta síntomas.

Datos y apuntes a tener en cuenta al entrevistar y seleccionar donantes de

sangre
o Cesárea (1 año)
o CMV (1 mes pos tratamiento)
o Cólera (1 mes pos recuperación)
o Síndrome de Cushing (diferir permanentemente)
o Dengue (1 mes, luego de terminar tratamiento y estar asintomático)???
o Depresión (aceptar sí está recuperado a la entrevista)
o Desmayo (sí ha sido uno solo aceptar)
o Eczema (aceptar sí las lesiones no están infectadas)
o Endocarditis (6 meses pos recuperación)
o Fiebre amarilla (6 meses después de estar asintomático)
o Gastritis (aceptar sí esta asintomático, sí toma antibiótico, esperar 72 horas)
o Guillian Barré (6 meses)
o Varón que ha estado en la cárcel (por más de 72 horas consecutivas en los últimos
12 meses serán temporalmente diferidos hasta por 12 meses desde el último día
de excarcelación.
o Ulcera péptica (aceptar).
o Síndrome de Down, aceptar si hay buena comunicación.
o Intervalo mínimo entre donaciones es de 3 meses (Perú).
o Donante que haya sido transfundido con cualquier hemocomponente, es diferido
hasta por un año.
o Pérdida de peso de más de 5 Kg. en 1 mes sin razón aparente, es diferido hasta
que no se dilucide la causa.
o Haber transcurrido 6 meses después de haber finalizado el parto (sea por
alumbramiento o por aborto) para poder donar, siempre y cuando no se encuentre
dando de lactar, en cuyo caso el periodo se contará luego de haber finalizado la
lactancia.
o Embarazadas, solo pueden donar para donación autóloga.
o Vacuna de influenza muestra un 5% de falsos positivos para HTLV.
o Residente de zona endémica diferido por 3 años.
o Tatuaje difieren un año para poder donar, así como acupuntura.
o Isoniacide (INH) antituberculoso, produce daño hepático, excluye un año.
o Hipertenso controlado puede donar siempre y cuando haya tomado ese día su
medicación.
o Personas que recibieron Hormona de crecimiento entre 58 y 83 están prohibidas
de donar por probable contaminación con priones.
o Vacunas contra Polio, Sarampión, paperas, Fiebre amarilla diferir la donación
hasta después de 2 semanas de la última dosis.
o Persona que recibe Gamma globulina Hiperinmune tiene que esperar 1 año para
donar no por la vacuna sino por la causa que lo motivó (exposición).
o TBC curada no es impedimento.
o Hipnóticos/sedantes: Diacepan, Alprazolan, Loracepan, Atiban, Valium.
o Antipsicóticos: Haldol, Largactil (prohibidos de donar).
o Antihistamínicos: Cloroalergan, Clortrimetron, Alergical, Clorfenamina maleato.

o Descongestionante: Sinutab, Teraflu, Nastizol, Rinactan, Vitapirena.
• Finasteride :(Proscar, Propecia) usado inicialmente para tratar pacientes con

Hiperplasia Benigna de próstata. Actualmente se usa para detener la caída y
estimular el crecimiento del cabello.
La finasteride no está indicada en mujeres. Pertenece a la categoría X de riesgo
en el embarazo, puede ocasionar malformaciones en los genitales externos de
los fetos
• Isotretinoina: (Accutane, Roacutan, para los casos del Acné grave)
La Isotretinoina se clasifica dentro de la categoría X de riesgo en el embarazo y
está absolutamente contraindicada en el embarazo, ya que tiene un alto riesgo
de producir malformaciones.
La donación de sangre de sujetos tratados con isotretinoina debe ser evitada
por el riesgo de que fuera transfundida a una mujer embarazada.
• Dutasteride (Avodart, similar al Finasteride, para la hiperplasia benigna de
próstata)

T.3 CONTROL DE CALIDAD EN INMUNOSEROLOGÍA

EJERCICIO Nº 1
Con la finalidad de realizar la evaluación de la Sensibilidad, Especificidad,

Valor Predictivo Positivo y Valor Predictivo Negativo se realizó el estudio de tres
ELISAs para el tamizaje de anticuerpos, de las marcas A, B y C contra determinada
enfermedad, para el estudio se empleó un total de 193 y 2347 sueros de referencia
Positivos y negativos respectivamente, todos ellos debidamente confirmados con
técnica de PCR. Los resultados obtenidos fueron los siguientes:
Sueros MARCA A MARCA B MARCA C

Control Positivo Negativo Positivo Negativo Positivo Negativo
Positivos
169 24 190 3 187 6
(193)
Negativos
15 2332 5 2342 331 2016
(2347)
Determinar para cada uno de las marcas de reactivos:

• Sensibilidad (S)
• Especificidad (E)
• Valor Predictivo Positivo (VPP)
• Valor Predictivo Negativo (VPN)
TABLA DE RESULTADOS
VP VN
𝑆= 𝑥 100 𝐸= 𝑥 100
𝑉𝑃+𝑁𝐹 𝑉𝑁+𝑃𝐹
VP VN
𝑉𝑃𝑃 = 𝑥 100 𝑉𝑃𝑁 = 𝑥 100
𝑉𝑃+𝑃𝐹 𝑉𝑁+𝑁𝐹
TP
𝑃= 𝑥 100
𝑁

MARCA A MARCA B MARCA B

Sensibilidad
Especificidad
VPP
VPN
Preguntas:
1. ¿Qué método posee mayor sensibilidad?
2. ¿Qué método posee mayor especificidad?
3. Compare los VPP y VPN de las diferentes marcas
4. Si Ud. fuese el responsable de elegir el KIT para tamizaje serológico de
VIH de sus donantes de sangre ¿Cuál de las tres marcas elegiría? ¿Por
qué?
5. ¿Qué probabilidad tiene un donante con resultado positivo por el
método C de estar realmente infectado?
EJERCICIO Nº 2
Lea atentamente el siguiente enunciado y responda Ud. las siguientes

preguntas:
Se analizaron 1078 muestras de donantes en un Banco de Sangre de

Europa, para probar la fiabilidad de los resultados de un KIT para tamizar VIH,
obteniéndose los siguientes datos:
1. 1067 muestras fueron inicialmente no reactivas (98,98%)

2. De las 11 muestras inicialmente reactivas (1,02%), 6 (0,56%) fueron
repetidamente reactivas.
3. Todas las reactivas fueron confirmadas con el método de PCR y se concluyó
como positivas las 6 repetidamente reactivas.
El fabricante afirma que la prueba es 100% sensible y 100% específica.
Preguntas.
a) ¿Cuál es su opinión al respecto?

b) ¿Es un ensayo adecuado para tamizaje de Anticuerpos en Banco de Sangre?

T.4 CASOS DE INMUNOHEMATOLOGÍA

Caso # 1: Paciente Grados.
Gestante de 24 años, grupo sanguíneo O Rh Negativo, se le solicita Coombs

Indirecto.
Cuyo resultado es el siguiente:
a b a b a b
D C c E e K k Fy Fy Jk Jk Le Le P1 M N S s PAI
1 + + 0 0 + 0 + + + + 0 0 + + + + 0 + 3+
2 + 0 + + 0 + + + 0 + 0 0 + 0 + 0 + 0 3+
3 0 0 + 0 + 0 + 0 + 0 + + 0 + 0 + 0 + 0
AC 0
1.- ¿Cuáles son las posibilidades de Anticuerpos?
Resultado del Panel de la paciente Grados:
D C c E e K k Fya Fyb Jka Jkb Lea Leb P1 M N S s PAI

1 + + 0 0 + 0 + 0 + + 0 + 0 0 0 + 0 + 3+
2 + + 0 0 + + + + + + + 0 + + + + 0 + 3+
3 + 0 + + 0 0 + 0 0 + 0 0 + + + 0 + + 3+
4 + 0 + 0 + 0 + + 0 + 0 0 0 + 0 + + 0 3+
5 0 + + 0 + 0 + + + + 0 0 + + + + 0 + 0
6 0 0 + + + 0 + 0 + + + 0 + + + 0 + 0 0
7 0 0 + 0 + + + 0 + 0 + 0 + + + + 0 + 0
8 0 0 + 0 + 0 + + 0 + + 0 + 0 + 0 + + 0
9 + + 0 0 + + + + + + + 0 + + + 0 0 + 3+
10 + 0 + + 0 0 + 0 + + + + 0 + + 0 0 + 3+
11 + + + 0 + 0 + + + 0 + 0 + 0 + 0 + 0 3+
12 0 0 + 0 + 0 + 0 + 0 + 0 + + 0 + 0 0 0
13 0 0 + 0 + 0 + + 0 + + + 0 + + + 0 + 0
14 0 0 + 0 + + 0 + + 0 + 0 + + + + + 0 0
15 0 0 + 0 + 0 + 0 0 + + 0 0 + + + + 0 0
16 0 0 + 0 + 0 + 0 0 + 0 0 0 + + + + 0 0
2.- ¿Es posible identificar alguna especificidad antigénica? ¿Cuál sería?

Caso # 2: Paciente Paretto.
Paciente varón de 70 años de edad, O Rh positivo, al que solicitan pruebas

cruzadas para ser operado de próstata, paciente refiere haber sido transfundido
de emergencia hace 10 años por un accidente automovilístico.
Al cruzar las dos unidades de sangre, se las hallaron incompatibles y se realizó el
estudio respectivo, con el siguiente resultado de células pantalla:
a b a b a b
1 + + 0 0 + 0 + + + + 0 0 + + + + 0 + 0
2 + 0 + + 0 + + + 0 + 0 0 + 0 + 0 + 0 3+
3 0 0 + 0 + 0 + 0 + 0 + + 0 + 0 + 0 + 0
AC 0
3.- ¿cuáles son las posibles especificidades del anticuerpo?

1 + + 0 0 + 0 + 0 + + 0 + 0 0 0 + 0 + 0
2 + + 0 0 + + + + + + + 0 + + + + 0 + 0
3 + 0 + + 0 0 + 0 0 + 0 0 + + + 0 + + 3+
4 + 0 + 0 + 0 + + 0 + 0 0 0 + 0 + + 0 0
5 0 + + 0 + 0 + + + + 0 0 + + + + 0 + 0
6 0 0 + + + 0 + 0 + + + 0 + + + 0 + 0 3+
7 0 0 + 0 + + + 0 + 0 + 0 + + + + 0 + 0
8 0 0 + 0 + 0 + + 0 + + 0 + 0 + 0 + + 0
9 + + 0 0 + + + + + + + 0 + + + 0 0 + 0
10 + 0 + + 0 0 + 0 + + + + 0 + + 0 0 + 3+
11 + + + 0 + 0 + + + 0 + 0 + 0 + 0 + 0 0
12 0 0 + 0 + 0 + 0 + 0 + 0 + + 0 + 0 0 0
13 0 0 + 0 + 0 + + 0 + + + 0 + + + 0 + 0
14 0 0 + 0 + + 0 + + 0 + 0 + + + + + 0 0
15 0 0 + 0 + 0 + 0 0 + + 0 0 + + + + 0 0
16 0 0 + 0 + 0 + 0 0 + 0 0 0 + + + + 0 0
4.- ¿Cuál es la especificidad del anticuerpo?

Caso # 3: Paciente Domínguez.

Paciente proveniente del servicio de hematología, portador de anemia refractaria,
varón de 52 años de edad, resulta incompatible al cruzar una unidad que se le
había solicitado para levantar su nivel de Hemoglobina.
El resultado de su panel es el siguiente:
a b a b a b
1 + + 0 0 + 0 + + + + 0 0 + + + + 0 + 1+
2 + 0 + + 0 + + + 0 + 0 0 + 0 + 0 + 0 0
3 0 0 + 0 + 0 + 0 + 0 + + 0 + 0 + 0 + 0
AC 0
5.- ¿Cuál sería la especificidad el anticuerpo?
6.- ¿Qué pruebas adicionales haría?

1 + + 0 0 + 0 + 0 + + 0 + 0 0 0 + 0 + 2+
2 + + 0 0 + + + + + + + 0 + + + + 0 + 2+
3 + 0 + + 0 0 + 0 0 + 0 0 + + + 0 + + 0
4 + 0 + 0 + 0 + + 0 + 0 0 0 + 0 + + 0 0
5 0 + + 0 + 0 + + + + 0 0 + + + + 0 + 1+
6 0 0 + + + 0 + 0 + + + 0 + + + 0 + 0 0
7 0 0 + 0 + + + 0 + 0 + 0 + + + + 0 + 0
8 0 0 + 0 + 0 + + 0 + + 0 + 0 + 0 + + 0
9 + + 0 0 + + + + + + + 0 + + + 0 0 + 2+
10 + 0 + + 0 0 + 0 + + + + 0 + + 0 0 + 0
11 + + + 0 + 0 + + + 0 + 0 + 0 + 0 + 0 1+
12 0 0 + 0 + 0 + 0 + 0 + 0 + + 0 + 0 0 0
13 0 0 + 0 + 0 + + 0 + + + 0 + + + 0 + 0
14 0 0 + 0 + + 0 + + 0 + 0 + + + + + 0 0
15 0 0 + 0 + 0 + 0 0 + + 0 0 + + + + 0 0
16 0 0 + 0 + 0 + 0 0 + 0 0 0 + + + + 0 0
7.- ¿Qué impresión le merece los resultados del presente panel?
8.- ¿Por qué motivo cree Ud. que se han obtenido esos resultados?
Caso # 4: Paciente Anaya.
Paciente mujer de 45 años de edad que hace reacción hemolítica post transfusión
de una unidad de paquete globular (a las 2 horas de haber terminado de pasar el
componente), cuya prueba cruzada original fue compatible, se verifica los grupos
de la paciente como de la unidad transfundida y ambos son conformes: O Rh
positivo, al repetir la prueba cruzada de la unidad transfundida y el suero, con
aparentes signos de hemólisis, obtenido luego de la reacción transfusional resultó
ser INCOMPATIBLE. Este fue el resultado de su pantalla:
a b a b a b
1 + + 0 0 + 0 + + + + 0 0 + + + + 0 + 0
2 + 0 + + 0 + + + 0 + 0 0 + 0 + 0 + 0 0
3 0 0 + 0 + 0 + 0 + 0 + + 0 + 0 + 0 + 1+
AC 0
9.- ¿Cuáles podrían ser las especificidades de o de los anticuerpos?

1 + + 0 0 + 0 + 0 + + 0 + 0 0 0 + 0 + 0
2 + + 0 0 + + + + + + + 0 + + + + 0 + 2+
3 + 0 + + 0 0 + 0 0 + 0 0 + + + 0 + + 0
4 + 0 + 0 + 0 + + 0 + 0 0 0 + 0 + + 0 0
5 0 + + 0 + 0 + + + + 0 0 + + + + 0 + 0
6 0 0 + + + 0 + 0 + + + 0 + + + 0 + 0 2+
7 0 0 + 0 + + + 0 + 0 + 0 + + + + 0 + 2+
8 0 0 + 0 + 0 + + 0 + + 0 + 0 + 0 + + 2+
9 + + 0 0 + + + + + + + 0 + + + 0 0 + 2+
10 + 0 + + 0 0 + 0 + + + + 0 + + 0 0 + 2+
11 + + + 0 + 0 + + + 0 + 0 + 0 + 0 + 0 2+
12 0 0 + 0 + 0 + 0 + 0 + 0 + + 0 + 0 0 2+
13 0 0 + 0 + 0 + + 0 + + + 0 + + + 0 + 2+
14 0 0 + 0 + + 0 + + 0 + 0 + + + + + 0 2+
15 0 0 + 0 + 0 + 0 0 + + 0 0 + + + + 0 2+
16 0 0 + 0 + 0 + 0 0 + 0 0 0 + + + + 0 0
10.- ¿Cuál sería la identidad del o de los anticuerpos?

Caso # 5: HCM
Paciente varón, del servicio de Oncología de, 61 años de grupo sanguíneo O Rh

positivo, le solicitan transfusión de paquete globular el cual resulta incompatible,
con Coombs directo negativo, el siguiente es el resultado de su panel:
a b a b a b
1 + + 0 0 + 0 + + + + 0 0 + + + + 0 + 0
2 + 0 + + 0 + + + 0 + 0 0 + 0 + 0 + 0 3+
3 0 0 + 0 + 0 + 0 + 0 + + 0 + 0 + 0 + 2+
AC 0
12.- ¿Cuál sería la posible especificidad del anticuerpo involucrado?

1 + + 0 0 + 0 + 0 + + 0 + 0 0 0 + 0 + 0
2 + + 0 0 + + + + + + + 0 + + + + 0 + 0
3 + 0 + + 0 0 + 0 0 + 0 0 + + + 0 + + 3+
4 + 0 + 0 + 0 + + 0 + 0 0 0 + 0 + + 0 2+
5 0 + + 0 + 0 + + + + 0 0 + + + + 0 + 1+
6 0 0 + + + 0 + 0 + + + 0 + + + 0 + 0 3+
7 0 0 + 0 + + + 0 + 0 + 0 + + + + 0 + 3+
8 0 0 + 0 + 0 + + 0 + + 0 + 0 + 0 + + 2+
9 + + 0 0 + + + + + + + 0 + + + 0 0 + 0
10 + 0 + + 0 0 + 0 + + + + 0 + + 0 0 + 3+
11 + + + 0 + 0 + + + 0 + 0 + 0 + 0 + 0 3+
12 0 0 + 0 + 0 + 0 + 0 + 0 + + 0 + 0 0 3+
13 0 0 + 0 + 0 + + 0 + + + 0 + + + 0 + 3+
14 0 0 + 0 + + 0 + + 0 + 0 + + + + + 0 3+
15 0 0 + 0 + 0 + 0 0 + + 0 0 + + + + 0 3+
16 0 0 + 0 + 0 + 0 0 + 0 0 0 + + + + 0 3+
13.- ¿Cuál es la posible especificidad del o de los anticuerpos?

+ + 0 0 + 0 + + 0 0 + + 0 0 0 + + 0
15.- ¿Cuál sería su diagnóstico?
16.- ¿Qué pruebas adicionales podría realizar para confirmar su diagnóstico?

Resultado del panel con el suero post adsorción (x2) con células rr .

1 + + 0 0 + 0 + 0 + + 0 + 0 0 0 + 0 + 0
2 + + 0 0 + + + + + + + 0 + + + + 0 + 0
3 + 0 + + 0 0 + 0 0 + 0 0 + + + 0 + + 1+
4 + 0 + 0 + 0 + + 0 + 0 0 0 + 0 + + 0 0
5 0 + + 0 + 0 + + + + 0 0 + + + + 0 + 0
6 0 0 + + + 0 + 0 + + + 0 + + + 0 + 0 1+
7 0 0 + 0 + + + 0 + 0 + 0 + + + + 0 + 0
8 0 0 + 0 + 0 + + 0 + + 0 + 0 + 0 + + 0
9 + + 0 0 + + + + + + + 0 + + + 0 0 + 0
10 + 0 + + 0 0 + 0 + + + + 0 + + 0 0 + 1+
11 + + + 0 + 0 + + + 0 + 0 + 0 + 0 + 0 0
12 0 0 + 0 + 0 + 0 + 0 + 0 + + 0 + 0 0 0
13 0 0 + 0 + 0 + + 0 + + + 0 + + + 0 + 0
14 0 0 + 0 + + 0 + + 0 + 0 + + + + + 0 0
15 0 0 + 0 + 0 + 0 0 + + 0 0 + + + + 0 0
16 0 0 + 0 + 0 + 0 0 + 0 0 0 + + + + 0 0
Las células rr usadas en la 1º adsorción fueron eluidas mediante EDTA/Glicina, se

le corrió un panel a ese eluido y este fue su resultado:

1 + + 0 0 + 0 + 0 + + 0 + 0 0 0 + 0 + 0
2 + + 0 0 + + + + + + + 0 + + + + 0 + 0
3 + 0 + + 0 0 + 0 0 + 0 0 + + + 0 + + 3+
4 + 0 + 0 + 0 + + 0 + 0 0 0 + 0 + + 0 3+
5 0 + + 0 + 0 + + + + 0 0 + + + + 0 + 3+
6 0 0 + + + 0 + 0 + + + 0 + + + 0 + 0 3+
7 0 0 + 0 + + + 0 + 0 + 0 + + + + 0 + 3+
8 0 0 + 0 + 0 + + 0 + + 0 + 0 + 0 + + 3+
9 + + 0 0 + + + + + + + 0 + + + 0 0 + 0
10 + 0 + + 0 0 + 0 + + + + 0 + + 0 0 + 3+
11 + + + 0 + 0 + + + 0 + 0 + 0 + 0 + 0 3+
12 0 0 + 0 + 0 + 0 + 0 + 0 + + 0 + 0 0 3+
13 0 0 + 0 + 0 + + 0 + + + 0 + + + 0 + 3+
14 0 0 + 0 + + 0 + + 0 + 0 + + + + + 0 3+
15 0 0 + 0 + 0 + 0 0 + + 0 0 + + + + 0 3+
16 0 0 + 0 + 0 + 0 0 + 0 0 0 + + + + 0 3+
17.- Interprete y comente sus resultados

Caso # 6: Paciente M.T.
Paciente de 66 años, sexo femenino, caucasoide, procedente de Madre de Dios,

fue admitida en hospital local el 10 de Setiembre del 2012, con fractura expuesta
de tibia. Se solicitaron 2 unidades de concentrado de hematíes para la realización
de la cirugía.
Historia transfusional: La paciente relata haber recibido 1 unidad de paquete

globular en Octubre del 2011. No recibió otras transfusiones.
Examen Físico: mucosas decoloradas +++/++++; Ictericia +/++, adenomegalia

axilar izquierda (2 ganglios de 1.5 a 2 cm), bazo percutible y no palpable.
Exámenes de laboratorio:
• Hemograma: Hb= 5.1 g/dl; Hto=16%; leucocitos: 5,000/mm3; plaquetas
200,000/mm3; presencia de esferocitos
• Bilirrubina total : 5.0 mg/dl (VN: 0.2-1.2);
• Bilirrubina Indirecta : 3.2 mg/dl.
Estudios iniciales: El servicio de Hemoterapia del hospital local, realizó inicialmente

la determinación del grupo sanguíneo ABO/Rh e investigación de anticuerpos
Irregulares. A continuación realizó Test de Coombs directo de Antiglobulina y
eluato, identificación de anticuerpos y fenotipaje Rh. Los resultados de las pruebas
inmunohematológicas realizadas demostraron:
ABO: O
Rh : POSITIVO
Fenotipo Rh: DCce (R1r)
Investigación de anticuerpos Irregulares:
Cel. Gel-
LISS-COOMBS Test de Coombs directo
Pantalla Enz
Tº Amb 37ºC AGH Reactivos
R1R1 0 0 2+ 4+ Antig. Poliespecifica 3+
R2R2 0 0 2+ 4+ Antig. IgG 3+
Rr 0 0 2+ 4+ Antig. C3d 0
Auto 0 0 2+ 4+
Eluato; Positivo 2+ en todas las células del panel de hematíes realizado.

Resultados de la prueba de Identificación de anticuerpos en suero del paciente:

Células Rh-Hr Kell Duffy Kidd MNS Lutheran Resultados
D C c E E CW K k Fya Fyb Jka Jkb M N S s Lua Lub Cel LISS Enz
RZR1 + + 0 + + 0 + + + 0 + 0 0 + 0 + 0 + 1 2+ 4+
R1W R1 + + 0 0 + + 0 + + 0 0 + + 0 + + 0 + 2 2+ 4+
R2R2 + 0 + + 0 0 0 + + + + 0 + + 0 + 0 + 3 2+ 4+
R0r + 0 + 0 + 0 0 + 0 0 + + + + 0 0 0 + 4 2+ 4+
r'r 0 + + 0 + 0 0 + + 0 0 + + 0 0 + 0 + 5 2+ 4+
r''r 0 0 + + + 0 0 + 0 + + 0 + 0 + + + + 6 2+ 4+
Rr 0 0 + 0 + 0 + + 0 + 0 + + + + + 0 + 7 2+ 4+
Rr 0 0 + 0 + 0 0 + + 0 + + 0 + + 0 0 + 8 2+ 4+
Rr 0 0 + 0 + 0 0 + + 0 + + + + 0 + 0 + 9 2+ 4+
Rr 0 0 + 0 + 0 0 + 0 + + + + 0 + 0 0 + 10 2+ 4+
R1R2 + + + + + 0 + + + + 0 + + + + + 0 + 11 2+ 4+
Auto 2+ 4+
Pregunta 1: ¿Qué indican los resultados arriba obtenidos?

¿Qué pruebas adicionales Ud. realizaría?
Fue realizada una prueba de dilución de suero
Células Suero 1:2 Suero 1:5

R1R1 2 1
R2R2 2 1
rr 1 0
Pregunta 2: ¿qué dilución de suero Ud. utilizaría para correr el panel?
Resultados de la prueba de identificación de anticuerpos utilizados en el suero

diluido del paciente;
D C c E e CW K k Fya Fyb Jka Jkb M N S s Lua Lub Cel LISS
RZR1 + + 0 + + 0 + + + 0 + 0 0 + 0 + 0 + 1 2+
R1W R1 + + 0 0 + + 0 + + 0 0 + + 0 + + 0 + 2 1+
R2R2 + 0 + + 0 0 0 + + (+) + 0 + + 0 + 0 + 3 2+
R0r + 0 + 0 + 0 0 + 0 0 + + + + 0 0 0 + 4 1+
r'r 0 + + 0 + 0 0 + + 0 0 + + 0 0 + 0 + 5 0
r''r 0 0 + + + 0 0 + 0 + + 0 + 0 + + + + 6 1+
Rr 0 0 + 0 + 0 + + 0 + 0 + + + + + 0 + 7 1+
Rr 0 0 + 0 + 0 0 + + 0 + + 0 + + 0 0 + 8 0
Rr 0 0 + 0 + 0 0 + + 0 + + + + 0 + 0 + 9 0
Rr 0 0 + 0 + 0 0 + 0 + + + + 0 + 0 0 + 10 0
R1R2 + + + + + 0 + + + + 0 + + + + + 0 + 11 2+
Pregunta 3: ¿Cómo interpretaría Ud. estos resultados y que pruebas adicionales

Ud. realizaría?
Resultados del fenotipaje realizado, utilizando sueros monoclonales IgM para el

sistema Rh y Kell:
Anti-D Anti-C Anti-c Anti-E Anti-e Anti-K Anti-k
Paciente 0 0 4 0 4 2 4
Control Positivo 4 4 4 4 4 4 4
Control Negativo 0 0 0 0 0 0 0
Se realizó un nuevo fenotipaje Kell del paciente utilizando hematíes tratados con
cloroquina. Después del tratamiento, los hematíes aún presentaban Test de
Antiglobulina directo francamente positivo.
Resultados de fenotipaje Kell en los hematíes tratados:
Anti-K Anti-k
Paciente (+) 1+
Control Positivo 4+ 4+
Control Negativo 0 0
Pregunta 4: ¿Que indican los resultados del fenotipaje?

¿Los hematíes podrían haber sido tratados con otro reactivo químico
para obtener un test de Combs directo negativo?
Pregunta 5: ¿Hay otro tipo de prueba que pueda ser realizada para demostrar la
presencia o ausencia de los antígenos del sistema Kell?
Pregunta 6: ¿Qué es lo que Ud. haría a continuación?
Resultados de la prueba de identificación de anticuerpos utilizando panel de células

seleccionadas:

D C c E e CW a b
K k Fy Fy Jka Jkb M N S s Lua Lub Cel LISS PEG
R 0 0 + 0 + 0 + 0 0 + 0 + + + 0 + 0 + 1 2+ 1+
Rr 0 0 + 0 + 0 0 + + 0 + + 0 + + 0 0 + 2 0 0
R2r + 0 + + + 0 0 + + + + + + + 0 + 0 + 3 1+ 2+
Rr 0 0 + 0 + 0 + + 0 + 0 + + 0 + 0 0 + 4 1+ 1+
R1r + + 0 0 + 0 0 + 0 + + 0 + + + + 0 + 5 2+ 2+
Pregunta 7: ¿Qué información se puede obtener utilizando este panel de células

seleccionadas y que se podría hacer todavía?
Pregunta 8: ¿Mediante los resultados obtenidos durante esta investigación que

anticuerpos están presentes en el suero de la paciente y que sangre Ud.
seleccionaría para su transfusión?

Pregunta 9: ¿Cuáles son las limitaciones de la prueba de dilución de anticuerpos

en suero?
Pregunta 10: Además de la dilución, ¿Qué otras pruebas son utilizadas para la
determinación de la especificidad de aloanticuerpos en la presencia de
autoanticuerpos? ¿Cuáles son sus ventajas y desventajas?
Pregunta 11: ¿Cuál es la importancia de determinar la especificidad de un

anticuerpo?

Manual de Practicas Gabinete 2019 Ver 0

Încărcat de

Informații document

Descriere originală:

Drepturi de autor

Formate disponibile

Partajați acest document

Partajați sau inserați document

Opțiuni de partajare

Vi se pare util acest document?

Este necorespunzător acest conținut?

Drepturi de autor:

Formate disponibile

Manual de Practicas Gabinete 2019 Ver 0

Încărcat de

Drepturi de autor:

Formate disponibile

UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

(Universidad del Perú, DECANA DE AMÉRICA)

Manual de Prácticas de Gabinete

Manual de Prácticas 2019

Es impresionante apreciar cómo ha crecido y expandido el desarrollo de la Medicina

Manual de Prácticas 2019

Nº 1 Estandarización del Trabajo en Inmunohematología 5

Nº 2 Control de Calidad de equipos, centrífuga de serología, y de 13

Nº 3 Control de Calidad de Reactivos 17

Nº 4 Determinación de Grupos Sanguíneos ABO y sistema Rh. 26

Nº 5 Fenotipificación de otros Grupos Sanguíneos 30

Nº 6 Prueba de Antiglobulina Directa 33

Nº 8 Prueba de Antiglobulina Indirecta - Investigación de Anticuerpos 43

Nº 10 Realización de técnicas Especiales - Técnica de Elución 61

A.2 Microaglutinación en tarjetas de gel: Principio, composición, tipos y 69

A.3 Determinación de los Grupos Sanguíneos ABO/Rh en recién nacidos 73

Manual de Prácticas 2019 3

A.4 Prueba Directa, Indirecta de Antiglobulina, Identificación de 77

A.5 Titulación de Anticuerpos para la detección temprana de la 85

A.6 Elución por congelación y descongelación de Lui: Principio y 88

A.7 Técnica de Adsorción: Principio, uso e interpretación. 89

A.8 Separación de los glóbulos rojos autólogos de los transfundidos por 91

T.2 Selección de Donantes 99

T.3 Control de calidad en Inmunoserología 105

T.4 Casos de Inmunohematología 107

Manual de Prácticas 2019 4

ESTANDARIZACIÓN DEL TRABAJO EN INMUNOHEMATOLOGÍA

Manual de Prácticas 2019 5

Fig. 1. Reactivos utilizados en la práctica de “Estandarización del trabajo de Inmunohematología”.

I.- Determinación en placa:

Muestra α 1 gota 1 gota

Mezclar con ayuda de una baqueta y

Manual de Prácticas 2019 6

Repetir el mismo esquema con la MUESTRA β

NOTA: La suspensión de hematíes de los frascos de muestras es homogénea,

II.- Determinación en tubo

NOTA: La formación de un botón de células en el fondo del tubo, persistente a los

Muestra α 1 gota 1 gota

Centrifugar a 3500 r.p.m por 15 seg

Repetir el mismo esquema con la MUESTRA β

➢ Colocar 20 gotas de la muestra α en un tubo de vidrio 12 x 75, rotularlo como

➢ Transferir una gota de la suspensión de trabajo al 5% a un tubo debidamente

Manual de Prácticas 2019 8

LECTURA E INTERPRETACION DE LA REACCIÓN ANTÍGENO-ANTICUERPO

El resultado final de la reacción antígeno-anticuerpo, puede manifestarse bajo la

➢ 4 + Un botón sólido de glóbulos rojos y fondo claro.

Fig. 2. Aglutinaciones en tubo de 1+ hasta 4+. Imágenes tomadas de la

Manual de Prácticas 2019 9

Fig. 2.1 Reactivos utilizados en la práctica de “Lectura e interpretación de la reacción antígeno-

Manual de Prácticas 2019 10

Centrifugar a 3500 r.p.m. por 15 segundos

Manual de Prácticas 2019 11

CALIBRACIÓN DE CENTRÍFUGAS DE SEROLOGÍA

Como parte de un sistema de Control de Calidad,

Manual de Prácticas 2019 13

Reactivo 2 2 gotas 2 gotas

Centrifugar por parejas a 3500 r.p.m. comenzando por 10 segundos

Anotar resultados según tabla adjunta

Repetir los pasos anteriores, ir incrementando el tiempo cada vez.

• Se evalúa por cada tiempo:

Criterios de Control 10” 15” 20” 30” 45”

Botón celular claramente definido

Células fácilmente resuspendidas