FACULTAD CIENCIAS DE LA VIDA

DEPARTAMENTO DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

CURSO DE BIOLOGÍA GENERAL

BIO-031
2019

GUÍA LABORATORIO N° 2
MICROSCOPÍA
 MICROSCOPÍA

INTRODUCCIÓN

Las primeras observaciones de organismos al microscopio fueron realizadas alrededor de 1669

por el matemático e inventor inglés Robert Hooke, quien con la ayuda de un primitivo microscopio de
luz describió una diversidad de microorganismos. Usó el término célula para referirse a las celdas o
pequeñas “cajitas” que aparecían al observar un delgado corte de corcho. A mediados del siglo XVIII,
ya se habían descrito células de animales y plantas y algunas estructuras subcelulares. El biólogo alemán
Theodore Schwann postuló la Teoría Celular, que establece que la célula es la unidad estructural y
funcional de los organismos vivos. También señala que ellos están compuestos por una o más células y
que las células son producidas sólo por divisiones de otras células.
La Biología como ciencia, nace y se desarrolla desde la segunda mitad del siglo XVII hasta los
inicios del siglo XX. Para ello, los científicos han debido proceder a través del método científico que es
un procedimiento riguroso y sistemático orientado a extraer información empíricamente verdadera de
cualquier objeto de estudio.

MICROSCOPIA

Microscopios Actuales

Actualmente existen dos tipos de microscopios:

 Microscopio compuesto. El microscopio de luz usa una fuente de luz visible, la que por intermedio
de una combinación de lentes, permite obtener una imagen aumentada hasta 1000X de un objeto no
visible a simple vista.

 Microscopio electrónico. En lugar de luz usa un flujo acelerado de electrones, la imagen es resultado
de los contrastes producidos por las diferencias de poder dispersante de las distintas estructuras del
objeto examinado. Con este tipo de microscopio se logra un aumento de 250.000X y 2.000.000X.
Existen dos tipos de microscopio electrónico: (a) M.E. de transmisión (MET): se utiliza un haz fijo
de electrones y la formación de la imagen se produce con los electrones que atraviesan y son
transmitidos por el objeto, por eso, las muestras deben ser delgadas y transmitir el 50-90% de los
electrones. El sistema que recibe y registra la imagen es una placa fluorescente que emite luz y
produce la imagen. Bajo esta pantalla hay placas fotográficas o películas que registran la imagen y
(b) M.E. de barrido (MEB): en este tipo de microscopio se utiliza un haz móvil de electrones que
recorre el objeto. La imagen se produce no por los electrones transmitidos sino por aquellos que se
desprenden del objeto cuando los electrones del microscopio inciden sobre él. La gran profundidad
de foco del MEB permite obtener imágenes tridimensionales de las superficies observadas y también
observar muestras grandes con buena resolución.

El microscopio compuesto está conformado de dos partes (Fig. 1):

 Parte óptica, está destinada a obtener una imagen aumentada del objeto e incluye tres partes:
 Objetivos: sistema de cristales convergentes que actúan como una lente.
 Ocular: recoge la imagen producida por el objetivo y forma una nueva.
 Sistema de iluminación, el cual está conformado por:
-- Condensador: sistema de lentes convergentes que concentran el haz de luz sobre la muestra.
-- Diafragma: sirve para regular la cantidad de luz que llega a la muestra.
-- Fuente de Luz: puede ser natural o artificial.

 Parte mecánica, está constituida por los distintos elementos ópticos y los objetos que se van a
examinar:
 Tubo: Cilindro ahuecado ubicado entre el cabezal y el ocular.
 Revólver: Pieza metálica situada bajo el cabezal que, por rotación, sitúa los diferentes objetivos
en su posición de trabajo.
 Platina: Superficie plana con una perforación central para permitir el paso de la luz hacia la
preparación. Posee una pinza que sostiene la preparación y que puede (o no) estar unida a un carro
móvil.
 Tornillo Macrométrico: Mecanismo de enfoque de avance rápido. Se utiliza cuando se está
enfocando con los objetivos de 4X y 10X.
 Tornillo Micrométrico: Mecanismo de enfoque de avance lento. Se utiliza cuando se enfoca con
todos los objetivos.
 Base o Pie: Estructura sólida y pesada que sostiene y da estabilidad a todo el instrumento.
 Columna: Vástago vertical que se articula con la base y con el tubo del microscopio y lleva el
mecanismo de movimiento del mismo. La parte superior constituye el denominado brazo.

Aumento

El aumento de un microscopio es la capacidad de sus lentes para formar una imagen de mucho
mayor tamaño que la imagen real del objeto. Actualmente, la mayoría de los microscopios poseen dos
tipos de lente: el objetivo que se encuentra más cerca del objeto a observar, y el ocular por el cual se
observa. Lo usual es que cada microscopio tenga 4 objetivos de diferentes aumentos 4X, 10X, 40X y
100X. En los tres primeros (objetivos en seco) el aire se interpone entre la lente y la preparación, mientras
que en el último (objetivo de inmersión) es aceite de inmersión lo que se interpone entre la lente y la
preparación (es necesario su uso para la observación). Cada objetivo forma una imagen aumentada, real
e invertida del objeto observado. El ocular recoge la imagen producida por el objetivo y forma una nueva
imagen virtual, derecha y amplificada un número de veces (X), según se indica en el propio ocular. Los
aumentos más comunes de los oculares son: 8X, 10X y 12,5X. La imagen observada resulta del efecto
combinado de ambos lentes y por lo tanto el aumento con que se aprecia el objeto corresponde a la
multiplicación del valor de aumento de cada lente con el valor del objetivo.

Resolución

El poder de resolución se refiere a la capacidad de mostrar claramente los detalles del objeto
(nitidez). El máximo poder de resolución del microscopio óptico es de aproximadamente 0,2
micrómetros, debido a que la longitud de onda de la luz utilizada (400-700 nm) es un factor limitante. El
ojo humano tiene un poder de resolución de aproximadamente 100 micrómetros. El límite de resolución
se puede definir como la distancia mínima que debe existir entre dos puntos para que se puedan distinguir.
El límite de resolución se puede calcular a partir de la ecuación:
 LR= KL/AN (K=0,61; L= Longitud de onda utilizada (550 nm); AN= Apertura numérica de cada
lente objetivo).
La apertura numérica de una lente objetivo se puede definir, como su capacidad para captar la
máxima cantidad de luz difractada por un objeto. Cuanto mayor sea el poder de resolución, menor será
su límite de resolución.

Tamaño muestra

Unidades de medida Usadas en microscopía

mm (milímetro) = 10-3 m
um (micrómetro) = 10-6 m
nm (nanómetro) = 10-9 m
Aº (Angström) = 10-10 m

Conversión unidades

Conversión nm µm mm
nm - Dividir 1000 Dividir 1000000
um Multiplicar 1000 - Dividir 1000
mm Multiplicar 1000000 Multiplicar 1000 -
 Ocular

Tubo

Revolver Cabezal
Brazo
Objetivo

Platina
Pinzas
T. Macrométrico
Condensador
Desplazador de platina T. Micrométrico
Fuente de luz
Base

Figura 1. Microscopio compuesto monocular y las partes que lo conforman.

Objetivo General

Conocer y caracterizar un microscopio y reconocer las utilidades que le brindan al ser humano.

Objetivos Específicos

 Reconocer las partes de un microscopio y su manejo.

 Observar preparaciones microscópicas, usando muestras permanentes, ejercitando el cálculo de los
aumentos.

REFERENCIAS

Alberts B, A Johnson, J Lewis, M Raff, K Roberts & P Walter (2004) Biología Molecular de la Célula.
4ta Edición. Editorial Omega. España, 1463 pp.

Audesirk T, G Audesirk & BE Byers (2008) Biología: la vida en la Tierra. 8va edición. Editorial Pearson
Educación. México, 1024 pp.

Curtis H (2006) Invitación a la Biología. 6ta edición. Editorial Médica Panaméricana. Buenos Aires, 675
pp.

De Robertis EDP, J Hib & R Ponzio (2001) Biología celular y molecular De Robertis. 15a edición.
Editorial El Ateneo. Buenos Aires, 469 pp.