BIOTECNOLOGIA

AMBIENTAL
Biorremediación
Monitoreo
Control de la
ambiental
polución

AGROPECUARIO MEDICINA
APLICACIONESDiagnóstico
Rendimiento de UTILES
Calidad Vacunas
cosechas
de
Salud animalalimentos Terapéutica

Biosensores Cultivo de células y

Bioprocesos tejidos
Ingeniería genética
HERRAMIENTAS BIOTECNOLOGICAS
Antisentido Anticuerpos monoclonales

Ingeniería de proteínas

Bioquímica Biología Celular

Ingeniería Inmunología
Bioquímica CONOCIMIENTO
Computación
CIENTIFICO
Microbiología
Genética
Biología Molecular Fisiología
Nos encontramos frente a
una nueva “Revolución
Industrial” llamada
Biotecnología, no basada
en hierro y acero sino en
microbios que, en manos
de científicos, se convierten
en minúsculas fábricas
para producir fármacos,
compuestos químicos
industriales, combustibles
o alimentos.
El prefijo “BIO” se refiere
a bacterias, levaduras y
otras células vivas, así
como a componentes de
estas células.

La “TECNOLOGIA”
consiste en relucientes
depósitos de acero, llenos
de microbios, conectados
a sus fuentes de
alimentación y oxígeno
mediante una intrincada
red de válvulas que se
cierran y abren según los
ritmos que marca una
computadora.
DEFINICION

Según la Organización de
Cooperación y Desarrollo
Económicos:

Es la aplicación de los
principios científicos y de la
ingeniería al procesamiento
de materiales por agentes
biológicos para proveer
bienes y servicios.
▪ PRINCIPIOS
CIENTIFICOS Y DE LA
INGENIERIA:
▪ Conjunto muy amplio
de disciplinas que
ponen especial
énfasis en la
Microbiología,
Bioquímica, Biología
Molecular, Genética,
Inmunología e
Ingeniería Bioquímica
y Química.
▪ MATERIALES:
▪ Incluye a aquellos
orgánicos e
inorgánicos, en
tanto los agentes
biológicos son, en
general,
catalizadores
biológicos; en
particular,
microorganismos,
células animales,
células vegetales,
virus y enzimas.
▪ BIENES:
▪ Todos los productos
(alimentos, productos
farmacéuticos,
recuperación de metales,
etc.)
▪ SERVICIOS:
▪ Lo relacionado
específicamente con las
prestaciones tales como
purificación de agua o
tratamiento de efluentes y
extracción de derrames de
petróleo.
 AREAS TEMATICAS
PRIORITARIAS

▪ SALUD:
▪ Vacunas (desarrollo de
vacunas por
procedimientos que
utilicen ingeniería
genética).
▪ Reactivos de diagnóstico:
Desarrollo de reactivos
por técnicas
inmunológicas (enzimo-
inmunoensayos o por
ingeniería genética).
AREA AGRICOLA:
▪ Diagnóstico de fitopatógenos en
plantas de interés económico.
▪ Desarrollo de agentes de control
biológico y plantas.
▪ Desarrollo de plantas transgénicas
resistentes a las plagas, enfermedades
y herbicidas. Modificación del
contenido celular en macromoléculas.
▪ Métodos de mejoramiento de especies
a través de técnicas no convencionales.
▪ Aceleración en la obtención de
híbridos.
▪ Utilización de marcadores moleculares.
▪ Identificación y caracterización de
genes de interés.
▪ AREA PECUARIA:
▪ SANIDAD ANIMAL:
▪ Desarrollo de métodos
para el diagnóstico de
enfermedades animales.
▪ Producción de nuevas
vacunas virales,
bacterianas y parasitarias
por técnicas de avanzada.

▪ PRODUCCION ANIMAL:
▪ Manipulación y sexado
de embriones.
▪ Hormonas para el
mejoramiento de la
producción animal.
▪ PRODUCCION DE
INSUMOS INDUSTRIALES:
▪ Mejoramiento y control
de calidad de las
industrias de alimentos,
incluyendo derivados
lácteos, vinos y
cervezas.
▪ Tratamiento biológico
de efluentes.
HISTORIA DE LA
BIOTECNOLOGIA
• 6000 AC: Arte de
fermentar. Los sumerios y
babilonios usaban
levaduras para fabricar
cerveza.
• 4000 AC: Los egipcios
descubrieron la manera
de fermentar pan con la
levadura cervecera.

• Libro del Génesis (9:

20,21): “Noé se dedicó a
la labranza y plantó una
viña. Bebió del vino, se
embriagó…”
• Siglo XIV DC: Destilación de
bebidas alcohólicas. Uso de
bacterias de ácido acético
para fabricar vinagre, de
bacterias de ácido láctico para
conservar la leche (yogur, por
ejemplo).
• Siglo XVII: Anthony von
Leeuwenhoek (1632-1723)
descubre el mundo
microbiano con sus
microscopios primitivos.
• Siglo XIX: El desarrollo
técnico de los microscopios
permite demostrar el origen
de los microbios y vencer la
creencia de la “generación
espontánea”.
Hablando de
“generación
espontánea”, veamos
algunas recetas
interesantes…
Ambroise Paré (1517-1590),
el más célebre cirujano de
su siglo, escribe:
“Hallándome en una viña
de mi propiedad, próxima al
pueblo de Meudon, hice
romper una enorme
cantidad de grandes piedras
sólidas. Dentro de una de
ellas se encontró un grueso
sapo vivo, sin que hubiera
en la piedra la menor
apariencia de abertura…
…Me maravilló el hecho de
que este animal hubiese
podido nacer, crecer y vivir
allí. Pero el cantero me dijo
que no había por qué
asombrarse, pues varias
veces había hallado
animales de ésta y de otras
clases en lo más recóndito
de las piedras, sin que
existiese el menor indicio
de una abertura. Se puede
explicar así el nacimiento y
la vida de estos animales:
son engendrados a partir
de alguna sustancia
húmeda de las piedras,
cuya humedad, al entrar
en putrefacción, produce
Van Helmont (1577-1644), el
más grande fisiólogo de la
época, indica lo siguiente
para la obtención de ratones:
un vaso lleno de trigo se
cubre con una camisa sucia,
preferentemente de mujer.
“Un fermento originado en la
camisa y transformado por el
olor de los granos, convierte
el trigo mismo en ratones.”
Esta metamorfosis dura cerca
de veintiún días, o sea el
tiempo de gestación de ratón
y nuestro naturalista se
asombre de su notable
rapidez…
…”Ello, nos dice, es tanto
más admirable cuanto que
los ratones originados por
el trigo y la camisa no son
pequeños ni lactantes, ni
minúsculos, ni deformes,
sino muy bien formados y
pueden saltar.”
• Francesco Redi (1626-1697):
Médico italiano que
demostró que los gusanos
de la carne son larvas de
mosca y que no aparecen si
la carne se guarda bien
tapada (“fiambrera”).
• Lázaro Spallanzani
(1729-1799): Naturalista
italiano, demostró que los
microbios son
transportados por el aire;
los mismos no invaden los
frascos cerrados
herméticamente.
• Nicolas-Francois Appert
(1750-1841): Desarrolla los
primeros procedimientos de
enlatado.
• Louis Pasteur (1822-1895):
Fue quien sentó las bases de
la futura industria
biotecnológica al demostrar
que todos los procesos de
fermentación eran el
resultado de la actividad
microbiana.
• Edward Buchner (1860-1917):
Descubre, dentro de las
células microbianas, las
sustancias vitales
responsables de todas las
transformaciones químicas:
las enzimas.
Hasta la primera guerra
mundial, apenas progresó
la idea de utilizar bacterias
y levaduras para fabricar
otra cosa que no fuera
alcohol.

Sin embargo, las

restricciones impuestas
durante el conflicto
anunciaron lo que puede
llamarse como “segunda
era biotecnológica.”
• La Guerra Mundial
(1914-1918) supuso
demandas biotecnológicas:
• Proceso Neuberg para
producir glicerol (para
nitroglicerina) mediante la
“fermentación dirigida” de
Saccharomyces cerevisiae.
Agregando álcali y bisulfito
de sodio al depósito de
fermentación alcohólica se
fomentaba la producción
de glicerol.
• Proceso Weizmann, usando
Clostridium acetobutylicum,
para la producción de
disolventes como la
acetona (fabricación de
cordita).
• Los descubrimientos de
Pasteur, Robert Koch
(1843-1910) y Alexander
Fleming (1928)
revolucionaron el
tratamiento de las
enfermedades infecciosas
con el descubrimiento de
los antibióticos.

• Durante la Segunda
Guerra Mundial comienza
la tercera era
biotecnológica, por la
necesidad de contar con
ciertos medicamentos
para que las víctimas no
murieran de sepsis
Puede decirse que la “cuarta
era biotecnológica”
comienza a principios de la
década de 1970, con el
advenimiento de la
Ingeniería Genética.

• El descubrimiento de los
sistemas de restricción y
modificación en bacterias
y la aplicación de las
endonucleasas.
• Los trabajos de Milstein y
Kohler sobre la formación
de hibridomas con la
posterior utilización para
la producción de
anticuerpos monoclonales
Un hito que merece
resaltarse ocurrió en 1982
cuando la compañía Eli
Lilly consiguió la
aprobación de la Food
and Drug Administration
de los Estados Unidos de
Norteamérica para la
utilización de “insulina
humana” clonada y
producida en Escherichia
coli. A esto siguieron los
interferones, hormonas de
crecimiento humana y
bovina, el antígeno de
superficie del virus de la
hepatitis B, etc.
Entrando ya en
tema…
El desarrollo de un
proceso de producción a
gran escala, en forma
exitosa, es el resultado de
acelerar e intensificar un
concepto original,
generalmente un
procedimiento de
laboratorio o a pequeña
escala.
 La actividad de
desarrollo se
concentra en tres
áreas principales:

• Desarrollo de los organismos.

• Desarrollo del medio de

cultivo.

• Ingeniería de fermentación.
EL FERMENTADOR
 DEFINICION OPERATIVA:

• Contenedor en el que se
mantiene un medio
ambiente favorable para la
operación de un proceso
biológico deseado.
En cuanto al biorreactor:
Para cada proceso
biotecnológico, el sistema de
contención más apropiado
debe diseñarse para brindar
el mejor medio ambiente,
optimizado para el
crecimiento celular y
actividad metabólica.
Equipos accesorios.

• Válvulas de seguridad
• Manómetros
• Válvulas de control
• Tuberías
• Control de temperatura
• Control de pH
• Control de espumas
• Puntos de muestreo
 El medio ambiente puede
considerarse en tres
aspectos:

• BIOLOGICO

• QUIMICO

• FISICO
AIREACION Y AGITACION.

La agitación es necesaria
para:
1- incrementar la velocidad
de transferencia de oxígeno
desde las burbujas de aire
al medio líquido; los
microorganismos no
pueden utilizar oxígeno
gaseoso, sino solamente el
que se encuentra en
disolución.
2- aumentar la velocidad
de transferencia de
oxígeno y nutrientes desde
el medio a las células.
Debido al movimiento se
evita que las células creen
áreas estancadas con
bajos niveles de oxígeno y
nutrientes.
3- impedir la formación
de agregados celulares.

4- aumentar la velocidad
de transferencia de
productos metabólicos de
las células al medio.
5- aumentar la tasa o la
eficiencia de la
transferencia de calor
entre el medio y las
superficies de refrigeración
del fermentador.
 Tipos de fermentador:

• Crecimiento en
suspensión.

• Crecimiento con soporte.

En el crecimiento en suspensión,
los organismos están sumergidos y
dispersados en el medio nutritivo y
su movimiento sigue al del medio.

En los sistemas con soporte,los

organismos crecen como una
monocapa o película sobre una
superficie en contacto con un
medio nutritivo.

En la práctica, sin embargo, los

sistemas en suspensión poseen
una película de organismos en la
superficie del contenedor y en
sistemas con soporte,
encontramos organismos
dispersos en el medio nutritivo.
TECNOLOGIA DE
BIOPROCESOS -
FERMENTACION
Las etapas en la manufactura
de productos en la tecnología
de bioprocesos son,
esencialmente, similares
independientemente del
organismo utilizado, del
medio elegido y del producto
buscado.
En todos los ejemplos, se
cultiva gran número de células
en condiciones controladas.

Los organismos deben

cultivarse y “motivarse” para
formar el producto deseado,
mediante un sistema de
contención técnica y física (el
biorreactor) y un medio
correcto en su composición y
parámetros reguladores del
crecimiento, tales como
temperatura y aireación.
PRINCIPIOS DE
CRECIMIENTO
MICROBIANO
El crecimiento de
microorganismos puede
verse como el incremento
en el material celular,
expresado en términos de
masa o número de células.
El incremento en biomasa
puede determinarse
gravimétricamente o
numéricamente para
sistemas unicelulares.
Tiempo de duplicación:
Se refiere al tiempo
requerido para duplicar el
peso de la biomasa.

Tiempo de generación:
Se refiere al tiempo
necesario para duplicar el
número de células.
En un proceso biotecnológico,
existen tres formas de hacer
crecer a los microorganismos en
un biorreactor:
-Por lotes (batch)
-Semi-continuo
-Continuo
 Modos de operación de
los fermentadores:

• Operación por lotes: El

reactor se carga con la
especie reactiva y, a
medida que procede la
reacción, cambian las
condiciones en el reactor al
consumirse los reactivos y
formarse los productos.
Cuando se ha alcanzado el
nivel deseado de reacción,
se vacía el reactor, se
limpia y el proceso se
repite. Son procesos que
no se encuentran en
estado estacionario.
El ambiente nutricional
dentro del biorreactor
cambia en forma continua y,
por lo tanto, fuerza cambios
en el metabolismo celular.
Eventualmente, la
multiplicación celular cesa
por desaparición o
limitación de nutrientes y
acumulación de productos
tóxicos de excreción.
La naturaleza compleja del
crecimiento de
microorganismos por lotes,
se muestra tal como sigue:
La fase 1 o “lag”, es un tiempo
de aparente no crecimiento,
pero estudios bioquímicos
demuestran actividad
metabólica, indicando que las
células están en proceso de
adaptación a las condiciones
ambientales y que un nuevo
crecimiento comenzará,
eventualmente.
Existe, luego, una fase de
aceleración transitoria
cuando el inóculo comienza
a crecer que es seguida,
rápidamente, por una fase
de crecimiento exponencial.
En la fase exponencial, el
crecimiento microbiano
ocurre a la máxima
velocidad posible para ese
microorganismo, con
nutrientes en exceso,
parámetros de crecimiento
ideales y ausencia de
inhibidores.
Sin embargo, en cultivos por
lote, el crecimiento
exponencial es de duración
limitada y, a medida que las
condiciones nutricionales
cambian, la velocidad de
crecimiento disminuye y se
entra en la fase de
deceleración, seguida de la
fase estacionaria, donde el
crecimiento global no se
obtiene, por falta de
nutrientes.
La fase final del ciclo es la
fase de muerte, cuando la
velocidad de crecimiento ha
cesado.
La mayoría de los procesos
biotecnológicos por lotes se
detiene antes de esta fase,
debido a la disminución en el
metabolismo y a la lisis celular.
Algunos medios para prolongar
la vida de un cultivo por lotes:
-Adición gradual de
componentes nutritivos
concentrados (carbohidratos),
aumentando el volumen del
cultivo (utilizado para
producción industrial de
levadura).
-Adición de medio al cultivo
(perfusión) y extracción de un
volumen igual de medio usado,
libre de células (utilizado para
cultivos de células animales).
• Operación continua: Existe
un flujo continuo de
reactivos frescos hacia el
reactor y el producto fluye
continuamente hacia fuera.
En algunos sistemas
continuos el medio
nutriente es inoculado con
el cultivo microbiano al
entrar al reactor y los
organismos llevan a cabo
su actividad a medida que
el líquido fluye a través del
sistema y salen del sistema
junto con el medio.
Los organismos pueden
separarse de la corriente que
lleva al producto y reciclarse
para inocular el líquido de
alimentación.
En un sistema continuo con
mezcla completa, las
condiciones son uniformes en
todo el reactor, en un
equilibrio de mezcla de
nutrientes, organismos y
productos.
La alimentación del sistema
es medio nutriente libre de
organismos y, en algunos
casos, un inóculo de
organismos reciclados.
Esta práctica de cultivo
continuo, provee un
crecimiento casi balanceado,
con pequeña fluctuación de
nutrientes, metabolitos,
número celular o biomasa.
Esto consiste en medio
fresco entrando un sistema
por lotes, en fase de
crecimiento exponencial, con
una remoción
correspondiente de medio
más células.
Este método de cultivo
continuo, permite a los
organismos crecer en
condiciones de estado
estacionario, en las que el
crecimiento ocurre a una
velocidad constante y en un
medio ambiente constante.
En un sistema de cultivo
perfectamente mezclado, se
pasa medio estéril al
biorreactor, a un flujo
constante y una mezcla de
cultivo (medio, productos de
desecho y organismos)
emergen del mismo a la
misma velocidad,
manteniendo el volumen
total del cultivo, dentro del
biorreactor, constante.
Ventajas de un proceso
por lotes:
Las principales son: menor
riesgo de contaminación,
flexibilidad operacional
cuando los fermentadores
se utilizan para distintos
productos, un control más
cercano de la estabilidad
genética del organismo, una
mejor coordinación con
estadios del proceso entre
lotes previos y posteriores.
Desventajas del proceso por
lotes:
La principal es la alta
proporción de tiempo
improductivo en la operación
del fermentador, dificultad de
diseño y la operación de
procesos que no están en
estado estacionario y la
variabilidad entre lotes.
Los fermentadores deben
ser vaciados, limpiados,
esterilizados y recargados
antes de cada fermentación,
operaciones todas
esenciales pero no
productivas.
En procesos por lotes, estas
operaciones pueden tomar
tanto tiempo como la
fermentación misma.
En un proceso continuo,
por el contrario, una
corrida puede durar
semanas o meses, es decir
que el tiempo no
productivo es, en
proporción, pequeño.
 Esterilización:

• Esterilización de
fermentadores.
• En el laboratorio, el
método estándar de
esterilización es el calor:
120ºC de calor húmedo
durante 15 min o 160ºC
de calor seco durante, al
menos, 1 hora. A escala
industrial, el calor seco es
prohibitivamente caro,
salvo en casos muy
especiales y se utiliza,
habitualmente, la
esterilización por calor
húmedo.
• Esterilización del fermentador
y el medio conjuntamente.

• El calentamiento se
consigue mediante:
• Inyección de vapor en
el medio, por lo que el
medio se prepara
ligeramente más
concentrado para
compensar la dilución
por el vapor
condensado.
• El medio se calienta
por conducción,
haciendo pasar vapor
por la camisa de
• Esterilización por separado
del fermentador y el medio.

• Este sistema ofrece

ventajas ya que reduce el
tiempo en el que el
recipiente de
fermentación es
improductivo: un
fermentador vacío se
esteriliza con relativa
rapidez.
Pasos a tener en cuenta:

-Cambio de escala
-Diseño de medios para
procesos de fermentación
-Fermentación en sustratos
sólidos
-Tecnología de cultivos de
células de plantas y
animales
-Procesamiento posterior
de la muestra
 Procesamiento
posterior de la muestra.
Purificación.
El diseño y la operación
eficiente de los procesos de
purificación, son elementos
vitales para obtener los
productos deseados para uso
comercial.
Deberían reflejar la
necesidad de no perder más
que lo absolutamente
necesario del producto final.
Este procesamiento final
involucrará, principalmente,
la separación inicial de la
mezcla de cultivo hacia una
fase líquida y una sólida, con
la subsecuente
concentración y purificación
del producto deseado.
El procesamiento involucrará
más de una etapa:
-Destilación
-Centrifugación
-Filtración
-Ultrafiltración
-Extracción con solventes
-Adsorción
-Tamices moleculares
-Electroforesis
-Cromatografía de afinidad
-Liofilización
 TECNOLOGIA
UTILIZANDO ENZIMAS
La tecnología de enzimas
involucra la producción,
aislamiento, purificación, uso
en forma soluble y, finalmente,
la inmovilización de las
enzimas para su utilización en
gran variedad de biorreactores.
La utilización de sistemas
enzimáticos libres de células,
presenta ventajas respecto
de los procesos químicos
que involucran un número
de reacciones secuenciales.
En fermentación, el uso de
microorganismos como
catalizadores puede
presentar las siguientes
limitaciones:
1. Una alta proporción del
sustrato será utilizada
para convertirse en
biomasa
2. Pueden ocurrir reacciones
secundarias inútiles
3. Las condiciones para el
crecimiento de los
microorganismos pueden
ser diferentes de las
requeridas para la
formación del producto
4. El aislamiento y
purificación del producto
deseado, a partir de la
mezcla de fermentación,
puede ser dificultoso.
INGENIERIA GENETICA
E INGENIERIA
PROTEICA DE ENZIMAS
La utilización de estas
técnicas ha posibilitado
producir enzimas industriales
con muy buena calidad y
pureza.
 Crecimiento de microorganismos
conteniendo la enzima de utilidad

Purificación de Purificación de mARN

la enzima total

Determinación de
la secuencia parcial mARN ADN
de aminoácidos

Síntesis de Clonación del ADN

oligonucleótidos en E. coli

Identificación de clones

Transformación de microorganismos

Producción industrial de enzima

Objetivos en la preparación de
enzimas modificadas:
1. Aumentar la actividad de las
enzimas
2. Mejorar la estabilidad
3. Permitir que funcionen en un
ambiente diferente
4. Cambiar el pH o temperatura
óptimos
5. Cambiar la especificidad para
que utilice un sustrato diferente
6. Cambiar la reacción catalizada
7. Aumentar la eficiencia de un
proceso
 ENZIMAS
INMOVILIZADAS
El uso de enzimas en forma
soluble o libre, debe
considerarse como un posible
derroche dado que, en general,
la enzima no puede
recuperarse al final de la
reacción.
Una nueva área de tecnología
enzimática es la relacionada
con la inmovilización de las
enzimas en polímeros
insolubles, tales como
membranas o partículas,
actuando como portadores de
la actividad enzimática.
Las ventajas de los catalizadores
inmovilizados:
1. Permite el reuso de las enzimas
2. Ideal para operaciones continuas
3. Los productos están libres de enzima
4. Permite un mejor control de los
procesos catalíticos
5. Mejora la estabilidad de las enzimas
6. Permite el desarrollo de sistemas de
reacción multienzimáticos
7. Ofrece un potencial considerable en
uso médico e industrial
8. Reduce los problemas de
tratamiento de efluentes
ESTERILIZACION Y
ESTERILIDAD
La esterilización es el proceso de
conseguir la esterilidad, para la
que no existen grados: un objeto,
superfcie o sustancia es, o no es,
estéril.
Si es estéril no contiene
organismos viables o células
presentes y, si se le protege
contra la contaminación, la
condición estéril permanecerá
indefinidamente.
La desinfección implica que el
material ha sido tratado a fin de
eliminar o reducir el riesgo de
organismos patógenos, pero no
implica que todos los
organismos viables hayan sido
inactivados.
La esterilización se utiliza para:
1. Asegurar que un proceso se
lleva a cabo solamente con
el organismo deseado
2. Permitir la utilización segura
de los productos
3. Evitar la contaminación
ambiental
4. Impedir el deterioro de un
producto
La esterilización se lleva a cabo:
• Eliminando los organismos
viables como en la filtración
• Matándolos de una de las
siguientes formas:
1. Calentando en presencia o
ausencia de agua
2. Irradiando con radiaciones
ultravioleta, gamma o X
3. Tratando con productos
químicos en solución o en
forma gaseosa
Las esporas bacterianas
resisten el calor (termófilas:
200 kPa a 134 oC, 1-10 min,
vapor de agua o calor seco a
180oC, 15 min) y, algunas,
las altas dosis de radiación
(Deinococcus radiodurans:
6000 krad).
La esterilización debe ser
capaz de eliminar las
esporas más resistentes de
las especies más resistentes.
Muerte por calentamiento:
En la esterilización húmeda,
el vapor a presión tiene
dos funciones importantes:
1. Condensándose sobre el
material permite que el
calor se transfiera
rápidamente causando un
aumento rápido de la
temperatura
2. Las propias moléculas de
agua aumentan, o al
menos mantienen el nivel
de hidratación dentro de
la espora.
En la esterilización por calor seco,
el calor es transferido muy
lentamente y la tendencia es
reducir más el nivel de
hidratación y, de esta forma, se
protegen las proteínas de las
esporas.
Las esporas son
considerablemente más
resistentes al calor seco que al
calor húmedo.
Radiación
La radiación ultravioleta no es
muy penetrante y no se
puede confiar en ella como
agente esterilizante, a menos
que se pueda garantizar la
exposición directa del
organismo contaminante.
Los rayos gamma y X son más
útiles debido a su alto poder
de penetración.
 Determinación de la destrucción
de microorganismos:
• Tiempo térmico letal: tiempo
más corto que lleva destruir los
microorganismos a una
temperatura determinada
• Punto térmico letal: temperatura
más baja que se necesita para
matar a los organismos en 10
minutos.
Para ambos se necesita saber el
tamaño inicial de la población y
las condiciones precisas. No son
particularmente útiles.
 Un parámetro más útil es:
• Tiempo de reducción
decimal o valor D: tiempo en
minutos, a una temperatura
determinada, que se requiere
para reducir la población
viable al 10% de su valor
previo.
• Valor-Z: es el cambio de
temperatura que se requiere
para modificar el valor D por
un factor de 10.
 Métodos prácticos:
Calentamiento:
Para comparar las capacidades
relativas de esterilización de los
diferentes procesos de calentamiento,
se requiere una unidad de letalidad.
La unidad escogida es el efecto letal
de un minuto de calentamiento, a la
temperatura de 121 oC.

F = t * 10(T-121)/z
Donde t= tiempo de aplicación del
tratamiento letal; T= temperatura en
o
C y z= aumento de temperatura
requerido para reducir el período de
calentamiento en un 90% (es decir el
valor z).
En la industria alimentaria el
peligro más serio para la salud
es la presencia de Clostridium
botulinum, el formador de
esporas patogénico más
resistente al calor, así como el
agente más tóxico.
En esterilización clínica:
Calor húmedo:
Vapor a 134 oC (30 psi), 3 min
o
Vapor a 126 C (20 psi), 10 min
Vapor a 121 oC (15 psi), 15 min
Vapor a 115 oC (10 psi), 20 min
Como los valores de D para
las esporas son, a 121oC, del
orden de 0,2 min, un tiempo
de mantenimiento de 15 min
de vapor a 121 oC equivale a
75xD, lo que hace la
probabilidad de fallo en
relación a la supervivencia de
C. botulinum casi
imposiblemente remota.
Procesos discontinuos:
Autoclaves:
Todo el aire debe ser
eliminado antes del ciclo de
calentamiento, ya que mezclas
de aire y vapor a una presión
determinada alcanzarán una
temperatura más baja que la
del vapor puro a la misma
presión.
Inyección directa del vapor:
Si se utilizan inyecciones
directas de vapor se debe
tener en cuenta que entre el
10 y el 20% del volumen final
se deberán a condensación.
Mientras la eficiencia térmica
de este proceso es alta, la
fuerte formación de espuma
durante el burbujeo puede
limitar la transferencia del
calor.
Calentamiento indirecto:
Pasando vapor de agua a través
de una espiral de intercambio
de calor o de una camisa. El
calor en este procedimiento es
menos eficiente que por
inyección directa y, en ambos
casos, permanecen los
problemas de enfriamiento,
generalmente conseguido
mediante espirales.
Esterilización por flujo continuo:
En el diseño del equipo deben
considerarse las tres etapas del
ciclo, para conseguir:
1. Un rápido calentamiento
2. Un tiempo de mantenimiento a
la temperatura de esterilización
3. Un rápido enfriamiento
Esterilización por radiaciones:
Normalmente se lleva a cabo
con una fuente de cobalto-60
o de cesio-137.
El efecto letal es siempre
mayor en presencia de
oxígeno y alto contenido en
agua.
La unidad de medida de la
dosis de radiación es el rad,
equivalente a una energía de
absorción de 100 ergs/g de
aire. El Roentgen (R) es 83
ergs/g de aire.
 Esterilización química:
• Formaldehído: solamente
efectivo si se puede
garantizar que entre en
contacto con los organismos
contaminantes. Pobre
difusibilidad y poder de
penetración. Olor picante y
duradero. Solamente en
casos especiales.
• Peróxido de hidrógeno:
poderoso agente oxidante
que mata células vegetativas
y esporas con actividad
creciente con la
concentración, temperatura y
normalmente pH. Sus
productos de degradación
son inocuos.
• Oxido de etileno y de propileno:
pueden utilizarse en forma
gaseosa. El de etileno es más
efectivo pero altamente tóxico,
irritante y violentamente
explosivo en mezclas con aire.
Su efecto letal sobre las
bacterias depende de la
humedad; las condiciones
óptimas incluyen 40-80% de
humedad relativa y
temperatura de 60oC durante
3-4h, para una concentración
de gas de 800-1000 mg/l. El
proceso se utiliza cuando el
equipo puede ser dañado por
altas temperaturas.
 Esterilización por filtración:
• Filtros profundos: capa
relativament gruesa de fibra
de vidrio, algodón, lana
mineral, celulosa moldeados
como planchas, tapones o
cilindros.
• Filtros de pantalla:
membranas hechas de
ésteres de celulosa u otros
polímeros
Evaluación de la eficiencia de
esterilización:
1. Termosensores
2. Tubos de Browne: tubos de vidrio
cerrados con 0,15 ml de un fluido rojo
que cambia a verde al aumentar el
calor
3. Tiras de papel impregnadas con
esporas: bioindicadores. Se incuban
luego del tratamiento para evaluar la
supervivencia
4. Tiras indicadoras: responden al calor
húmedo entre 115-123oC. Indican la
dosis de calor por distancia recorrida
de un colorante azul
5. Cinta adhesiva de autoclave: indica
que el vapor, a un mínimo de 120 oC,
alcanzó la cinta cuyas rayas se tornan
de blancas a negras. No asegura
esterilidad sino que un objeto ha sido
procesado mediante vapor.
Pruebas de eficiencia de filtración:
1. Prueba del azul de metileno: para
distribución de partícula de
0,02-0,2 micrones
2. Prueba del cloruro sódico: para
que haya esterilización, el filtro
debe retener el 99,997%
3. Esporas de Bacillus: rango de
tamaño 0,7-1 micrón
4. Prueba del bacteriófago T3: 0,03
micrones. Un filtro con
penetración de llama de sodio de
0,001% tiene un equivalente de
0,000005% B. Subtilis y de
0,00005% de T3.