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Ficha de Referencia R.A.E

Referencia
Ciudad: Bogotá_________________________________Fecha: 2019 / 06 / 04
Katherine Niño Salinas
Autor Erika Pineda Mateus
Juan Camilo Torres Olarte
Pola Bernate Castro
Título Actividad antimicrobiana del aceite esencial de Cannabis sativa sobre
trabajo Fusobacterium nucleatum. Estudio in vitro.
Asesor Alveiro Tupaz Erira
Nivel de Pregrado de Odontología
Formación
Facultad Facultad de Odontología
Odontología
Programa
Modalidad Presencial
de grado
Título Odontólogo
Obtenido
 Metodología
TIPO DE ESTUDIO: Estudio Experimental In Vitro

CRITERIOS DE INCLUSIÓN:Cepas viables.

CRITERIOS DE EXCLUSIÓN:Crecimiento atípico.

MUESTRA:Fusobacterium nucleatum

HIPÓTESIS: NULA: El aceite esencial de cannabis sativa NO tiene actividad

antimicrobiana sobre Fusobacterium nucleatum.

ALTERNA: El aceite esencial de Cannabis sativa Sí tiene actividad antimicrobiana sobre

Fusobacterium nucleatum.

PROCEDIMIENTO

Fase 1: selección bacteriana y del aceite esencial.

-Selección de la cepa bacteriana: Fusobacterium nucleatum

-Selección del aceite. Aceite Esencial de Cannabis sativa

Fase 2: Preparación de la solución de trabajo y dilución en diferentes concentraciones

Se realizó una solución de trabajo con el extracto puro de Cannabis sativa, ya que por
sus características viscosas y resinosas fue imposible tomar las cantidades necesarias
con la pipeta para realizar las diferentes diluciones con exactitud. Para esto se realizó
una dilución del extracto en agua destilada y tween 1:1:1, obteniendo un volumen final
de 300 µl; posteriormente, se procedió a realizar las diluciones de trabajo al 20,40, 60,
80 y 100% en agua destilada.

Fase 3: Activación bacteriana.

La cepa se encontraba conservada a -20°C en suspensión de leche descremada, se

procedió a descongelarla tomando un volumen de 100 µl, y fueron inoculadas en agar
sangre suplementado con hemina y menadiona, utilizando la técnica de siembra masiva.
Luego se incubaron a 37°C por cinco días en condiciones de anaerobiosis,
posteriormente se tomó una UFC y se realizó un pase de siembra por técnica de rejilla,
en agar Wilkins Chalgren suplementado con hemina y menadiona, se incubaron a 37°C
por cinco días en condiciones de anaerobiosis.

Se tomaron 3-5 UFC de una caja previamente sembrada, con asa bacteriológica para
ser solubilizadas en caldo tioglicolato, y así alcanzar una concentración MacFarland 1
(3x108 células/mililitro).

Se depositó el inoculo y se sembró sobre las superficies de agar Wilkins Chalgren

suplementado con hemina y menadiona, seguido a esto se realizaron pozos sobre la
superficie del agar con un sacabocados estéril de 6mm de diámetro y en cada uno de
ellos se depositaron 20 µl de las diluciones del extracto puro de Cannabis sativa al
20,40,60,80,100% respectivamente, Clorhexidina al 0,2% (control positivo) y agua con
Tween 20 (control negativo), cada uno de estos ensayos se realizaron por triplicado, y
se procedió a incubar por 24 horas a 37°C, posteriormente se midieron los halos de
inhibición.

RECOLECCIÓN Y ANÁLISIS ESTADÍSTICO DE LA INFORMACIÓN.

Los datos obtenidos fueron registrados en la base de datos realizada en Excel llamada
resultados Cannabis Sativa. Los análisis fueron realizados por medidas de tendencia
central, medidas de dispersión y T de Student.

Objetivos

OBJETIVO GENERAL
Determinar la actividad antimicrobiana del aceite esencial de Cannabis sativa sobre
Fusobacterium nucleatum.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS
Establecer la concentración mínima inhibitoria del aceite esencial de Cannabis Sativa
sobre Fusobacterium nucleatum.
Comparar la actividad antimicrobiana del aceite esencial de Cannabis Sativa versus la
clorhexidina al 0.2 % sobre Fusobacterium nucleatum.

Tabla de contenido

TABLA DE CONTENIDO

GLOSARIO .............................................................. Error! Bookmark not defined.

INTRODUCCIÓN ..................................................... Error! Bookmark not defined.
1 CONTEXTO DE LA INVESTIGACIÓN .............. Error! Bookmark not defined.
1.1 PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA DE INVESTIGACIÓN.Error! Bookmark
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1.2 MARCO TEÓRICO ..................................... Error! Bookmark not defined.
1.3 MARCO REFERENCIAL ............................ Error! Bookmark not defined.
1.4 JUSTIFICACIÓN ........................................ Error! Bookmark not defined.
1.5 OBJETIVOS ............................................... Error! Bookmark not defined.
1.5.1 OBJETIVO GENERAL ......................... Error! Bookmark not defined.
1.5.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS ................ Error! Bookmark not defined.
2 MÉTODO .......................................................... Error! Bookmark not defined.
2.1 TIPO DE ESTUDIO .................................... Error! Bookmark not defined.
2.2 CRITERIOS DE INCLUSIÓN...................... Error! Bookmark not defined.
2.3 CRITERIOS DE EXCLUSIÓN .................... Error! Bookmark not defined.
2.4 MUESTRA .................................................. Error! Bookmark not defined.
2.5 OPERACIONALIZACIÓN DE VARIABLES Error! Bookmark not defined.
2.6 HIPÓTESIS ................................................ Error! Bookmark not defined.
2.7 PROCEDIMIENTO ..................................... Error! Bookmark not defined.
2.8 RECOLECCIÓN Y ANÁLISIS ESTADÍSTICO DE LA INFORMACIÓN.Error!
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2.9 ASPECTOS ÉTICOS .................................. Error! Bookmark not defined.
3 RESULTADOS .................................................. Error! Bookmark not defined.
4 DISCUSIÓN ...................................................... Error! Bookmark not defined.
5 CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES .... Error! Bookmark not defined.
REFERENCIAS
ANEXOS
Anexo 1. Protocolo cultivo bacteriano

Resumen
La enfermedad periodontal es una patología multifactorial que afectan los tejidos del periodonto
(encía, ligamento periodontal, cemento radicular y hueso), su primera manifestación es la
gingivitis la cual progresivamente produce periodontitis. Como alternativas de tratamiento para
esta enfermedad se han utilizado co-ayudantes de tipo natural, específicamente aceites
esenciales, ya que estos demuestran menos efectos colaterales, como lo presenta la
clorhexidina. El objetivo de este estudio es determinar la actividad antimicrobiana del aceite
esencial de Cannabis sativa sobre Fusobacterium nucleatum. El aceite esencial de cannabis
sativa demuestra tener actividad antimicrobiana en cepas gram-positivas y gram-negativas, se
tomó fusobacterium nucleatum para cultivarla en medio de agar sangre suplementado con
hemina y menadiona, utilizando la técnica de siembra masiva, luego se incubaron a 37°C por
cinco días en condiciones de anaerobiosis por 5 días. Posterior a esto se realizó un pase de
siembra para luego alcanzar concentración McFarland 1, se procedió a realizar la siembra en
cajas Petri. Se depositaron 20 μl de Cannabis sativa al 20,40,60,80,100%, clorhexidina al
0.2%(control positivo), tween20 y agua (control negativo) en cada una de las cajas sembradas.
Cada uno de estos ensayos se realizó por triplicado. Resultados: no fue posible determinar la
concentración mínima inhibitoria ya que no se obtuvo resultados a las concentraciones del 20,
40, 60,80% de cannabis sativa, solo se obtuvo resultados de cannabis sativa al 100% con un
halo de inhibición promedio de 4.2mm ±0.85, la clorhexidina al 0.2% presentó un halo de
inhibición promedio de 4.6mm±0.65 y el control negativo o generó ningún tipo de resultados. Al
comprar cannabis sativa al 100% Vs la clorhexidina al 0.2% las diferencias no fueron
estadísticamente significativas (p=0.50). con todo esto se pudo concluir que el aceite esencial
de Cannabis sativa si tiene actividad antimicrobiana sobre Fusobacterium nucleatum y esta es
similar a la presentada por la clorhexidina al 0.2%
 Abstract
Periodontal disease is a multifactorial pathology affecting the tissues of the periodontium
(gingiva, periodontal ligament, root cement and bone). Its first manifestation is gingivitis,
which progressively produces periodontitis. As alternative treatments for this disease,
natural co-helpers, specifically essential oils, have been used, since they show less side
effects, as chlorhexidine does. The objective of this study is to determine the
antimicrobial activity of the essential oil of Cannabis sativa on Fusobacterium nucleatum.
The essential oil of cannabis sativa demonstrates to have antimicrobial activity in gram-
positive and gram-negative strains, fusobacterium nucleatum was taken to cultivate it in
blood agar medium supplemented with hemin and menadione, using the technique of
massive sowing, then incubated at 37 ° C for five days in conditions of anaerobiosis for
5 days. After this, a sowing pass was made to reach McFarland 1 concentration, then
sowing in Petri dishes was carried out. 20 μl of Cannabis sativa was deposited at
20,40,60,80,100%, 0.2% chlorhexidine (positive control), tween20 and water (negative
control) in each of the boxes sown. Each of these tests was performed in triplicate.
Results: it was not possible to determine the minimum inhibitory concentration since no
results were obtained at concentrations of 20, 40, 60.80% of cannabis sativa, only results
of 100% cannabis sativa with an average inhibition halo of 4.2 were obtained. mm ± 0.85,
0.2% chlorhexidine had an average inhibition halo of 4.6mm ± 0.65 and negative control
or generated no results. When buying cannabis sativa 100% Vs chlorhexidine 0.2% the
differences were not statistically significant (p = 0.50). with all this it was possible to
conclude that the essential oil of Cannabis sativa does have antimicrobial activity on
Fusobacterium nucleatum and this is similar to that presented by chlorhexidine at 0.2%

Descriptores / Palabras Claves

gingivitis, periodontitis, co-ayudantes, aceites esenciales, Cannabis sativa, Fusobacterium
nucleatum.

Conclusiones
El aceite esencial de Cannabis Sativa si presenta actividad antimicrobiana sobre
Fusobacterium nucleatum al 100%

La actividad antimicrobiana de Cannabis sativa al 100% es similar al de la clorhexidina

al 0,2%.

La mezcla de tween 20 y agua como diluyente inhibe las propiedades antimicrobianas

de cannabis sativa sobre Fusobacterium nucleatum.
 Cita Bibliográfica
Niño, K., Pineda, E., Torres, J., Bernate, P.(2019) Actividad antimicrobiana del aceite
esencial de Cannabis sativa sobre Fusobacterium nucleatum. Estudio in vitro.1-33

Firma(s) Autor(es)

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