Guia Laboratorio QUIM225L-2019 - 2

Universidad Andrés Bello
Facultad de Ciencias Exactas

Departamento de Ciencias Químicas
QUÍMICA ANALÍTICA E INSTRUMENTAL

(QUIM225)
MANUAL DE LABORATORIO
Carrera: Ingeniería en Biotecnología

Bioquímica
Manual de Laboratorio “Química Analítica e Instrumental” QUIM225
Reglamento de Laboratorio
1. El alumno deberá presentarse puntualmente a la hora de inicio del laboratorio.
2. Durante el desarrollo del práctico, es obligatorio el uso del delantal y gafas de seguridad.
3. Es obligación del alumno realizar el total de los laboratorios programados. Sólo se podrá recuperar
1 (uno) laboratorio siempre y cuando la inasistencia sea debidamente justificada, mediante un
certificado médico a través de la Dirección del Departamento de Ciencias Químicas, dentro de las
72 horas siguientes a la ausencia del práctico.
La falta del práctico sin justificar A TIEMPO o la ausencia de más de una práctica significa
automáticamente un 1.0 en las evaluaciones de control e informe.
4. El alumno es responsable de la destrucción de cualquier material de laboratorio y deberá

reponerlo.
5. Como norma de seguridad, los alumnos dejarán sus pertenencias en los casilleros con candado
que se encuentran en el exterior del laboratorio. Por ningún motivo dentro del laboratorio o sobre los
mesones de trabajo.
6. Frente al uso de algún reactivo, el alumno debe tomar las precauciones indicadas por el profesor
y/o ayudante, como asimismo las señaladas por el fabricante. Ante cualquier duda, más vale
preguntar.
7. Se dispondrá de recipientes para los deshechos. ÚSELOS
8. Se recomienda el uso del cuaderno de laboratorio ya que le ayudara a recopilar toda la información
realizada en el laboratorio para posteriormente elaborar el informe que se entregará la semana
siguiente al laboratorio, el cual será evaluado.
9. La no entrega oportuna del informe será calificada con la nota mínima y significará reprobar el
correspondiente práctico.
10. Evaluaciones y ponderaciones se detallan a continuación:
Controles Laboratorio Semanales (CLS): (60 %)

Informes de Laboratorio (I): (40%)
Nota Presentación: (CLS* 0.60 + I*0.40)
Departamento de Ciencias Químicas, Facultad de Ciencias Exactas 2

FORMATO DE INFORME FINAL DE RESULTADOS PARA QUIM-225

(LABORATORIO DE QUÍMICA ANALÍTICA E INSTRUMENTAL)
La letra a usar en el Informe Final debe ser Arial o Time New Roman 12 con interlineado
simple en hoja tamaño carta.
1. PORTADA:
i. Nombre de la actividad de Laboratorio.
ii. Nombre de los autores y número de grupo de trabajo.
2. DIAGRAMA EXPERIMENTAL (5 puntos)

Realice un diagrama de bloques que resuma el trabajo experimental realizado
2. RESULTADOS (15 Puntos)

i. Resumen completo de los datos de pesadas, volúmenes y respuesta del instrumento,
necesarios para calcular los resultados.
ii. Cálculos, ejemplos de cálculos y tratamiento de error.
iii. Debe incluir las ecuaciones químicas de las reacciones del análisis, así como también las
ecuaciones algebraicas que muestren como se calcularon los resultados.
iv. Presentación de datos: tablas, figuras, gráficos, etc.
Nota: Los gráficos y tabla de resultados, deben contextualizarse, por lo que deben incluirse el texto
necesario para entender en la secuencia lógica los resultados y cálculos obtenidos.
3. DISCUSIÓN (15 Puntos)

i. Se deben colocar las reflexiones de los resultados obtenidos basados en el trabajo práctico
y en los resultados obtenidos. Estas reflexiones deben ser apoyadas por bibliografía.
ii. Un resumen de las observaciones que apoyen la validez de un resultado en particular o del
análisis total.
iii. La bibliografía debe seguir formato APA, y debe colocarse de manera adecuada para apoyar
la discusión.
4. CONCLUSIONES (5 Puntos)
i) Escribir claramente las conclusiones, en forma detallada, que se obtienen a partir de la experiencia
realizada en base a los objetivos del trabajo práctico.
Bibliografía Recomendada:
1. D. Skoog, F, Holler, T. Nieman. “Principios de Análisis Instrumental”; 5a Edición,

Editorial Mc Graw-Hill.
2. D. Harvey, “Química analítica Moderna” Editorial Mc Graw-Hill.
3. K. Rubinson y J. Rubinson, “Análisis Instrumental”. Editorial Prentice Hall.
4. Páginas Web, con fecha y hora de visita. Solo si tienen una editorial asociada.
Escala de puntajes:

Laboratorio 1
Determinación potenciométrica de la concentración en una disolución de H3PO4 y de fosfatos

en una bebida cola
Objetivos
1. Conocer algunos conceptos teóricos, procedimientos y lenguaje para la medición de pH.
2. Aprender el uso, cuidado y calibración de un electrodo medidor de pH.
3. Construir una curva de titulación experimental para la determinación de la concentración de
H3PO4, por valoración potenciométrica.
4. Determinar de la concentración de H3PO4, en una bebida cola por valoración potenciométrica
Introducción
Los métodos potenciométricos de análisis se basan en las medidas del potencial de las
celdas electroquímicas en ausencia de corrientes apreciables. Desde hace mucho tiempo las
técnicas potenciométricas se han utilizado para la detección de puntos finales en métodos
volumétricos de análisis.
El equipo requerido para los métodos potenciométricos incluye un electrodo de referencia,
un electrodo indicador y un dispositivo para medir el potencial.
El potencial de un electrodo indicador adecuado se puede utilizar para establecer el punto
de equivalencia de una valoración (valoración potenciométrica). El punto final potenciométrico es
ampliamente aplicable y proporciona datos más precisos que los métodos que utilizan indicadores.
Este tipo de valoraciones es muy útil en la valoración de soluciones coloreadas, turbias y para
detectar la presencia de especies insospechadas en solución.
La utilidad del pH como una medida de la acidez o basicidad de un medio acuoso y la amplia
disponibilidad de electrodos indicadores de pH (electrodos de vidrio), han hecho que las medidas
potenciométricas sean una de las medidas más utilizadas en el análisis químico.
Parte experimental
Materiales y reactivos:
ü Bureta graduada de 25 mL
ü pH metro
ü Agitador magnético
ü Barra magnética
ü Pipeta aforada de 10 mL
ü Matraz aforado de 100 mL
ü Probeta graduada de 100 mL
ü Vaso de precipitados de 150 mL
ü Pizeta con agua destilada
ü Solución de NaOH 0.1 mol/L, estandarizada previamente
ü Buffer estándares (pH 4 y 7)
ü Muestra problema (H3PO4)
ü Muestra problema (bebida cola)
Procedimiento experimental
Parte A: Determinación potenciométrica de la concentración en una disolución de H3PO4

1. Calibre el medidor de pH con soluciones buffer estándares (pH 7 y 4). Lave y seque el electrodo
cuidadosamente cada vez que cambie de solución.
2. Mida exactamente 10 mL de H3PO4 y viértala en un matraz de 100 mL, lleve con agua destilada
al volumen total.
3. Tome una alícuota de 10 mL de la solución preparada y viértala en el vaso precipitado de 150 mL.
Añada 75 mL de agua destilada. Introduzca la barra magnética e instale el vaso sobre el agitador
magnético. Agite suavemente. Sumerja el electrodo en la solución.

4. Anote el pH inicial. Valore con la solución de NaOH que se halla en la bureta graduada adicionando
0.5 mL cada vez, anote el valor de pH después de cada adición. Continúe hasta pH 12. Tabule
volumen de NaOH versus pH.
5. Grafique pH versus Volumen (en mL) de solución de NaOH y determine en forma aproximada el
punto de equivalencia de la solución.
6. Repita la valoración
7. Construya una tabla que incluya: pH (o E), DpH/DV, D2pH/DV2 y Volumen de NaOH (mL).
8. Grafique cada conjunto de datos versus volumen de NaOH agregado.
9. Calcule el volumen final (punto final) para la muestra.
10. Determine gráficamente el volumen del punto final. Grafico 2º derivada.
11. Con todos los datos obtenidos calcular la concentración del ácido problema en: g de ácido
fosfórico en los 100 mL de solución.
12. Calcule el valor de pKa1, Ka1, pKa2 y Ka2 del H3PO4.
13. Establezca los equilibrios involucrados.
Parte B: Determinación potenciométrica de la concentración de H3PO4 en bebida

1. Mida 25,0 mL de bebida cola desgasificada, y viértala en un vaso de 400 mL.
1. Sumerja el electrodo de vidrio combinado, cerciórese que quede sumergido el contacto del
electrodo de referencia externo. Mida el pH inicial.
2. Agregue porciones de 0,5 mL de NaOH 0,05M, anotando el pH después de cada adición. Titule
hasta pH = 10,0 aproximadamente.
3. Repita con otra alícuota de 25,0 mL de bebida previamente desgasada.
4. Determine la concentración de fosfato (mg/L) en la bebida cola sin gas.

Laboratorio 2
Determinación potenciométrica iones fluoruro usando un electrodo selectivo de iones (ISE)

Determinación conductométrica de acetoaminofen en muestras farmacéutica
Objetivos
1. Conocer el manejo, mantenimiento y aplicaciones de electrodos selectivos de iones, ISE.
2. Construir curvas de calibración típica aplicables en potenciometría directa.
3. Se analizarán muestras de enjuagatorio bucal para la determinación de ion fluoruro.
Introducción
Electrodo selectivo de iones
Los Electrodos Selectivos de Iones (ISE, por sus siglas en inglés) son dispositivos relativamente
simples y económicos que, al sumergirse en una solución, desarrollan un potencial eléctrico cuya
magnitud depende selectivamente de la concentración (en rigor, de la actividad) de un tipo de ión en
particular, aún en presencia de otros iones en la solución.
Cuando este electrodo selectivo es utilizado conjuntamente con un electrodo de referencia, se forma
una celda electroquímica cuyo potencial permite conocer la actividad de este ión particular realizando
una calibración apropiada.
El electrodo selectivo de fluoruro quizás sea el electrodo de estado sólido más común, está basado
en la utilización de un cristal de fluoruro de lantano impurificado con europio (II). En este caso, la
impurificación (o dopaje) consiste en añadir pequeñas cantidades de Eu(II) en vez de La(III). La
solución de relleno interna del electrodo consiste en NaF y NaCl 0.1M. Su fundamento consiste en
que el ión fluoruro en solución está selectivamente absorbido en las dos caras del cristal; por lo que
los iones F- pueden moverse a través del cristal de LaF3. Al impurificar el LaF3 con EuF2 se producen
lagunas reticulares de aniones en el cristal. Esto provoca que un ión F- de un sitio adyacente a un
hueco pueda saltar a éste, dejando a su vez un nuevo hueco en el sitio que ocupaba. Así el fluoruro
puede migrar de un lado a otro de la membrana y establecer una diferencia de potencial entre las
caras del cristal, necesaria para el funcionamiento del electrodo. La respuesta del electrodo de ión
F- viene dado por la ecuación:
Eind =K −0.059log (F-)
Esta respuesta es casi Nernstiana (cumple la ecuación de Nernst) para un intervalo de

concentración comprendido entre aproximadamente 10-6 y 1 M. Es importante que el pH sea
controlado ya que a pH menores de 5 se forma HF o HF2- los cuales no pueden ser detectados por
el electrodo. Se utiliza un amortiguador de fuerza iónica (TISAB) para ajustar la fuerza iónica y el pH
(± 5) de las muestras y patrones a un mismo valor.
Valoración Conductométrica
La conductividad es el recíproco de la resistencia y sus unidades más comunes son Ohms y
Siemens. Las determinaciones de la conductividad reciben el nombre de determinación
conductométricas. La conductancia de una solución varía con el número, tamaño y carga de los
iones y con algunas características del solvente, como la viscosidad.
Además, depende del área (A) y la distancia (l) de las placas, es decir, depende del electrodo (o
celda) que se esté utilizando. Así, para independizar la medida de conductancia de estas variables,
se debe determinar previamente la constante de la celda (Θ = distancia/área), la cual es específica
para cada electrodo. Es posible que a través del tiempo, el área o la distancia de las placas varíen,
por lo que se recomienda verificar el valor de esta constante cada cierto tiempo.
Para determinar la constante de la celda generalmente se mide la conductancia a soluciones de KCl
patrón de concentración exactamente conocida, se degasifican y se termostatizan a 25ºC. Luego se
busca en tablas la conductividad específica (k) de estas soluciones y se calcula:
Θ = Conductividad específica (k, ohms/ cm)

Conductividad medida (L, ohms)

La medida de conductividad puede ser útil en la

detección del punto final de una valoración, ya que la
variación de las concentraciones de las diferentes
especies portadoras de carga presentes en la
solución analito se traduce en variación en la
conductividad de la disolución. Si en el punto de
equivalencia se producen cambios marcados en la
conductividad del medio, esto puede ser aprovechado
para detectar el punto final de la valoración
graficando: Conductividad vs Volumen de titulante
agregado.
La figura 1 muestra la valoración de un ácido débil,
solución de paracetamol (acetaminofeno o para-
acetil-aminofenol, pKa = 9.5), con base fuerte (NaOH 0.1 mol/L).
Esta aplicación es un caso típico de valoración conductimétrica de

un ácido muy débil con una base fuerte.
La fórmula química del acetaminofeno, paracetamol, es:
La reacción de valoración es:
CH3CONHC6H6OH + Na+ + OH- ¾® CH3CONHC6H6O- + Na+ + H2O
En el primer tramo los iones OH-, base muy fuerte, desplazan los protones del grupo ácido OH del
para-acetil-aminofenol, formando H2O más la sal sódica del acetaminofeno que presenta muy baja
conductancia. Ésta produce entonces un suave aumento de conductancia en la zona previa al punto
final de la valoración. Una vez neutralizado el acetaminofeno, las siguientes adiciones de NaOH
libres producen un rápido aumento de la conductancia produciendo un claro cambio de pendiente
que permite determinar un punto final confiable, por extrapolación.
En las valoraciones conductométricas no importan los valores absolutos de la conductividad, ya que
éstos desplazan la curva en el eje Y, sin que esto afecte el volumen del punto de equivalencia, eje
X. Lo que sí es indispensable es realizar la corrección por la dilución:
(𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛'2'"'34 + 𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛3&$%&3(# )
𝑙"#$$%&'(# = 𝑙*%('(#
𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛'2'"'34
Parte experimental
A) Materiales y reactivo. Determinación de Fluoruro.
ü Medidor de pH capacitado para mediciones con electrodos selectivos de iones (Ionómetro)
ü Electrodo específico de ion fluoruro
ü Electrodo de referencia Ag/AgCl de doble puente salino (solución de relleno externa: KNO3)
ü Agitador magnético, barrita magnética y extractor
ü Pipeta volumétrica de 25 mL
ü Matraces aforados de 50 mL
ü Vasitos plásticos desechables de 50 mL
ü Solución stock patrón de F- de 100 ppm (preparada a partir de NaF p.a. seco)
ü Amortiguador de ajuste de fuerza iónica (TISAB).
A) Procedimiento experimental
1. Dependiendo del nivel de la concentración esperable en la muestra, prepare una curva de
calibración para ion fluoruro (el tramo de concentraciones puede variar).

2. Para la determinación en un tramo diluido prepare 250 mL de una solución patrón de F- de 10

ppm por dilución de la solución estándar de 100 ppm y a partir de ésta prepare un conjunto de
matraces con soluciones patrón que contengan 0.4, 1.0, 2.0, 4.0 y 5.0 ppm de F-. Utilice matraces
aforados de 50 mL a los que se añaden 25 mL de solución TISAB.
3. Las muestras también deben contener la proporción correspondiente de TISAB (50%).
4. Después de enjuagar bien introduzca los electrodos en el estándar de 5.0 ppm (vaso plástico),
agite durante 3 - 5 minutos hasta alcanzar un valor de equilibrio, registre el potencial. Repita con los
estándares restantes y con la muestra.
5. Trace un gráfico de potencial versus log concentración de los estándares. Determine la ecuación
y el coeficiente de regresión. (Analice la ecuación).
6. Utilice esta ecuación para determinar la concentración en ppm de F- en la muestra problema (esta
concentración deberá ser corregida por la dilución que ha sufrido la muestra por efecto del TISAB).
7. Haga repeticiones para la determinación de la muestra (3 muestras)
Parte experimental. Determinación de paracetamol.

Materiales y reactivos.
ü Conductímetro
ü Agitador magnético
ü Barra magnética
ü Balanza analítica
ü Pipeta volumétrica de 5 mL
ü Solución de NaOH 0.1 mol/L, estandarizada previamente
ü Muestra Problema: Paracetamol en jarabe (100 mg/5 mL)
1. Mida exactamente 5 mL del jarabe de paracetamol, viértalo en un matraz de 50 mL y lleve con
agua destilada a volumen.
2. Coloque los 50 mL de la solución problema diluida en el vaso de valoración de 100 mL.
3. Inserte la barra magnética en el vaso de titulación e instale el vaso sobre el agitador magnético.
Coloque la celda de conductividad de modo que quede totalmente sumergida.
4. Ajuste la velocidad de la agitación de forma tal que no produzca turbulencias.
5. Encienda el equipo. Con ayuda de su profesor seleccione la escala apropiada en μmhos.
6. Cargue la bureta con la solución de NaOH. Espere la estabilización de la lectura del conductímetro
y anote el valor de la lectura inicial de conductancia.
7. Agregue alícuotas de 0.5 mL de la solución titulante. Después de cada adición espere la
estabilización de la lectura del conductímetro, anote el volumen agregado y su correspondiente
lectura de conductancia.
8. Tabule conductancia versus volumen de titulante en mL. Continúe la valoración adicionando
alícuotas de 0.5 mL hasta completar 15.0 mL.
9. Retire la celda y lave los electrodos. Valore una nueva alícuota de 50 mL de la solución problema
diluida, pero antes de titular agregue 2 mL de NH3 concentrado. Agregue alícuotas de 0.5 mL de la
solución titulante hasta completar 15.0 mL.
10. Grafique Conductancia corregida versus Volumen de NaOH añadido. Defina los puntos de
equivalencia de forma gráfica.
11. Calcule el contenido de paracetamol en la muestra original, expresándolo como mg de
paracetamol en 5 mL del jarabe.

Laboratorio 3
Determinación de ácido acetilsalicílico por Espectrofotometría Ultravioleta
Objetivos
1. Establecer el espectro de absorción del ácido acetilsalicílico (AAS) en NaOH 0,05 mol/L.
2. Determinar el intervalo de respuesta lineal en una curva de calibración de AAS en NaOH 0,05
mol/L.
3. Determinar la concentración de ácido acetilsalicílico en una muestra problema.
Introducción
La espectrofotometría o espectroscopía ultravioleta es aplicable al análisis de analitos que absorban
radiación electromagnética en longitudes de onda correspondientes a la región ultravioleta,
aproximadamente entre 180 y 350 nm. La mayoría de los analitos que presentan la propiedad de
absorber en la región ultravioleta son moléculas con dobles enlaces y reciben el nombre de
cromóforos.
Parte experimental
Materiales y reactivos
ü Espectrofotómetro UV-Vis
ü Cubetas de cuarzo 1 cm de paso óptico
ü Pipeta aforada de 2 mL
ü NaOH 0.05 mol/L
ü Ácido acetilsalicílico patrón
ü Muestra problema (diferentes tipos de aspirinas)
ü Mortero
ü Estufa
ü Pesa sales
ü Desecadora
ü Balanza analítica
ü Papel filtro
ü Embudo
Procedimiento Experimental
Preparación de la muestra problema

1. Pese una tableta de aspirina en balanza analítica.
2. Pulverice la tableta en el mortero y pese exactamente alrededor de 175 mg de muestra y
disuélvalos en NaOH 0.05 mol/L, luego filtre el volumen total directamente en un matraz de aforo de
25 mL. Una vez preparada esta solución, se toman 2 mL y se llevan a un matraz de aforo de 50 mL,
luego tome 5 mL de la solución y se llevan a 25 mL. Afore todas las soluciones con NaOH 0,05 mol/L.
3. Repita el procedimiento de preparación de muestra problema.
Preparación de la curva de calibración:

1. Utilice una solución estándar de ácido acetilsalicílico (1.0 x 10-3 mol/L) para preparar 5 soluciones,
en un rango de 7.0 x 10-4 a 2.0 x 10-5 mol/L, utilizando NaOH 0.05 mol/L como disolvente en un
volumen de 25 mL.

Tabla 1.- Preparación de soluciones de curva de calibración
N° solución Concentración (*10-4) mol/L Volumen (mL)

1 7,0
2 4,0
3 1,0
4 0,6
5 0,2
2. Calibre el instrumento según instrucciones. Use el disolvente con el que preparó las soluciones
como blanco.
3. Tome la solución 3 y determine la longitud de onda máxima del ácido acetilsalicílico en el
disolvente utilizado. Para ello mida la absorbancia de la solución entre 200 y 400 nm con un intervalo
de 1 nm.
4. Grafique Absorbancia vs Longitud de onda.
5. Determine gráficamente la longitud de onda máxima del ácido acetilsalicílico.
6. Determine la absorbancia de cada una de las soluciones preparadas a la longitud de onda
máxima.
7. Grafique Absorbancia vs Concentración.
8. Determine la concentración de la muestra problema.
9. Compare la longitud de onda máxima encontrada con la longitud de onda del ácido acetilsalicílico
informada en bibliografía.
10. Exprese sus resultados en base húmeda
11. Exprese sus resultados en base a la muestra real (tableta, mg de ácido acetilsalicílico).
12. Compare los valores de la concentración de su muestra problema, obtenidos desde la curva de
calibración y el valor dado por el fabricante.

Laboratorio 4
Determinación de la concentración de Cobre por Espectrofotometría de Absorción Atómica

Objetivos
1. Conocer el funcionamiento de un equipo de absorción atómica.
2. Determinar la concentración de Cobre en una muestra.
3. Analizar los métodos de curva de calibración y de adición estándar.
Introducción
La característica especial de la Espectroscopía de Absorción Atómica, (EAA) es que la muestra debe
atomizarse. Esto se hace normalmente con una llama, horno calentado eléctricamente o un plasma
de radiofrecuencia. La sensibilidad y los efectos de interferencia que se observan en la
espectroscopia de Absorción Atómica dependen de los detalles del método de calentamiento.
En la atomización de la muestra mediante una llama la combinación más común de combustible y
oxidante es acetileno/aire. Cuando se requiere de mayor temperatura puede utilizarse una
combinación de acetileno/óxido nitroso. Los hornos calentados eléctricamente (hornos de grafito)
presentan una mayor sensibilidad y necesitan un menor volumen de muestra.
La medición de Absorbancia en espectroscopia de Absorción Atómica se rige por la Ley de Beer.
Aunque en la práctica a menudo se encuentran desviaciones de la linealidad, esto no constituye un
obstáculo para trabajar con curvas de calibración empíricas.
Cuando no es posible eliminar las interferencias de matriz se puede utilizar el método de adición
estándar, técnica que permite trabajar en presencia de un interferente, realizando una determinación
correcta del analito. Con esta técnica es posible determinar más de 60 elementos.
Parte experimental
Materiales y Reactivos
Equipo de Absorción Atómica
Estándar de Cu de 1000 ppm
Ácido nítrico al 5% v/v
Matraces aforados de 50 y 100 mL
Matraz Erlenmeyer 250 mL
Pipeta de 10 mL
Pizeta
Propipeta
Muestra problema de Cu, Agua potable
Procedimiento
A partir de la solución de 1000 ppm, diluya apropiadamente para realizar una curva de calibrado.
Recuerde que el solvente de dilución es HNO3 5%
N° solución Concentración ppm (mg/L) Volumen (mL)

1 1
2 2
3 4
4 6
5 8
6 10
Mida la cada estándar en las condiciones para cobre

Para la muestra problema, tome una moneda de $10 y con HNO3 concentrado (10 mL) en un matraz
Erlenmeyer. Coloque la muestra en la campana y caliente hasta disolución completa de la moneda.
Enfrie la solución y enrase a 100 mL. Diluya apropiadamente (aprox 10000 veces). La solución diluida
mídala en AA y determine el contenido de cobre en la muestra.

Laboratorio 5
Determinación de parámetros cromatográficos por HPLC. Ecuación de Van Deemter

Separación de Aminoácidos por Cromatografía en Capa Fina
Objetivos
1. Conocer la técnica de cromatografía en capa fina, sus características y factores que en ella
intervienen.
2. Deducir, mediante los valores de Rf, la relación que existe entre la polaridad de las sustancias que
se analizan y la de los eluyentes utilizados.
3. Aplicar la técnica de Cromatografía de Capa Fina (TLC) como criterio parcial de identificación de
sustancias.
4. Determinar la composición cualitativa de una muestra problema.
Introducción
La cromatografía en capa fina (TLC), es un método analítico versátil, sensible en alto grado y rápido
para separar en forma bien definida compuestos estructuralmente parecidos. El mecanismo de
separación predominante es el de adsorción, pero también se puede dar el mecanismo de reparto,
intercambio iónico, inclusión o una combinación de éstos, dependiendo de la fase estacionaria
utilizada. Es una técnica muy usada con la que se logra la separación de sustancias de naturaleza
hidrofílicas o hidrofóbicas.
La muestra aplicada en la placa es adsorbida en la superficie del material por la acción de fuerzas
electrostáticas. Luego, cuando la placa es expuesta a un flujo por acción capilar, se inicia una
competencia de enlace entre los sitios activos del adsorbente y la sustancia con el disolvente. Una
vez aplicada la muestra sobre el cromatofolio se coloca en una cámara cromatográfica, la cual
contiene la mezcla de disolventes adecuada para el desarrollo de la cromatografía, según se muestra
en la figura.
La técnica de cromatografía en capa fina permite:

§ Determinar el grado de pureza de un compuesto.
§ Comparar muestras.
§ Realizar el seguimiento de una reacción.
§ Controlar el contenido de las fracciones obtenidas en una cromatografía en columna.
§ Separar los componentes de una muestra, entre otros.
Los adsorbentes más utilizados en la cromatografía de capa fina son:
§ Sílica gel (se utiliza en el 80% de las separaciones)
§ Óxido de aluminio o alúmina (ácida, neutra o básica)
§ Tierra silícea o Kieselguhr
§ Celulosa (nativa o microcristalina)
§ Poliamidas
Las características a tomar en cuenta para la elección correcta de los adsorbentes son:
Tamaño de partículas
§ Volumen de poro
§ Diámetro de poro
§ Área superficial
§ Homogeneidad

Se usan como soporte del adsorbente laminas de: vidrio, plástico o metálicos (ejemplo: aluminio).
Los tamaños de la placa para cromatografía en capa fina convencional son: 20 cm x 20 cm, 10 cm x
20 cm y 5 cm x 2 cm.
En la separación cromatográfica, el disolvente, el adsorbente y los compuestos de la mezcla que se
está separando, interaccionan entre si y constituyen el sistema cromatográfico.
En la cromatografía de adsorción y reparto es muy importante la relación entre la velocidad de
movimiento del soluto y la velocidad del movimiento del disolvente de desarrollo expresado mediante
el Coeficiente de Reparto, Rf, el cual se define como:
Rf = Velocidad de movimiento del soluto

Velocidad de movimiento de la fase estacionaria
Si la fase estacionaria y el soluto empiezan a moverse al mismo tiempo, la relación anterior se puede
expresar en función de las distancias recorrida por cada uno según:
Rf = Distancia recorrida por el soluto

Distancia recorrida por el solvente
El Rf se calcula en base a la relación de la distancia recorrida por el solvente y la distancia recorrida

por la muestra, como se muestra en la figura:
Frente de disolvente
Posición final del
Compuesto 2.5 cm Rf = 1.8 cm = 0.72
2.5 cm
1.8 cm
Origen
El valor de Rf, siempre es menor o igual a 1, depende de las condiciones experimentales como
identidad y composición de las fases estacionarias y móviles, temperatura, estructura química de los
compuestos que se separan, pero es independiente del tiempo y dimensiones de la placa.
Generalmente se corren las muestras junto con estándares sobre la misma placa en las mismas
condiciones para poder comparar los Rf.
Es posible afirmar que: sustancias que poseen diferentes valores de Rf son distintas, siempre que
se desarrollen en idénticas condiciones, pero no es posible asegurar que dos manchas con igual Rf
correspondan a la misma sustancia. Se deben realizar otras pruebas para tener certeza de que son
esas manchas.
Después del desarrollo de la cromatografía, la placa cromatográfica se retira de la cámara, se marca
con un lápiz el frente del disolvente y se deja al aire hasta que se seque o se ayuda con un ventilador
o secador de cabello o en un horno. Si los solutos son coloreados se verán a simple vista su
localización. Si los solutos son incoloros hay que localizarlos por métodos especiales. Dentro de los
métodos para localizar los solutos se tienen:
1. Métodos químicos
2. Métodos físicos
3. Radiactividad
4. Métodos biológicos y enzimáticos
Dependiendo del tipo de analito a estudiar se podrán emplear diferentes sustancias químicas para
revelarlas. Por ejemplo: para aminoácidos se puede utilizar ninhidrina, para ácidos se puede realizar
un revelado selectivo mediante un indicador ácido-base, utilizando la técnica de bañado.

Parte experimental
Materiales y Reactivos:
ü Regla graduada
ü Lápiz grafito
ü Placa cromatográfica (Sílica gel)
ü Placas para cromatografía de 10x10 cm (cromatofolios)
ü Cámara cromatográfica
ü Capilares de vidrio
ü Tubos de ensayo
ü Gradilla para tubos
ü Aspersor
ü Estufa de secado a 105ºC
ü n-Propanol, NH4OH 34 %, Ácido acético glacial, n-Butanol, Agua destilada
ü Solución de ninhidrina (0.2% en etanol)
ü Soluciones estándares de aminoácidos (AA)
ü Muestra problema de aminoácidos
Sembrado de muestras y patrones de caracterización.
1. Se trabajará con una muestra problema de aminoácidos la cual será entregada por el Profesor.
2. Marcar línea de origen con lápiz grafito y con cuidado de no levantar la sílice, a una distancia de
1 cm desde el borde inferior del cromatofolio.
3. Realizar en el cuaderno una tabla en la que se indica el orden de sembrado como se indica a
continuación:
Siendo AAn, el estándar n de AA. (Un ejemplo puede ser…)
Placa Posición Posición Posición Posición Posición Posición Posición

1 2 3 4 5 6 7
1 AA1 AA2 AA3 MP AA4 AA5 AA6
2 AA1 AA2 AA3 MP AA4 AA5 AA6
4. Tomar un capilar para cada estándar y otro para la muestra, identificarlos.

5. Sembrar patrones y muestras, de manera que cada punto de aplicación diste 0.5 cm de los bordes
y 1 cm entre sí.
6. Para la aplicación de los estándares y muestras, se debe introducir un capilar en la solución a
sembrar y esperar que el nivel del líquido llegue a la marca correspondiente. El líquido se deposita
con cuidado en la placa tocando la misma, manteniendo el capilar en posición perpendicular.
Después de cada toque se debe esperar que se seque la mancha para volver a sembrar, para evitar
la difusión en el origen.
Preparación de la cámara cromatográfica

1. Preparar la mezcla de solventes adecuada según los componentes de la muestra a analizar para
desarrollar la cromatografía. Su profesor le ayudará en este punto.
2. Colocar en la cámara cromatográfica la fase móvil anteriormente preparada, cuidando que el nivel
de líquido no supere los 0.8 cm de altura.
3. Colocar un papel de filtro por alrededor de la cámara cromatográfica de forma de ayudar a saturar
la misma más rápidamente.
Desarrollo del cromatograma

1. Colocar la placa preparada con las muestras sembradas y tapar la cámara lo más rápido posible.
2. Una vez que el frente del solvente se encuentra a 1 cm del borde superior de la misma, retirar las
placas, marcar el frente del solvente con un lápiz de grafito.
3. Dejar secar el solvente. Este proceso se puede acelerar secando la placa en estufa o con un
secador de cabello.

Estándares y disolventes para la cromatografía

1. Se usarán estándares de: glicina, arginina, histidina, alanina, fenilalanina y ácido glutámico.
2. Se utilizarán las siguientes mezclas de disolventes:
a. Fase móvil 1: n-Propanol: NH4OH 34% (7:3)
b. Fase móvil 2: n-Butanol: Ácido acético glacial: Agua (6:2:2)
Localización de las manchas y Revelado

Los aminoácidos se revelarán asperjando la placa cromatográfica con una solución de ninhidrina.
Este es el revelador clásico de los aminoácidos. Aparecerán manchas de color violeta, azul y
amarilla, según sea el aminoácido estudiado. Una vez desarrollada la cromatografía:
1. Se coloca la placa bajo campana.
2. Se pulveriza la placa con la solución de ninhidrina.
3. Se deja secar al aire.
4. Trasladar las placas asperjadas con ninhidrina a una estufa a 105ºC, y dejar 5 minutos la placa en
la misma.
5. Al cabo de ese tiempo las manchas de aminoácidos empezarán a aparecer de colores.
Importante: La ninhidrina es cancerígena, por lo cual se debe tener precaución de asperjar

las placas cromatográficas utilizando guantes y lentes, las mismas deben ser colocadas
dentro de la campana.
La localización de las manchas en la placa de cromatografía dependerá del problema que se tiene
en estudio. En forma general si se tiene un problema desconocido se procede en la siguiente
secuencia:
1. Si se ha utilizado placas fluorescentes se observan éstas a la luz UV 254 nm. En los lugares en
que en la placa aparece oscura se marca pues ahí hay un componente de la muestra.
2. Luego se introduce la placa en una cámara de yodo. Al cabo de 10-60 minutos, la mayoría de
sustancias orgánicas aparecen como manchas pardas.
3. Otro revelador sería pulverizar las placas con una solución de sulfato de amonio al 20% acidificado
con ácido sulfúrico. Las placas se calientan a 180ºC y las sustancias orgánicas se carbonizan.
4. Si se tienen información de los componentes de la muestra problema entonces se pueden utilizar
reveladores específicos según el tipo de sustancias a identificar
Parte experimental. Determinación de Ecuación de Van Deemter

Trabajando con el patrones de 10 ppm de teofilina, teobromina y cafeína con una fase móvil
isocrática (30:70 = Metanol:Agua) y utilizando una longitud de onda de detección de 260 nm,
desarrollar los siguientes flujos de fase móvil :
mL/min; 0,4 0,6 0.8 1.0 1.2 1,4 1,6
1. Analice como influyen los flujos de fase móvil sobre los tiempos de retención y la resolución de las
señales cromatográficas.
2. Calcular la resolución de las señales y la selectividad en cada flujo.
3. Determine el número de platos teóricos promedio y la altura de los platos de la columna
cromatográfica.
4. Calcule los factores de selectividad, de retención y resolución respectivo
5. Grafique H v/s flujo de fase móvil ¿Qué condiciones debe cumplir una fase móvil?

Laboratorio 6
Cromatografía Líquida de Alta Resolución (HPLC). Determinación de cafeína en una muestra
problema
Objetivos
1. Conocer y manejar un equipo HPLC.
2. Determinar el contenido de Teofilina en una muestra problema.
Introducción
La cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) es un tipo de cromatografía en columna utilizada
frecuentemente en Bioquímica y Química Analítica.
Es una técnica utilizada para separar los componentes de una mezcla basándose en diferentes tipos
de interacciones químicas entre las sustancias analizadas y la columna cromatográfica.
En la HPLC isocrática el compuesto pasa por la columna cromatográfica a través de la fase
estacionaria (normalmente, un cilindro con pequeñas partículas redondeadas con ciertas
características químicas en su superficie) mediante el bombeo de líquido (fase móvil) a alta presión
a través de la columna. La muestra a analizar es introducida en pequeñas cantidades y sus
componentes se retrasan diferencialmente dependiendo de las interacciones
químicas o físicas con la fase estacionaria a medida que adelantan por la columna.
El grado de retención de los componentes de la muestra depende de la naturaleza del compuesto,
de la composición de la fase estacionaria y de la fase móvil. El tiempo que tarda un compuesto para
ser eluído de la columna se denomina tiempo de retención y se considera una propiedad identificativa
característica de un compuesto en una determinada fase móvil y estacionaria. La utilización de
presión en este tipo de cromatografías incrementa la velocidad lineal de los compuestos dentro la
columna y reduce así su difusión dentro de la columna mejorando la resolución de la cromatografía.
Los disolventes más utilizados son el agua, el metanol y el acetonitrilo.
El agua puede contener tampones, sales, o compuestos como el ácido trifluoroacético, que ayudan
a la separación de los compuestos.
Un estándar interno (IS) es una sustancia que se añade a todas las muestras en una cantidad
constante. La calibración supone representar la razón entre la señal del analito y la del estándar
interno como una función de la concentración del analito.
El estándar interno puede compensar distintos tipos de errores indeterminados y sistemáticos. Si el
IS y el analito responden proporcionalmente a los errores instrumentales y fluctuaciones del método,
la razón entre las señales es independiente de las fluctuaciones.
La mayor dificultad es encontrar un IS adecuado, con señal reproducible y que genere una señal
similar a la del analito.
Parte experimental
Cromatógrafo HPLC
Fase móvil (30:70 = Metanol:Agua)
Patrón de cafeína 1000 μg/mL
Patrón de Teobromina (Estándar interno) 10 μg/mL
Metanol Calidad HPLC
Agua Milli-Q o Nanopure
Viales o tubos eppendorf 2 mL
Jeringuilla de 25 μL
Determinación de la concentración de cafeína, en una muestra problema. Trabajando con una fase
móvil isocrática (30:70 = Metanol:Agua), a un flujo de 1 mL/min (20 μL de volumen inyectado) y
utilizando una longitud de onda de detección de 271 nm, se determinará la concentración de cafeína
en una muestra problema, utilizando el método de estándar interno), por interpolación en una curva
de calibración, previamente medida usando
patrones de cafeína

Parte experimental
Trabajando con el patrones de 10 ppm de teofilina, teobromina y cafeína con una fase móvil
isocrática (30:70 = Metanol:Agua) y utilizando una longitud de onda de detección de 260 nm,
desarrollar los siguientes flujos de fase móvil :
mL/min; 0,4 0,6 0.8 1.0 1.2 1,4 1,6
1. Analice como influyen los flujos de fase móvil sobre los tiempos de retención y la resolución de las
señales cromatográficas.
2. Calcular la resolución de las señales y la selectividad en cada flujo.
3. Determine el número de platos teóricos promedio y la altura de los platos de la columna
cromatográfica.
4. Calcule los factores de selectividad, de retención y resolución respectivo
5. Grafique H v/s flujo de fase móvil ¿Qué condiciones debe cumplir una fase móvil?
Preparación de muestras de bebidas

Coca-cola Normal y Coca-cola Light: 1 mL de bebida diluida y aforado en 25 mL
Té y Café: 1 mL de bebida diluida y aforado en 50 mL
Bebida energética: 1 mL de bebida diluida y aforado en 50 mL
Cafiaspirina: 0,6544g. de tableta diluido y aforado a 100 mL, a partir de esa dilución tomar
100 μL y diluir y llevar a un volumen total de 2 mL.
Información Adicional
Curva de calibración con patrón interno

Un patrón interno es un compuesto, diferente del analito, que se agrega en cantidad conocida
y constante a la muestra y a los patrones. La señal del analito se compara con las del patrón interno
para determinar la cantidad de analito presente en la muestra.
La aplicación satisfactoria de una calibración con estándar externo o del método de adición
de patrón depende de la capacidad del analista para manipular de forma reproducible las muestras
y los patrones. Cuando no es posible controlar un procedimiento para que todas las muestras y
patrones reciban el mismo procedimiento se ven afectadas la exactitud y la precisión de las medidas.
Los patrones internos son especialmente útiles cuando la cantidad de muestra analizada o
la respuesta del instrumento varían algo de experiencia a experiencia, por razones que son difíciles
de controlar. Una curva de calibración sólo es válida si se mantiene el conjunto de condiciones como
se obtuvo.

Los patrones internos son muy utilizados en cromatografía debido a que la pequeña cantidad
de muestra que se introduce en el cromatógrafo no es muy reproducible en algunos experimentos.
También son útiles cuando se pueden dar pérdidas de muestra durante la preparación de la muestra
antes del análisis (etapa pre – analítica). Si se agrega una cantidad conocida de patrón interno a la
muestra antes de cualquier tratamiento, la relación patrón interno a analito se mantiene constante,
ya que se pierde la misma fracción de ambos en cualquier operación.
Si una disolución contiene un analito a una concentración CA y un patrón interno a una
concentración CPI, la señal producida por el analito, SA, y la producida por el patrón interno, SPI,
serán:
S A = k ACA
S PI = kPI CPI
Donde kA y kPI, son respectivamente, las sensibilidades del analito y del patrón interno. El
cociente entre las dos señales será:
S A kA CA C
= × =K × A
S PI k PI C PI C PI
De esta forma si se grafica SA/SPI en función de la concentración de analito, la pendiente

estará dada por K/CPI.
Curva de calibrado de patrón interno

SA/SPI
pendiente = K/CPI
Concentración
analito

Laboratorio recuperativo B
Determinación de vitaminas por espectrofotometría
Objetivos
1. Conocer la instrumentación y el manejo de un espectrofotómetro.
2. Obtener, interpretar y calcular el rango de concentraciones de trabajo en un espectro.
3. determinar simultáneamente dos isómeros.
Introducción
La absorbancia es una propiedad aditiva, es decir, en disoluciones que contengan más de una
especie absorbente la absorbancia total es la suma de las absorbancias individuales de cada especie
absorbente. Suponiendo que no haya interacción entre las distintas especies absorbentes (es decir,
que estas sean independientes entre sí), la absorbancia total para un sistema absorbente
multicomponente 1, 2, 3,... n, cuyas absorbancias individuales sean A1, A2, A3,....An viene dado por:
A TOTAL = S A i = A1 + A2 + A3 +.......... + An
A i = e1bC1 + e2bC2 + e3bC3 + …………+ enbCn
Parte experimental
ü 2 Bureta graduada de 10 mL
ü 2 Matraces aforados de 250 mL
ü 6 Matraces aforados de 25 mL
ü Espectrofotómetro UV-Visible
ü Celdas de 1 cm de paso óptico (cuarzo)
ü Soluciones patrón de o-nitrofenol y p-nitrofenol
ü Muestra Problema
Preparación de soluciones
Disolución madre de vitamina B2 que contiene 0,030 g disueltos en 1 L de agua (MM = 376,4 g/mol).
Disolución madre de vitamina B12 que contiene 0,150 g disueltos en 1 L de agua (MM = 1355,4 g/mol).
Preparar 9 disoluciones de vitamina B2, tomando 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 mL de la disolución madre

de vitamina B2 (0,030 g/L) completando hasta 10 ml con agua destilada.
Preparar 9 disoluciones de vitamina B12, tomando 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 mL de la disolución madre
de vitamina B12 (0,150 g/L) completando hasta 10 ml con agua destilada.
Determine el máximo de absorción tomando una de las disoluciones. Posteriormente mida cada
solución en las longitudes de onda respectiva para cada vitamina y luego en la longitud de onda que
corresponde al otro analito.
Muestra problema
Calcule la concentración de cada componente en la solución problema, aplicando la Ley de Beer y
la propiedad de aditividad de la absorbancia en una mezcla. Exprese sus resultados en: molar
(moles/litro), gramos/litro (g/L) y ppm (mg/L).

Laboratorio Recuperativo
Determinación del cobre por Espectrofotometría
Objetivos
1. Análisis del contenido de fósforo en una muestra problema mediante espectrofotometría UV –
Visible.
2. Aplicación de métodos de cuantificación haciendo uso de curvas de calibración y de adición
estándar.
Introducción
En la figura se muestra la radiación que atraviesa una

solución de una especie absorbente de concentración c y b cm de espesor. A causa de la interacción
entre los fotones y las partículas absorbentes, la potencia del haz se atenúa de P0 a P. La
transmitancia T de la solución es entonces la radiación incidente transmitida por la solución.
P
T=
P0
También se expresa a la transmitancia como un porcentaje de la siguiente forma:
P
%T = x 100
P0
Otra magnitud común para expresar la cantidad de luz absorbida es la absorbancia (A), la cual esta
definida por:
A = - log T
A diferencia de la transmitancia, la absorbancia de una solución aumenta cuanto mayor sea la
atenuación de P haz.
Parte experimental
Materiales y Reactivos:
ü Equipo espectrofotómetro UV-Visible
ü Cubeta de 1 cm de paso óptico

ü Pipetas aforadas de 5 y 10 mL
ü Propipeta
ü CuSO4.5H2O patrón
ü NH3
A. Espectros de absorción de una solución Complejo Cu-Amoniacal, Cu(NH3)42+
Se dispone en el laboratorio de las siguientes soluciones:

-
Solución de CuSO4 0.079 molar = 5,0 g/L Cu2+
- Solución de amoniaco 2.6 molar
1. Preparar una solución de complejo amoniacal de Cu2+ de 0.5 g/L por dilución de una solución de
Cu2+ de 5,0 g/L y mediante la adición de amoniaco para obtener una concentración final de 0.26
mol/L.
2. Realizar un barrido automático de longitudes de onda entre 400-800 nm para el complejo. Menú
barrido.
3. Observar el espectro obtenido en el espectrofotómetro.
4. Establecer la longitud de onda de máxima absorbancia en su equipo y la A de la solución de 0.5
g/L.
5. Con los datos obtenidos de A para la solución de 0.5 g/L calcular los rangos de concentración para
preparar una curva de calibración en la zona de menor error (20 y 70% T).
6. Diseñar un esquema de dilución para preparar 5 puntos para la curva de calibración.
B. Ley de Beer: Curva de calibración
Se va a comprobar si las sustancias bajo estudio obedecen la Ley de Beer al graficar la absorbancia
vs concentración, para una serie de soluciones con diferentes concentraciones conocidas. El ancho
de la cubeta (1 cm) y la longitud de onda se mantienen constantes. Prepare las soluciones
previamente determinadas.
1. Ajuste el 0 de absorbancia colocando solución-blanco en el haz de medición.
2. Medir A (%T) para cada una de las soluciones preparadas anteriormente.
3. Registrar los datos de A vs C en una tabla confeccionada en su cuaderno.
4. Graficar y calcular la ecuación de la recta por ajuste de mínimos cuadrados. Determinar el
coeficiente de correlación.
5. Preparar la muestra problema en forma similar a las soluciones estándares.
6. Medir la A de la muestra problema en forma inmediata.
7. Calcular la concentración de la muestra recibida, considerando la dilución efectuada.
C. Método de adición estándar
1. Preparar una batería de 5 matraces aforados y a cada uno de ellos agregue un volumen igual de
solución de la muestra.
2. Al primero aforarlo directamente después de agregarle el amoniaco.
3. A los siguientes matraces aforados, agregarles volúmenes crecientes de solución estándar de
Cu2+ (1, 2, 3 y 4 mL) y después de agregar amoniaco enrasar con agua destilada.
4. Medir la A de cada una de estas soluciones.
5. Con los valores de A obtenidos, calcular la ecuación lineal de A vs mL de estándar agregados,
donde el intercepto lo denominaremos a y a la pendiente b.

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Universidad Andrés Bello

Facultad de Ciencias Exactas

QUÍMICA ANALÍTICA E INSTRUMENTAL

Carrera: Ingeniería en Biotecnología

1. El alumno deberá presentarse puntualmente a la hora de inicio del laboratorio.

4. El alumno es responsable de la destrucción de cualquier material de laboratorio y deberá

7. Se dispondrá de recipientes para los deshechos. ÚSELOS

10. Evaluaciones y ponderaciones se detallan a continuación:

Controles Laboratorio Semanales (CLS): (60 %)

Departamento de Ciencias Químicas, Facultad de Ciencias Exactas 2

FORMATO DE INFORME FINAL DE RESULTADOS PARA QUIM-225

2. DIAGRAMA EXPERIMENTAL (5 puntos)

2. RESULTADOS (15 Puntos)

3. DISCUSIÓN (15 Puntos)

1. D. Skoog, F, Holler, T. Nieman. “Principios de Análisis Instrumental”; 5a Edición,

Departamento de Ciencias Químicas, Facultad de Ciencias Exactas 3

Determinación potenciométrica de la concentración en una disolución de H3PO4 y de fosfatos

Parte A: Determinación potenciométrica de la concentración en una disolución de H3PO4

Departamento de Ciencias Químicas, Facultad de Ciencias Exactas 4

Parte B: Determinación potenciométrica de la concentración de H3PO4 en bebida

Departamento de Ciencias Químicas, Facultad de Ciencias Exactas 5

Determinación potenciométrica iones fluoruro usando un electrodo selectivo de iones (ISE)

Eind =K −0.059log (F-)

Esta respuesta es casi Nernstiana (cumple la ecuación de Nernst) para un intervalo de

Θ = Conductividad específica (k, ohms/ cm)

Departamento de Ciencias Químicas, Facultad de Ciencias Exactas 6

La medida de conductividad puede ser útil en la

Esta aplicación es un caso típico de valoración conductimétrica de

La reacción de valoración es:

CH3CONHC6H6OH + Na+ + OH- ¾® CH3CONHC6H6O- + Na+ + H2O

Departamento de Ciencias Químicas, Facultad de Ciencias Exactas 7

2. Para la determinación en un tramo diluido prepare 250 mL de una solución patrón de F- de 10

Parte experimental. Determinación de paracetamol.

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Determinación de ácido acetilsalicílico por Espectrofotometría Ultravioleta

Preparación de la muestra problema

Preparación de la curva de calibración:

Departamento de Ciencias Químicas, Facultad de Ciencias Exactas 9

Tabla 1.- Preparación de soluciones de curva de calibración

N° solución Concentración (*10-4) mol/L Volumen (mL)

Departamento de Ciencias Químicas, Facultad de Ciencias Exactas 10

Determinación de la concentración de Cobre por Espectrofotometría de Absorción Atómica

N° solución Concentración ppm (mg/L) Volumen (mL)

Mida la cada estándar en las condiciones para cobre

Departamento de Ciencias Químicas, Facultad de Ciencias Exactas 11

Determinación de parámetros cromatográficos por HPLC. Ecuación de Van Deemter

La técnica de cromatografía en capa fina permite:

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Rf = Velocidad de movimiento del soluto

Rf = Distancia recorrida por el soluto

El Rf se calcula en base a la relación de la distancia recorrida por el solvente y la distancia recorrida

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Placa Posición Posición Posición Posición Posición Posición Posición

4. Tomar un capilar para cada estándar y otro para la muestra, identificarlos.

Preparación de la cámara cromatográfica

Desarrollo del cromatograma

Departamento de Ciencias Químicas, Facultad de Ciencias Exactas 14

Estándares y disolventes para la cromatografía

Localización de las manchas y Revelado

Importante: La ninhidrina es cancerígena, por lo cual se debe tener precaución de asperjar

Parte experimental. Determinación de Ecuación de Van Deemter

mL/min; 0,4 0,6 0.8 1.0 1.2 1,4 1,6

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