Articulo Científico

Proyecto de Aula
Microbiología General

PRODUCTIVIDAD Y SELECTIVIDAD DE Salmomella typhi EN EL AGAR

BISMUTO SULFITO POR MEDIO DE LA EVALUACION DEL METODO
ECOMETRICO.
PRODUCTIVITY AND SELECTIVITY OF Salmomella typhi IN THE SULFIT
BISMUTE AGAR BY MEANS OF THE EVALUATION OF THE ECOMETRIC
METHOD.
1Jenny Paola Gamboa García
1Programa
de Microbiología Industrial
Facultad de Ciencias Físicas Exactas Naturales y Agropecuarias Universidad de
Santander-UDES
Campus Universitario Lagos del Cacique, calle 70 No 55-210
Bucaramanga.
2019
_________________________________________________________________________

RESUMEN

El presente trabajo se llevó a cabo para evaluar la eficiencia del medio de cultivo Bismuto
Sulfito con la cepa bacteriana de Salmonella typhi, La productividad y selectividad del
medio de fue determinada mediante el método Ecométrico en un tiempo de 24 horas. Los
análisis estadísticos aplicados para evaluar y comparar el crecimiento de las cepas en los
diferentes agares de acuerdo al crecimiento. Los resultados demostraron que el medio de
cultivo es altamente productivo y selectivo, lo que representa una alternativa en la
conservación, el mantenimiento y el desarrollo de la Bacteria estudiada.

Palabras clave: método Ecométrico, Shigella typhi, Bacillus cereus.

Abstract

The present work was carried out to evaluate the efficiency of the Bismuth Sulfite culture
medium with the bacterial strain of Salmonella typhi. The productivity and selectivity of the
medium was determined by the Ecométrico method in a time of 24 hours. The statistical
analyzes applied to evaluate and compare the growth of the strains in the different agars
according to the growth. The results showed that the culture medium is highly productive
and selective, representing an alternative in the conservation, maintenance and
development of the Bacteria studied.

Key words: Ecométrico method, Shigella typhi, Bacillus cereus


Introducción
El Agar escogido para realizar este proyecto e
investigación fue Bismuto Sulfito el cual es un
medio altamente selectivo, recomendado para
aislamiento de Salmonella spp, particularmente
Salmonella thyphi, en heces.
La Peptona y el Extracto de carne aportan
nitrógeno, vitaminas, minerales y amino ácidos
esenciales para el crecimiento. La Dextrosa es
el carbohidrato fermentable y provee de carbono
y energía. El indicador de Bismuto sulfito y el
verde Brillante son inhibidores de bacterias
Gram positivas y de algunas bacterias del grupo
coliformes. El Agar bacteriológico es el agente
solidificante. El sulfato ferroso se incluye para la
producción de H2S. Cuando el H2S esta
presente, el hierro es precipitado dando colonias
positivas características de color marrón a negro
con brillo metálico. Las placas deben ser
uniformes, opacas, de color crema-verde palo.
Se recomienda guardar las placas en
refrigeración 4 días antes de usar para reducir la
inhibición y así poder aislar salmonella de
muestras de heces débilmente contaminadas.
CARACTERISTICAS DE LAS COLONIAS S.
typhi.
Las colonias de S. typhi son negras rodeadas
por una zona negra o parduzca, con brillo
metálico. En las zonas donde haya mucho
crecimiento pueden aparecer como colonias
verde claras.
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Otras Salmonellas producen colonias negras
con o sin oscurecimiento del medio.E. coli está
parcialmente inhibida ocasionalmente crece
como colonias marrones o con brillo verdoso.
Las colonias de coliformes que producen que
producen H2S, forman colonias de similar
apariencia a Salmonella typhi. Estas bacterias
se pueden diferenciar fácilmente porque
producen gas en medios con lactosa, por
ejemplo TSI Agar (Cat.1046) o Kligler Iron Agar
(Cat. 1042).
La bacteria en estudio en la cual ya hablamos es
Salmonella, Utilizaremos como bacteria inhibida
Bacillus.
El género Bacillus pertenece a la familia
Bacilliaceae, es un género que hoy en día
incluye más de 60 especies de bacilos. Este
género está formado por microorganismos
bacilares Gram positivos, formadores de
endosporas, Quimi heterótrofos que
normalmente son móviles y rodeados de
flagelos periticos. Son anaerobios o aerobios
facultativos son catalasa positivos. Las células
bacterianas de este género tienen un amplio
tamaño que varia 0,5 a 2,5 µm x 1,2-10 µm. Este
género se encuentra comúnmente en suelos y
plantas donde tienen un papel importante en
ciclo del carbono y el nitrógeno. Son habitantes
comunes de aguas frescas y estancadas, son
particularmente activos en sedimentos.
(Koneman, 2001).Entre las especies más
representativas del genero Bacillus se
encuentran B.alkalophilus, B anthracis, B
azotoformans, B brevis,B cereus, B subtillis,B
coagulans,B firmus,B insolitus,B
lincheniformis,B polimyxa y B turingiensis entre
otros. (Berge’ys ,2000) (Bergey´s ,1984).

En este proyecto vamos a utilizar y poner en
práctica el análisis ecométrico establece la
eficiencia con la cual un medio de cultivo sirve
para recuperar una cepa o, mejor aún, inducir su
crecimiento y desarrollo mediante la
comparación que se realiza entre el medio por
evaluar y un medio control (Soler, 2006).
Un parámetro útil para interpretar los resultados
es el índice de crecimiento absoluto (ICA) que
determina el grado de selectividad y
productividad del medio según el caso; otro
parámetro es el índice de crecimiento relativo
(ICR) que relaciona los valores de ICA del medio
por evaluar con el ICA del medio control, y
determina la capacidad que tiene el medio de
prueba de recuperar la microbiota de una
muestra determinada, frente a un medio nutritivo
como lo es el de control (Mossel et al., 1983).
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• El ICA permite clasificar los medios de
cultivo
• ICA = 4.5 – 5, medios altamente
productivos
• ICA = 2,5 – 4,5, medios medianamente
productivos
• ICA < 2,5 , medios poco productivos
• ICA = 0, medios no productivos
•
El ICA resultante del interferente evalúa la
selectividad, por lo que a mayor selectividad,
menor será el ICA:ICA=0, medios altamente
selectivos; ICA=0 -2,5 medios medianamente
selectivos; ICA>2,5 medios no selectivos. Se
debe llevar un control en un medio nutritivo o
enriquecido para determinar que el
microorganismo no tiene ningún problema en
crecer.
El ICA de control debe ser muy parecido al de
prueba, lo cual dice que el microorganismo no
presente ningún problema de crecimiento y la
cepa resulta viable para el estudio, dándole
validez a la prueba. El ICR se obtiene dividiendo
el ICA de prueba / ICA de control, al ser
crecimientos similares el valor debe esta por
encima de 0,95 – 1, es decir, la prueba tiene
validez si existe por lo meneos un crecimiento de
un 95 – 100%.
El objetivo de la presente investigación fue
evaluar la eficiencia Productividad y Selectividad
de un medio de cultivo Agar Bismuto Sulfito para
recuperar una cepa mediante el método
ecometrico con el fin de comprobar la
eficacia del medio, al inocular Salmonella
typhi, el microorganismo que identifica el
medio y un microorganismo que se inhibe
que es Bacillus cereus, todo con el fin de
evaluar la sensibilidad del medio para
recuperar el crecimiento de Salmonella al
inocular las otras dos cepas que lo pueden
interferir.

Materiales y Métodos
Se utilizaron las cepas Salmonella typhy y
Bacillus cereus Las cuales fueron
proporcionadas por el laboratorio de la
Universidad de Santander donde nos entregan
las cajas de Petri ya listas con el cultivo axénico
de las cuales tomamos colonias y se realiza un
inoculo con una Escala de McFarland de 0.2,
Esta tabla se usan como referencia en
suspensiones bacteriológicas para saber que el
número de bacterias por mililitro, o más bien
en UFC según una escala que va de 0.5 a 10.
Estos estándares son creados al mezclar
soluciones de cloruro de bario al 1% con ácido
sulfúrico al 1% en volúmenes específicos, para
asegurar la densidad correcta se puede
controlar usando espectrofotómetros.
realizamos siembra masiva en cada uno de los
agares seleccionados con las bacterias
determinadas, se llevan a incubar a 37°C Por 24
horas.
Así mismo se utilizo el Agar nutritivo es un medio
de cultivo sólido no selectivo y no diferencial. En
este medio crecen todo tipo de bacterias no
exigentes Su utilidad en el laboratorio es muy
variada. Principalmente sirve para el subcultivo
de especies, mantenimiento de cepas, contaje
de colonias, como base para preparar agar
sangre, entre otras. Así mismo, por su color
beige claro pueden distinguirse de manera
excepcional la producción de pigmentos
generados por algunas cepas bacterianas, tales
como el pigmento verdoso de Pseudomonas
aeruginosa, el pigmento rojo ladrillo producido
por Serratia marcescens a temperatura
ambiente, el pigmento amarillo dorado
de Staphylococcus aureus, entre otros.
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Evaluación del crecimiento.
Las Bacterias fueron evaluadas en su
crecimiento mediante observación
macroscópica (forma, elevación, borde,
superficie, color), y microscópica con tinciones
específicas y conteo de células viables por el
método de las diluciones seriadas (Aquiahuatl y
Pérez, 2004).
Pruebas microbiológicas
El Agar Nutritivo sin adición de nutrientes fue
inoculado con Salmonella typhi y Bacillus cereus
con el fin de verificar si el agar aportaba
nutrientes a los microorganismos.
El medio nutritivo para las pruebas
microbiológicas se preparó según el protocolo
PNT-ME-010 y la composición final del medio
fue: peptona 5 g/l, extracto de levadura 5 g/L y
cloruro de sodio 5 g/L.
Para los diferentes procedimientos del método
ecométrico se utilizó agar bacteriológico de dos
casas comerciales diferentes.
Método ecométrico
La selección del método ecométrico se realizó
teniendo en cuenta la comparación con otros
como: Miles-Misra, y el de estrías (Michanie,
1992). Según Kornacki et al (2003), entre las
ventajas del método ecométrico se destacan la
facilidad y rapidez en la ejecución de la prueba,
la eficiencia para evaluar varios lotes de medios
de cultivo y el uso de un inóculo estandarizado
en donde se garantiza la misma cantidad de
microorganismo en todas las siembras.
La evaluación de la productividad del medio de
cultivo se realizó a través del análisis del método
ecométrico (Mossel, 2003) el cual se procesó
por triplicado para cada una de las especies
bacterianas.

Análisis de Resultados
Los resultados obtenidos mediante el método
ecométrico donde se permitieron evaluar los
resultados de crecimiento de las cepas, en
unidades formadoras de colonias, Figura 1 del
anexo, y tomando como control el medio Agar
Bismuto Sulfito frente a las cepas de Salmonella
typhi y Bacillus cereus,
(Tabla 1) Evidencia que después de 24 horas
de incubación el conteo de UFC por cada
cuadrante evaluado (4 cuadrantes) más la
línea central, teniendo en cuenta el conteo
supervisado y comprobado con teoría
previamente estudiada.
TABLA 1 Conteo de UFC en medios.
Agar Bismuto Sulfito, cepa bacteriana
Salmonella typhi resulto con un crecimiento
óptimo en cada una de sus estrías marcadas
por el método, observándose claramente en la
Figura 2 del anexo.
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Con un resultado contundente de 1 en cada uno
de los cuadrantes para un total de 5.0 lo cual en
el ICA se evidencia que es un medio que
proporciona alta productividad.
Para la bacteria Bacillus cereus usada como
microorganismo que se inhibe, se logro
evidenciar que en el Agar BS no presento
crecimiento alguno en las estrías, lo que se
comprueba claramente que el medio BS
presenta una alta selectividad. Figura 3 del
anexo. En la tabla 1 se comprueba este análisis
debido al valor cero en cada cuadrante.
Agar nutritivo para la cepa Bacillus cereus,
presento un crecimiento parcial de UFC Figura 4
del anexo. Tabla 1 donde en el cuadrante 1 y 2
mostro un valor de 0,8 en el cuadrante 3 un valor
de 0.4 en el cuadrante 4 un crecimiento nulo
valor 0 y finalmente en la línea central un valor
de 1 para un total ICA 3.0. Dando como un
análisis final de acuerdo al método ecometrico
que este es un agar medianamente productivo
para el crecimiento de esta bacteria.
Los valores de ICA e ICR permitieron clasificar
los microorganismos en productividad baja,
media o alta (tabla 2). Interpretando como un
resultado altamente favorable para el medio de
prueba.
TABLA 2 Resultados de ICA ICR
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Los resultados demuestran que el método referencia. Bogotá: Pontificia Universidad

ecométrico es adecuado para evaluar medios de Javeriana.
cultivo microbiológico como lo confirman
SIPSA (Sistema de Información de Precios del
estudios realizados por Michanie (1992) quienes
Sector Agropecuario). 2008. Boletín Semanal,
destacan las ventajas de este método como son
enero 5-11, 13 (2): 15.
la facilidad y rapidez de ejecución. Kornacki et al
(2003) afirman que el método es una alternativa Soler, J. P. 2006. Validación secundaria del
aceptable cuando se compara con otras más método del número más probable y recuento en
laboriosas e ineficientes. placa profunda para coliformes totales y fecales
en muestras de alimentos basada en la norma
Conclusiones ISO NTC 17025. Pontificia Universidad
Javeriana.
El medio de cultivo Bismuto Sulfito
representa una opción viable para el Lightfood, N. F. y Maier, E. A. 2002.Análisis
crecimiento de la cepa de Salmonella typhi microbiológico de alimentos y aguas. Directrices
teniendo en cuenta los resultados obtenidos para el aseguramiento de la calidad. Zaragoza:
se evidencio su eficacia y validez al ICA lo Aribia.
cual presenta una alta productividad y
selectividad del medio y un ICR que presento un Merck. 2007-2008. Casa Comercial. Catálogo,
valor de 0,95 – 1, es decir, la prueba tiene Manual de Microbiología.
validez con un crecimiento de un 95 – 100%.
Mosselt, D. A. A., Rees, M .G., Bonants- V AN
laarhoven, A., Ligtenberg-Merk, T. H. y Werdle,
M. 1983.: an attempt at standardization a the
Referencias bibliográficas international level.Journal of Applied
Bacterioioqy, 54: 313-327.
Aquiaatl, R. M. y Pérez, C. M. 2004.Manual de
prácticas de laboratorio de microbiología
general. 1 edición. Mexico: Universidad
Autónoma Metropolitana.
Lara, M. C. y Mendoza, C. A. 2010.Evaluación
de la productividad y selectividad de un medio
de cultivo a partir de guayaba agria (Psidium
araca) en el crecimiento de las cepas nativas del
género Candida sp. Tesis de Maestría en
Biotecnología. Depto de Química. Universidad
de Córdoba, Córdoba, Colombia, p. 78

Padilla, J. E. 2007.Validación secundaria del

método de recuento en placa en superficie de
Bacillus cereus y Staphylococcus aureus en
muestras de alimentos en un laboratorio de
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ANEXOS

Figura 1 Cajas de Petri

Medios de Cultivo Figura 2
Demostracion del Metodo Agar Bismuto Sulfito
ecometrico Salmonella typhi

Figura 3
Agar Bismuto Sulfito Figura 4
Bacillus cereus Agar Nutritivo
Bacillus cereus