Manual de Inmunohemato y MT 2016 PDF

___________________________________________________________________________________INMUNOHEMATOLOGIA Y MEDICINA TRANSFUSIONAL
MANUAL TECNICO
INMUNOHEMATOLOGIA
Y
MEDICINA TRANSFUSIONAL
TMs: Leonor Armanet, Juana Vargas, Amalia Cárcamo, Carolina Hernández
Ste
2012
CURSO 2016
Actualizado por TMs Josefina Barrera, Catalina Salinas y Silvana Lillo
1
INTRODUCCION
La Medicina Transfusional es un área de la Medicina que ha sufrido

diversos y rápidos cambios a lo largo de su historia, en especial en los últimos
años, lo que constituye un constante desafío para los que trabajan en ésta
área. Hemos desarrollado este texto que pretende servir de guía tanto a
estudiantes de la Carrera de Tecnología Médica como a profesionales que
trabajan en Servicios de Sangre.
En el presente Manual se describen aspectos básicos de

Inmunohematología y Medicina Transfusional, se describen las técnicas y
procedimientos que se utilizan con mayor frecuencia en una Unidad de
Medicina Transfusional y en un Centro de Sangre. Se incorpora un cuestionario
de autoevaluación al término de cada una de las unidades temáticas, que
permite que el estudiante pueda conocer el nivel de comprensión y manejo
de las materias que aquí tratamos.
Pretendemos además hacer reflexionar a quienes se inician en esta

disciplina sobre aspectos relevantes del quehacer del Tecnólogo Médico en
Medicina Transfusional, en tópicos como control de calidad, metodologías,
registros, etc., con el propósito de lograr en ellos un espíritu crítico y autonomía
en su quehacer profesional. Pretendemos reforzar el aprendizaje y
comprensión del texto con talleres dirigidos y discusión de casos, buscando a
través del trabajo cooperativo las respuestas a las interrogantes que aquí
planteamos, y así también fortalecer aspectos que pueden no estar
explícitamente tratados en éste manual.
Contenido
UNIDAD DONACIÓN DE SANGRE .......................................................................................................................... 6
SELECCION DE UN DONANTE DE SANGRE 7
1.- INTRODUCCION: 7
2.- EL LLENADO DE LA FICHA DE DONANTE Y EL CUESTIONARIO: 8
3.- SELECCION DEL DONANTE: 8
4.- CONDICIONES DE LA ENTREVISTA DEL DONANTE DE SANGRE 8
5.- PRINCIPIOS DE UNA ENTREVISTA: 9
6.- CRITERIOS DE SELECCIÓN 11
(Basados en la Norma General Técnica Nº 0146 – 2013: Norma que regula el procedimiento de
atención de donantes de sangre (en sitio fijo o móvil). 11
ALGUNAS PREGUNTAS A REALIZAR DURANTE LA ENTREVISTA AL DONANTE 12
PROCEDIMIENTOS A UTILIZAR EN LA ATENCION Y SELECCION DE UN DONANTE DE SANGRE 21
REACCIONES ADVERSAS A LA DONACION DE SANGRE 31
REGISTROS 34
TRANSPORTE DE SANGRE 35
READMISION DE UNIDADES DE SANGRE 35
TRANSPORTE DE LA SANGRE Y COMPONENTES SANGUINEOS 35
UNIDADES MOVILES DE RECOLECCION 36
ALMACENAMIENTO Y TRANSPORTE DE HEMOCOMPONENTES 37
GESTION DE STOCK EN BANCO DE SANGRE 37
UNIDAD INMUNOHEMATOLOGIA ........................................................................................................................ 44
INTRODUCCION A LA INMUNOHEMATOLOGIA 44
REACTIVOS BASICOS A USAR EN INMUNOHEMATOLOGIA Y SERVICIOS DE SANGRE 47
1.- BUFFER FOSFATO Y BUFFER FOSFATO SALINO 49
2.- PREPARACION DE SUERO AB INERTE 50
3.- MEDIO DE BAJA FUERZA IÓNICA (LISS): 50
4.- EDTA - SALINO(para suspender GR testigos A y B) 50
5.- SOLUCION DE ALSEVER MODIFICADA: 51
6.- CONVERSION DE PLASMA A SUERO 51
TRATAMIENTO DE MUESTRAS CON COAGULACION INCOMPLETA 53
PREPARACION DE LECTINAS PARA USO EN INMUNOHEMATOLOGIA 54
LAVADO DE ERITROCITOS Y PREPARACION DE SUSPENCIONES CELULARES 55
GRADUACION DE LOS RESULTADOS INMUNO-HEMATOLOGICOS EN TUBO: 56
GRADUACION DE LOS RESULTADOS INMUNO-HEMATOLOGICOS COLUMNA (TARJETA): 57
CARACTERISTICAS DE LOS SUEROS CLASIFICADORES 59
ESPECIFICIDAD: 59
POTENCIA: 60
AVIDEZ E INTENSIDAD: 60
TITULO: 60
CLASIFICACION DEL SISTEMA ABO 62
CLASIFICACION Rh D 66
INVESTIGACION DE ANTIGENO D DEBIL 67
TECNICA DE AGLUTINACION EN COLUMNA 69
ALGORITMO A UTILIZAR EN LA CLASIFICACION Rh D 70
CLASIFICACION DE GRUPO ABO Y RH: TÉCNICA EN MICROPLACA 71
DETERMINACION DE GENOTIPO RH 73
3
FRECUENCIAS GENICAS DE SISTEMAS SANGUINEOS EN DIFERENTES POBLACIONES 75
TEST ANTIGLOBULINA HUMANA DIRECTO (TAD) TEST DE COOMBS DIRECTO 76
TEST ANTIGLOBULINA HUMANA INDIRECTO (TAI) TEST DE COOMBS INDIRECTO 78
DETECCION DE ANTICUERPOS IRREGULARES 82
DETECCIÓN DE ANTICUERPOS EN MEDIO LISS 86
IDENTIFICACION DE ANTICUERPOS IRREGULARES 87
COMPORTAMIENTO SEROLOGICO DE LOS PRINCIPALES ANTICUERPOS IRREGULARES 88
TITULACION DE ANTICUERPOS 94
PRUEBA CRUZADA O CROSMATCH 97
ADSORCION DE ANTICUERPOS 100
ELUCION DE ANTICUERPOS 101
ESTUDIO RH EN CELULAS CON TAD POSITIVO 104
DETERMINACION DE ESPECIFICIDAD DE AUTO ANTICUERPOS FRIOS 105
DEMOSTRACION DE AUTOAGLUTININAS FRIAS (CRIOAGLUTININAS) DE ALTO TITULO 106
ESTUDIO INMUNOHEMATOLÓGICO DE UNA MUESTRA 107
ESTUDIO DE MUESTRAS CON TAD POSITIVO 108
TÉCNICAS DE USO MENOS FRECUENTE EN INMUNOHEMATOLOGÍA 109
CALIBRACION DE CENTRIFUGAS SEROLOGICAS PARA INMUNOHEMATOLOGIA 109
DETERMINACION DE ANTIGENOS SOLUBLES ABH Y LEWIS EN SALIVA 111
DETECCION DE ANTICUERPOS IRREGULARES EN PAPAINA 113
TECNICA DE IDENTIFICACION DE ANTICUERPOS EN BROMELINA 114
ESTANDARIZACION DEL MEDIO DE BAJA FUERZA IONICA (LISS) 115
PREPARACION Y ESTANDARIZACION DE SOLUCIONES ENZIMÁTICAS PARA USO EN
INMUNOHEMATOLOGÍA 117
EVALUACION DEL TRATAMIENTO DE LOS ERITROCITOS 119
USO DE DTT PARA DIFERENCIAR ANTICUERPOS IGM DE IGG 120
TRATAMIENTO DE ERITROCITOS CON DTT 122
AUTOADSORCION DE ANTICUERPOS CALIENTES (ZZAP) 123
ADSORCION DIFERENCIAL EN CALIENTE USANDO ZZAP 124
ESTUDIO DE CALIDAD DE UN SUERO ANTIGLOBULINA HUMANA 126
CARACTERISTICAS GENERALES DE METODOS USADOS EN INMUNOHEMATOLOGIA 133
ERITROCITOS CONGELADOS PARA FINES DE LABORATORIO 134
SANGRE Y COMPONENTES SANGUINEOS ....................................................................................................... 135
PREPARACION Y CONSERVACION DE COMPONENTES SANGUINEOS 136
PREPARACION DE COMPONENTES SANGUINEOS POR CENTRIFUGACIÓN 136
CARACTERISTICAS DE LOS PRINCIPALES COMPONENTES SANGUINEOS 139
REDUCCION DE LEUCOCITOS EN LOS COMPONENTES SANGUINEOS: 141
DATOS BIOLOGICOS DE ALGUNOS FACTORES DE COAGULACION 142
EFECTOS ADVERSOS DE LA TRANSFUSION SANGUINEA ............................................................................... 143
EFECTOS ADVERSOS DE LA TRANSFUSION SANGUINEA 144
A.- REACCIONES TRANSFUNSIONALES INMEDIATAS 144
B.- REACCIONES TRANSFUSIONALES RETARDADAS 148
CUADRO RESUMEN DE LOS EFECTOS ADVERSOS DE LA TRANSFUSIÓN SANGUÍNEA 150
INVESTIGACIÓN DE UNA REACCION TRANSFUSIONAL 151
ENFERMEDADES DE TRANSMISION SANGUINEA ............................................................................................. 153
EXAMENES MICROBIOLOGICOS 154
REQUERIMIENTOS ESPECIFICOS PARA HBS AG 155
ANTI VIH 1 Y 2 155
ANTI HCV 155
ANTICUERPOS DE SIFILIS 156

ANTICUERPOS ANTI TRYPANOSOMA CRUZI 156
EXÁMENES MICROBIOLÓGICOS ADICIONALES PARA CASOS ESPECIALES ........................................... 156
EVALUACION DE PROCEDIMIENTOS DE TAMIZAJE O SCREENING 159
BIBLIOGRAFIA ......................................................................................................................................................... 160
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UNIDAD DONACIÓN DE SANGRE
SELECCION DE UN DONANTE DE SANGRE
1.- INTRODUCCION:
La seguridad de la transfusión sanguínea o de sus componentes comienza con la
apropiada selección del donante. Para lograr este objetivo se dispone de una Ficha de
Donante y un cuestionario a aplicar durante la entrevista a los potenciales donantes,
cuya finalidad es lograr una correcta selección. Es posible además apoyarse con folletos
informativos (Ver anexos al término de la unidad) que mencionan las enfermedades que
se transmiten por la sangre y la seguridad del proceso de extracción sanguínea, entre
otras cosas. Es necesario enfatizar también en la necesidad de ofrecer al donante un
proceso seguro y controlado.
El proceso de atención de donantes de sangre consta de las siguientes etapas:
a.- Recepción, identificación y codificación del donante: La recepción debe ser cálida.
Solicite la información necesaria para identificar con seguridad al donante y carnet de
identidad o documento con RUT y foto, llenando con el máximo de precisión todos los
datos que aparecen en la Ficha de Donante de Sangre, e ingresándolos al sistema
informático. El sistema asignará un número único de donación y emitirá etiquetas con
código de barras, que deberán adherirse a los documentos de registro, bolsas de
extracción y tubos para estudios posteriores.
b.- Verificación del estado general del donante: Se realiza un exámen físico que incluye
peso, pulso, presión arterial, hemoglobina y aspecto general del donante, información
que también debe registrar en la Ficha de Donante de Sangre.
c.- Entrevista y aplicación del cuestionario: Comprende una serie de preguntas

específicas que tienen por objeto recoger una clara información para que determine si el
donante cumple o no con los requisitos exigidos para donar. La duración de este
procedimiento es de 8 a 10 minutos.
d.- Compromiso del donante: Todo donante debe firmar el Consentimiento Informado
contenido en la Ficha de Donante de Sangre, declarando entender las preguntas
formuladas, que la información entregada es verdadera y que autoriza el procedimiento.
e.- Agradecimiento por la donación e invitación a ser donante voluntario: Usted debe
incentivar la donación voluntaria y pedir el consentimiento para ser invitado a donar
sangre en el futuro como donante voluntario.
f.- Prevención y control de reacciones adversas a la donación: Debe estar atento a

cualquier reacción que presente el donante durante o después de la donación,
anotando signos, síntomas, incidentes de la venopunción, momento de la ocurrencia y
otras características; también debe registrar el manejo y la evolución, y registrarlo en la
Ficha de Donante.
g.- Identificación del profesional que selecciona y del flebotomista: El responsable de la

entrevista (usted) debe anotar su nombre en el lugar correspondiente de la Ficha de
Donante y del Cuestionario. El técnico paramédico que realiza la extracción de sangre
también debe firmar.
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2.- EL LLENADO DE LA FICHA DE DONANTE Y EL CUESTIONARIO:
a.- Quién: El Tecnólogo Médico responsable de la sección.
b.- Cómo: Preguntando al donante uno a uno los aspectos que contiene la "Ficha de
Donante de Sangre" y el “Cuestionario”, recogiendo la información pertinente, teniendo
presente la importancia de explicar en términos simples cada punto y de ganar la
confianza del donante para lograr respuestas verdaderas. La entrevista que se realiza
para llenar el cuestionario debe ser confidencial.
c.-Cuando: Una vez que el potencial donante ha leído la información acerca de las
infecciones de transmisión sanguínea, tendientes a lograr la autoexclusión y se ha
interiorizado sobre el procedimiento de la extracción (Revisar folletos relativos al tema).
3.- SELECCION DEL DONANTE:
a.- Se entrevistará al donante de sangre, utilizando un cuestionario basado en las normas de

selección establecidas en el país.
b.- Se evaluará la información recogida, determinando la aceptación o exclusión del posible

donante.
c.- En caso de exclusión se explicará al donante de la forma más clara y completa posible, si
la causa de rechazo es definitiva o transitoria y se darán las recomendaciones
pertinentes, verificando que el donante ha comprendido la situación, y se registrará la
causa en la ficha del donante, utilizando el código respectivo.
d.- Si no hay motivos de exclusión, se someterá al donante a un examen físico dirigido la

toma de signos vitales y a revisar especialmente las zonas de punción. La piel de la zona
de venopunción en ambos brazos no debe presentar lesiones o signos que indiquen que
es adicto a drogas endovenosas. Lesiones poco importantes de la zona, como dermatitis
y sarna serán causa de exclusión temporal.
4.- CONDICIONES DE LA ENTREVISTA DEL DONANTE DE SANGRE
La entrevista se diferencia de la conversación corriente en que está dirigida y orientada

hacia un propósito, y tiene una duración definida (aproximadamente 12 minutos). El
propósito de la entrevista que se realiza al donante de sangre es obtener información
fidedigna, lo que requiere un constante entrenamiento y aplicación de criterio, ya que la
automatización de esta función lo puede llevar a cometer errores.
Dos son los ingredientes de una entrevista bien hecha: “EL CONTENIDO” y “LA
DIRECCION”. El contenido se refiere a los temas a tratar en la entrevista, y la dirección
corresponde a la forma en que el entrevistador presenta el contenido.
5.- PRINCIPIOS DE UNA ENTREVISTA:
1) Iniciar -CEOR: Cállese, escuche, observe, registre.

En general a las personas les resulta interesante hablar de sí mismos, por lo tanto al
aplicar este principio se consigue más información.
Este principio permite que el donante le hable, se explaye. Es importante observar su

comunicación no verbal (gestos, posiciones, miradas, movimientos). Escuchar
activamente le permitirá captar el mensaje, detectar incongruencias o nerviosismo,
que pueden ser una pista para obtener mayor información.
Puede obtener información a nivel consciente o subconsciente; esta última se conoce

con el nombre de tincadas, corazonada, palpito, etc. Debe sondear y luego adquirir
más información, contrastar para así decidir si solo es una “idea” o realmente es un
antecedente de importancia.
Debe hacer hablar al entrevistado por medio de preguntas abiertas.
2)Mantener el control de la entrevista:

Con una actitud serena, objetiva, clara, conociendo la estructura de la entrevista, no
hay posibilidad de que el entrevistado maneje la situación.
Frente a un donante agresivo, prepotente, seductor, coqueto, amistoso, lloroso,

angustiado, etc. lo importante es que el entrevistador (usted) no se involucre; hay que
observar su actuación, ya que todas estas manifestaciones son en su mayoría
mecanismos de defensa. Un donante agresivo, prepotente o expansivo es más fácil
de conocer y de obtener información, ya que basta con dejarlo hablar. Por el
contrario, si el donante es evasivo debe confrontarlo ya sea en forma directa o
indirecta (ingenuamente). Frente a un donante alterado emocionalmente, debe darle
tiempo a que se tranquilice pero no involucrarse en su emoción.
3)Escuchar activo:
Significa leer las características del donante y concentrarse en el foco externo,
observando cuidadosamente su conducta no verbal. Recordar los temas a tratar y así
organizar el orden de la entrevista.
4)Tolerancia:
Es la “aceptación de lo que sea” dentro del ámbito de la entrevista. No corresponde
que evalúe moralmente al donante, ya que el propósito de la entrevista es aceptarlo
o excluirlo como donante de sangre. Por consiguiente sus valores y creencias son
irrelevantes en este caso. En esta situación su autocontrol es importante para no
evidenciar la valoración positiva o negativa que pueda tener de una respuesta que el
donante le entregue. La práctica de la empatía incrementa la tolerancia.
5)Cuidar la comunicación no verbal:

Es importante vigilar su propia conducta. Durante la entrevista es fundamental
observar la conducta del entrevistado, por lo tanto es importante no coartarla con
comentarios, gestos o expresiones. No conviene decir “que bueno”, “que bien”, etc.
Los comentarios positivos hacen que el donante abunde sobre el tema,
sobredimensionando la situación. Por el contrario los comentarios negativos tienen el
efecto inverso, reduce el tema, le resta importancia, lo minimiza. Sus gestos pueden
modificar la conducta del donante, ya sea incrementándola o cohibiéndola.
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6)Uso del silencio:
Es fundamental para escuchar. Debe hacer un contacto visual laxo, permanecer en
silencio con semi sonrisa, ladear ligeramente la cabeza para intensificar el efecto ya
que es una invitación a hablar. Si el donante deja de hablar, debe mantener la
posición de silencio, no interrumpir. Esto hace que el donante se incomode, sube su
ansiedad, y trata de romper el silencio, por lo tanto hablará y entregará información.
Los silencios del donante frente a una pregunta por ejemplo de su vida sexual, puede
significar que él está evaluando su respuesta. Es importante estar alerta a los silencios
del donante y debe volver a sondear, preguntar y confrontar. Es importante que
recuerde, el silencio del donante de sangre no significa necesariamente que terminó
de hablar, sobre todo si la información que le entregó le merece duda, sino que está
organizando el pensamiento.
7)Facilitación:
Si realiza pequeñas intervenciones pueden animar al donante para que hable o
amplíe un tema en particular. Por ejemplo: Verbal: Sí, ya, ya veo, hum, ajá. Preguntas
cortas: ¿Cómo así? “Ud. mencionó”. Repetir la última frase que dijo el donante (con el
fin de que continúe el relato), resumir en una frase lo que dijo (técnica del reflejo –
sirve para que amplíe el tema). No verbal: cabeza, sonrisa, levantar cejas, levantar
hombros.
Cuide especialmente las facilitaciones no verbales, debe administrarlas en momentos

muy precisos ya que pueden llevar implícitamente a una valoración del tema que
puede inhibir o ampliar la respuesta del donante, recogiendo errores en la respuesta;
es recomendable que no las utilice. Recuerde que durante la entrevista debe
mantener una expresión neutra que no induzca la respuesta del donante. En resumen
debe facilitar que el donante hable pero mantener una expresión neutra.
8) Confrontación y contrastación:
Contrastar durante toda la entrevista las inconsistencias y dudas que le merecen las
respuestas del donante, para confrontárselas al final y así obtener respuestas más
fidedignas. La contrastación es un ejercicio que debe realizar en forma íntima,
señalando con asteriscos o marcas aquellos aspectos que ameritan ser confrontados.
Es necesario confrontar hasta quedar tranquilo, pero cuidando que no sea molesto o
amenazante para el donante porque entonces él puede entregar una respuesta de
compromiso social. Es recomendable usar la técnica del ingenuo.
9) Desanimar la comunicación improcedente:

Cuando el donante le entregue información improcedente, tratar de discriminar si es o
no irrelevante porque puede estar entregando información indirecta.
Cuando el donante se emociona, desvíe su atención empleando preguntas directas a

un tema específico o confrontándolo. No use el silencio o la facilitación.
10) Atmósfera adecuada:

Es conveniente ser cordial, cálido al inicio y al final de la entrevista. Consolar o
reconfortar si el donante se emociona pero con límites, no involucrarse. Es importante
dar también la posibilidad de que el donante le pregunte. La calidez da seguridad y
con la confianza el sujeto se abre por lo tanto entrega la información deseada.
6.- CRITERIOS DE SELECCIÓN

(Basados en la Norma General Técnica Nº 0146 – 2013: Norma que regula el procedimiento
de atención de donantes de sangre (en sitio fijo o móvil).
1.- EDAD: - entre 18 y 60 años.
Los donantes regulares que han donado una vez al año en los últimos 5 años se
pueden aceptar hasta los 65 años, si cumplen con los requisitos de la entrevista y
exámenes pre donación.
2.- FRECUENCIA DE DONACIÓN: debe existir un intervalo mínimo entre donaciones de

sangre de 3 meses en los hombres y 4 meses en las mujeres.
3.- PESO: Mínimo 50 kilos. ESTATURA: Verificar que esté relacionada con el peso.
Los donantes que pesan 50 Kgs. o más, pueden donar un máximo de 450 ml +/- 10% de
sangre, es importante que las muestras para la calificación biológica de la donación,
no excedan los 30 ml. La obtención de más del 13% de la volemia en un donante de
50 Kgs. puede significar una mayor frecuencia de reacciones adversas en el donante.
El volumen debe ser controlado para asegurar que los componentes sanguíneos
obtenidos cumplan con las especificaciones establecidas.
4.- ALIMENTACIÓN: los donantes que han comido en los horarios habituales, considerando
cuatro ingestas alimentarias por día, pueden donar. Si un donante se ha saltado una
comida se le debe dar a beber algo de líquido antes de la extracción. Se recomienda
la ingestión de 500 mL de agua antes de la donación, ya que reduce
significativamente la incidencia de reacciones adversas.
5.- PRESION ARTERIAL: (Tomada en reposo)

- Sistólica: menor a 180 mmHg
- Diastólica: menor a 100 mmHg
6.- PULSO: Entre 60 y 100 pulsaciones por minuto, regular y palpado por 30 segundos a
lo menos.
7.- HEMOGLOBINA:sobre 13,5 grs/dL en hombres

sobre 12,5 grs/dL en mujeres
8.- MICROHEMATOCRITO: 40% en hombres; 38% en mujeres
7.- REGISTROS EN LA FICHA DE DONANTE Y APLICACION DEL CUESTIONARIO AL POSIBLE DONANTE

DE SANGRE:
Los formularios que se utilicen para seleccionar al posible donante deben estar en
conformidad con las normas del Ministerio de Salud; revisados y actualizados
periódicamente, y se deben aplicar a todo donante de sangre.
A continuación, usted podrá analizar las diferentes partes de un modelo de ficha de

donante y de un cuestionario:
Ficha de donante de sangre

§ Identificación del donante
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§ Examen físico
§ Consentimiento informado
§ Firma del profesional y del donante
§ Antecedentes de la extracción
§ Características de la bolsa de extracción
§ Incidentes de la venopunción
§ Identificación del técnico paramédico
§ Reacciones adversas
§ Tipo de donante
§ Lugar de colecta
Cuestionario
§ Preguntas
§ Responsabilidad del donante sobre veracidad de las respuestas
§ Aprobación – exclusión
ALGUNAS PREGUNTAS A REALIZAR DURANTE LA ENTREVISTA AL DONANTE
§ ¿HA LEÍDO Y COMPRENDIDOEL INFORMATIVO?

Dirigida a saber si recibió, leyó y comprendió los folletos explicativos que contienen los
requisitos generales establecidos para donar sangre,para protegerlo como donante y
para proteger al paciente/receptor de ella.
§ ¿DURMIÓ MÍNIMO 5 HORAS?
NO: debe diferirse temporalmente al donante hasta que haya dormido esta
cantidad de horas.
§ ¿HA BEBIDO ALCOHOL EN LAS ÚLTIMAS 24 HORAS?

Donantes bajo la influencia del alcohol, deben excluirse transitoriamente hasta cumplir 24
horas sin ingesta de alcohol, debido a que generalmente no es posible obtener
antecedentes clínicos fidedignos, la donación además puede ser dañina para el propio
donante. El donante no debe tener síntomas o signos de intoxicación por alcohol o
drogas.
Preguntar sobre antecedentes de alcoholismo crónico, daño hepático crónico,
hemorragias digestivas etc. Si existen estos antecedentes, excluir en forma definitiva al
donante.
Una pequeña cantidad de alcohol ingerida recientemente, en especial durante las
comidas, no es causa de rechazo ya que en ese caso no existe riesgo para donante ni
receptor.
§ ¿HA DONADO SANGRE ANTES?

Dirigida a tener antecedentes sobre el lugar y fecha de donaciones previas, con el
objeto de proteger tanto al donante como al receptor.
SI: Se acepta solo si su donación fue hace más de 3 meses si es hombres y 4 meses
se es mujer.
NO: Se acepta.
§ ¿SE HA SENTIDO MAL DURANTE O DESPUÉS DE DONAR SANGRE?:

Dirigida a detectar alteraciones o problemas en donaciones previas. Debe quedar
registrada la característica de la reacción adversa a la donación.
SI: No debe donar si tiene historia de un desmayo severo o 2 desmayos consecutivos.

A CRITERIO: si se decide aceptar, se requiere una observación cuidadosa.
NO: Se acepta como donante.
INFORMACION ADICIONAL:
Una historia de predisposición a desmayos aumenta las posibilidades de una reacción
adversa a la donación Debe excluirse a las personas que en donaciones anteriores,
tuvieron un desmayo severo o en donaciones sucesivas tuvieron desmayos.
§ ¿HA SIDO RECHAZADO ALGUNA VEZ COMO DONANTE DE SANGRE? ¿POR QUÉ?
Dirigida a conocer alguna causa temporal o definitiva que lo inhabilite como donante.
Enfatizar acerca del conocimiento de resultados alterados de exámenes realizados a su
sangre. Excluir todo donante con antecedentes de exámenes positivos para: Hepatitis,
Chagas, Sida, HTLV-I. En caso de Sífilis dependerá si hubo tratamiento, aceptándolo si
existió y fue dado de alta hace un año por lo menos.
Evaluar si el rechazo anterior fue por una causa definitiva o transitoria, en este último caso,
el donante se acepta si el plazo determinado se ha cumplido.
SI: Preguntar la causa y verificar si es causal o no de rechazo.

§ ¿HA TOMADO ASPIRINA O ANTINFLAMATORIOS EN LOS ÚLTIMOS 3 DÍAS?

La sangre de donantes que hayan ingeridoaspirina o piroxicam los últimos 3 días o ha
recibido otro AINES en las últimas 48 horas previas a la donación, no debe ser utilizada
para preparar concentrados plaquetarios. La aspirina y productos que la contienen (Ewin,
Mejoral, Gluspirin, Cafiaspirina, Cardioaspirina, etc.), inhiben la actividad plaquetaria
durante 1 a 5 días.
SI: Se acepta como donante, rotulando la bolsa "NO PREPARAR PLAQUETAS".

§ ¿EN LAS ÚLTIMAS DOS SEMANAS HA TENIDO FIEBRE, RESFRÍO, VÓMITOS O DIARREA?
La diarrea es a menudo, un signo de infección del aparato digestivo, especialmente de
su segmento intestinal. En este caso puede ser motivado por bacterias, virus, parásitos,
hongos. Estas infecciones pueden traspasar la barrera intestinal y pasar a la sangre
constituyendo "bacteremias" o "viremias". Al momento de la entrevista, al no poder hacer
diagnóstico diferencial con aquellas infecciones que no traspasan la barrera intestinal, ni
tampoco con diarreas de causa no infecciosa (como la secundaria a colon irritable), se
debe excluir como donante.

SI: Se excluye en forma transitoria hasta que cumpla 1 semanadesde el último episodio.
Sugerirle que consulte un médico
§ ¿EN LAS ÚLTIMAS 8 SEMANAS, LE HAN PUESTO ALGUNA VACUNA O INYECCIÓN?

SI: Analizar si es o no causal de rechazo, en caso positivo, explicarle si es definitivo o
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transitorio.
OBLIGATORIO: no debe donar si han transcurrido menos de 8 semanas de la vacunación

con microorganismos vivos:
• Fiebre amarilla
• Parotiditis
• Polio oral
• Rubeola
• Sarampión
• Tifoidea oral
A CRITERO: aceptar si la vacunación se realiza con microorganismos no vivos:

• Ántrax
• Botulismo
• Cólera
• Difteria
• Haemophilus influenzae
• Influenza
• Meningococo
• Neumococo
• Polio inyectable
• Tifoidea inyectable
• Coqueluche
CASOS ESPECIALES: consultar NGT 146 para mayores detalles:

Rabia: si se administró después de una mordedura animal, no debe donar hasta 12
meses después de la exposición.
Tétanos: no debe donar si han transcurrido menos de 4 semanas de la exposición.
BCG: no debe donar si el sitio de inoculación no ha sanado o si han pasado menos de
8 semanas desde la inoculación.
Viruela: no debe donar si el sitio de inculación o cualquier sitio de infección secundaria
no han sanado completamente, o han transcurrido menos de 8 semanas desde la
inculación o aparición de un sitio de infección secundario. La vacunación contra viruela
es con virus vivo, por lo que si no ha sanado completamente existe riesgo de tranmitir el
virus u otra infección.
Hepatitis A:no debe donar si han pasado menos de 6 semanas desde la vacunación o la
admistración de inmunoglubulina intramuscular.
Hepatitis B: no debe donar si han pasado menos de 12 meses desde la vacunación.
Última dosis en el caso de exposicion a riesgo y 7 días si es vacunación preventiva
INFORMACIÓN ADICIONAL: las vacunas que utilizan virus o bacterias vivos atenuados
estimulan el sistema inmune, pero normalmente no causan una enfermedad severa. Sin
embargo pueden hacerlo en personas inmunodeprimidas. Al diferir por 8 semanas la
donación, se evita la transmisión causada por la vacuna, pues esta ya estaría controlada.
§ ¿EN LOS ÚLTIMOS12 MESES HA SIDO OPERADO U HOSPITALIZADO?

DEFINICIÓN: Cirugía mayor: todo procedimiento quirúrgico que requiere una estadía
hospitalaria de más de 5 días.
OBLIGATORIO: no debe donar si

• La cirugía se debió a un cáncer
• No han sanado todas las heridas
• Hay cualquier infección
• No se ha restablecido la movilidad normal
• Han transcurrido menos de 12 meses de una cirugía mayor
• Han transcurrido menos de 7 días de cualquier otra cirugía
• Si requiere tratamiento post operatorio o atención hospitalaria regular
NO: Acepte al donante
§ ¿EN LOS ÚLTIMOS 12 MESES SE HA REALIZADO ENDOSCOPIA?

El antecedente de endoscopía, está destinado a detectar donantes en riesgo de
infección por hepatitis B o similares, con el uso de endoscopio flexible.
NO: Se acepta como donante

SI: Evaluar según norma
§ ¿SE HA REALIZADO EXAMEN DE SANGRE U OTRO TIPO DE EXAMEN?

OBLIGATORIO: no debe donar si:
• Está en espera de exámenes o de resultados para una condición no diagnosticada aún y
que podría significar el rechazo de la donación.
§ ¿EN LOS ÚLTIMOS 6 MESES HA RECIBIDO ALGÚN TRATAMIENTO MÉDICO?

¿HA TOMADO ALGÚN MEDICAMENTO EN EL ÚLTIMO TIEMPO? ¿CUÁL?
En general los medicamentos que toma un donante no son perjudiciales para el receptor.
Pueden ser aceptados como donantes la mayoría de las personas que toman
medicamentos, incluso los que lo hacen por indicación médica.
Normalmente el rechazo debido a la ingesta de algún medicamento no se debe a las
propiedades de este sino a las características de la enfermedad que justifica su
administración. Debe quedar registrado el medicamento que tomó el donante y cuando.

SI: Preguntar cual y en que dosis. Consultar NGT 0146.
No son causa de exclusión:

Anticonceptivos orales, analgésicos comunes, vitaminas, sustitutos hormonales y pastillas
para adelgazar.
La aspirina y productos que la contengan (Ewin, Mejoral, Gluspirin, Cardioaspirina etc.),
inhiben la actividad plaquetaria durante 1 a 5 días. La sangre de donantes que estén
ingiriendo estosmedicamentos hasta3 días antes de la donación, no debe ser utilizada
para preparar concentrados plaquetarios. Lo mismo se aplica para aquellos que tomaron
Piroxicam.
Se excluyen personas con antecedentes de ingestión reciente (1 semana atrás) o actual
de los siguientes medicamentos:
ð Antibióticos
ð Antihistamínicos
ð Corticoides
ð Neurolépticos (Antipsicóticos y tranquilizantes mayores)
ð Antiepilépticos - anticonvulsivantes.
15
ð VER LISTADO DE MEDICAMENTOS
§ ¿EN LOS ÚLTIMOS 12 MESES HA IDO AL MÉDICO, MATRONA, DENTISTA U OTRO PROFESIONAL
DE SALUD?
§
§ ¿HA TENIDO CÁNCER ALGUNA VEZ?
§ ¿TIENE O HA TENIDO ALGUNA ENFERMEDAD AL CORAZÓN, PULMÓN, RIÑON, TIROIDE O

TIENE HIPERTENSIÓN, DIABETES, ALERGIA, TENDENCIA A SANGRAR U OTRA?
Preguntas dirigidas a detectar patologías que lo inhabiliten como donante.
a) Enfermedades Cardiovasculares: Se excluyen: Cardiopatías con insuficiencia cardíaca,

Enfermedad reumática en tratamiento y Enfermedad coronaria (angina, infarto), por la
posibilidad de una nueva crisis.
b) Diabetes: Se excluye quienes están bajo tratamiento con medicamentos
normoglicemiantes, insulinodependientes. Se aceptan los que controlan su diabetes sólo
con régimen.
c) Hipertensión: Se excluye aquellos que estén en tratamiento reciente o han cambiado los
medicamentos y han pasado menos de 4 semanas. En caso de detectar valores de
presión fuera de los rangos establecidos, se debe esperar 15 minutos y volver a tomar la
presión con el donante acostado.
d) Enfermedades Gastrointestinales: Se excluye las diarreas agudas o crónicas reactivadas.
Se aceptan donantes con antecedentes de úlcera péptica asintomáticos y sin
tratamientos. Otras patologías como pólipos rectales o hemorroides, pueden ser
aceptados como donantes si en el momento del interrogatorio están asintomáticos y sin
tratamiento médico.
e) Enfermedades Respiratorias: Se excluye las enfermedades broncopulmonares activas,
Tuberculosis activa. Cuadros respiratorios agudos se excluyen hasta su curación. Se
acepta a las personas que han padecido tuberculosis después de 1 año de haber
cumplido el tratamiento y esté dado de alta. Resfríos activos se excluyen transitoriamente.
f) Cáncer: Se excluye. Se aceptará solo con autorización médica, después de 5 años sin
tratamiento.
g) Enfermedades Hematológicas: Se excluye si ha presentado anemia crónica o
enfermedades oncohematológicas como Linfomas, Leucemia, etc.
h) Enfermedades Inmunológicas no alérgicas: Se excluye en forma definitiva a quienes
presenten enfermedades tales como: Lupus Eritematoso Sistémico, Artritis Reumatoidea,
Enfermedad Mixta del Tejido Conectivo, Esclerodermia.
i) Enfermedades Endocrinológicas: Se excluye en forma definitiva como donante a las
personas que sufran endocrinopatías activas y las que han recibido hormona del
crecimiento de origen humano.
j) Enfermedades Hepáticas: Hepatitis ver pregunta Nº 15. Se excluye en forma definitiva a
quienes sufran Hepatopatías (cirrosis hepática).
k) Malaria: Se excluye por un período de 3 años a quienes hayan sufrido de Malaria, tomado
drogas antimaláricas, o quienes han vivido en países endémicos.
l) Piel: Se excluye a quienes presenten lesiones en la piel especialmente en las áreas de
punción venosa o vecinas. Lesiones poco importantes como dermatitis y sarna serán
causa de rechazo temporal.
m) EnfermedadesRenales: Se excluye personas con enfermedades crónicas. Se excluyen por
2 meses las pielonefritis aguda. No se excluye personas con antecedentes de cálculos
renales (Litiasis).
n) Retraso mental:Se excluye en forma definitiva por no tener discriminación y por

pertenecer a grupo de riesgo de enfermedades de transmisión sexual.
o) Sífilis y Gonorrea: Se excluye por un período de 12 meses, ya que pudieran asociarse con
transmisión de VIH.
p) Sangramientos importantes: Consultar causa, frecuencia y temporalidad. Se excluye si es
frecuente, importante y activo.
q) Enfermedades crónicas: Dirigida a detectar patologías que lo inhabiliten como donante.
En caso de exclusión permanente, explicarle que nunca debe donar sangre y por qué.
r) Pérdida inexplicable de peso: El peso es el parámetro biomédico de gran importancia. En
el adulto tiende a mantenerse estable en el tiempo. La ganancia de peso por sobre los
valores normales para estatura y sexo se definen como obesidad.
La pérdida injustificada de peso (4 - 5 Kg. y más en los últimos meses sin causa aparente)
puede constituir un elemento de juicio médico indicador de enfermedad crónica como:
cáncer, SIDA, TBC, hipertiroidismo, anorexia psicógena, etc. Por lo tanto, constituye
motivo de rechazo como donante de sangre. Hace excepción la baja de peso motivada
por régimen, asistida por médico.
§ ¿EN LOS ÚLTIMOS 12 MESES LE HAN PUESTO SANGRE A USTED O A SUPAREJA SEXUAL?
NO: Acepte al donante.

SI: Se excluye hasta cumplir 12 meses desde el momento de la transfusión. Consultar
la causa de la transfusión y registrarla en el cuestionario.
§ PARA SER RESPONDIDO SOLO POR MUJERES:¿EN LOS ÚLTIMOS 6 MESES HA TENIDO
EMBARAZO, PARTO O ABORTO?
INFORMACIÓN ADICIONAL: durante el embarazo, especialmente en los últimos meses,
una cantidad importante de fierro es transferida de la madre al feto. Es importante dar
tiempo para que este fierro perdido sea reemplazado a través de la dieta.
OBLIGATORIO: no debe donar si:

• Hay embarazo actual
• Se trató de embarazo molar invasivo
• Se trató de embarazo molar no invasivo que está bajo tratamiento y estudio.
SI: Diferir por un periodo de seis meses post parto con o sin lactancia.
§ ¿TIENE ANTECEDENTES DE EPILEPSIA, CONVULSIONES O DESMAYOS?

Dirigido a detectar personas que hayan sufrido desmayos frente a estímulos banales
(stress, extracción de sangre, etc.), durante su vida adulta, o que estén en tratamiento
por epilepsia.
NO: Acepte al donante.

SI: Se excluye si ha presentado desmayos frente a estímulos banales (stress, extracción
de sangre, etc.) y si está en tratamiento por epilepsia.
Se acepta si ha cumplido 3 años sin crisis y sin tratamiento para la epilepsia.
§ ¿TIENE O HA TENIDO HEPATITIS DESPUÉS DE LOS 12 AÑOS?

Dirigida a detectar antecedentes de hepatitis viral. Es necesario en algunos casos explicar
el término hepatitis en base a "ponerse amarillo".
NO: Se acepta al donante.
17
SI: Se excluye. Debe instruírsele en que nunca puede ser un donante de sangre. Solo se
acepta un donante que refiere ictericia de causa obstructiva comprobada. Si
documenta una hepatitis de tipo A, puede ser aceptado como donante, si han pasado
más de 12 meses de su recuperación.
§ ¿HA RECIBIDO TRATAMIENTO CON HORMONA DE CRECIMIENTO ANTES DE 1985?
No debe donar si ha recibido gonadotrofinahipofisaria u hormona de crecimiento de

origen humano.
§ ¿HA VIVIDO EN INGLATERRA ENTRE LOS AÑOS 1980 Y 1996 O HA RECIBIDO ALLÍ
TRANSFUSIÓN DE ALGÚN COMPONENTE SANGUÍNEO?
§ ¿TIENE HISTORIA FAMILIAR DE LA ENFERMEDAD DE CREUTZFELDT JAKOB?

Estas preguntas están enfocadas a prevenir la transmisión de la enfermedad de
Creutzfeldt-Jakob, una alteración rara, degenerativa y fatal del sistema nervioso. No se ha
demostrado aún la transmisión de la enfermedad por la transfusión sanguínea, sin
embargo, no hay test para detectar la enfermedad, por lo tanto, se recomienda que no
donen sangre aquellas personas que han recibido hormona del crecimiento de origen
humano, Hormona Pituitaria de origen humano o injertos de duramadre o quienes tienen
algún familiar que padezca de la enfermedad de Creutzfeldt-Jakob.

SI: Se excluye en forma definitiva si la hormona recibida es de origen humano o
con historial familiar de la Enfermedad de Creutzfeldt-Jakob.
§ ¿USTED O SU FAMILIA TIENE(N) ENFERMEDAD DE CHAGAS O HA(N) SIDO PICADO POR UNA
VINCHUCA?
Destinado a pesquisar donantes portadores del agente causal de la enfermedad de
Chagas.

SI: Excluirlo en forma definitiva
§ ¿HA VIAJADO FUERA DE CHILE EN LOS ÚLTIMOS 3 AÑOS?
§ ¿HA TENIDO MALARIA, DENGUE O FIEBRE INEXPLICABLE DURANTE O DESPUÉS DE UN VIAJE

FUERA DE CHILE?
Estas preguntas están enfocadas a prevenir la transmisión de enfermedades parasitarias y
otras tales como la Malaria, Babeiosis, y otras infecciones como el Dengue. Las personas
deben detallar su estadía en las zonas endémicas para ser diferidas temporal o
definitivamente. La Historia de Babesiosis, Dengue es causal de exclusión definitiva.

SI: Se evalúa la condición de diferido o excluido.
Para la malaria, se recomienda que aquellos que la han tenido, deben ser diferidos por
tres añosdesde que se vuelven asintomáticos, diferir por un año a aquellos que han
estado en alguna zona endémica para malaria (ver anexo zonas endémicas), y diferir por
tres años a aquellos que han vivido en una zona endémica. Exposición al riesgo con o sin
profilaxis, excluir por 3 años.
§ EN LOS ÚLTIMOS 12 MESES, ¿UD. O SU PAREJA SE HAN REALIZADO ALGÚN TATUAJE,

PIERCING, ACUPUNTURA, O HA SUFRIDO ALGÚN PINCHAZO ACCIDENTAL CON AGUJA O
JERINGA CON SANGRE?
Dirigida también a la identificación de personas que pueden estar en fase de incubación
de VIH, hepatitis u otra infección de transmisión sanguínea.
Personal de salud no se considera grupo de riesgo, a menos que haya sufrido accidentes
corto-punzantes con material presuntamente contaminado, en los últimos 12 meses, en
cuyo caso debe excluirse por igual periodo.
NO: Se acepta al donante.

Si: Tatuajes: se excluye por un periodo de 12 meses
Acupuntura y perforación auricular: se excluye por un periodo de 12 meses
NOTA: preguntar por tratamientos inyectables con material no desechable, ya que sería
causal de exclusión.
§ ¿HA COMPARTIDO AGUJA O JERINGA CON OTRA PERSONA?

§ ¿HA PROBADO ALGÚN TIPO DE DROGA COMO MARIHUANA, COCAÍNA, PASTA BASE U
OTRA?
§ ¿SE HA INYECADO DROGAS ILEGALES NO INDICADAS POR UN MÉDICO?
§ ¿HA TENIDO RELACIONES SEXUALES CON ALGUIEN QUE ALGUNA VEZ SE HAYA INYECTADO
DROGAS?
§ Dirigido a detectar personas que están en riesgo de infección por VIH y otras
enfermedades infecciosas que podrían ser transmitidas al receptor de productos
sanguíneos. Averiguar el tipo de droga, el período en que se consumió, excluir en forma
permanente si es drogadicto crónico, drogadicto endovenoso, o si ha tenido conductas
de riesgo en los últimos 12 meses, producto de su drogadicción.
ADICCIÓN Y ABUSO DE DROGAS:

INFORMACIÓN ADICIONAL: la inyección de drogas ha sido vinculada con la transmisión
de muchas infecciones, incluyendo la Hepatitis B y el VIH. Puede que pasen muchos años
antes de la aparición de la infección y muchos consumidores de drogas no tienen
conciencia que pueden ser transmisores de infección años después de la última vez que
consumieron drogas
OBLIGATORIO: Rechazar si:
• ha usado drogas endovenosas ilegales no prescritas por un médico: rechazo permanente.
§ ¿HA ESTADO PRIVADO DE LIBERTAD EN LOS ÚLTIMOS 12 MESES?

Los individuos que han estado en una institución correccional (cárcel o prisión), por más
de 72 hrs. consecutivas, se excluyen como donantes por 12 meses desde la fecha de
última detención, por riesgo de conducta sexual y/o drogas.

SI: Se excluye por un periodo de 12 meses.
§ ¿HA TENIDO ENFERMEDAD DE TRANSMISIÓN SEXUAL COMO SÍFILIS, GONORREA U OTRA?

§ ¿HA TENIDO RELACIONES SEXUALES CON UNA PAREJA NUEVA EN LOS ÚLTIMOS 12 MESES?
§ ¿HA TENIDO RELACIONES SEXUALES CON MÁS DE UNA PERSONA EN LOS ÚLTIMOS 12 MESES?
§ ¿HA PAGADO O RECIBIDO DINERO, DROGA U OTRO, POR TENER RELACIONES SEXUALES EN
LOS ÚLTIMOS 12 MESES?
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§ ¿CREE HABER TENIDO ALGUNA VEZ RIESGO DE INFECTARSE CON VIH?
Preguntas dirigidas a detectar personas que están en riesgo de infección por VIH y otras
enfermedades infecciosas que podrían ser transmitidas al receptor de productos
sanguíneos.

SI: Evaluar el riesgo real y la promiscuidad de la conducta sexual. Si es el caso, excluir
por 12 meses
§ ¿HA TENIDO CONTACTO SEXUAL CON ENFERMO O PORTADOR CRÓNICO DE HEPATITIS B o

CEN LOS ÚLTIMOS 12 MESES?
Dirigida a identificar pacientes que pueden estar en fase de incubación de Hepatitis.
Consultar Norma.
NO: Se acepta
SI: Donantes con antecedentes de este tipo de contacto se excluyen por 12 meses.
ANTES DE TERMINAR LA ENTREVISTA, ES NECESARIO INDAGAR SI EL DONANTE:
§ QUIERE DONAR SANGRE PARA HACERSE EL EXAMEN DEL SIDA

Si es así consultar la razón y enviarlo a los consultorios de CONASIDA en que lo hacen en
forma gratuita.

SI: Excluirlo como donante
§ VIENE A DONAR SANGRE POR DINERO

Dirigida a detectar donantes pagados. Explicar en forma clara y precisa la
inconveniencia de la donación pagada. Asegurarse que el donante comprendió el
concepto. Se le otorga al donante la oportunidad de aclarar sus motivaciones para
donar sangre.

SI: Excluirlo en forma transitoria, asegurándose que él comprendió el concepto.
CONSENTIMIENTO INFORMADO
Dirigido a comprometer la responsabilidad del donante en cuanto a la

comprensión del procedimiento y la veracidad de la información por el entregada. Con su
firma autoriza la realización de los exámenes para detectar infecciones transmisibles por vía
sanguínea, de acuerdo a las normas vigentes.
NOTA: Cualquier duda que se le presente frente a las respuestas entregadas por un donante,
y que signifique aplicar un criterio diferente al escrito en este manual, o aparezcan aspectos no
consignados en él deben ser aclarados oportunamente con sus instructores o el médico a
cargo del servicio de sangre.
PROCEDIMIENTOS A UTILIZAR EN LA ATENCION Y SELECCION DE UN DONANTE DE SANGRE
I.- DETERMINACION DE Hb UTILIZANDO SULFATO DE COBRE.
PRINCIPIO:
Se basa en la gravedad específica. Una gota de sangre introducida en una
solución de Sulfato de Cobre queda encapsulada por proteinato de cobre, que
evita cualquier cambio de gravedad específica durante 15 segundos. Si la gota
tiene una gravedad específica superior a la solución, caerá en 15 segundos. Si
no es así, la gota oscilará, permanecerá suspendida o subirá hacia la superficie
de la solución.
Es una prueba cualitativa que demuestra sólo si la hemoglobina se encuentra
por encima o por debajo de límites aceptables.
MUESTRA:
Sangre, obtenida por punción capilar del pulpejo del dedo, de acuerdo a
procedimiento estandarizado.
MATERIALES:
1- Soluciones de Sulfato de Cobre de densidad 1.053 para Hombres, la que

corresponde a una Hb. de 12,5 grs./dl y de 1.052 para Mujeres, que corresponde
a una Hb. de 12,0 grs./dl. Para preparar estas soluciones pese 89 grs. de sulfato
de cobre y agregue agua destilada csp 1000cc.Mida la densidad y ajústela a
1.053 agregando más agua o sulfato según corresponda. Para preparar una
solución de densidad 1052 agregue a un litro de solución preparada de la forma
anterior 40 cc. de agua destilada y ajuste la densidad. Estas soluciones deben
almacenarse a Tº ambiente y en recipientes cerrados para evitar su
evaporación.
2- Dos vasos pp. de 6-10 cm. de alto.

3- Lancetas estériles.
4- Tórulas de algodón.
5- Alcohol Yodado.
6- Capilares heparinizados.
PROCEDIMIENTO:
1.- Coloque 75-80 ml. de cada solución en 1 vaso pp. que tenga 6-10 cms. de alto,
limpio y seco. Estos vasos deben estar rotulados HOMBRES o MUJERES según
corresponda. Cambiar las soluciones cada vez que haya cambio de turno o
después de 30 determinaciones. Antes de usar las soluciones mezclarlas bien.
2.- Limpie la zona de la piel donde se va a efectuar la punción (pulpejo del dedo)
con alcohol yodado, deje secar. Pinche el dedo firmemente, cerca del extremo
distal y ligeramente lateral, con una lanceta estéril. Descarte la lanceta en el
recipiente destinado al material cortopunzante. Es importante un buen flujo libre
de sangre. No comprimir repetidamente el dedo, ya que esto puede diluir la
gota de sangre con un exceso de líquido tisular y dar resultados falsamente
bajos.
21
3.- Recoja la sangre en un tubo capilar con anticoagulante impidiendo que penetre
aire en su interior.
4.- Deje caer suavemente del tubo capilar 1 gota de sangre desde una altura de
aproximadamente 1 cm. sobre la superficie de la solución de Sulfato de Cobre.
5.- Observe durante 15 segundos. Si la gota de sangre se va al fondo, el nivel de Hb.

está sobre el mínimo aceptable para donar sangre. Si la gota queda en la
superficie o bien cae y luego se devuelve, significa que el nivel de Hb. está bajo
el mínimo aceptable para donar sangre. Compruebe esto haciendo un
microhematocrito.
REGISTRO DE RESULTADOS:
Los resultados quedarán registrados en la Ficha de Donante.
CONTROL DE CALIDAD:
1.- Realícelo cada vez que se prepare una nueva solución de Sulfato de Cobre.
2.- Seleccione muestras de sangre tomadas con anticoagulante y de Hb. conocidas,
que estén entre 0,5 - 1,0 gr./dl bajo y sobre el rango aceptado respectivamente.
3.- Lleve a cabo la técnica de acuerdo a lo detallado en el procedimiento.
4.- Anote sus resultados en el registro de control de calidad.
NIVELES MINIMOS DE HEMOGLOBINA Y HEMATOCRITO EN DONANTES DE SANGRE
ORIGEN DE LA METODO NIVEL MINIMO

MUESTRA
HOMBRES MUJERES
DEDO Hb 125 g/l 120 g/l

O 12.5 g/dl 12.0 g/dl
VENA
Hto 0,38 0,36
38% 36%
Sulfato de cobre 1.050 1.052
NOTA: Puede presentarse resultados falsos debido a un exceso de proteínas o a un alto

recuento de leucocitos en la muestra.
II.-DETERMINACION DE HEMOGLOBINA EN DONANTES DE SANGRE CON EL METODO HEMOCUE
PRINCIPIO
Este método determina la concentración de hemoglobina como metahemoglobina, a dos
longitudes de onda (570 y 880 mm) sin necesidad de dilución de la muestra. Para la
realización de esta técnica se cuenta con microcubetas que contienen el reactivo
(desoxicolato sódico) seco y un fotómetro destinado a la lectura de la muestra, el que está
calibrado sobre la base del método internacional de referencia para la determinación de
Hb que es la hemocianhemoglobina (HiCN)
INSUMOS NECESARIOS
1. Fotómetro para lectura de HemoCue

2. Cubeta control de HemoCue
3. Microcubetas HemoCue para determinación
4. Lancetas desechables
5. Algodón
6. Desinfectante
7. Caja de descarte de material cortopunzante
CONTROL DE CALIDAD
Realizar cada día al iniciar el trabajo:
Ø Chequee en Nº de serie del equipo y de la cubeta de control
Ø Coloque en ON el aparato
Ø Tire el porta cubeta hacia la posición de inserción de la muestra. La pantalla mostrará las
letras "Hb".
Ø Después de 6 segundos aparece la palabra "READY" en la pantalla
Ø Coloque la cubeta roja standard de control en el porta cubeta y empújelo hacia la
posición de medición. La pantalla mostrará la palabra "MEASURING".
Ø Después de 10-15 segundos se completa la medición y el fotómetro muestra el valor en
g/dL. En el registro de control de calidad anote este valor, el Nº de serie de la cubeta, el
valor standard de la cubeta de control utilizada y el Nº de lote de las microcubetas que
utilizará en las determinaciones de los donantes. El valor del control no debe desviarse del
valor standard más de +/-0.3 g/dL.
Ø Si el standard está fuera de rango aceptable, limpie el porta cubeta, séquelo
completamente y vuelva a realizar la determinación del estándar. Si continua fuera del
rango aceptable, informe al TM. Jefe.
Ø Si el equipo no puede ser calibrado, utilice el método alternativo determinado para estos
casos.
MANEJO DE LAS MICROCUBETAS DEL HEMOCUE
1. Coloque la fecha al set de microcubetas cada vez que este se abre por primera vez
Ø Las microcubetas son estables por 90 días a partir de la apertura del set.
2. Retire solo las microcubetas que utilizará para los test inmediatos
3. Los reactivos incluidos en la microcubeta son sensibles a la humedad por lo que debe
guardarlas con un desecador.
4. COLOQUE LA TAPA INMEDIATAMENTE DESPUES DE HABER RETIRADO CADA MICROCUBETA
DEL CONTENEDOR.
5. Las microcubetas que no se ha usado deben permanecer en el contenedor original.
6. Debido a que este es un método fotocolorimétrico, es importante no tomar las
microcubetas por el lado donde se realizará la lectura
7. Mantenga las microcubetas almacenadas entre 15 a 30ºC. No refrigerar.
PROCEDIMIENTO
1. Coloque el fotómetro en ON. Asegúrese que el portacubeta está afuera (para colocar la
microcubeta). Cuando parpadea la palabra READY en la pantalla, el fotómetro está listo
para usar. El aparato muestra en la pantalla la sigla Hb durante 2 segundos cuando está
funcionando.
2. Utilice siempre guantes mientras realiza la punción capilar y manipula las microcubetas.
Cámbiese guantes entre cada donante.
3. La forma y partes de la cubeta se observa en la figura Nº1.
4. Saque una microcubeta nueva del contenedor, tomándola por el lado de sostén y no de
lectura.
23
5. Realice la punción capilar de acuerdo a lo descrito en el procedimiento en este Manual
6. Asegúrese de lograr una gota de sangre que llene completamente la cubeta.
7. Tomar la cubeta por la parte posterior y poner en contacto con la sangre la porción
donde se encuentran los reactivos de manera de llenarla completamente por
capilaridad. Evite contaminar el ojo óptico. No rellene la cubeta. Si hay burbujas de aire
en el ojo óptico de la cubeta debido a un lleno inadecuado de la cubeta, debe
descartarla y utilizar una nueva para realizar el test.
8. Una vez llenada completamente, limpie el exterior de la cubeta con un papel absorbente
limpio. No tocar la ranura de la microcubeta.
9. Coloque la cubeta en el portacubeta del fotómetro.
10. Empuje el portacubeta hacia adentro. Una vez que el brazo alcanza la posición de
lectura, aparece en pantalla el mensaje MEASURING.
11. Después de 30-50 segundos se logra el estado estable de la reacción química y el
fotómetro muestra en pantalla el resultado. El valor aparece durante 5 minutos si la
cubeta ha permanecido en la posición de lectura. Después de 5 minutos la pantalla
muestra la sigla Hb.
12. Una nueva lectura puede realizarse si se lleva hacia fuera el porta cubeta, se espera que
aparezca en pantalla la palabra READY, se coloca una nueva muestra y se vuelve el
portacubeta a la posición de lectura. Estas nuevas lecturas demorarán solo 10-20
segundos para mostrar el resultado en la pantalla.
13. Registre el valor de hemoglobina obtenido en el lugar correspondiente del cuestionario al
donante.
14. Realice una segunda lectura de la muestra y anótela en el registro correspondiente.
15. Elimine las microcubetas en el contenedor de desechos una vez finalizada la técnica.
16. Si la segunda lectura de una muestra se diferencia de la primera en más de +/-0.3 g/dL,
la lectura no es válida. Repita el método desde el paso 5. Si nuevamente los resultados no
son válidos, notifique al TM. jefe para recibir instrucciones.
17. Si aparece un código de error en el procedimiento, siga el siguiente procedimiento:
18. Apague el equipo. Si el fotómetro tiene baterías recargables, manténgalas en el
cargador mientras no está en uso.
19. Limpie el porta cubeta todos los días con alcohol o una solución jabonosa suave,
retirándolo del fotómetro. Es importante que el portacubeta esté completamente seco
antes de volver a colocarlo en el equipo.
20. Guarde y traslade el fotómetro dentro de su caja
III.- TECNICA EN LAMINA PARA CONTROLAR ANTIGENOS ABO EN GLOBULOS ROJOS.

(No debe usarse como técnica para definir ABO en donantes o pacientes)
PRINCIPIO:
Se basa en la detección de antígenos A y B presentes en el glóbulo rojo
mediante antisueros específicos.
MUESTRA.
Sangre obtenida por punción capilar del pulpejo del dedo, según lo descrito en
el procedimiento estandarizado.
MATERIALES.
- Lanceta estéril
- Tórulas de algodón
- Desinfectante
- Lámina de vidrio
- Sueros clasificadores para ABO

- Fuente de luz para lectura
- Baguetas
PROCEDIMIENTO.
1.-Coloque en una lámina limpia y seca una gota de cada uno de los antisueros, primero
anti-A, después anti-B y finalmente anti-AB.
2.- Proceda a realizar una punción capilar en el pulpejo del dedo según el procedimiento
estandarizado, obteniendo una suficiente cantidad de sangre. Añada a cada gota de
antisuero una gota de la muestra de sangre, teniendo cuidado de dejarla caer
libremente sin contaminar el capilar con antisuero.
3.- Mezcle bien utilizando baguetas diferentes, los antisueros con la sangre. La mezcla debe
esparcirse en un área de aproximadamente 20 mm. de diámetro.
4.- Balancee suavemente la lámina durante 2 min.
5.- Observe la lámina en busca de aglutinación frente a una fuente de luz. La aglutinación
de los glóbulos rojos en presencia de cualquier antisuero para la tipificación ABO,
constituye un resultado positivo. Una suspensión uniforme de los glóbulos rojos es un
resultado negativo. Realice la interpretación de acuerdo al siguiente esquema:
GRUPO ABO anti-A anti-B anti-AB

AB + + +
A + - +
B - + +
O - - -
6.- Después de usar las láminas, póngalas en una solución de Cloro al 0,5% por 30 minutos
antes de lavarlas.
CONTROL DE CALIDAD:
1.- Observe diariamente el aspecto de los sueros clasificadores. Los antisueros deberán ser
claros y transparentes, si se observa turbidez o cambio de color no deben usarse.
2.- Diariamente deberá realizar controles positivos y negativos:
ANTISUERO CONTROL + CONTROL -

anti-A G.R. A2 G.R. B
anti-B G.R. B G.R. A1
anti-AB G.R. A2B G.R. O
3.- Anote los resultados en el registro de Control de Calidad.
NOTA: Este método no debe considerarse útil para informar un grupo sanguíneo, dada su
baja sensibilidad y el alto porcentaje de error que presenta, solo puede ser usado
para tamizaje.
25
IV.- CONTROL DE CALIDAD DEL PROCEDIMIENTO DE EXTRACCION EN UN DONANTE DE SANGRE.
1.- CULTIVO BACTERIOLÓGICO DEL SITIO DE PUNCIÓN.
Debe realizarlo una vez al mes o según lo establezca el manual de procedimientos del
servicio, para lo cual elegirá un donante al azar, efectuando el siguiente procedimiento:
1.-Usando una tórula estéril tome una muestra del brazo del donante, en el sitio elegido
para realizar la flebotomía, antes de limpiar la zona.
2.- Tome otra muestra después de realizada la limpieza de esta zona.
3.- Envíe ambas muestras al laboratorio de bacteriología para su cultivo.
En el laboratorio de bacteriología las muestras se cultivarán por 48 horas en un medio de
agar sangre. El resultado ( de la muestra post limpieza) del cultivo debe ser negativo, de
lo contrario deberá investigar y corregir la causa. Los resultados obtenidos quedarán
anotados en un registro especial para estos fines.
2.- CULTIVO BACTERIOLÓGICO DE LAS UNIDADES DE SANGRE.
Debe realizarlo una vez al mes, eligiendo al azar una bolsa de sangre que sea no reactiva
para las enfermedades de transmisión sanguínea. Preferentemente elegir bolsas que
tengan más de 15 días de extracción y de aspecto dudoso.
Esta bolsa será enviada al laboratorio de bacteriología donde será cultivada en caldo de
tioglicolato en una proporción de 1:10 (use una muestra de sangre de por lo menos 10
ml.).
Las muestras deberán incubarse a 37ºC durante 7 días, al tercer y quinto día se harán
subcultivos.
Los resultados obtenidos se anotarán en el registro dispuesto para estos fines. De acuerdo
a los resultados deben tomarse las medidas correspondientes.
3.- CONTROL DE CALIDAD DEL VOLUMEN DE SANGRE EXTRAÍDO A CADA DONANTE.
Debe controlar el 1% de todas las unidades de sangre. Controlará dos aspectos:

a) Que el volumen de sangre extraído a cada donante en tubos pilotos, ya sea para
uso del Banco de Sangre u otros laboratorios, no exceda, bajo ningún concepto los 30 ml.
b) Que el volumen de sangre extraído en cada bolsa, sea de 450 +/- 50 ml. Esto lo
deberá controlar el TM. responsable de la unidad, pesando diariamente 6 bolsas de
sangre, tomadas al azar (3 en el turno de mañana y 3 en el turno de tarde). El peso de las
bolsas vacías debe ser determinado para cada marca comercial por el TM. responsable
de la unidad.
DETERMINACIÓN DEL PESO DE LAS BOLSAS:

Considere que 1 ml. de sangre pesa 1,052 grs. (suponiendo una Hb. de 12,0 gr./dl). Por
lo tanto cada bolsa debe pesar:
473 +/- 52 grs. + PESO DE LA BOLSA CON ANTICOAGULANTE
Debe anotar los resultados en un registro especialmente dispuesto para estos fines. En
caso de detectar anomalías debe tomar las medidas correspondientes para corregir el
error.
V.- MEDICION DE LA PRESION ARTERIAL

La medición de la presión arterial se obtiene mediante el uso de un manómetro de
mercurio y/o sistema digital automatizado. Al utilizar el manómetro se persigue
auscultar los ruidos del latido arterial mediante un estetoscopio.
SELECCIÓN DEL MANGUITO:

El tipo de manguito a utilizar dependerá del grosor del brazo de la persona a
examinar. Una cámara de goma de un ancho no apropiado a la circunferencia del
brazo del paciente entrega mediciones de PA con un error sistemático. Si la cámara
es muy ancha, la presión se subestima; por el contrario, si la cámara es muy angosta,
la presión se sobreestima, esto es frecuente cuando se usa el manguito de adulto
estándar en personas obesas. El ancho de la cámara de goma debe corresponder al
40% de la circunferencia del brazo; dicho de otra forma, el ancho de la cámara
multiplicado por 2.5 define la circunferencia de brazo para el cual es adecuado ese
manguito en particular: para una circunferencia braquial de 30 cm es adecuada
una cámara de un ancho de 12 cm manguito adulto estándar). Para medir la
circunferencia de brazo, determine la distancia entre el acromium y el olécranon y
marque el punto medio; en ese lugar realice la medición. En un adulto con una
circunferencia de entre 26-30 cm, utilice el manguito estándar de adulto.
PROCEDIMIENTO:
1. El donante debe estar en posición sentada, con el brazo a la altura del corazón,
apoyado en una mesa. Relajado, sin ejercicio exagerado ni emociones fuertes
minutos previos al examen.
2. Libere el brazo a examinar de prendas de vestir que puedan ejercer presión adicional
a la del esfingomanómetro.
3. Apoye el antebrazo sobre la mesa, incluyendo el codo. El eje del antebrazo con el
brazo puede quedar en semiflexión.
4. Disponga el manguito alrededor del brazo ajustado y firme, y de modo que el borde
inferior de este quede a 2.5 cm sobre el pliegue del codo. Asegure que el balón
neumático está ubicado en la cara interna del brazo.
5. Ubique la arteria radial por palpación. Insufle aire al manguito hasta dejar de percibir
dicho pulso radial (presión sistólica palpatoria). Proceda a desinflar el manguito,
bajando aproximadamente 3 mm Hg/ segundo. Espere 30 segundos antes de re
inflar.
6. Disponga la membrana del estetoscopio sobre la arteria braquial previamente
ubicada. Vuelva a insuflar el manguito 20 a 30 mmHg más que la medición hecha en
el punto anterior, lo que constituye el nivel máximo de insuflación.
7. Libere el aire de la cámara a una velocidad aproximada de 2 a 4 mm Hg por
segundo. EL PRIMER RUIDO que se ausculta corresponde a la PRESION SISTOLICA, siga
auscultando cuidadosamente y notará que los ruidos se debilitan y terminan por
desaparecer. La desaparición de ruidos marca el punto de la PRESION DIASTOLICA.
8. Registre la presión sistólica y diastólica en números pares e identifique en qué brazo
efectuó la medición.
9. Espere 1 a 2 minutos antes de una nueva medición en el mismo brazo.
10. Si la presión sistólica o diastólica esta fuera de los rangos establecidos en las normas,
el donante debe ser excluido temporalmente hasta ser evaluado por un médico.
27
PRECAUCIONES:
Brazalete ubicado a nivel del corazón. Paciente relajado para que no influya sobre
gasto cardíaco y resistencia periférica. Bajar presión con velocidad uniforme. Registrar
en que brazo se tomó la presión y en qué posición.
VI.- PREPARACION DE LA ZONA DE PUNCION VENOSA.
La sangre debe extraerse de una vena grande y firme, en un área libre de lesiones. Es
aconsejable inspeccionar ambos brazos y aplicar torniquete con una presión de 40-60
mm de Hg. para hacer las venas más prominentes. Una vez seleccionada la mejor
vena, se liberará la presión y preparará la zona para la punción.
No existe ninguna forma completamente aséptica de preparar una zona de

venopuntura, pero se pueden conseguir condiciones higiénicas que garanticen al
máximo la obtención de una unidad estéril empleando varios métodos.
METODO 1:
Prepare un área de 6 cm de diámetro a partir del sitio de punción previsto, utilizando en
todo momento material estéril.
1. Limpiar vigorosamente la piel del área de punción con jabón acuoso o solución
detergente no alcohólica al 15 % (Zefirol o Kabacilin 1: 10.000) durante un mínimo
de 15 seg. para eliminar grasa, suciedad, células cutáneas y otros. Hacerlo en un
solo sentido (de abajo hacia arriba o de dentro hacia afuera).
2. Elimine el jabón con abundante agua y secar la zona.
3. Aplicar alcohol isopropilo al 70% de forma circular desde adentro hacia afuera
utilizando tórulas de algodón o sachets que lo contengan.
5. Si la punción no se realiza inmediatamente, cubra el área con gasa estéril.
6. ¡NO VOLVER A PALPAR EL ÁREA!
VII.- PUNCION VENOSA Y EXTRACCION DE SANGRE.
1. Compruebe que la bolsa de extracción, registro, tubos de análisis y otros, tengan la

misma identificación entre ellos y el donante (nombre, número etc.).
2. Inspeccione la bolsa en busca de defectos. Aplique presión para verificar que no

tiene fallas. La solución de anticoagulante debe ser clara y transparente.
3. Deposite la bolsa a un nivel inferior al del brazo del donante. Asegure el control de
la cantidad de sangre a extraer.
4. Clausure temporalmente el ingreso de aire a la bolsa pinzando la tubuladura (tripa)

y deje un nudo suelto.
5. Seleccione la vena y prepare la zona a puncionar según el método establecido en

el manual de procedimientos, que garantice al máximo la obtención de una
unidad estéril.
___________________________________________________________________________________________INMUNOHEMATOLOGIA Y BANCO DE SANGRE
6. Una vez realizado el procedimiento anterior, aplique nuevamente el torniquete (4

dedos sobre el pliegue del codo) sin tocar el área desinfectada. Solicite al donante
que abra y cierre la mano para hacer más prominente la vena previamente
seleccionada.
7. Descubra la aguja estéril y puncione inmediatamente con el bisel hacia arriba. Sólo
puede usar una vez cada equipo. Fije con tela adhesiva para mantener la aguja en
su sitio y cubra con gasa estéril.
8. Abra el cierre provisional y solicite al donante que abra y cierre la mano suave y
lentamente
9. Observe y atienda al donante durante toda la extracción a fin de pesquisar en

forma oportuna cualquier reacción adversa.
10. Mezcle suavemente la sangre con el anticoagulante, ya sea en forma manual, o

con agitador mecánico.
11.Controle cada cierto tiempo que se mantenga un buen flujo sanguíneo para evitar
coagulación. La extracción no debe demorar más de 10 minutos.
12. Controle el volumen de sangre extraído.
Si se utiliza un sistema de balanza: 1 ml de sangre pesa como mínimo, 1.052 grs., la

gravedad específica mínima admisible para mujeres donantes. Una cifra adecuada
para usar es 1.062 grs.; una unidad de 405- 495 ml deberá pesar 425-520 grs., más el
peso de la bolsa y anticoagulante.
13. Una vez completado el volumen: Libere la presión del torniquete a 20 mm. de Hg.
Cerrar el nudo o sellar la tubuladura más cerca de la punción.
14. Recolecte las muestras de sangre para análisis mediante un sistema que evite la
contaminación de éstas y de la unidad extraída. Existen varios métodos, uno de
ellos puede ser:
- Obturar la tubuladura más cerca de la punción por sobre el nudo sellado, con una
pinza hemostática.
- Cortar la tripa por sobre el nudo, asegurándose antes que este pinzada, de modo
que la bolsa quede sellada.
- Introducir el extremo de la tubuladura que viene del brazo del donante, en el tubo
para análisis, abrir la pinza, llenarlo y volver a pinzar.
15. Desinflar y retirar el torniquete. Retirar la aguja del brazo y ejercer presión sobre la
gasa por algunos minutos. Desechar la aguja y el resto en un contenedor
adecuado para desechos corto-punzantes.
16. Solicitar al donante que eleve el brazo (codo recto) manteniendo firme la gasa
sobre la flebotomía con la otra mano.
17. Exprimir la tubuladura que lleva la sangre hacia dentro de la bolsa, empezando en
el punto de sellado y en forma rápida para evitar coagulación. Invertir la bolsa
varias veces y dejar que la tubuladura se llene de sangre con anticoagulante
29
18. Sellar la tubuladura en varios segmentos numerados de manera clara y fácil de
leer.
19. Inspeccionar de nuevo la bolsa por si hay defectos.
20. Volver a comprobar la identificación de la bolsa, tubos de análisis y registros con el

donante (nombre, número etc.)
21. Dejar la unidad en refrigerador a 4ºC., excepto si está destinada a preparar

concentrados plaquetarios.
21. Examinar el brazo del donante para verificar que no sangra, colocar un apósito y
fijar con tela adhesiva.
ETAPAS DE LA EXTRACCIÓN DE SANGRE

IDENTIFICAR AL DONANTE
INSPECCIONAR EL EQUIPO
SELECCIONAR DE LA MEJOR VENA
REALIZAR DESINFECCION
FLEBOTOMIA
TERMINAR DE LA EXTRACCION
ENTREGAR RECOMENDACIONES
AL DONANTE
OFRECER UN REFRIGERIO
AGRADECER DONACION
VIII.- ATENCION DEL DONANTE DESPUES DE LA EXTRACCION
1. El donante debe permanecer acostado en el sillón de donación por unos 5 minutos

más, bajo la observación directa del personal de la sala de extracción.
2. Puede sentarse, previa autorización de quien lo atendió, y esperar algunos minutos

antes de ponerse de pie; cuando lo haga y camine hasta el área de observación,
debe estar acompañado por personal de la unidad de donante.
3. Indicarle ciertas normas o cuidados que debe observar después de la extracción:
- No marcharse sin que algún miembro del CS/ UMT lo autorice.

- Beber más líquido del acostumbrado en las 4 hrs. siguientes.
- No es recomendable beber alcohol.
- No fumar durante las 2 hrs. siguientes.
- Si continúa sangrando por el sitio de punción, presionar sobre éste y levantar el
brazo.
- Si siente vértigo o mareo, recostarse o sentarse y poner la cabeza entre las

rodillas. Si alguno de los síntomas persiste, volver centro de sangre/ UMT, o
consultar un médico.
- Puede reanudar la actividad normal después de 1 hr. si se siente bien. Si realiza
determinado tipo de trabajo que supone riesgo o esfuerzo, se recomienda
esperar 12 hr. antes de reanudar su actividad normal.
- Indicar retirar el apósito pasado algunas horas.
4. Ofrecer de beber leche, jugos u otro refrigerio según lo establecido por cada banco
de sangre.
5. Agradecer la donación; animarle a hacer una nueva donación después de

transcurrido el intervalo de tiempo recomendado entre una y otra (según
corresponda).
6. Registrar en el expediente del donante, cualquier reacción que éste haya sufrido.
REACCIONES ADVERSAS A LA DONACION DE SANGRE
Es muy importante saber cómo proceder frente a una reacción adversa a la

extracción. Las reacciones adversas que puede presentar un donante de sangre se
clasifican en: generalizadas o localizadas en el sitio de punción.
I.- REACCIONES LOCALES:

a) Hematomas.
Es el escape de sangre de la vena hacia el tejido circundante y puede resultar de
una mala técnica de punción, traspaso de la vena, sacar la aguja teniendo ligado
el brazo, no aplicar suficiente presión cuando se retira la aguja al finalizar la
extracción. El hematoma produce dolor y posteriormente cambio de color en la
zona por la destrucción de los glóbulos rojos los que liberan hemoglobina. Para una
reabsorción más rápida de un hematoma ya instalado, puede colocarse
compresas tibias sobre él.
Si el donante presenta un hematoma Ud. debe proceder de la siguiente forma:
♦ Suelte la ligadura y retire la aguja

♦ Coloque dos tórulas limpias de algodón sobre el hematoma y haga
presión con los dedos por 7 minutos.
♦ Puede colocar hielo en la zona por 5 minutos.
Si sospecha que ha puncionado una arteria:
♦ Desligue y saque la aguja de inmediato.

♦ Presione con dos tórulas limpias la zona por 10 minutos
♦ Coloque un vendaje compresivo
b) Nervio dañado.
No es frecuente, pero cuando ocurre el donante manifiesta tener un dolor agudo
en todo el brazo el que permanecerá por bastante tiempo. Si sospecha que esto ha
ocurrido, retire inmediatamente la aguja del sitio de punción y siga las instrucciones
31
dadas por el médico jefe del Servicio. Es conveniente puncionar venas superficiales,
para evitar dañar algún nervio.
II.-REACCIONES GENERALIZADAS:
a) Síndrome vaso-vagal
Se produce por factores síquicos. Los síntomas pueden ser: debilidad, palidez,
ansiedad, piel fría y sudorosa, con o sin pérdida del conocimiento, puede haber
también nauseas, vómitos y relajación de esfínteres. La presión y el pulso bajan.
Si el donante presenta signos como palidez sudoración, desmayo o fatiga durante

la donación:
1.-Suspenda la extracción.
2.- Colocar al donante tendido de espaldas y con los pies más altos que la cabeza.
3.- Asegurarse que él tiene las vías aéreas expeditas.
4.-El donante debe inhalar sales de amoníaco. El TM. que lo atiende debe inhalarlas
primero para comprobar la intensidad del aroma, ya que si es demasiado fuerte
puede afectar las membranas nasales y si es excesivamente suave no es
efectivo; deben provocar la tos del donante, lo que elevará su tensión arterial.
5.-Deje reposar al donante en la camilla por un tiempo prudente hasta que se
recupere, (15 minutos como mínimo).
6.- Debe permanecer en estricta vigilancia del Tecnólogo Médico a cargo. En caso
de agravarse la situación, dé aviso al médico del servicio, o siga las instrucciones
entregadas por él.
Si el donante presenta signos de un síndrome vaso-vagal después de la donación:

1.-Coloque al donante tendido de espalda y con los pies más altos que la cabeza.
2.- Suéltele el cinturón, la corbata u otra prenda de ropa ajustada.
3.- Verifique que las vías aéreas estén expeditas
4.- Aplique compresas frías sobre la frente
5.-Hágalo inhalar sales de amoníaco, teniendo igual precaución que las ya
descritas.
6.- Es muy importante calmarlo y no demostrar nerviosismo
7.- Vigile su estado hasta que el donante se reponga totalmente.
8.- En caso de agravarse la situación del donante, siga las instrucciones entregadas
por el médico del Servicio para esta situación.
Si el donante presenta vómitos o nauseas:

1.- Procure calmarlo y que esté cómodo.
2.- Recomiéndele que respire lenta y profundamente (inspirando por la nariz y
botando el aire la boca).
3.- Aplique compresas frías en la frente y/o la nuca.
4.- Vuélvale la cabeza hacia un lado, para evitar que pueda aspirar su propio
vómito.
5.- Si el donante vomita, proporciónele un recipiente adecuado y toallas de papel.
Asegúrese de mantener la cabeza hacia un lado para evitar que aspire vómito.
6.- Pídale que permanezca tendido hasta que se haya recuperado.
7.- Mantenga al donante bajo continua vigilancia hasta que se haya recuperado
totalmente.
8.- Ofrézcale agua para enjugarse la boca.
b) Tetania (temblores y espasmos musculares):

Cuando el donante se encuentra ansioso y nervioso, puede comenzar a respirar
rápidamente y profundamente, esta hiperventilación trae como consecuencia una
pérdida excesiva de CO2 generando un estado de alcalosis, que produce ligeros
temblores musculares y espasmos tetánicos de las manos y la cara, pudiendo llegar
a presentar convulsiones e inconsciencia.
Observe al donante durante la extracción procurando mantenerlo siempre

calmado, y para detectar la aparición de alguno de estos síntomas. Si el donante
está hiperventilando puede interrumpir el proceso con algún tema de conversación
para distraer su atención.
Si el donante de sangre presenta los síntomas descritos, proceda como sigue:

1. Suspenda la extracción.
2. Haga que el donante respire durante un rato dentro de una bolsa de
papel.
3. Espere que se relaje (no forzar el brazo).
4. Si presenta convulsiones pida ayuda para evitar que se lastime.
5. Mantenga al dador bajo vigilancia directa y controle pulso y presión.
6. No administrar oxígeno.
c) Convulsiones verdaderas (epilepsia)

1. Pida ayuda para evitar que se lastime.
2. Impida que se muerda la lengua, colocando una gasa estéril bajo la lengua.
3. Avise de inmediato al médico jefe del servicio.
d) Problemas cardíacos.
Se pueden observar con muy poca frecuencia, pero si sospecha que el donante
presenta problemas cardíacos avise de inmediato al médico jefe del servicio.
33
________________________________________________________________________________INMUNOHEMATOLOGIA Y MEDICINA TRANSFUSIONAL
REGISTROS
Uno de los elementos más importantes de un sistema de Garantía de Calidad son los registros.
Ellos pueden ser de diverso tipo y cumplir varios objetivos. A continuación mostramos algunos
ejemplos de registros a usar en la unidad de donante de sangre
CONTROL BACTERIOLOGICO DEL SITIO DE PUNCION
FECHA Nº FLEBOTO RESULTADO RESULTADO COMENTARIOS

DADOR MISTA MUESTRA MUESTRA
PREVIA POSTERIOR
CONTROL DE VOLUMEN DE SANGRE EXTRAIDA AL DONANTE
FECHA Nº PESO DE LA VOLUMEN FLEBOTOMISTA COMENTARIO

DADOR BOLSA EXTRAÍDO
TRANSPORTE DE SANGRE
Para estos fines es indispensable contar con un programa de control de calidad que
garantice que la sangre a usar en transfusiones, desde este punto de vista es segura.
Es muy importante vigilar la integridad de las bolsas de sangre, es recomendable realizar

cultivos si se observa que el aspecto de la sangre y de los componentes no es normal, o si
el paciente experimenta una reacción adversa que clínicamente pueda ser debida a
algún tipo de contaminación en la sangre del donante. Las técnicas elegidas para el
cultivo de la sangre deben seleccionarse cuidadosamente para obtener un buen
rendimiento, y el Banco de Sangre debe verificar que se han realizado de forma
adecuada.
Algunos aspectos a considerar son:
READMISION DE UNIDADES DE SANGRE
La sangre devuelta al Banco no debe destinarse nuevamente a la transfusión, hasta que

no se hayan comprobado los siguientes puntos:
El cierre de la bolsa no debe haber sido abierto ni manipulado de ninguna forma. Esto
garantiza que se ha mantenido la esterilidad.
La sangre debe en todo momento haberse mantenido entre 1 y 10_C, preferentemente

entre 1 y 6 _C. El hecho de que la sangre alcance temperaturas superiores a estos valores,
aunque se enfríe posteriormente, tiende a acelerar el metabolismo de los eritrocitos,
provoca la hemólisis y puede permitir el crecimiento bacteriano en la unidad. Muchos
servicios de transfusión no consideran válidas las unidades de sangre que hayan
permanecido fuera de un refrigerador controlado por más de 30 minutos.
Si la sangre cumple las normas establecidas para ser utilizada, al menos un segmento
sellado del tubo de conexión con el donante debe permanecer adosado a la bolsa,
para ser usado en las pruebas cruzadas.
Los registros deben indicar que la sangre ha sido readmitida y considerada apta para ser
utilizada y que ha sido inspeccionada previamente. Debe existir un TM. responsable de
este hecho.
TRANSPORTE DE LA SANGRE Y COMPONENTES SANGUINEOS
La temperatura de la sangre y de los concentrados de eritrocitos debe mantenerse en

todo momento entre 1 y 10ºC durante el transporte. Esto se puede conseguir empleando
cajas resistentes y bien aisladas y/o, que contengan suficiente material refrigerante,
siendo el más recomendado para la mayoría de los envíos, el hielo húmedo en
recipientes impermeables, como bolsas plásticas. Sin embargo los cubitos de hielo
excesivamente fríos, el hielo envasado y el hielo seco, no deben emplearse para
transportar o almacenar sangre total o eritrocitos ya que pueden hacer bajar tanto la
temperatura en el recipiente que se produzca la hemólisis de los eritrocitos más próximos.
La sangre transportada por vía aérea puede congelarse si se transporta en un
compartimento no presurizado. Los compartimentos de carga de los autobuses y
camiones alcanzan a menudo temperaturas superiores a los 38ºC. La temperatura de la
35
sangre y de los componentes debe controlarse rigurosamente durante el transporte con

algún sistema de registro de temperatura y también en el momento de la recepción.
El hielo debe colocarse encima de la sangre, ya que el aire frío se mueve hacia abajo.
Durante los viajes largos con altas temperaturas, el hielo y la sangre deben estar en
contacto directo, ya que si quedan separados por una lámina de cartón o una franja de
aire se produce un aislamiento interno que no permite que el hielo proteja
adecuadamente la sangre de las altas temperaturas del entorno. Es necesario colocar
hielo húmedo encima y debajo de la sangre si el tiempo es muy caluroso o si el viaje dura
varias horas. El hielo húmedo utilizado en cubos es mejor que en láminas o en trozos
porque se derrite más lentamente. En las cajas enviadas a grandes distancias o en
condiciones ambientales de elevada temperatura, el volumen de hielo debe ser, como
mínimo, igual al de la sangre. En un recipiente aislado se puede considerar que la
temperatura está entre 1 y 6ºC mientras que quede hielo sin derretir.
El control de la temperatura de la sangre y los eritrocitos durante el transporte puede

poner de manifiesto la necesidad de mejorar el aislamiento de los recipientes o de
colocar en ellos una mayor cantidad de hielo. En los envases debe periódicamente
colocarse controles para el registro de las temperaturas. Los registros de temperatura
deben ser completados y remitidos a su origen por el personal del Banco de Sangre que
recibe el envío, para poder saber si el aislamiento es correcto y si la cantidad de hielo es
adecuada. El personal encargado de enviar o distribuir la sangre, tiene la responsabilidad
de garantizar que los sistemas de envío puedan mantener durante el transporte la
temperatura de la sangre por debajo de 10ºC.
La decisión sobre la utilización de la sangre que ha estado expuesta a temperaturas

superiores a los 10ºC debe tomarla, preferentemente, el personal de Tecnólogo Médico
calificado. Deben tenerse en cuenta factores como el tiempo y el tipo de transporte, los
grados en que la temperatura ha sobrepasado los 10ºC, la presencia de hielo residual en
los envases y la aparición de hemólisis. El personal encargado de efectuar los envíos
debe ser informado si se registran temperaturas elevadas que no son aceptables.
UNIDADES MOVILES DE RECOLECCION

Si la sangre se envía desde una unidad móvil de recolección a un centro donde se
procesa y se preparan diversos componentes, debe mantenerse en frío a la temperatura
anteriormente indicada, excepto en el caso de que esté destinada a la obtención de
plaquetas, en que no debe bajar de 20ºC, ya que éstas se separan mejor de la sangre
total a temperatura ambiente. Estas unidades deben transportarse desde el área de
recolección hasta el lugar de procesamiento lo antes posible, y en el caso de la
obtención de plaquetas no deben pasar más de 8 horas entre la recolección y la
centrifugación.
La sangre almacenada entre 1 y 6ºC alcanza los 10ºC o más si permanece

aproximadamente 30 minutos a temperatura ambiente, por este motivo la sangre debe
enviarse al centro en un período no superior a los 30 minutos.
ALMACENAMIENTO Y TRANSPORTE DE HEMOCOMPONENTES
ALMACENAMIENTO EN
COMPONENTE BANCO DE SANGRE TRANSPORTE
Glóbulos rojos en AS-5, 1-6ºC, en refrigerador con No puede permanecer por

También leucorreducidos registro de temperatura, más de 30 minutos fuera de
en circuito cerrado hasta 42 días un refrigerador con registro
de temperatura.
Glóbulos rojos o sangre 1-6ºC, en refrigerador con La temperatura de la
total en CPD, También registro de temperatura, sangre y de los
leucorreducidos en circuito hasta 21 días concentrados de eritrocitos
cerrado debe mantenerse en todo
momento entre 1 y 10ºC
Glóbulos rojos o sangre 1-6ºC, en refrigerador con durante el transporte
total en CPD-A, También registro de temperatura,
leucorreducidos en circuito hasta 35 días
cerrado
Glóbulos rojos lavados o 1-6ºC, en refrigerador con

circuito abierto registro de temperatura,
hasta 24 horas después del
lavado
Concentrado de Plaquetas 20-22ºC en agitación

preparados de sangre total constante hasta 5 días.
o por aféresis Expiran 4 horas después de
realizar un pool
Plasma fresco congelado -18ºC o menos en freezer

hasta 1 año. Expira en 4
horas después de hacer
pool
*El día de expiración corresponde a la medianoche del día final de almacenamiento.
GESTION DE STOCK EN BANCO DE SANGRE

La gestión del stock de productos sanguíneos en un banco de sangre es un punto
administrativo crítico, que necesita de una acuciosa coordinación y que involucra
diferentes elementos:
a) Adquisición
Corresponde a la disponibilidad de componentes sanguíneos, lo ideal para estos
fines es disponer de un sistema de Captación de Donantes Voluntarios, lo que
permite programar y manejar el número de productos disponibles
b) Tratamiento de la sangre
Se refiere a las decisiones de fraccionamiento
c) Transporte
Disponibilidad en el momento y lugar preciso
d) Almacenamiento
Contar con condiciones satisfactorias de almacenamiento en todos los procesos
37
e) Utilización
Disponer de un sistema que garantice una utilización adecuada de cada
componente sanguíneo.
ESTUDIOS PREVIOS PARA GESTIONAR STOCK.
Para realizar una adecuada gestión de stock, cada Banco de Sangre debe evaluar los
siguientes elementos:
1. Requerimientos de cada componente sanguíneo, de acuerdo a grupo ABO y Rh D.

2. Conocer los recursos humanos, físicos y financieros que dispone.
3. Conocer el sistema administrativo de gestión de pedidos y su frecuencia.
4. Sistema de Identificación y etiquetado de los productos.
5. Sistemas de controles.
6. Mecanismos a seguir cuando se tiene stock mínimo y emergencias inesperadas.
7. Mecanismos para notificar acerca de déficit.
8. Acciones a seguir cuando las solicitudes no pueden ser cumplidas.
9. Procedimientos y registros de distribución, almacenamiento, transporte, productos no
conformes, solicitud y entrega de pedido.
10. Cálculo de reservas para afrontar impacto inicial de desastres y catástrofes.
11. Determinar frecuencia de control de estado de inventario.
METODOS DE ESTIMACION DE REQUERIMIENTOS DE HEMOCOMPONENTES (STOCK)
1. Correspondería al 2-5% de la población del área.

2. 50 unidades de sangre por 1000 habitantes y por año.
3. 6-7 unidades de sangre por cama de agudos y por año.
4. Uso histórico por grupo y por componente sanguíneo.
FACTORES A CONSIDERAR PARA CALCULAR STOCK ÓPTIMO
1. Distancia entre el Centro de Sangre y las Unidades de Medicina Transfusional que

abastece. (distancias cortas 15-20%).
2. Condiciones de tránsito y climáticas.
3. Espacio de almacenamiento en los refrigeradores-y freezer.
4. Personal disponible, carga y distribución de trabajo.
5. Frecuencia de las peticiones
6. Vencimiento de componentes sanguíneos
7. Déficit de productos
8. Tipo de cirugías que se realizan en el hospital: traumatología, oncología. (15-20%)
9. Indicación de Transfusión.
10. Relación prueba de compatibilidad hecha / transfusiones realizadas.
11. Satisfacción de la demanda transfusional.
12. Postergación de cirugías
13. Ingresos y egresos de componentes sanguíneos de y a otros hospitales
14. Desarrollo previsto del establecimiento.
PROCEDIMIENTO PARA CALCULAR SOLICITUR DE COMPONENTES SANGUÍNEOS DE UMT AL CS.
1. Conocer previamente el stock mínimo y óptimo semanal y diario por grupo

sanguíneo.
2. Determinar las existencias disponibles por grupos sanguíneos al momento del

pedido.
3. Determinar las reservas disponibles.
4. Estar en conocimiento de cirugías y procedimientos programados durante el
período que cubrirá el pedido.
5. Considerar eventos y fechas con mayores riesgos en el área. Ejemplo: fiestas,
eventos, etc.
6. Calcular las unidades óptimas de componentes sanguíneos por grupo según
período a cubrir.
7. Restar a las unidades óptimas calculadas, las existencias disponibles.
8. Analizar si corresponde un aumento extra según análisis. (puntos. 1 y 8)
MANEJO DE STOCK EN CENTRO DE SANGRE
El Centro de Sangre es el encargado de la captación de donantes, el procesamiento de la

sangre y la distribución de los componentes sanguíneos, para ello es fundamental conocer
y manejar algunas variables que influirán en su stock disponible.
1. Número de donantes que concurren diario, semanal y mensualmente, y sus

variaciones estacionales.
2. Potencial de captación de donantes voluntarios y frecuencias prevista de las
donaciones
3. Calcular los stocks mínimos y óptimos.
4. Conocer stock de UMTs (inventario externo).
5. Conocer stock disponible y no disponible del C.S. (inventario interno)
6. Comparar stock óptimo con el existente.
7. Relacionar el stock no disponible con el disponible y colecciones programadas.
8. Hacer solicitud a unidad de fraccionamiento y donantes de acuerdo a las
necesidades.
REGISTROS DE DESPACHO DE PRODUCTOS DEL C.S.
Los registros son un punto crítico de calidad en la gestión de stock, ellos deben contener
como mínimo:
1. Detalle de la entrega con Nº de donación, tipo de componente, grupo.
2. Resumen del total de entrega con firma de la persona que despacha y de la que
retira.
3. Solicitud desde UMT a CS.
4. Control de Stock.
5. Solicitud de CS a sección de fraccionamiento.
ESTRATEGIAS PARA EVITAR VENCIMIENTOS
Para una correcta gestión de stock de componentes sanguíneos, es importante cautelar la

sobre o sub demanda de productos. Existen varios aspectos que entregan evidencias sobre
la calidad de este manejo, entre ellas:
1. Solicitudes de emergencias (fuera de las fechas establecidas de distribución). Si las
unidades solicitadas en forma extraordinaria no se utilizan, esto debe tenerse presente.
2. Buena comunicación entre UMTs para intercambiar componentes de grupos
sanguíneos escasos, de conservación limitada, etc.
3. Normas claras que establezcan como debe elegir la unidad a transfundir.
4. Normas de indicación de transfusión. (Relación PC/transfusión).
39
5. Pautas de solicitud transfusional para cirugía según diagnóstico.

6. Revisión diaria de stock, por fecha de vencimiento de todos los tipos de componentes
sanguíneos.
7. Criterios de distribución bien establecidos.
8. Control sobre el uso e indicación de componentes sanguíneos.
ANALISIS Y EVALUACION
Este proceso debe estar sujeto a permanente análisis y evaluación, para ello debe
conocer ciertos indicadores como:
1. Índice de caducidad de los componentes debe ser menor a 7%
2. Índice de Déficit de productos debe ser igual o menor 1%.
3. Frecuencia de envíos de emergencias.
4. Postergación de transfusiones.
5. Cumplimiento de pedidos de componentes.
6. Stock por mes, grupo, tipo de componentes.
7. Unidades no conformes.
8. Unidades intercambiadas.
9. Cumplimiento de captación de donantes y de producción.
CÁLCULO SEMANAL DE STOCK MÍNIMO HEMOCOMPONENTES = _________

EJ.:
grupo G.R.
O+ A+ B+ AB+ O- A- B- AB- O+
semana
1 4
2 15
3 0
4 16
5 15
6 0
7 7
8 12
9 5
10 4
11 24
12 10
13 11
14 13
15 13
16 10
17 10
18 8
19 9
20 10
21 10
22 14
23 13
24 12
25 11
26 8
Total
transf= a 264
Valor más alto
transf=b 24
c=a-b c=240
c/25 240/25
stock mín.
semanal 9.6
Stock óptimo = stock mínimo + X %
X = Porcentaje calculado en base otros factores ( )
41
U.M.T. HOSPITAL CARLOS VAN BUREN FECHA. / / HORA:
REGISTRO DE EXISTENCIA / PEDIDO
EXISTENCIA
CONDICION GR GLR PFC PSF CPP PLQ
TRA
O+ RET
DISP
TRA
A+ RET
DISP
TRA
B+ RET
DISP
TRA
AB+ RET
DISP
TRA
O- RET
DISP
TRA
A- RET
DISP
TRA
B- RET
DISP
TRA
AB- RET
DISP
SOLICITAMOS NOS REMITAN LOS SIGUIENTES HEMOCOMPONENTES EN EL DÍA DE HO Y
PEDIDO : DE / / A / /
HEMO GRUPO ABO / D
O+ A+ B+ AB+ O- A- B- AB-
S E S E S E S E S E S E S E S E
GR
GLR
PFC
PSF
CPP
PLQ
NOTA T.M: EVE

PRODUCTO G.R/GSL PFC/PSF CPP PLQ TOTAL
Nº UNIDADES
ENTREGADO POR: TRANSPORTADO POR:

FECHA: HORA: RECIBIDO POR: HORA:
Manejo de Stock ha sido escrito con la colaboración de la Sra. Mª Cecilia Lyng Falcone, TM
Supervisora del Centro de Sangre Valparaíso.
UNIDAD
INMUNOHEMATOLOGIA
Ag Duffy
43
UNIDAD INMUNOHEMATOLOGIA
INTRODUCCION A LA INMUNOHEMATOLOGIA
El Sistema Inmune está compuesto por la piel, órganos linfoides primarios (Timo, Médula Ósea),
órganos linfoides secundarios (Bazo y ganglios linfáticos), las células y proteínas asociadas a la
defensa del organismo contra lo no propio y lo propio transformado.
Podemos dividir a la respuesta inmune según su especificidad en Innata y adaptativa. La

Respuesta Inmune Innata (RII) está dirigida contra patrones moleculares comunes a diversos
microrganismos o células, su diversidad es limitada asociada a líneas germinales y no presenta
respuesta de memoria. Es la primera en reaccionar ante noxas y su función es activar y dirigir a
la respuesta inmune adaptativa y mantener una respuesta localizada y controlada mediante
citoquinas y quimioquinas. La RII está compuesta por elementos celulares (células dendríticas y
células natural killer) y componentes séricos (citoquinas y proteínas del complemento). La
Respuesta Inmune adaptativa (RIA)está dirigida contra antígenos pertenecientes a estructuras
específicas de microrganismos o células diferentes a las propias, siendo muy diversa en su
respuesta, con capacidad para generar memoria inmunológica, lo que permite que su
intensidad ante un segundo estímulo sea más rápida y específica. La RIA está compuesta por
linfocitos (B y T) y componentes séricos (citoquinas y anticuerpos.
La Inmunohematología estudia los procesos inmunológicos asociados a la respuesta a

elementos sanguíneos, siendo las más importantes aquellas dirigidas a antígenos eritrocitarios
pertenecientes a los diferentes grupos sanguíneos. Otros elementos que pueden iniciar una
respuesta inmune son los antígenos leucocitarios, plaquetarios y séricos (ejemplo factores de la
coagulación).
Los antígenos eritrocitarios son moléculas presentes en la superficie eritrocitaria capaces de

iniciar y activar una respuesta inmune (inmunógenos). Estos se caracterizan por ser productos
génicos derivados de variantes alélicas, por lo que no todos los individuos presentan una misma
composición antigénica. Ante una transfusión eritrocitaria heteróloga, el ingreso de eritrocitos
del donante a circulación aportará una gran cantidad de moléculas que podrán ser
reconocidas por el sistema inmune como “no propias”, activando una respuesta inmune
principalmente humoral del tipo IgM y/o IgG. Esta respuesta dependerá del grado de
inmunogenicidad del antígeno y del estado inmunológico del receptor. Las respuestas más
importantes son aquellas asociadas a antígenos del grupo sanguíneo ABO y Rh.
El grado de gravedad de las respuestas dependerá principalmente de los anticuerpos

involucrados y las características de estos en cuanto al isotipo, título, afinidad,avidez, y
activación del complemento. Por ejemplo: una reacción a antígenos eritrocitarios mediada
por IgM en alto título, podría asociarse a precipitación de complejos inmunes o a la activación
de la vía clásica del complemento. Si esta última llega hasta la formación del complejo de
ataque a membrana (MAC), se producirá una hemólisis intravascular, con todos los riesgos que
esto conlleva. Una reacción mediada por IgG, dependiendo del isotipo, opsonizará al
antígeno, permitiendo su reconocimiento por el sistema monocítico-macrofágico, asociándose
principalmente a una hemólisis extra-vascular (Recordemos que solo los isotipos IgG 1 y 3
activan complemento).
La respuesta humoral se caracteriza por la expansión clonal de todos aquellos linfocitos B que
reconozcan al inmunógeno presente, es decir todos aquellos linfocitos cuya región variable
reconozca zonas de una misma molécula reconocida como “no propia”. Como las moléculas
presentan distintos sitios de reconocimiento, siempre que hablemos de una reacción mediada
por anticuerpos ante una molécula completa, es decir, ante distintos antígenos de una misma
molécula, debemos pensar en una reacción policlonal. Cuando nos refiramos a un proceso
caracterizado por la presencia de un solo tipo de anticuerpos, hablaremos de una respuesta
monoclonal. Este proceso ocurre in vitro o por biología molecular donde se selecciona y
expande un solo clon de linfocitos antígeno específico. Esta estará caracterizada por la
presencia de anticuerpos dirigidos contra un solo epitopo, es decir con la misma región variable
y provenientes de un clon único de linfocitos B.
El diagnóstico inmunohematológico previo a la transfusión es clave para la prevención de

reacciones post- transfusionales a antígenos eritrocitarios. Siempre buscaremos la
compatibilidad entre el receptor y el donante. Para esto deberemos testear tanto antígenos (es
decir eritrocitos) como anticuerpos (suero del paciente o antisueros comerciales) mediante
reacciones de inmunoaglutinación o activación del complemento. Es fundamental que exista
un gran dominio en los términos de inmunología básica, de tal forma de poder conocerlos y
aplicarlos al trabajo diario de una Unidad de medicina transfusional.
45
Glosario básico de términos inmunológicos e inmunohematológicos:
Término Significado
Antígeno Secuencia molecular reconocida por el sistema inmune. Puede

ser de distintas naturalezas (glicosilada, lipídica o proteica)
Inmunógeno Antígeno capaz de activar una respuesta inmune adaptativa.
Epitopo Región del antígeno reconocida por la región variable del
anticuerpo. Puede ser lineal o conformacional.
Paratopo Región del anticuerpo que reconoce y une al epitopo. Se ubica
en la fracción Fab (antigen binding fragment).
Idiotipo Región del anticuerpo caracterizada por la fracción variable (Fv).
Está formada por la región variable de la cadena liviana y
pesada. Contiene al paratopo.
Isotipo Región del anticuerpo caracterizada por la fracción cristalizable
(Fc) del anticuerpo. Está formado por la cadena pesada. Es
determinado genéticamente.
Avidez Sumatoria de interacciones que unen a un antígeno con el
anticuerpo. Depende de la afinidad y valencia de las
interacciones.
Afinidad Fuerza de interacción no covalente con la que el paratopo une
al epitopo.
Título Concentración sérica del anticuerpo. Se cuantifica mediante
diluciones seriadas del suero.
Alogénico Refiere a la respuesta inmune a estructuras variables dentro de
una misma especie.
Respuesta Autóloga Respuesta inmune a estructuras moleculares propias. Asociada a
una respuesta autoinmune.
Respuesta Heteróloga Respuesta inmune a estructuras moleculares variables entre
individuos de una misma especie. Es secundaria a la presencia de
moléculas de otro individuo que generen activación de la
respuesta inmune.
Suero Monoclonal Antisuero que contiene anticuerpos provenientes de un solo clon
linfocitario, por lo tanto todos tendrán la misma región variable
dirigida a un epitopo específico.
Suero Policlonal Antisuero que contiene anticuerpos provenientes de distintos
clones linfocitarios dirigidos hacia distintos epitopos
pertenecientes a una misma molécula
REACTIVOS BASICOS A USAR EN INMUNOHEMATOLOGIA Y SERVICIOS DE SANGRE
1.- GENERALIDADES:
A.- Definiciones generales:
1.- Mol, peso molecular en gramos: Es el peso, en gramos, de una sustancia igual al peso
molecular de la sustancia (sumatoria de los pesos atómicos).
2.- Solución molar: Una solución 1 molar (1M) contiene 1 mol de soluto en 1 litro de
solución. Si no se indica lo contrario, el solvente siempre debe suponerse que es agua
destilada.
3.- Solución molal: Una solución molal contiene 1 mol de soluto por Kg. de solvente. Si el
solvente es agua, hay poca diferencia práctica entre solución molar y molal.
4.-Equivalente gramo: El peso, en gramos, de una sustancia que producirá o reaccionará

con 1 mol de ión hidrógeno.
5.- Solución normal: Una solución 1 normal (1N) contiene el peso de un equivalente
gramo de soluto en 1 litro de solución.
6.- Soluciones porcentuales: El porcentaje de una solución da el peso o volumen de

soluto presente en 100 unidades de solución total. El porcentaje puede expresarse como:
- Peso/peso (p/p), dando gramos de soluto en gramos 100 gramos de solución.
- Volumen / volumen (v/v), dando mililitros de soluto en 100 ml de solución.
- Peso / volumen (p/v), dando gramos de soluto en 100 ml de solución.
Si no se indica lo contrario, se supondrá que una solución expresada en porcentaje
corresponde a p/v.
B.- Dilución de suero:
En las pruebas serológicas, suele emplearse suero diluido para determinar entre otros
aspectos, la concentración de un anticuerpo en dicho suero. Normalmente se expresa el
volumen de suero diluido en unidades (1), indicando 1 parte de suero contenido en el
número total de partes de la dilución. Por ejemplo si se desea diluir 10 veces un suero,
debe hacerse una dilución 1/10, mezclando 1 parte de suero concentrado con 9 partes
de diluyente, por lo tanto 1/10 no es 1+10 sino 1+9, de manera que el volumen final es 10.
Cada una de las 10 partes de la dilución contendrá un décimo (1/10 o 0.1) del suero.
Puede prepararse fácilmente una dilución mayor a partir de una menor, añadiendo la
cantidad necesaria de diluyente. La fórmula para calcular la cantidad de diluyente a
añadir para obtener la nueva dilución mayor deseada es:
𝑉𝑎𝑙𝑜𝑟 𝑟𝑒𝑐í𝑝𝑟𝑜𝑐𝑜 𝑑𝑒 𝑉𝑎𝑙𝑜𝑟 𝑟𝑒𝑐í𝑝𝑟𝑜𝑐𝑜 𝑑𝑒

𝑙𝑎 𝑑𝑖𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛 𝑎𝑐𝑡𝑢𝑎𝑙 = 𝑙𝑎 𝑑𝑖𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛 𝑓𝑖𝑛𝑎𝑙
𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝑑𝑒 𝑑𝑖𝑙𝑢𝑦𝑒𝑛𝑡𝑒 𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝑓𝑖𝑛𝑎𝑙
𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙
47
EJEMPLO:
Se tiene un ml de suero diluido 1/2 y se le añadieron 4 ml de solución salina ¿Cuál será la

dilución final?
2 𝑋 1
= = 10 𝑜 𝑑𝑖𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛
1 5 10
C.- Dilución de soluciones expresadas en porcentaje:
Puede preparase diluciones a partir de soluciones más concentradas expresadas en %

utilizando la siguiente fórmula:
𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 1 𝑥 𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 1 = 𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 2 𝑥 𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 2
V1 X C1 = V2 X C2, donde V1 y C1 representan el volumen y concentración original, y V2

y C2 representan el volumen y la concentración final.
D.- Cálculo de la fuerza centrífuga relativa en g:
𝑟𝑝𝑚
𝐹𝑅𝐶 𝑒𝑛 𝑔 = 28,38 R ∗
1.000
*= Radio del rotor de centrífuga en pulgadas.

Los tiempos incluyen el tiempo de aceleración pero no el de deceleración. Son sólo
aproximados. Debe evaluarse cada centrífuga para la preparación de cada
componente sanguíneo y de cada método de laboratorio.
E.- Rangos de temperaturas aceptados en inmunohematología:
Cuando se establece en un método una temperatura específica de incubación, los

rangos aceptados son:
TEMPERATURA RANGO ACEPTADO

ESTABLECIDA
4ºC 2-8 ºC
AMBIENTE 20-24 ºC
37ºC 36-38 ºC
56ºC 54-58 ºC
F.- Tiempos de incubación aceptados en inmunohematología:
Debe cumplirse estrictamente los tiempos de incubación establecidos en cada método.

Es aconsejable seguir las instrucciones de cada fabricante de antisueros e incluir controles
positivos y negativos en cada metodología.
INCUBACION RANGO ACEPTABLE

ESTABLECIDA
CENTRIFUGACION INMEDIATAMENTE
INMEDIATA
1-5 MINUTOS 1-10 MINUTOS
1.- BUFFER FOSFATO Y BUFFER FOSFATO SALINO
1.- Preparar una solución madre ácida (solución A) disolviendo 22.16 g de NaH2PO4 x
H2O en 1 litro de agua destilada. Esta solución 0.16 M de la sal fosfato monobásico
tiene un pH de 5.0,
2.- Preparar una solución madre alcalina (solución B), disolviendo 17.2 g de Na2HPO4
en 1 litro de agua destilada. Esta solución 0.16 M de la sal de fosfato dibásico tiene
un pH de 9.0.
3.- Preparar soluciones de trabajo del buffer al pH deseado, mezclando volúmenes
adecuados de ambas soluciones. Por ejemplo:
pH Solución A Solución B
5.5 94 ml 6 ml
7.3 16 ml 84 ml
7.7 7 ml 93 ml
4.- Comprobar el pH de la solución de trabajo antes de usarla. Añadir pequeños

volúmenes de la solución a o b para alcanzar el pH deseado.
5.- Para preparar el BUFFER FOSFATO SALINO (PBS) a un pH deseado, añadir un
volumen de buffer fosfato a ese pH a nueve volúmenes de solución salina normal
(suero fisiológico).
49
2.- PREPARACION DE SUERO AB INERTE
El suero AB inerte tiene múltiples usos en inmunohematología, desde suero control

negativo de reacciones serológicas hasta diluyente de anticuerpos en titulaciones. Tiene
las ventajas de ser barato, fácil de preparar y de tener las mismas características de los
sueros a estudiar, lo que lo convierte en el control negativo ideal.
Es preferible usar suero en vez de plasma en los test serológicos, ya que el fibrinógeno
puede formar pequeños coágulos que eventualmente se confunden con aglutinación.
Al calentar un plasma a 56ºC durante 1 hora, el fibrinógeno se denatura, precipitando y al
mismo tiempo se inactiva el complemento.
MATERIALES:
- Plasma AB de un donante con serología negativa.
- Baño termorregulado a 56ºC
- Centrífuga adecuada.
PROCEDIMIENTO:
1.- Separe una bolsa de plasma fresco grupo AB, compruebe que el donante no
posee anticuerpos irregulares en ningún medio, haciendo los estudios a 4ºC, 22ºC
y 37ºC.
2.- Ponga la bolsa transfer bien sellada en un baño a 56ºC durante 1 hora.
3.- Centrifugue a alta velocidad y transfiera el sobrenadante a una bolsa limpia.
4.- Deje la bolsa durante toda la noche a 4ºC.
5.- Centrifugue nuevamente a alta velocidad por lo menos durante 10 minutos.
6.- Filtre el suero y guárdelo a - 30ºC en alícuotas.
7.- Compruebe la ausencia de aglutinación con un panel a 4, 22 y 37ºC.
3.- MEDIO DE BAJA FUERZA IÓNICA (LISS):
PREPARACIÓN:
1.- En un matraz volumétrico de 1 litro agregue 1.75 g de NaCl y 18 g de glicina.
2.- Prepare un buffer fosfato, combinando 11.3 ml de KH2PO4 0.15M, y 8.7 ml de
Na2HPO4 0.15M.
3.- Agregue 20 ml de este buffer al matraz dispuesto en pto. 1.
4.- Agregue agua destilada hasta completar 1 litro.
5.- Ajuste a pH 6.7 con NaOH. Agregue 0.5 g de azida de sodio como preservativo.
NOTA: Al agregar esta cantidad de azida de sodio, la fuerza iónica sube de 0.0355
a 0.043. Esto no establece diferencias prácticas en la reactividad serológica de los
anticuerpos.
4.- EDTA - SALINO(para suspender GR testigos A y B)
Los anticuerpos anti-A y Anti-B causan directamente aglutinación y/o lisis de los GR. El uso
de EDTA en el medio de suspensión, produce quelación del Ca++, quien es esencial para
la integridad de la molécula C1 del sistema del complemento. De esta forma se inhibe la
lisis celular.
REACTIVOS:
- EDTA dipotásico dihidratado(K2EDTA x 2H2O): 25 g
- Hidróxido de sodio(Na OH): 2g
- Salino normal 0.85% o Cloruro de sodio 0.9%: 1 litro
PROCEDIMIENTO:
1.- Mezcle el EDTA con el salino normal en un matraz apropiado.
2.- Agregue el NaOH y mezcle sobre un agitador magnético.
3.- Deje la mezcla durante toda la noche para que se estabilice.
4.- Mezcle nuevamente y realice control de calidad correspondiente (pH). Coloque
nombre y fecha al reactivo.
NOTAS:
1.- Antes de usar cada lote de EDTA hay que comprobar pH y que inhibe la lisis
celular en presencia de anti-A y anti-B hemolíticos.
2.- La osmolaridad del EDTA salino debe ser 450 mOsm/kg y su pH 6.7 +/- 0.2.
5.- SOLUCION DE ALSEVER MODIFICADA:
Esta solución permite almacenar eritrocitos "in vitro" para uso de laboratorio a 4ºC por
varias semanas. Contiene antibióticos que retarda el crecimiento bacteriano.
REACTIVOS:
- Cloranfenicol: 0.33 g
- Ácido cítrico monohidratado: 0.5 g
(C6H8O7 x H2O)
- Dextrosa: 19.0 g
(C6H12O6
- sulfato de neomicina: 0.5 g
- Cloruro de sodio: 4.2 g
(NaCl)
- Citrato trisódico: 8.0 g
(C6H5Na3O7 x 2H2O)
PROCEDIMIENTO:
1.- Disolver en aproximadamente 600 ml de agua destilada el ácido cítrico, dextrosa,
cloruro y citrato de sodio.
2.- Agregue el cloranfenicol, y neomicina; mezcle bien.
3.- Diluya hasta completar 1 litro con agua destilada.
4.- Guarde a 4ºC.
5.- Para su uso mezcle 1 volumen de esta solución con 1 volumen de sangre total.
También puede preparar soluciones al 3-5% en solución Alsever. Guardar a 4ºC.
6.- CONVERSION DE PLASMA A SUERO
Es preferible usar suero a plasma en tests serológicos, porque el fibrinógeno que hay en el
plasma puede formar pequeños coágulos que conducen a error en la lectura al ser
confundidos con aglutinación.
Técnica por calor.

Al calentar el plasma a 56ºC por 60 min. se denatura el fibrinógeno, el que precipita, y al
mismo tiempo se inactiva el complemento.
MATERIALES:
- Baño termorregulado a 56ºC.
- Centrífuga adecuada.
51
- Tubos de vidrio adecuados.
MÉTODO:
1.- Centrifugar la muestra a altavelocidad y separar el plasma de los elementos
celulares.
2.- Colocar el plasma a un envase de vidrio preferentemente, y volver a centrifugar a
alta velocidad para eliminar toda contaminación celular.
3.- Depositar el plasma en un tubo limpio y dejar incubar a 56ºC por una hora.
4.- Centrifugar el plasma tratado con calor y transferir a un tubo limpio (idealmente
estéril).
5.- El suero puede necesitar más centrifugación y/o filtrado antes de su uso.
TRATAMIENTO DE MUESTRAS CON COAGULACION INCOMPLETA
En muestras que no han completado el proceso de la coagulación, puede continuar

generándose fibrina una vez separado el suero de los GR, especialmente durante su
incubación a 37ºC. Este proceso hace que las proteínas atrapen eritrocitos, haciendo
muy difícil la lectura y la evaluación de la aglutinación. La sangre obtenida de pacientes
que están en tratamiento con heparina, puede no coagular, y aquella obtenida de
pacientes con actividad fibrinolítica excesiva, puede licuarse, o contener fragmentos que
interferirán en la lectura en busca de aglutinación.
MATERIALES:
- Trombina: humana/bovina seca o solución de trombina (50 unidades/mL en salino)
- Baguetas de vidrio
- Sulfato de protamina: 10 mg/mL en salino
- Acido epsilon aminocaproico (EACA): 0.25 g/mL en salino
PROCEDIMIENTO:
1.- Para acelerar el proceso de coagulación pueden utilizarse diferentes técnicas:
a) Agregar a la sangre total o al suero obtenido la cantidad de trombina seca que se
adhiera a una bagueta seca, o 1 gota de la solución de trombina por mL de
sangre.
b) Agitar suavemente el suero obtenido en un tubo con una bagueta de vidrio,
mientras se incuba a 37ºC por varios minutos. Centrifugue y use el suero
sobrenadante.
2.- Para neutralizar la heparina, agregar 1 o más gotas de la solución al 1% de sulfato
de protamina (10 mg/mL) en salino a 4 mL de sangre total.
3.- Para inhibir la actividad fibrinolítica, agregue 0.1 mL de EACA a 4 ml de sangre
total fresca.
NOTAS:
1.-Use la protamina con precaución, ya que usada en exceso causa formación de
rouleaux, y en gran cantidad actúa inhibiendo la coagulación.
2.-La trombina de origen humano puede estar contaminada con anti-A y anti-B.
53
PREPARACION DE LECTINAS PARA USO EN INMUNOHEMATOLOGIA
Los extractos salinos de las semillas pueden servir como reactivos en Inmunohematología y
son altamente específicos en diluciones apropiadas. Son fáciles de preparar y de usar pero
pueden ser difíciles de obtener.
Los más usados son el extracto de Dolichos Biflorus, que aglutina glóbulos rojos A1 y A1B, y
el de Hulex Europeus que reacciona con células con actividad antigénica H en forma
proporcional a la cantidad existente.
Existen otras lectinas que se utilizan para la tipificación de antígenos M y N, y para el
estudio de los fenómenos de poliaglutinación.
PREPARACIÓN:
1.- Muela la semilla hasta que quede como arena gruesa. Puede usar un mortero o bien
usar la semilla entera.
2.- Coloque en un vaso o en tubo las semillas molidas y agregue 3 o 4 veces más su
volumen de suero salino. (Para 1 gr. de Hulex Europeus utilizar 10 ml de salino)
3.- Incube a temperatura ambiente por 4 - 12 horas agitando de vez en cuando.
4.- Centrifugue durante 5 minutos a 3500 rpm el sobrenadante. Fíltrelo.
5.- Determine la actividad del extracto con las células apropiadas.
PARA DOLICHOS BIFLORUS:
1.- Coloque 1 gota de extracto a cada uno de 3 tubos marcados A1, A2 y 0. Pueden
usarse eritrocitos B, A1B y A2B.
2.- Agregue a cada tubo una gota de eritrocitos correspondientes suspendidos en salino
al 3%
3.- Centrifugue el tiempo estandarizado para lectura en salino en su centrífuga.
4.- Observe los tubos en busca de aglutinación y anote los resultados.
5.- La lectina debe aglutinar los eritrocitos A1 y A1B pero no los 0, A2 y A2B. A menudo el
extracto nativo aglutina todos los eritrocitos estudiados, por lo que hay que buscar la
dilución adecuada en cada caso. (Buscar la dilución que de una reacción de 3+ o 4+
con A1 y A1B pero no con los otros grupos.
PARA ULEX EUROPAEUS:
1.- Enfrente la lectina con glóbulos rojos A1, A2, A1B, A2B, y O.
2.- La fuerza de la aglutinación deberá ser en la siguiente secuencia: O, A2, B, A1, A1B
3.- Diluya con salino si fuera necesario de manera que los eritrocitos O aglutinen 3+ o 4+,
con A2 de una intensidad menos y reacción negativa o muy débil con A1 y A1B.
4.- Guarde el extracto en el refrigerador por varios días o en freezer por períodos más
largos, que pueden ser indefinidos.
5.- Al usar la lectina use siempre controles positivos y negativos.
REACCION DE CELULAS POLIAGLUTINABLES CON LECTINAS
LECTINA T Tn Tk Cad
______________________________________________
Arachis hypogoea + - + -
Salvia sclarea - + - -
Salvia horminum - + - +
Glycine Soya + + - +
Dolichos Biflorus - + - +
LAVADO DE ERITROCITOS Y PREPARACION DE SUSPENCIONES CELULARES
Los eritrocitos lavados son necesarios en la mayoría de las técnicas inmunohematológicas.

Los eritrocitos deben ser lavados al menos 1 vez para eliminar el plasma, ya que este
puede inducir resultados falsos positivos en los métodos utilizados al generarse pequeños
coágulos o interferir con la reacción Ag-Ac. También las sustancias de grupo sanguíneo
presentes en el plasma pueden producir reacciones falsas negativas debido a la
neutralización del anticuerpo.
Para los test Inmunohematológicos se usan generalmente suspensiones globulares débiles
ya que la proporción suero/células afecta directamente la sensibilidad de la mayoría de
los test, para producir aglutinación o ser detectados por medio del test antiglobulina
humano indirecto (TAI), debe existir un mínimo de moléculas de anticuerpo recubriendo los
eritrocitos para que la reacción se observe como positiva.
MATERIALES
- Muestra de sangre o eritrocitos
- Buffer fosfato salino (PBS) o salino tamponado
- Tubos de Khan
- Centrífuga para Inmunohematología
METODO
1.- Coloque la cantidad deseada de eritrocitos en un tubo Khan (nomás de 0.5 ml).
2.- Llene el tubo hasta 1 cm del borde superior
3.- Centrifugue a la velocidad y el tiempo estandarizado para lavado de células.
4.- Elimine cuidadosamente el sobrenadante.
5.- Agite el tubo para resuspender en el líquido residual, los eritrocitos que han quedado
adheridos a la pared del tubo. Esto constituye 1 lavado, repita los pasos 1 - 5 las veces
que estipule cada procedimiento.
6.- El último lavado siempre debe presentar un sobrenadante claro, sin signos de hemólisis.
7.- Para hacer una suspensión al 5%, agregue 1 volumen de eritrocitos concentrados a 19
volúmenes de PBS.
8.- Para hacer una suspensión al 3%, agregue 1 volumen de eritrocitos concentrados a 32
volúmenes de PBS.
NOTA: Salino tamponado se refiere a una solución de NaCl al 0.85%, cuyo pH se ha

ajustado a 7. Los eritrocitos se suspenden en salino o PBS a no ser que se establezca lo
contrario.
55
GRADUACION DE LOS RESULTADOS INMUNO-HEMATOLOGICOS EN TUBO:
Una reacción positiva se manifiesta por medio de aglutinación o hemólisis. Debe

estandarizarse la graduación de la intensidad de reacción de los resultados de los test
inmunohematológicos, entre los miembros de un servicio de Banco de Sangre, con el fin de
uniformar criterios y reproductibilidad de los resultados. La graduación puede ser en cruces
o en puntaje según sea el caso.
MATERIAL
- Centrífuga serológica para aglutinación.
- Lector de aglutinación
- Eritrocitos y anticuerpos específicos
METODO
1.- Luego de una centrifugación estandarizada para lectura, agite suavemente el tubo
haciéndolo rotar hacia adelante y hacia atrás por varias veces.
2.- Observe la forma como los eritrocitos se liberan del botón producido por la
centrifugación previa.
3.- Registre los resultados de acuerdo a lo establecido en el esquema de la página
siguiente.
NOTAS:
1.- Después de la centrifugación debe examinarse el sobrenadante en busca de hemólisis,
la que debe registrarse como un resultado positivo.
2.- Signos de la tabla:
Grumos= Aglutinación Macro= Macroscópico Micro= Microscópico GR= Glóbulos rojos
FUERZA GRADO PUNTAJE APARIENCIA

4+ C 12 Botón único, sin células libres
3-1/2+ 4+w o 3+s 11
3+ 3+ 10 Reacción fuerte. Numerosos aglutinados
grandes
2-1/2+ 3+w o 2+s 9
2+ 2+ 8 Grumos grandes en un mar de grumos
pequeños. Sin GR libres
2+w 2+w 7 Muchos grumos medianos y pequeños sin GR
libres
1-1/2+ 1+s 6 Muchos grumos medianos y pequeños. Con GR
libres
1+ 1+ 5 Muchos grumos pequeños en un mar de GR
libres
1+w 1+w 4 Muchos grumos muy pequeños con muchos GR
libres
1/2+ +/- Macro 3 Granularidad débil en la suspensión de GR
Algunos grumos macro y muchos micro.
Trazas o (+) 2 Macro -, Algunos grumos de 6-8 GRS en muchos
Micro Micro campos
Dudoso (OR) 1 Raros grumos micro
0 0 0 No se detectan grumos
GRADUACION DE LOS RESULTADOS INMUNO-HEMATOLOGICOS COLUMNA (TARJETA):
Esta técnica consiste en una tarjeta plástica con 6 a 8 microcolumnas, las cuales tienen
una cámara de reacción en la parte superior y en la parte inferior tienen un gel
transparente o microesferas de vidrio, los que pueden contener suero anti-globulina
humana o cualquier otro antisuero dependiendo de lo que se quiera determinar(también
pueden ser neutros).
La determinación de aglutinación en por medio de esta técnica se basa en la separación

de los eritrocitos en un gel poroso o microesferas de vidrio en relación a su tamaño,
posterior a una centrifugación, donde los de mayor tamaño debido a la aglutinación,
quedarán atrapados en la región superior de la columna y los de menor tamaños, y que
por lo tanto no han aglutinado, o lo han hecho en menor grado, quedan atrapados a lo
largo de la columna o pasan al fondo de esta.
57
Esta técnica tiene como objetivo estandarizar el uso de rectivos y la lectura de la reacción
antígenos anticuerpo con facilidad y repetitividad, permitiendo de esta forma disminuir la
influencia del operador.
MATERIALES:
-Pipeta automática y puntas desechables.
-Tubos de vidrio.
-Centrífuga para tarjetas.
-Incubador para tarjetas.
MUESTRA BIOLÓGICA :
- Glóbulos rojos
- suero con anticuerpo específico
RECTIVOS:
-Tarjetas para aglutinación en columna.
-Solución salina o PBS
METODOS:
1. .Aplicar a cada columna de los eritrocitos debidamente diluidos y los anticuerpos
específicos .
2. Centrifugar la tarjeta de geles según indicaciones del fabricante.
3. Observar cómo se distribuyen los eritrocitos a través de cada columna.
4. Registrar los resultados en cruces según la siguiente imagen.
CARACTERISTICAS DE LOS SUEROS CLASIFICADORES
La confiabilidad de todo examen de laboratorio depende, entre otras variables, de la

calidad de los reactivos utilizados, por lo tanto, es fundamental conocer su origen,
composición, modo de preparación, uso y conservación.
De igual importancia es seguir estrictamente las instrucciones dadas por el fabricante y
efectuar control de calidad, para comprobar si reúnen los requisitos mínimos que otorgarán
seguridad a los resultados obtenidos. En un Servicio de Banco de Sangre, dadas las
características propias de su quehacer, esto adquiere especial importancia para lograr
seguridad transfusional en beneficio del paciente.
REQUISITOS:
Los sueros clasificadores de grupo sanguíneo deben cumplir ciertos requisitos mínimos.
1. Ausencia de hemólisis, grasas, precipitado.
2. Ausencia de contaminación bacteriana.
3. Ausencia de formación de rouleaux, fenómeno de prosona, poliaglutinación y de
aglutinación inespecífica.
4. Ausencia de anticuerpos irregulares.
5. Libre de enfermedades infecciosas de transmisión sanguínea.
6. Especificidad.
7. Potencia.
8. Avidez.
ESPECIFICIDAD:
Es la reactividad selectiva de un anticuerpo con su antígeno específico. Se puede

determinar estudiando el suero reactivo con glóbulos rojos de 4 diferentes muestras que
contengan el antígeno específico y con igual número de muestras conocidas que
carezcan de él.
El suero en estudio debe dar reacciones intensas de aglutinación (sin hemólisis) con los
glóbulos rojos que poseen el antígeno específico y no deben reaccionar con aquellos que
carecen de él.
MUESTRA:
Suero clasificador en estudio.
MATERIAL:
- Tubos de vidrio 12 x 75 mm. (Kahn)
- Pipetas Pasteur con capuchón de goma.
- Centrífuga para inmunohematología previamente calibrada.
- Fuente luminosa para lectura.
REACTIVOS:
- Buffer salino fosfatado PBS
- EDTA al 5%
- Glóbulos rojos de grupo A1, A 2, B, A1B, A 2B, O, previamente lavados.
- Glóbulos rojos de grupo A,B,O r'r (Cde/cde)
O r0r (CdE/cde)
O r"r (cdE/cde)
O r r (cde/cde)
59
METODO:
1.- Preparar una suspensión al 3% en EDTA 5% de glóbulos rojos de grupo A1, A 2, B, A1B, A2B,
O. (4 de c/u).
2.- Marcar igual número de tubos de Kahn por cada suero en estudio.
3.- Agregar a cada tubo 1 gota de la suspensión de glóbulos rojos correspondiente.
4.- Agregar a cada tubo 2 gotas del suero en estudio.
5.- Mezclar y centrifugar inmediatamente, según tiempo y velocidad estandarizados.
6.- Efectuar lectura macroscópica verificando la presencia o ausencia de aglutinación y
hemólisis. Anotar los resultados.
POTENCIA:
Fuerza del anticuerpo que se mide test de avidez, intensidad y titulación. La avidez es
influenciada por: fuerza del antígeno presente en los glóbulos rojos reactivos, el medio y
concentración de la suspensión y la temperatura.
AVIDEZ E INTENSIDAD:
Medida de capacidad de unión y rapidez con que el Ac. se combina con su

correspondiente Ag.
MATERIAL:
- Lámina y baguetas de vidrio
- Pipetas Pasteur con capuchón de goma
- Cronómetro
REACTIVOS:
- Buffer salino fosfatado PBS
- Glóbulos rojos de grupo A1, A 2, B, A1B, A 2B, O.
- Suero clasificador en estudio.
MÉTODO:
1.- Depositar en una lámina de vidrio a temperatura ambiente, 2 gotas del suero en estudio
sin diluir, más 1 gota de glóbulos rojos al 40% en suero homologo y que posean el
antígeno específico.
2.- Mezclar con bagueta de vidrio y describir un círculo de 2,5 cm de diámetro.
3.- Cronometrar el tiempo transcurrido a partir de la mezcla y el inicio de la reacción y el
grado de aglutinación al cumplirse 1 min.
TITULO:
Medida de fuerza del Ac, obtenida por dilución seriada del suero que lo contiene y en
contacto con su Ag. específico.
MÉTODO: Efectuar técnica de titulación de Ac. IgM.

REQUISITOS MINIMOS EXIGIDOS PARA SUEROS CLASIFICADORES ABO

________________________________________________________________
* AVIDEZ * INTENSIDAD
________________________________________________________________
AABB OMS MINSAL AABB OMS MINSAL
ANTI A
GR A1 15" 10" 10" 4+ 4+ 3+ 4+ s/d
GR A2 30" 20" 20" 3+ 3+ 3+ s/d
GR A2B 45" 30" 30" 1+ 2+ 2+ s/d
ANTI B
GR B 15" 10" 10" 4+ 4+ 3+ 4+ s/d
________________________________________________________________
* Método en lámina
___________________________________________
TITULO
___________________________________________
AABB OMS MINSAL
ANTI A
GR A1 256 64 128
GR A2 128 32 64
GR A2B 64 8 32
ANTI B
GR B 256 64 128
___________________________________________
61
CLASIFICACION DEL SISTEMA ABO
TÉCNICA EN TUBO
MUESTRA
Sangre completa con o sin anticoagulante
MATERIAL
- Pipetas Pasteur
- Tubos Khan (11x75)
- Gradillas para tubos Khan
- Lector de aglutinación
REACTIVOS
- Sueros anti-A y anti-B si utiliza reactivos monoclonal.
- Eritrocitos testigos A1 y B lavados y suspendidos al 2-4% en EDTA o PBS (1 volumen de
eritrocitos y 32 volúmenes de diluyente). Ellos deben ser frescos e idealmente Rh
negativos. La suspensión debe prepararse diariamente.
- EDTA al 1,5% en suero fisiológico.
- PBS o suero fisiológico tamponado
METODO
1.- Numerar las muestras a clasificar y colocarlas ordenadamente en una gradilla
apropiada.
2.- Colocar en la gradilla 5 tubos previamente marcados con las letras A, B, GRA, GRB, PA,
bajo cada muestra a clasificar.
3.- Deposite en un tubo previamente marcado una alícuota de eritrocitos de la muestra en
estudio, y proceda a lavarlos por al menos 1 vez con PBS.
4.- Colocar 2 gotas de suero anti-A en el tubo marcado A; 2 gotas de suero anti-B en el
tubo marcado B; 1 gota de GR testigos A1 en el tubo marcado GRA; 1 gota de GR
testigos B en el tubo marcado GRB.
5.- Agregar a los tubos marcados GRA, GRB y PA, 2 gotas del suero de la muestra.
6.- Agregar a los tubos marcados A, B, y PA 1 gota de la suspensión al 3% de los eritrocitos
de la muestra.
7.- Mezclar y centrifugar todos los tubos por el tiempo estandarizado para lectura en su
centrífuga.
8.- Girar suavemente hacia adelante y atrás el tubo, y ayudándose con un lector de
aglutinación proceda a registrar los resultados en intensidad de cruces.
NOTA:
1.- El punto 7 puede ser reemplazado por una incubación de 1 hora a temperatura
ambiente y luego lectura sin centrifugar.
2.- Cuando se desea clasificar un gran número de muestras, puede en vez de lavar como
lo indica el punto 4, proceder a resuspender los eritrocitos en suficiente cantidad de PBS
como para lograr una suspensión al 2-3%.
INTERPRETACION
En el cuadro siguiente se presentan los resultados esperados, correspondiendo a los

fenotipos ABO más frecuentes.
Reacción de células con Reacción del suero con células Interpretación

antisueros testigo. GRUPO
Anti-A Anti-B Células A Células B
0 0 + + O
+ 0 0 + A
0 + + 0 B
+ + 0 0 AB
0= no aglutinación
+= aglutinación
Cuando los resultados entre ambas pruebas no concuerdan, existe una discrepancia, la
que debe ser investigada antes de informar el grupo ABO. Si la discrepancia se presenta en
una unidad de sangre donada, ésta debe mantenerse aparte y no transfundirla hasta
resolver el problema. Cuando la discrepancia se presenta en un paciente que requiere
una transfusión, él puede ser transfundido con eritrocitos concentrados del grupo O, Rh
compatible, para solucionar la emergencia, teniendo la precaución de obtener
previamente una muestra suficiente como para resolver el caso.
Las discrepancias en una clasificación ABO pueden deberse a:
1- Errores técnicos
- Material sucio.
- Contaminación bacteriana de las muestras.
- Contaminación de reactivos, sueros y células.
- Proporción incorrecta de la relación suero/células
- Exceso o falta de centrifugación
- Falta de adición de reactivos y muestra
- Temperatura de incubación incorrecta
- Pérdida de actividad de los reactivos
- Empleo inadecuado de reactivos y células testigos
- Presencia de hemólisis en la muestra
- Identificación incorrecta de la muestra, tubos.
- Registros mal llevados e incompletos.
- Etc.
2- Problemas inherentes a las células

- Presencia de gelatina de Wharton en muestras de cordón
- Pacientes recientemente transfundidos.
-Autosensibilización de los GR del paciente (autoanticuerpos) o EHRN
- Poliaglutinación
- Antígenos débiles de A y/o B
-Pacientes que sufren de patologías infecciosas importantes (Ag. B adquirido) u otras
patologías malignas.
-Presencia de altas concentraciones de sustancias de grupo sanguíneo en el plasma.
- Etc.
63
3- Problemas inherentes al suero

-Presencia de anticuerpos irregulares fríos
-Patologías que se caracterizan por alto contenido de proteínas plasmáticas
- Pacientes que están recibiendo expansores plasmáticos de alto peso molecular
- Pacientes que carecen de anticuerpos, o los presentan en títulos muy bajos.
- Etc.
CONTROL DE CALIDAD:
a.-Tipificación de antígenos: GR A2, A2B, B, O y autocontrol.
b.-Detección de anticuerpos: Suero AB inerte
c.-Chequear los GR. testigos
Estos controles deben incluirse en cada serie de tests.
PREGUNTAS A RESPONDER:
1.- ¿Cuál es la causa de cada uno de los factores de error descritos?
2.- ¿Cómo interfieren en la clasificación ABO los factores de error descritos?
3.- ¿Producen resultados falsos positivo o negativo?
4.- ¿Existen otras causas de error en la clasificación ABO que no aparezcan en este listado?
5.- ¿Cómo se resuelve cada una de las discrepancias indicadas?
6.- Elabore un esquema a aplicar en el laboratorio en que se describa paso a paso lo que
debe realizarse en la resolución de una discrepancia.
Existen subgrupos de A y B, que corresponden a expresiones fenotípicas más débiles de los

antígenos habituales y que en el laboratorio pueden investigarse apoyándose en el siguiente
esquema:
SUBGRUPO REACCION CON REACCION CON ANTIGENOS EN

ANTISUEROS ERITROCITOS SECRECION
Anti Anti Anti Anti A1 A2 B O SALIVA
A AB A1 H
A1 4+ 4+ 4+ 0 0 0 4+ 0 AyH
Aint 4+ 4+ 2+ 3+ 0 0 4+ 0 AyH
A2 4+ 4+ 0 2+ 0* 0 4+ 0 AyH
A3 2+# 2+# 0 3+ 0* 0 4+ 0 AyH
Ax 0/º 2+ 0 3+ 2+º 0 4+ 0 H
Ael 0 0 0 4+ 2+º 0 4+ 0 H
Am 0/º 0/º 0 4+ 0 0 4+ 0 AyH
B 0 4+ 0 0 4+ 4+ 0 0 ByH
B3 0 2+# 0 4+ 4+ 4+ 0 0 ByH
Bx 0 0/2+ 0 4+ 4+ 4+ 0 0 H
*: ocasionalmente forman anti-A1 #: campo mixto. º: frecuentemente forman anti-A1.

TECNICA DE AGLUTINACIÓN EN COLUMNA ( TARJETA):
Para realizar una determinación ABO con esta técnica, debemos utilizar una tarjeta que
contenga columnas con Anticuerpos anti-A, anti-B, y 2 columnas neutras para realizar la
preuba inversar con suero o plasma del paciente y glóbulos rojos testigos A1 y B.
MUESTRA
-Sangre completa con anticoagulante.
MATERIALES
-Pipeta automática.
-Puntas desechables para pipeta.
-Tubos Khan.
-Gradilla para tubos Khan.
-Centrifuga para tarjetas.
REACTIVOS
-Tarjetas de gel para tipificación ABO.
-Solución salina.
-Eritrocitos testigos anti- A1y anti- B.
METODO
-Numere las muestras a clasificar y colocarlas ordenadamente en una gradilla apropiada.
-Colocar tras cada muestra un tubo khan numerado igual que la muestra.
-Preparar en el tubo Khan una suspensión de hematíesen medio Salino(según instrucciones
del fabricante).
-Añadir la suspensiónde glóbulos rojos previamente hecha a las columnas identificadas
como A, B y Ctl.
- Añadir los GR testigos A1 a la columna identificada como NA1 y los GR testigos B a la
columna identificada como NB.
-Añadir plasma de la muestra a las columnas marcadas como NA1y NB l.
-Centrifugar la tarjeta por el tiempo estandarizado.
-Leer la tarjeta según ubicación de los eritrocitos a lo largo de la columna.
INTERPRETACIÓN
La interpretación de la determinación de grupo ABO al igual que en tubo se realiza en
cruces de 1 a 4.
65
CLASIFICACION Rh D
TÉCNICA EN TUBO
MUESTRA:
Sangre con o sin anticoagulante.
MATERIAL:
Pipetas Pasteur
Tubos Khan (11x75)
Gradilla para tubos
Lector para inmunohematología
Baño termo regulable
Centrífuga para Inmunohematología.
REACTIVOS:
Suero anti-D: Existen sueros de alto contenido proteico, químicamente modificados de bajo
contenido proteico, o mezclas IgM + IgG de bajo contenido proteico. Debe seguir
cuidadosamente las instrucciones de uso del fabricante y hacer los ajustes pertinentes.
Suero Antiglobulina Humana
Suero fisiológico tamponado o PBS
Suero control Rh (solo si es necesario).
Células control AGH (eritrocitos sensibilizados)
METODO:
1.- Enumerar las muestras a tipificar.
2.- Lavar por lo menos una vez una alícuota de eritrocitos de la muestra con PBS, y preparar
con ellos una suspensión al 2-4% en salino, suero AB inerte u otro. (Puede usar la misma
suspensión preparada para la clasificación ABO).
3.- Depositar 1 gotas de suero anti-D en un tubo Khan previamente marcado D.
4.- Colocar una gota de suero Rh control en otro tubo marcado, o albúmina al 30% si usa
reactivos con alto contenido proteico (como control negativo).
5.- Agregar una gota de la suspensión de eritrocitos preparada en el punto 2 a ambos
tubos.
6.- Centrifugar el tiempo establecido para lectura en la estandarización de su centrífuga.
7.- Girar suavemente el tubo y observar si existe o no aglutinación macroscópica frente a
una buena fuente de luz.
8.- Si el resultado es negativo, incubar por un mínimo de 15 minutos y un máximo de 1 hora
a 37ºC. (de acuerdo con las instrucciones del fabricante).
9.- Proceder igual que en los puntos 6 y 7.
INTERPRETACIÓN:
- Si hay aglutinación = o > a 2+ en el tubo test, y no se observa en el control, la persona

presenta el antígeno D en los eritrocitos, por lo tanto es D+ (Rh positiva).
- Si la aglutinación es < de 2+ o negativa en el tubo test, no debe interpretarse como Rh +
sino que debe continuarse el estudio en busca de expresiones débiles o variantes del
antígeno D, para definir así el grupo Rh.
- Si el tubo control Rh presenta aglutinación, no informar antes de verificar con otro tipo
de reactivo el grupo Rh de la muestra.
INVESTIGACION DE ANTIGENO D DEBIL
10.- Incubar ambos tubos cuya lectura fue negativa por 15 a 30 minutos a 37ºC.
11.- Centrifugar y leer igual que en los puntos 5 y 6.
12.- Si el resultado es positivo en el tubo test y negativo en el control, la persona es Rh
positivo. Si la lectura es negativa proceder como sigue:
13.- Lavar los eritrocitos de ambos tubos con abundante PBS por 4 veces.
14.- Después del último lavado, eliminar tanto salino como sea posible dejando los eritrocitos
resuspendidos en el salino residual adherido a las paredes.
15.- Agregar una gota de suero Antiglobulina Humana.
16.- Centrifugar y leer de la forma descrita en los puntos 5 y 6.
17.- Registrar los resultados en cruces.
18.- Si el resultado del test es positivo, éste debe ser validado por un test Antiglobulina
Humana directa de los eritrocitos de la muestra. NOTA: En caso de utilizar un suero anti-D
que requiere el uso de un control Rh trabajado en paralelo, el TAD puede ser
reemplazado por el TAI que se realiza con este último suero, ya que este asegura que
están representados todos los componentes de la reacción que pueden causar
resultados falsos positivos.
INTERPRETACIÓN:
Si el resultado de esta segunda fase es negativo, se puede decir que no hay antígeno D en
los eritrocitos y por lo tanto la persona es Rh negativo, si al agregar células control AGH se
obtiene un resultado positivo.
En aquellos casos en que se obtiene un resultado positivo en el punto 17, y el test AGH
directo (que se usa para confirmar que el anticuerpo adherido a los eritrocitos en estudio
corresponde al anti-D agregado y no a un anticuerpo previamente adherido), es negativo,
se debe informar como Rh +.
Si el AGH directo es positivo, no se puede informar Rh, si se trata de un receptor de

transfusión debe usarse sangre Rh negativa mientras se estudia su Rh.
Es incorrecto informar una muestra como Rh - Du +, la nomenclatura actual se refiere al Du

como un antígeno débil pero Rh positivo, lo que implica presencia de él en los eritrocitos.
El cuadro siguiente muestra algunos posibles resultados:
ANTI-D CONTROL Rh INV. D DEBIL TAD INFORME

(Du)
+ - Rh positivo
+ + ¿
- - - Rh negativo
- - + - Rh positivo
- - + + ¿
En aquellos casos en que no se puede informar el Rh (?), se debe utilizar otro tipo de reactivo
Rh y eventualmente aplicar otras técnicas como elución y absorción.
67
CONTROL DE CALIDAD:
Todos los resultados son válidos si se usan en cada serie de tests, controles adecuados
usando células con antígenos débiles y negativos para el antígeno en estudio, ej.: GR R1r y rr
para anti-D, y se validan los resultados de AGH negativos con células control de AGH.
RESULTADOS FALSOS:
Las causas de que se produzcan reacciones falsas en la determinación del grupo Rh,
pueden asociarse a:
1.- Uso de reactivos de alto contenido proteico: Por su contenido pueden causar
reacciones falsas positivas si los hematíes del paciente están recubiertos de anticuerpos.
La incubación de los GR y el antisuero durante un tiempo excesivo, antes de efectuar la
lectura de la prueba, puede tener como consecuencia que el reactivo con alto
contenido proteico provoque la formación de rouleaux, confundiéndose con
aglutinación.
2.- Utilización inadvertida de reactivos erróneos: Para evitar errores el CFR americano
autoriza el uso de un código de colores en las etiquetas de algunos reactivos
empleados en la determinación de grupos sanguíneos. En el sistema Rh el color
aprobado para el anti-D es gris, rosa para el anti-C, café para el anti-E, azul para el anti-
c, verde para el anti-e y naranja para el anti-CDE. A pesar de estas medidas, es
importante leer la etiqueta cada vez que se utilice ya que fiarse solo del color no es
suficiente para tener la seguridad de que ha elegido el reactivo correcto.
3.- Presencia en el reactivo de un anticuerpo irregular con especificidad distinta. Los
fabricantes prueban la especificidad de cada reactivo con eritrocitos que poseen los
antígenos más comunes en la población (más de 1% en la población), y con el método
descrito, por lo que cambios en los métodos pueden dar lugar a resultados falsos. En
casos críticos es recomendable hacer la técnica por duplicado con dos reactivos de
diferente origen.
4.- Hematíes poliaglutinables pueden ser aglutinados por cualquier reactivo que contenga
suero humano, pero rara vez existe este error ya que la edad, dilución y los diferentes
pasos del proceso de fabricación, tienen tendencia a eliminar estos anticuerpos.
5.- Contaminación bacteriana de los reactivos, o con sustancias extrañas, o con reactivos
provenientes de otros frascos. Es recomendable nunca sacar a la vez el cuentagotas de
más de un reactivo, y debe inspeccionarse periódicamente los frascos en busca de
deterioro. Es importante recordar que en los reactivos de alto contenido proteico, la
contaminación bacteriana puede no producir una turbidez detectable, ya que el índice
de refracción de las bacterias es similar al del propio material.
6.- No se ha añadido el antisuero al tubo. Un buen habito es fomentar el colocar en primer
lugar el antisuero al tubo, controlar su presencia y luego colocar la suspensión de
hematíes.
7.- Un antisuero específico no reacciona con un antígeno variante o deprimidos.
8.- Es posible que un antisuero que contenga un anticuerpo dirigido principalmente contra
un antígeno compuesto Rh no presente una reacción detectable con los hematíes
portadores de antígenos individuales como producto de genes independientes. Esto
ocurre más frecuentemente con los sueros anti-C, cuyas reacciones con el antígeno C,
casi invariablemente son más fuertes cuando este ha sido producto de R1 o r'.
9.- No se siguen las instrucciones de los fabricantes y en consecuencia se ha usado
incorrectamente el antisuero.
10.- Si se realiza una agitación demasiado enérgica al resuspender el botón de hematíes
después de la centrifugación, puede dispersarse una aglutinación débil.
11.- Reactivo inactivo por falla en su manipulación y almacenamiento. El anti-D
químicamente modificado es especialmente sensible a la destrucción del IgG por
enzimas proteolíticas que podrían producir las bacterias.
TECNICA DE AGLUTINACION EN COLUMNA
MUESTRA
Sangre completa con anticoagulante.
MATERIAL
Micropipetas
Puntas para micropipetas
Tubos khan.
Gradilla para tubos khan.
Incubador para tarjetas.
Centrifuga para tarjetas
REACTIVOS
Tarjetas para aglutinación en columna que contengan anticuerpos anti-D.
Solución salina.
METODO
1.- Identificar las muertras a analizar
2.- Marcar los tubo khan de la misma forma que hizo con las muestras y ubicarlos tras estas
3.- Preparar en cada tubo khan suspensiones de hematíes según las indicaciones del fabricante
a partir e las muestras a analizar.
4.- Abrir los pocillos del cassette a utilizar.
5.- Añadir a los pocillos la suspensión de hematíes según indicaciones del fabricante.
6.- Centrifugar la tarjeta según el tiempo estimado por el proveedor .
7.- Leer aglutinación en las tarjetas.
Las muestras que parezcan ser D negativo o presenten una intensidad de aglutinación menor a
2+ deben ser confirmadas.
69
ALGORITMO A UTILIZAR EN LA CLASIFICACION Rh D
MUESTRA SANGRE
con o sin anticoagulante
Suspensión eritrocitos
al 3% en PBS
GR 3% + anti-D
POSITIVO NEGATIVO
Controles OK
INFORME AGH DE Rh
Rh Positivo o test Du
NEGATIVO POSITIVO
Controles OK
INFORME NO
Rh negativo INFORMAR
REALIZAR
TAD
TAD TAD
NEGATIVO POSITIVO
INFORME ELUCION Usar anti-D

Rh POSITIVO del Ac. salino
D DEBIL
TAD negativo Controles OK

repetir Rh
Controles OK INFORMAR
INFORMAR
CLASIFICACION DE GRUPO ABO Y Rh: TÉCNICA EN MICROPLACA
Las técnicas en microplacas pueden usarse para investigar antígenos ABO en los glóbulos
rojos y anticuerpos en el suero. La microplaca es una matriz de 96 tubos de ensayo, en los
cuales puede visualizarse hemaglutinación con sueros clasificadores diluidos y en bajo
volumen.
Las microplacas pueden ser flexibles o rígidas, con microcubetas en forma de U o V. Las más
usadas son las en forma de U porque permiten la lectura de los resultados después de
centrifugar la placa y observar las características de los GR resuspendidos o analizar el
patrón de flujo de las células cuando se inclina la placa, pudiendo finalmente estimar la
intensidad de la aglutinación.
MUESTRAS:
-Adultos: sangre con EDTA
-Recién nacidos: sangre de cordón.
MATERIALES:
-Microplacas con fondo en “U”
-Pipetas Pasteur.
-Tubos de Kahn.
-Gradillas.
EQUIPOS:
-Centrífugas con soporte para microplacas.
-Agitador.
-Lector.
REACTIVOS:
-Sueros clasificadores anti-A y anti-B monoclonales diluidos, según estandarización hecha
previamente.
-Suero clasificador anti-D, diluido según estandarización.
-Glóbulos rojos A-1,A-2, B, O R1r y O rr suspendidos al 1% en EDTA.
-PBS pH 7.3.
TÉCNICA:
-Identificar las microplacas de acuerdo al siguiente esquema. Cada columna corresponde a
una muestra, Las columnas 11 y 12 se ocupan para control de calidad.
C+ C-
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
anti- A A A2 B
anti- B B B A1
anti - AB C R1r rr
anti- D D
anti- D E
P.A. F
g.r. A G
g.r. B H
71
1. Repartir los sueros de la siguiente forma: una gota de anti-A en todos los pocillos de la
primera fila, una gota de anti-B en la segunda fila , una gota de anti-AB en la tercera
fila, una gota de anti -D en la cuarta y quinta fila y una gota de PBS en la sexta fila.
2. Repartir las muestras de la siguiente manera: una gota de suero en los pocillos G y H.
3. En un tubo aparte prepare una suspensión de GR de la muestra a estudiar al 1% en PBS,
reparta una gota de esta suspensión en los pocillos A al F.
4. Reparta una gota de la suspensión de GR A1 en los 10 primeros pocillos de la fila G.
5. Reparta una gota de la suspensión de GR B en la fila H.
6. Reparta 1gota de las suspensiones de GR control según se muestra en el esquema
anterior.
7. Centrifugue las placas a 1400 r.p.m. durante 20 segundos.
8. Agite las placas durante 20 seg. Con el agitador en alta revolución y 20 seg. Con el
agitador en baja revolución.
9. Lleve las placas al lector para ver presencia o no de aglutinación. Registre el resultado
en el protocolo correspondiente en intensidad de cruces, siguiendo el mismo criterio
que en la clasificación en tubo.
Si existe alguna discrepancia en la clasificación se debe repetir en tubo. Del mismo modo,
todas las muestras que resulten negativas con anti-D, se deben clasificar en tubo.
ABO B A A A O O A O O B AB A
Rh + + + + + + + + + + + +
DETERMINACION DE GENOTIPO Rh
Las pruebas de rutina para determinar el grupo sanguíneo de donantes y pacientes solo
comprende la determinación del antígeno D. Las pruebas para determinar otros antígenos
Rh se realizan en caso de que existan razones especiales que lo justifiquen, por ejemplo:
investigación de paternidad, estudios de enfermedad hemolítica del recién nacido, apoyo
en identificación de anticuerpos, preparación de un panel de células detectoras de
anticuerpos y células para realizar control de calidad de las técnicas inmunohematológicas.
En la selección de sangre compatible para un paciente que en el suero tenga un anticuerpo
Rh comparativamente débil, la determinación de los hematies negativos respecto de un
antígeno, mediante técnicas que emplean antisueros reactivos, es más fiable que el
resultado negativo obtenido en la prueba cruzada.
MUESTRA:
Sangre con o sin anticoagulante
METODO:
Se utilizan sueros anti-D, anti-C, anti-c, anti-E, y anti-e, los que se enfrentan a una suspensión
de los eritrocitos en estudio de acuerdo estrictamente a las instrucciones del fabricante de
los antisueros, siguiendo rigurosamente los tiempos y temperaturas de incubación. Es
necesario incluir controles positivos para cada antisuero, que deben corresponder a células
heterocigotos para el antígeno en estudio, y controles negativos con células que no poseen
el antígeno.
CALCULO DE GENOTIPO MÁS PROBABLE:
Para realizar este cálculo debemos recurrir a la frecuencia de los haplotipos Rh en la

población chilena y basarnos en el equilibrio de Hardy-Weinberg. Si se desea calcular por
ejemplo la frecuencia en Chile del genotipo CDe/cde, debe calcularse 2 X (CDe)(cde) = 2
(0.500 X 0.2192) = 0.22
Frecuencia de los haplotipos Rh en población chilena.
CDE (Rz) 0.0132

CDe (R1) 0.5001 REFERENCIA:
cDE (R2) 0.2259 Rev. Med. de Chile 116: 28-33. 1988.
cDe (Ro) 0.0255
CdE (Ry) 0.0000
Cde (r') 0.0064
cdE (r'') 0.0097
cde (r) 0.2192
73
NUMERO DE SITIOS ANTIGENICOS DE ACUERDO AL GENOTIPO CELULAR
GENOTIPO ANTIGENO
D C E c e
R1R1 14.500 46.000 - - 18.200
19.300 56.000 24.000
R1r 9.900 21.000 - 37.000 18.200
14.600 40.000 53.000 24.000
R1R2 23.000 25.000 15.000 37.000 13.400
31.000 40.000 53.000 14.500
R2R2 15.800 - 25.000 70.000 -
33.300 85.000
Rºr 12.000 - - 70.000 18.200
20.000 85.000 24.000
Rr - - - 70.000 18.200
85.000 24.000
ORDEN DE FUERZA DEL Ag. D
cDE/cDE > CDe/cDE > CDe/CDe > cDE/cde > CDe/cde
R2/R2 R1/R2 R1/R1 R2/r R1/r
NOMENCLATURA ACTUALMENTE UTILIZADA PARA REFERIRSE AL Ag.D
D Ag D común, todos los epitopos presentes

D débil Ag. D presente en menor cantidad, anteriormente llamado Du.
D parcial Ausencia de algunos epitopos del Ag. D, los otros presentes en
cantidad normal o reducida.
D parcial débil Ag. D parcial presente en cantidad considerablemente reducida,
muy débil para categorizarlo. Se reconoce solo por la presencia
de anti-D.
D aumentado Ag. D normal presente en cantidad considerablemente
aumentada.
FRECUENCIAS GENICAS DE SISTEMAS SANGUINEOS EN DIFERENTES POBLACIONES
SISTEMA MIXTA ESPAÑOLA MAPUCHES AYMARAES ATACAMEÑOS NEGRA

CHILENA
ABO
A 0.1824 0.2864 0.018 0.0549 0.0562 0.1780
B 0.0698 0.0670 0.000 0.0160 0.0027 0.1143
O 0.7477 0.6465 0.9820 0.9286 0.9407 0.7077
N: 321 20000 148 183 182 858
Duffy
Fya 0.5805 0.3966 0.7080 0.7823 0.7008 0.0607
No Fya 0.4195 0.6034 0.2920 0.2177 0.2990 0.9393
N: 379 1988 141 654 180 365
Rh
CDE 0.0093 0.0008 0.0320 0.0267 0.0465 0.0000
CDe 0.4999 0.4036 0.6930 0.3657 0.4727 0.0256
.cDE 0.2224 0.1670 0.2550 0.5757 0.4340 0.0427
.cDe 0.0230 0.0186 0.0210 0.0329 0.0267 0.7395
CdE 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000
Cde 0.0089 0.0049 0.0000 0.0000 0.0000 0.0707
.cdE 0.0139 0.0029 0.0000 0.0000 0.0000 0.0000
.cde 0.2223 0.3820 0.0000 0.0000 0.0198 0.1184
N: 679 8297 258 183 181 644
CARACTERISTICAS GENERALES DE SISTEMAS SANGUINEOS DE IMPORTANCIA CLINICA
Nº NOMBRE SIMBOLO Nº ESTRUCTURA NOMBRE DEL GEN CROMOSOMA

Ag DE MEMB GEN CLONADO
ASOCIADA
001 ABO ABO 4 H de C ABO SI 9
002 MNSs MS 38 GPA/GPB GYPA/GYP SI 4

B
004 Rh RH 45 Proteína RHD/RHCE SI 1
005 Lutheran LU 18 Superfamilia LU SI 19

de Igs de
memb.
006 Kell KELL 21 Glicoproteín KELL SI 7
a
008 Duffy FY 6 Receptor de FY SI 1
quimokinas
(ECR)
009 Kidd JK 3 Transporte JK POSIBLE 18
de urea
019 Kx XK 1 Glicoproteín XK SI X
a
75
TEST ANTIGLOGULINA HUMANA
El test Antiglobulina Humana (AGH) o test de Coombs, se basa en principios elementales

simples:
- Las moléculas de anticuerpos y los componentes del complemento son globulinas.
- Al inyectar a un animal globulina humana, se estimula la producción de anticuerpos frente a
esta proteína extraña.
- Se remueven del suero las proteínas y anticuerpos no deseados dejando solamente el
ANTICUERPO ANTIGLOBULINA HUMANA.
- Este suero AGH reaccionará específicamente con globulinas humanas tanto si están unidas
a eritrocitos como libres en el suero.
- La porción Fab de la molécula AGH reaccionará con la porción Fc del anticuerpo unido a
cada glóbulo rojo por separado produciendo la aglutinación.
- Las globulinas libres no unidas, pueden neutralizar el AGH si no se eliminan completamente y
causar resultados negativos falsos.
- Es uno de los test de laboratorio más usados en inmunohematología, se utiliza 2 tipos de test
AGH
1. - El test Antiglobulina Directo TAD.

2. - El test Antiglobulina Indirecto TAI.
TEST ANTIGLOBULINA HUMANA DIRECTO (TAD) TEST DE COOMBS DIRECTO
TÉCNICA EN TUBO
El TAD se utiliza para demostrar anticuerpos IgG y/o complemento (C3dg), que se han unido
"in vivo" a los eritrocitos del paciente. Se utilizan directamente los eritrocitos lavados del
paciente y el suero AGH.
MUESTRA:
Sangre obtenida con EDTA como anticoagulante, para evitar la unión de complemento "in
vitro" que puede ocurrir en muestras sin anticoagulante.
REACTIVOS:
- Suero Antiglobulina Humana: Existen sueros AGH poliespecíficos que detectan tanto IgG
como Complemento, sueros monoespecíficos anti-IgG, anti-C3d, anti-C4, anti-C3dg, etc...
Los métodos de rutina usan sueros AGH poliespecíficos. Es muy importante leer
cuidadosamente las instrucciones del fabricante al comenzar a trabajar con cada lote de
SAGH.
- PBS
PROCEDIMIENTO:
1.- Prepare cuidadosamente una suspensión de eritrocitos del paciente al 2-4% en su propio
plasma.
2.- Lave 1 gota de la suspensión anterior de eritrocitos del paciente por 4 veces con PBS.
Después del último lavado, elimine totalmente el sobrenadante e inmediatamente
agregue 1 o 2 gotas del suero AGH poliespecífico.
3.- Centrifugue el tiempo y velocidad estandarizado para lectura de AGH, y examine en
busca de aglutinación. Regístrela en intensidad de cruces. La lectura es muy importante
en este test para lo cual rote suavemente el tubo hasta lograr que se desprendan todos
los eritrocitos del fondo.
4.- Si al usar suero AGH poliespecífico o anti-C3d la reacción es negativa, incube por 5
minutos a temperatura ambiente el tubo y proceda igual que en el punto 3. Esto le otorga
mayor sensibilidad a la detección del complemento, especialmente en anemias
hemolíticas autoinmune. Esta segunda lectura jamás puede reemplazar a la lectura
inmediata ya que la reacción del anticuerpo IgG puede hacerse débil o negativa.
5.- Agregue 1 gota de células control de AGH (GR sensibilizados con IgG) a todo test cuyo
resultado es negativo.
6.- Proceda igual que en el punto 3. Si los eritrocitos de la muestra no fueron
adecuadamente lavados, quedando Igs libres, el suero AGH se neutralizará obteniendo
en esta fase un resultado negativo. Para que el resultado del TAD sea válido, el resultado
de esta etapa debe ser positivo.
INTERPRETACIÓN:
1.- El TAD es positivo cuando se detecta aglutinación desde la centrifugación inmediata o
después de la incubación de 5 minutos a temperatura ambiente. Las reacciones por IgG
se observan en la centrifugación inmediata y el complemento generalmente se presenta
mejor luego de la incubación a temperatura ambiente. Es necesario el uso de SAGH
monoespecíficos para confirmar el tipo de globulinas presentes.
2.- El TAD es negativo cuando no se observa aglutinación en la centrifugación inmediata,
luego de la incubación a temperatura ambiente, y si aparece la reacción positiva al
agregar los eritrocitos sensibilizados con IgG en la última fase.
NOTA: Un test con resultado negativo no necesariamente indica ausencia de globulinas

sensibilizando los eritrocitos, los sueros AGH poliespecíficos y anti-IgG, detectan
aproximadamente 200-500 moléculas de IgG por eritrocito, se han publicado casos de AHAI
con un número inferior de anticuerpos por célula y por lo tanto con un TAD negativo.
TECNICA DE AGLUTINACIÓN EN COLUMNA ( TARJETA):
MUESTRA
-Sangre obtenida con EDTA.
REACTIVOS
-Tarjetas para aglutinación en columna.
-Solucion salina.
PROCEDIMIENTO
1. Prepare una suspensión de eritrocitosen medio salino según indicaciones del fabricante.
2. Los hematíes obtenidos de cordon umbilical o procedentes de pacientes con proteínas
sericas anormales se deben labar como minimo una vez con solución salina fisiológica.
3. Marcar la tarjeta con la muestra que se va a analizar.
4. Abrir la tira de aluminio exponiendo únicamente las columnas que se van a utilizar.
Agregar la suspención de eritrocitos a las columnas.
5. Centrifugar las tarjetas.
6. Leer la aglutinación en cruces.
77
TEST ANTIGLOBULINA HUMANA INDIRECTO (TAI) TEST DE COOMBS INDIRECTO
TÉCNICA EN TUBO
El Test Antiglobulina Indirecto (TAI) se utiliza para comprobar el recubrimiento "in vitro" de los
eritrocitos por anticuerpos y/o complemento, mediante incubación del suero (Ac) con
hematíes (Ag) que posteriormente se lavan para eliminar las globulinas no adheridas. El
hecho de que se produzca aglutinación después de añadir el reactivo AGH indica que el
suero contiene anticuerpo(s) que reacciona(n) con antígeno (Ag) presente en el glóbulo
rojo.
Se utiliza para detección, identificación y titulación de anticuerpos, pruebas cruzadas,

determinación de grupos sanguíneos con ciertos antisueros.
TAI USANDO GLOBULOS ROJOS SUSPENDIDOS EN SALINO
MUESTRA:
Sangre total sin anticoagulante.
MATERIALES:
- Tubos Kahn (11 x 75mm).
- Gradilla para tubos Kahn.
- Centrífuga para inmunohematología.
- Fuente de luz.
REACTIVOS:
- PBS o Suero fisiológico tamponado pH 7.3
- Suero antiglobulina humana poliespecífico.
-Glóbulos rojos grupo O de al menos 2 donantes distintos que en suma posean los Ags. de
importancia clínica. (D, C, E, c, e, Fya, Fyb, MNSs, JKa, JKb, K). Cada célula debe
enfrentarse por separado al suero en estudio, el uso de pool de células da resultados falsos
negativos.
- Células control AGH
- Suero control que posea un anticuerpo IgG débil (reacción de 2+ en AGH)
METODO
1. Marcar los tubos con la identificación: paciente, suero control.
2. Depositar 2 gotas del suero en estudio y del suero control en los tubos correspondientes.
3. Agregar 1 gota de suspensión al 5% en salino de glóbulos rojos reactivos al tubo
correspondiente y mezclar.
4. Centrifugar y leer de la forma previamente estandarizada.
5. Incubar los tubos a 37ºC por 60 min.
6. Centrifugar el tiempo establecido según estandarización de la centrífuga.
7. Leer en busca de hemólisis y/o aglutinación, rotando suavemente el tubo frente a una
fuente de luz. Anotar los resultados tubo en mano.
8. Un resultado positivo de aglutinación o hemólisis en estas etapas no debe ser
interpretado como producido por recubrimiento por IgG o Complemento.
9. Lavar los tubos débilmente positivos y negativos por 4 veces con PBS, eliminando al
máximo el sobrenadante del último lavado.
10. Agregar a cada tubo 2 gotas del suero AGH.
11. Mezclar y centrifugar según punto 4.

12. Leer en busca de hemólisis y/o aglutinación, rotando suavemente el tubo frente a una
fuente de luz. Anotar los resultados tubo en mano.
13. Confirmar los resultados negativos, agregando 1 gota de células control AGH (Coombs) a
los tubos en que el resultado del test fue negativo.
14. Centrifugar y leer según punto 4.
INTERPRETACIÓN:
Se considera que un TAI es positivo cuando se detecta aglutinación después de agregar
AHG. Esta positividad significa presencia de anticuerpo(s) de tipo IgG y/o de anticuerpo(s)
que se manifiesta a través de la fijación de Complemento.
Para que el test se considere válido, el tubo con suero control positivo debe presentar un
resultado positivo y el resultado de las células control AGH debe ser positivo.
NOTA: Puede acortarse el tiempo de incubación si en el punto 3, los eritrocitos se suspenden

en medio de baja fuerza iónica (LISS), teniendo la precaución de utilizar los tiempos y
volúmenes previamente estandarizados para este reactivo.
TÉCNICA DE AGLUTINACIÓN EN COLUMNAS ( TARJETA):

MUESTRA
-Sangre total
REACTIVOS
-Solucion salina o PBS
- Potenciador de la técnica
-Tarjetas para aglutinación en columnas.
-Globulos rojos grupo O de al menos 2 donantes diferente que en suma posean los Ags.de
importancia clínica.
METODO
1. Marcar las tarjetas según la muestra a identificar.
2. Abrir la tira de aluminio únicamente en las columnas que se van a utilizar para la
reacción.
3. Añadir a las columnas ambas suspenciónes de los glóbulos rojos según indicaciones del
fabricante.
4. Añadir suero de la muestra a las correspondientes columnas según indicaciones del
fabricante.
5. Incubar.
6. Centrifugar la tarjeta.
7. Leer microplacas buscando aglutinación o hemolisis.
FACTORES QUE AFECTAN LA SENSIBILIDAD DE UN TAGH
1.- Temperatura
2.- Fuerza iónica del medio
3.- Proporción suero/células
4.- Tiempo de incubación
Para fines didácticos puede considerarse que el TAGH tiene diferentes fases, en cada una
de las cuales existen causas de error que deben manejarse para un correcto resultado del
test:
79
FASE 1: Selección de los eritrocitos de prueba:

1.- Deben ser grupo O Rh positivo y contener todos los antígenos de importancia clínica.
2.- Usarse por separado, nunca en pool.
3.- Prepararse una suspensión al 2-4% en PBS, y 1,5 - 2% en LISS
FASE 2: Sensibilización de los eritrocitos:
1.- Proporción correcta suero/células:
para TAI en salino = 2:1 a 4:1
para TAI en LISS = 1:1
2.- Tiempo de incubación:
Para TAI salino = 45 minutos a 1 hora
Para TAI LISS = 15 a 20 minutos, según la estandarización del test.
FASE 3: Lavado de las células:
1.- Trabajar con centrífugas calibradas.
2.- Uso de 4 lavados con abundante PBS.
3.- No interrumpir el proceso de lavado en ningún momento ya que los anticuerpos pueden
eluirse.
4.- Mezclar bien los GR después de cada lavado, cuidando de soltar todas las células del
fondo del tubo.
5.- Remoción de todo el sobrenadante del último lavado, idealmente secando el borde del
tubo con papel absorbente muy limpio.
6.- Uso de células control AGH (sensibilizadas con IgG o Complemento, según corresponda)
FASE 4: Lectura:
1.- Agregar la cantidad suficiente de suero AGH.
2.- Cuidar que el suero AGH en uso sea de calidad óptima conocida y que las condiciones
de almacenamiento y uso sean las adecuadas.
3.- La lectura debe realizarse inmediatamente después de haber terminado el último
lavado.
4.- Calibrar la centrifugación para lectura.
5.- lectura macroscópica: Agitación suave del tubo, idealmente Tip and Roll (rotación
suave del tubo hasta desprender todas las células del fondo).
6.- Lectura microscópica: Observar el tubo colocado en forma horizontal bajo aumento
lupa, o transferir su contenido a un porta objeto, colocar un cubre objeto y luego
examinar con aumento 10X y 40X. En este caso sonimportantes los controles positivos y
negativos (células de prueba solas), como así mismo la experiencia en este tipo de
lectura.
Es muy importante para obtener resultados confiables el uso en paralelo con los tubos
test de un suero control conocido que presente una reactividad débil en AGH (2+) con
los eritrocitos de prueba usados en el test.
PREPARACION DE GLOBULOS ROJOS CONTROL PARA TEST ANTIGLOBULINA HUMANA
En el test AGH, la presencia de suero residual después del último lavado puede llevar a
neutralización parcial del reactivo AGH, que implicaría reacciones más débiles o negativas
del test. Se recubren eritrocitos grupo O Rh positivo con IgG anti-D de modo que den una
reacción de ++ a +++ al ser agregados a los test Antiglobulina Humana negativos.
METODO I:
MATERIALES:
- Eritrocitos grupo O Rh positivo (pool de 4 células R1r, con TAD negativo y con menos de 3
semanas de almacenamiento)
- Anti-D con título 32 o 64.
METODO:
1.- Lave los eritrocitos seleccionados por 3 veces con abundante PBS.
2.- Coloque 10 ml de PBS en un tubo y agregue 10 gotas del suero anti-D. Agregue una
cantidad suficiente de los eritrocitos O previamente lavados como para obtener una
concentración al 3% (aprox. 150 microlitros)
3.- Mezcle e incube a 37ºC durante 30-60 minutos.
4.-Lave los glóbulos rojos 4 veces con PBS y resuspendalos hasta alcanzar una concentración
final del 2-3%.
5.- Realice un TAD a los eritrocitos tratados con el suero Antiglobulina Humana que Ud. utiliza
de rutina en su Banco de Sangre. Debe obtener una reacción de +++.
6.- Estos eritrocitos pueden ser guardados a 4ºC por 48 hrs.
METODO II
MATERIALES:
- Eritrocitos grupo O Rh positivo (pool de 4 células R1R1, con TAD negativo y con menos de 3
semanas de almacenamiento)
- Anti-D con título = o superior a 128 (1 UI/ml)
METODO:
Se colocan 2 ml de GR concentrados, con 4 ml del suero anti-D; incubar durante 1 hora a

37ºC, centrifugar, eliminar sobrenadante y lavar por 4 veces con PBS. Para guardar use 1 ml
de eritrocitos sensibilizados y 2 ml de sol. Alsever, puede guardarse durante 10 a 15 días a
4ºC, cuidando de mantener la esterilidad. Para uso diario, almacenar en alícuotas de 2 ml.
Para su uso, suspender los eritrocitos a una concentración del 3% en PBS.
81
DETECCION DE ANTICUERPOS IRREGULARES
TÉCNICA EN TUBO
Los anticuerpos irregulares representan una inmunización a antígenos eritrocitarios de los

otros sistemas sanguíneos y son distintos de los anticuerpos "naturales" anti-A y anti-B.
La inmunización a estos antígenos eritrocitarios puede estar desencadenada por embarazo

o transfusión, o por inyección deliberada de material inmunógeno. En algunos casos, el
causante es desconocido.
Los anticuerpos dirigidos contra antígenos eritrocitarios del propio individuo se denominan
autoanticuerpos, a diferencia de los aloanticuerpos que reaccionan contra antígenos
eritrocitarios de otros individuos de la misma especie.
La determinación y selección de estos anticuerpos se realiza mediante técnicas de hemólisis

y aglutinación principalmente, capaces de pesquisar Ac. clase IgM e IgG en el suero
sanguíneo. Las características físico-químicas de los anticuerpos involucrados hacen
necesario la utilización de medios y temperaturas óptimas y diferentes para cada tipo, como
también eritrocitos reactivos con fenotipo adecuado.
MUESTRA:
- Sangre sin anticoagulante, con no más de 48 hrs .de extraída.
MATERIALES:
- Tubos de Khan (vidrio 12x 75 mm)

- Gradillas para tubos.
- Centrífuga para inmunohematología previamente calibrada.
- Lector para Inmunohematología.
REACTIVOS:
- Suero salino isotónico tamponado pH 7.0,o PBS.

- Eritrocitos reactivos de grupo O Rh +,con las siguientes características:
1.- Provenientes como mínimo de 2 donantes diferentes, uno R1R1 y el otro R2R2. Marcarlos
como I y II.
2.- En conjunto posean los antígenos eritrocitarios de importancia clínica: D, C, E, c, e, M, N,
S, s, Fya, Fyb, JKa, Jkb, Lea, Leb, P1.
3.- Que posean los antígenos que presentan efecto de dosis en estado homocigoto.
- Células control de test AGH.
- Suero AB inerte.
- Suero control positivo débil.
MÉTODO:
1. Marcar 3 tubos con las siglas I, II , PA. Depositar en cada uno 2 gotas del suero en
estudio.
2. Agregar al tubo I, 1 gota de la suspensión al 2-4% en salino de eritrocitos reactivos

seleccionados como I (lavado previo 4 veces).
3. Agregar al tubo II, 1 gota de la suspensión al 2-4% en salino de eritrocitos reactivos
seleccionados como II (ídem).
4. Agregar al tubo PA, 1 gota de la suspensión al 2-4% en salino de los eritrocitos de la
muestra en estudio (ídem).
5. Mezclar y centrifugar al tiempo y velocidad establecida en la estandarización de la
centrífuga.
6. Leer, frente a una fuente luminosa, rotando suavemente el tubo en busca de hemólisis
y/o aglutinación macroscópica. Anotar los resultados en el protocolo.
7. Incubar por 15 min. a temperatura ambiente y proceder luego como en los puntos 3 y 4.
8. Incubar en un baño María a 37ºC, por 45 min. y luego proceder como en los puntos 3 y
4.
9. Lavar los tubos negativos o débilmente positivos por 4 veces con salino tamponado o
PBS para realizar la prueba de AGH.
10. Después de eliminar totalmente el sobrenadante del último lavado, agregar 1 gota
de suero AGH poliespecífico y proceder como en los puntos 3 y 4.
11. En los tubos que resultaron negativos, agregar 1 gota de células control AGH y
proceder como en los puntos 3 4.
NOTA:
a) si se dispone de un set de eritrocitos comercial, utilizar según las indicaciones del

fabricante.
b) El tiempo de incubación puede acortarse si en el punto 2 los eritrocitos se suspenden
en medio de baja fuerza iónica, LISS, teniendo la precaución de utilizar los tiempos
previamente establecidos en la estandarización del reactivo, por ej.: 10-15 min a 37ºC y
los reactivos en proporción volumen a volumen.
83
INTERPRETACIÓN:
Se considera como positiva una detección de anticuerpos irregulares, cuando en cualquiera

de sus fases se observa aglutinación o hemólisis. Este método proporciona además las
características de reacción, medio y temperatura óptimos del anticuerpo pesquisado, así
como también la condición de alo o autoanticuerpo.
EJEMPLOS:
Aloanticuerpo
I II PA
S - - -
37º - - -
AGH - 1+ -
Auto + Aloanticuerpo
I II PA
S - - -
37º - - -
AGH 1+ 4+ 1+-
Crioaglutininas
I II PA
S 3+ 3+ 3+
37º - - -
AGH - - +/-
Autoanticuerpo
I II PA
S - - -
37º 1+ 1+ 1+
AGH 2+ 2+ 2+
CONTROL DE CALIDAD:
1.-En cada set de tests debe incluirse en paralelo como control positivo un suero que posea
un anticuerpo débil, con una reacción de 1+ o 2+ en AGH y un control negativo con
suero AB inerte.
2.-Si utiliza LISS debe tener las precauciones establecidas para este medio.
TÉCNICA EN COLUMNAS (TARJETAS).
La detección de anticuerpos irregulares en gel utiliza glóbulos rojos diluidos solos o con
plasma para el uso en TAD, TAI como también en pruebas cruzadas. El fundamento de esta
técnica se basa en una reacción de Coombs dentro del tubo de la tarjeta de gel, la cual se
incuba junto a los glóbulos rojos y plasma a probar para observar aglutinación. Luego de un
proceso de centrifugación, las células que den reacción negativa (no aglutinación) pasaran
por la matriz de gel hasta el fondo del tubo, en cambio las reacciones positivas
(aglutinación) quedaran atrapadas en la matriz con diferentes intensidades según sea la
reacción.
MUESTRAS:
- Suero o plasma obtenido de muestras de sangre tomadas con EDTA.

MATERIALES
- Pipetas automáticas de 25 y 50 microlitros.

- Puntas de pipetas desechables.
- Gradillas.
EQUIPOS:
- Centrífuga con soporte para geles.

- Incubador a 37°C.
REACTIVOS
- Glóbulos rojos comerciales para la detección de Acs. Irregulares (Pool I y II), diluidos
al 1% en medio de Baja Fuerza Iónica.
- Tarjeta Gel Coombs.
METODO
1. Identifique las columnas de gel según corresponda. Debe utilizar dos columnas para cada
muestra en estudio.
2. Dispense en los pocillos de incubación de los microtubos (columna de gel)
correspondientes 50 microlitros de glóbulos rojos del Pool I y del Pool II respectivamente.
3. Añada 25 microlitros de suero o plasma del paciente.
4. Incube por 15 minutos a 37ª C.
5. Centrifugue las tarjetas de geles.
6. Lea e interprete los resultados.
Se recomienda una lectura inmediata de los resultados después de la centrifugación de las

tarjetas, sin embargo se pueden leer hasta 24 horas después, si se conservan en posición
vertical, refrigeradas y selladas con parafilm, para evitar la evaporación del sobrenadante.
INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS. (Figura 1)

Reacción negativa:
Banda de hematíes en el fondo de la columna, resto de la columna sin aglutinados visibles.
Reacción positiva:
+/- : Escasos aglutinados de pequeño tamaño en la mitad inferior de la columna.
1+ : Algunos aglutinados de pequeño tamaño en la columna.
2+ : Aglutinados de tamaño pequeño o mediano a lo largo de la columna.
3+ : Banda superior de aglutinados, de tamaño mediano en la mitad superior de la columna.
4+ : Banda de Hematíes aglutinados en la parte superior de la columna.
Doble población: Doble banda de hematíes, en el fondo y en la parte superior de la
columna.
Hemólisis: Sobrenadante y columna de color rosa.
85
Figura 1
DETECCIÓN DE ANTICUERPOS EN MEDIO LISS
Se usa para evidenciar la presencia de un anticuerpo dirigido contra algún sistema

sanguíneo, en un medio de baja fuerza iónica o LISS, lo que permite acortar el tiempo de
incubación y favorecer la aglutinación a algunos anticuerpos que presentan constantes de
asociación a su antígeno relativamente bajas.
Al usar este tipo de medio es muy importante hacer una estandarización previa y trabajar con
control positivo (anticuerpos débilmente reactivos) y control negativo (suero AB inerte). Revisar
las limitaciones del método.
REACTIVOS:
- Suero salino isotónico tamponado pH 7.0,o PBS.

- Eritrocitos reactivos de grupo O Rh +, con iguales características que las descritas en la
técnica de detección de anticuerpos irregulares.
- Células control de test AGH.
- Suero AB inerte.
- Suero control positivo débil.
- Medio LISS.
-
MÉTODO:
1.- Marcar 3 tubos con las siglas I, II, PA.

Depositar en cada uno 2 gotas del suero en estudio.
2.- Agregar al tubo I, 2 gotas de la suspensión al 2% en LISS de eritrocitos reactivos
seleccionados como I (hacer un lavado previo con PBS por 3 veces, eliminar todo el
sobrenadante y suspender las células en LISS).
Agregar al tubo II, 2 gota de la suspensión al 2% en LISS de eritrocitos reactivos
seleccionados como II (preparados igual que las células I)
Agregar al tubo PA, 2 gota de la suspensión al 2% en LISS de los eritrocitos de la muestra en
estudio (preparados igual que las células I).
NOTA: si se dispone de un set de eritrocitos comercial, dispensar según las indicaciones del
fabricante.
3.- Mezclar y centrifugar al tiempo y velocidad establecida en la estandarización de la
centrífuga.
4.- Leer, frente a una fuente luminosa, rotando suavemente el tubo en busca de hemólisis y/o
aglutinación macroscópica. Anotar los resultados en el protocolo.
5.- Incubar por el tiempo establecido en la estandarización del medio LISS, a 37ºC y proceder
luego como en los puntos 3 y 4.
7.- Lavar los tubos negativos o débilmente positivos por 4 veces con salino tamponado o PBS
para realizar la prueba de AGH.
8.- Después del último lavado, eliminar totalmente el sobrenadante, agregar 1 gota de suero
AGH poliespecífico y proceder como en los puntos 3 y 4.
9.- En los tubos que resultaron negativos, agregar 1 gota de células control AGH y proceder
como en los puntos 3 y 4.
NOTA: Al utilizar LISS debe tener las siguientes precauciones:

a) Uso de una proporción suero/células 1/1. Esto es obligatorio.
b) Los eritrocitos deben lavarse previamente en PBS, para luego suspenderlos en LISS.
c) Dejar que las células alcancen temperatura ambiente antes de su uso, ya que de lo
contrario puede inducirse reacciones falsas positivas.
d) La suspensión de células en LISS se asocia con un acelerado deterioro de algunos
antígenos como Fya, Fyb, S, s, por lo que ellos no deben ser usados más allá de 24 horas.
e) Puede utilizarse azida de sodio como preservativo, para evitar contaminación.
f) Debe usarse un método previamente estandarizado, para determinar los tiempos de
incubación, según el método descrito en este manual.
IDENTIFICACION DE ANTICUERPOS IRREGULARES
87
Los aloanticuerpos irregulares son anticuerpos distintos a los anticuerpos naturales anti-A y anti-
B. Estos aloanticuerpos se encuentran en aproximadamente un 0.3 - 2% de la población,
según sea el grupo estudiado y la sensibilidad del método utilizado.
Una vez detectada la presencia de un anticuerpo irregular, debe determinarse su

especificidad y su significación clínica. Un anticuerpo clínicamente significativo es aquel que
acorta la sobrevida prevista de los hematíes incompatibles transfundidos, o que se asocia con
enfermedad hemolítica del recién nacido (EHRN). No obstante el grado de significación
clínica es variable. Algunos anticuerpos producen la destrucción de los G.R. en pocas horas e
incluso minutos, mientras que otros acortan la sobrevida prevista en solo unos pocos días. Por
lo tanto, puede utilizarse la experiencia documentada de un anticuerpo con la misma
especificidad para evaluar la significación clínica de un anticuerpo dado.
COMPORTAMIENTO SEROLOGICO DE LOS PRINCIPALES ANTICUERPOS IRREGULARES
AC LISIS SALINO AGH ENZIMA ASOCIADO A

In vitro 4ºC 22ºC 37ºC AGH EHRN RPT
M No May Alg Pocos 0 0 Pocos Pocos
N No May Pocos Ocas 0 0 Raros ¿
S No Pocos Alg May Si Si
S No 0 Pocos May Si Si
U No 0 Pocos May May May Si Si
Lua No Alg May Pocos Pocos Pocos No ¿
Lub No Pocos Pocos May Pocos Pocos Mod Si
K No Pocos May Alg May Si Si
K No Pocos May Alg May Si Si
Fya No Raros May 0 0 Si Si
Fyb No Raros May 0 0 Si Si
Jka Alg Pocos May Alg Si Si Si
Jkb Alg Pocos May Alg Si Si Si
Dia No Alg May Alg Si Si
Dib No May Alg Si Si
alg= algunos; may= mayoría; ? = desconocido; O = negativo
No existen datos concretos de algunos anticuerpos, por lo que se considera que un

anticuerpo es clínicamente significativo, si él es activo a 37ºC y en test AGH.
La determinación de la especificidad de un aloanticuerpo es importante para valorar la
necesidad de seleccionar para la transfusión, sangre antígeno negativa.
PRINCIPIO DEL TEST:

Usando las condiciones bajo las cuales el anticuerpo fue originalmente detectado, se mezcla
el suero con cada tipo celular del panel de identificación, observando la presencia o
ausencia de lisis o aglutinación y comparando el patern de reactividad con el perfil
antigénico de las células.
PROCEDIMIENTO GENERAL
MUESTRA:
Idealmente 10 ml de sangre total sin anticoagulante
MATERIALES:
- Tubos Khan
- Gradilla para tubos Khan
- Baño termorregulable
- Pipetas Pasteur
- Lector para test inmunohematológicos.
REACTIVOS:
- Suero antiglobulina humana poliespecífica.
- PBS o suero fisiológico tamponado pH 7.0
- Panel de células para identificación de anticuerpos.
- Células control para test AGH.
- Suero AB inerte.
METODO:
1.- Leer cuidadosamente las instrucciones del panel a usar.
2.- Numerar tantos tubos de Khan como muestras tenga el panel a usar, agregue un
tubo más para el autocontrol.
3.- Agregue a cada tubo, incluyendo el autocontrol 2 gotas del suero en estudio,
usando una pipeta Pasteur.
4.- Coloque en cada tubo 1 gota de eritrocitos del correspondiente frasco del panel de
identificación. Ej.: En el tubo Nº1 agregar 1 gota de las células del frasco Nº1 y así
sucesivamente. En el tubo destinado al autocontrol, coloque 1 gota de células del
paciente suspendidas al 3% en salino o en solución diluyente de células.
5.- Mezclar y centrifugar el tiempo estandarizado para lectura en su centrífuga.
6.- Lea en busca de hemólisis o aglutinación en cada tubo y anote los resultados en cruces,
tubo en mano.
7.- Incubar por 45 minutos a 37ºC todos los tubos.
8.- Proceda igual que en los puntos 5 y 6.
9.- Lave con abundante PBS todos los tubos cuyo resultado sea débilmente positivo o
negativo, por cuatro veces, cuidando de eliminar bien el sobrenadante del último
lavado.
10.- Agregue a cada tubo una gota de suero antiglobulina humana poliespecífico.
11.- Proceda igual que en los puntos 5 y 6.
12.- En los tubos cuya prueba de AGH fue negativa, agregue 1 gota de células control AGH,
centrifugue y lea.
13.- Interprete los resultados en la tabla del panel.
NOTA: Existen varios tipos de paneles (fríos, calientes, tratados con enzimas, etc.) en que el
procedimientos para realizar este test varía de acuerdo a las características de cada tipo de
panel.
Puede usarse LISS como medio de suspensión de cada célula del panel, teniendo la
precaución de lavarlas por lo menos 1 vez con LISS y luego resuspenderlas en ese reactivo al
2%. De esa forma puede disminuirse el tiempo de incubación.
89
CONTROL DE CALIDAD:
- Uso de paneles de células de reactividad conocida y probada.
- Validación de los resultados AGH negativos con células control AGH.
- Uso de suero AB inerte como control negativo.
- Uso de prueba autóloga.
CONSIDERACIONES EN LA INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS SEROLOGICOS
Los aloanticuerpos de ciertas especificidades de grupo sanguíneo muestran a menudo

características serológicas constantes (ver tabla anterior). Al interpretar los resultados de los
estudios serológicos, es importante buscar estas características y examinar los fenotipos tanto
de las muestras de hematíes reactivos como no reactivos. Deben considerarse los puntos
siguientes:
a.- ¿Cuáles son los efectos de la temperatura, medio de suspensión o enzimas proteolíticas
sobre la reacción?
b.- ¿Hay alguna variación de intensidad de la aglutinación observada entre las muestras de
hematíes reactivos?
c.- ¿Hay hemólisis?
d.- ¿Los hematíes autólogos son o no reactivos?.
A continuación se detalla una serie de puntos a seguir para interpretar los resultados de las
pruebas de identificación de aloanticuerpos y seleccionar pruebas adicionales necesarias
para la confirmación:
1.- AUTOCONTROL: Evaluar las reacciones del autocontrol. Si son negativas, se excluye la
presencia de autoanticuerpos. Si son positivas, considerar la presencia de autoanticuerpos o
aloanticuerpos producidos en respuesta a una transfusión previa reciente.
2.- HEMATIES REACTIVOS: No considerar inicialmente los antígenos presentes en las muestras no
reactivas.
3.- HEMATIES AUTOLOGOS: No considerar anticuerpos contra antígenos presentes en los
hematíes autólogos.
4.- HEMATIES TRATADOS CON ENZIMAS: Examinar los fenotipos (Ej.: S, Fya) de las muestras que
reaccionan con los hematíes no tratados, pero no son reactivas (o más débiles) frente a
hematíes tratados con enzimas.
5.- PATRON DE REACCION: Examinar los patrones de reacción en cada fase de la prueba,
recordar las posibles especificidades implicadas y considerar posibles especificidades en
relación a la fase de la prueba y el tipo de especificidad (Ej.: aglutinación con anti-P1,
hemólisis a 37ºC con anti Lea, falta de reactividad con anti-Fya y hematíes tratados con
enzima)
6.- PRUEBAS ADICIONALES: Analizar un número suficiente de muestras de hematíes de fenotipo

adecuado para obtener un valor p (probabilidad) inferior a 0.05 para cada anticuerpo
sospechado. Analizar el suero frente a hematíes con dosis doble de antígeno contra los cuales
el suero puede tener anticuerpos, si estos no se encontraban presente en las muestras
anteriormente no reactivas. Analizar hematíes autólogos con antisueros adicionales (en caso
necesario) para demostrar la ausencia de todos los antígenos contra los cuales el suero tiene
anticuerpos.
CALCULO DE PROBABILIDAD:
Para la identificación definitiva del anticuerpo, debe realizarse un Nº suficiente de muestras de

hematíes que carezcan del antígeno frente al cual el anticuerpo parece mostrar especificidad,
y un Nº suficiente de hematíes que contengan dicho antígeno. Es necesario comprobar que el
patrón de reactividad observado no es producto del azar. La tabla siguiente muestra las
probabilidades de diversas combinaciones de pruebas reactivas y no reactivas calculadas
según el método exacto de Fisher para estimar probabilidades.
Los valores de probabilidad (p) que se muestran en la tabla siguiente son el resultado de
pruebas estadísticas que demuestran la probabilidad de que un conjunto dado de resultados
sea producto únicamente del azar. Un valor de p de 0.05 indica que los mismos resultados se
obtendrían por azar en 1 de 20 estudios parecidos; las posibilidades de que la interpretación de
los datos sea correcta es de 19:1 (95%). Una p de 0.05 es el valor mínimo aceptado en el que
una interpretación se considera estadísticamente válida. Debido a estos requisitos estadísticos,
para confirmar la especificidad del anticuerpo, la mayoría de los paneles de hematíes tienen
una capacidad limitada para identificar de forma concluyente algunos anticuerpos.
VALORES DE PROBABILIDAD
Nº muestras Nº muestras Nº muestras P

analizadas positivas negativas
6 4 2 0.067
6 3 3 0.050
7 5 2 0.048
7 4 3 0.029
8 7 1 0.125
8 6 2 0.036
8 5 3 0.018
8 4 4 0.014
9 8 1 0.111
9 7 2 0.028
9 6 3 0.012
10 7 3 0.008
10 9 1 0.100
10 8 2 0.022
10 6 4 0.005
10 5 5 0.004
91
CALCULO:
Los niveles de probabilidad para la identificación de anticuerpos se
calculan construyendo tablas de 2x2 en las que la presencia y ausencia
de reactividad sérica se relaciona con la presencia o ausencia de un
antígeno concreto en las muestras de hematíes analizadas. Una tabla 2x2
se construye como sigue:
HEMATIES
REACCIONES Ag PRESENTE Ag AUSENTE TOTAL
SERICAS
POSITIVO A B A+B
NEGATIVO C D C+D
TOTAL A+C B+D N
A: Nº de reacciones positivas observada con células Ag positivas.

B: Nº de reacciones positivas observada con células Ag. negativas
C: Nº de reacciones negativas ob. con células Ag. positivas
D: Nº de reacciones negativas ob. con células Ag. negativas
N: Nº total de muestras de hematíes analizadas.
La fórmula para calcular la probabilidad (p) a partir de una tabla 2X2 es la siguiente:
p= (A+B)! x (C+D)! x (A+C)! x (B+D)!

N! x A! x B! x C! x D!
NOTA:
!: símbolo de factorial, que es el producto de todos los números enteros desde 1 hasta el
número en cuestión. Ej.: 6!: 6x5x4x3x2x1= 720
3!: 3x2x1= 6
1!: 1
0!: 1
EJEMPLO DE CÁLCULO:
Para un suero reactivo con 3 muestras de células E+ y no reactivo con 3 muestras E-, la tabla
2X2 es:
HEMATIES
REACCIONES Ag PRESENTE Ag AUSENTE TOTAL
SERICAS E+ E-
POSITIVO 3 0 3
NEGATIVO 0 3 3
TOTAL 3 3 6
p: 3! x 3! x 3! x 3! = 36 = 1 = 0.05
6! x 3! x 0! x 3! x 0! 720 20
Esto indica que hay una probabilidad de 1 en 20 de que un anticuerpo distinto de anti-E
pudiera, debido al azar, haber ocasionado las reacciones observadas. Este nivel de
probabilidad es el mínimo aceptable para la significación estadística. La prueba del suero
frente a 10 muestras de hematíes, 6 E- y 4 E+, mejora drásticamente el nivel de probabilidad
para anti-E.
93
TITULACION DE ANTICUERPOS
La titulación es una forma semicuantitativa de medir la cantidad de anticuerpos presentes

en una muestra a estudiar.
Una de las aplicaciones más útiles de la titulación es el seguimiento de muestras de

pacientes embarazadas, con anticuerpos que pueden causar Enfermedad Hemolítica del
Recién Nacido. Para que los resultados sean significativos es importante titular en paralelo y
bajo las mismas condiciones, las muestras tomadas en las distintas etapas de la gestación.
Los títulos también puede ayudar a identificar la especificidad de los anticuerpo en una
mezcla, cuando el suero se titula contra células de fenotipos diferentes; a determinar la
fuerza relativa de un antígeno dado en diferentes muestras celulares (ej.: el título de un
anticuerpo anti-M será más alto con células MM que con células MN); y a revelar la
presencia de anticuerpos de "alto título, baja avidez" (ATBA).
Al proceder a titular un anticuerpo es necesario conocer previamente su medio, tiempo y

temperatura óptima de reacción y utilizar estas mismas condiciones en la técnica de
titulación.
MATERIALES:
- Tubos de Kahn (vidrio 12x 75 mm).
- Pipeta automática de 1 ml y de 100ul.
- Puntas desechables para pipeta automática.
- Centrífuga para inmunohematología calibrada previamente.
- Gradilla para tubos Kahn.
- Fuente luminosa para lectura.
REACTIVOS:
- Suero en estudio.
- Suspensión celular de fenotipo adecuado.
- Medio de suspensión adecuado al anticuerpo en estudio.
MÉTODO:
Se preparan diluciones madres dobles en la siguiente forma:
1. Marcar 10 tubos del 1 al 10; colocar a partir del tubo nº 2 un volumen constante (ej.:
0.5ml) del diluyente apropiado (suero AB inerte, PBS, etc.). El tubo 1 corresponde al
suero sin diluir.
2. Depositar en los tubos 1 y 2, igual volumen de suero en estudio al usado para diluir (ej.:
0.5ml). Mezclar varias veces el contenido del tubo 2 con una punta de pipeta limpia,
evitando la formación de burbujas. Se obtendrá en este tubo una dilución de 1 en 2.
3. Tomar del tubo 2 igual volumen elegido (0.5ml) y agregarlo al tubo 3. Mezclar en forma
similar al punto 2. Se obtendrá una dilución 1 en 4.
4. Repetir el proceso utilizando cada vez una punta de pipeta limpia para cada dilución,
hasta terminar la corrida de tubos. En el tubo nº 10 obtendrá una dilución 1 en 1024.
Retirar un volumen del suero diluido del último tubo y guardarlo para realizar nuevas
diluciones si fuera necesario.
5. Marcar nuevamente 10 tubos del 1 al 10.
6. Depositar 100ul de cada dilución madre en los tubos correspondientes y agregar 50ul
de la suspensión en salino al 4% de las células apropiadas. Puede utilizar la misma
punta si se dispensa primero la dilución mayor (ej. desde el tubo 10).
7. Efectuar la técnica que haya sido seleccionada de acuerdo a las características de

reacción óptima del anticuerpo a titular (ej.: salino, TAI, 37ºC)
8. Examinar macroscópicamente las reacciones, evaluar y registrar los resultados. Como
el fenómeno de prozona puede producir reacciones más débiles o negativas en las
diluciones menores, es preferible empezar la lectura por el tubo que contiene la mayor
dilución.
INTERPRETACIÓN:
El título es recíproco a la mayor dilución que presenta aglutinación de 1+, o hemólisis,
ej.: si la dilución 1/64 da una reacción positiva pero la dilución siguiente 1/128 es
negativa, el título es 64.
En estudios comparativos, una diferencia mayor a 2 diluciones entre dos sueros se
considera significativa. Las variaciones de la técnica y del operador, puede hacer que
los resultados de las pruebas duplicadas se diferencien hasta +/- una dilución.
Una mejor idea de la fuerza del anticuerpo, está dada por el score o puntaje de
reacción. Por ejemplo, cuando se comparan dos sueros de la misma especificidad:
Dilución
Suero 1/1 ½ ¼ 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 1/256 Score
X 4+ 4+ 3+ 2+ 1+ 1+ 1+ - -
12 12 10 8 5 5 5 0 0 55
Y 4+ 4+ 4+ 3+ 3+ 2+ 1+ - -
12 12 12 10 10 8 5 0 0 71
Ambos sueros tienen el mismo título de 64 ; el suero Y contiene el anticuerpo más potente
con un score de 71, comparado con el suero X que muestra un score de 55. Una diferencia
mayor de 10 en el score es significativa. Para mejor interpretación del clínico, es conveniente
informar título y score.
NOTAS:
1.- Es esencial una técnica de pipeteo cuidadosa. Se recomienda el uso de pipetas
automáticas con puntas desechables, las que deben cambiarse después de efectuar
cada dilución.
2.- Deben utilizarse siempre los tiempos, temperaturas de incubación y centrifugación
considerados óptimos.
3.- La edad, fenotipo y concentración de la suspensión de GR puede influir en los
resultados. Cuando haya que comparar los títulos de diferentes muestras de un
anticuerpo, todos los sueros deberán ser enfrentados a una muestra de hematies del
mismo donante. Si no es posible, se debe emplear GR del mismo fenotipo. Cuando
vaya a analizarse un mismo suero frente a distintas muestras de GR, las muestras de
suero deben extraerse y conservarse en las mismas condiciones, y diluirse a la misma
concentración antes de su uso.
4.- Es imposible la interpretación de los resultados si las muestras a comparar no se titulan
en paralelo, bajo las mismas condiciones de trabajo. Un ejemplo es el seguimiento de
muestras de pacientes embarazadas, con anticuerpos que pueden causar
Enfermedad Hemolítica del Recién Nacido. Para que los resultados sean significativos
es fundamental titular en paralelo y bajo las mismas condiciones las muestras tomadas
en las distintas etapas de la gestación.
5.- En las pruebas de un suero único frente a distintos tipos de GR, debe usarse la misma
muestra o suero diluido en todas ellas.
95
6.- Las determinaciones son más exactas si se emplean mayores cantidades de suero en
las diluciones, por lo que se debe trabajar con dilución madre, ya que da resultados
más confiables que las diluciones individuales.
7.- Para tener resultados confiables es necesario usar en paralelo, como control de
calidad, un suero standard de referencia para compararlo con los resultados de la
muestra en estudio.
PRUEBA CRUZADA O CROSMATCH
El objetivo de la prueba cruzada o crosmatch es seleccionar, para cada receptor, la unidad

de sangre total, glóbulos rojos u otro componente sanguíneo que, una vez transfundidos,
tendrán una sobrevida aceptable, no experimenten destrucción clínicamente significativa y
no afecten los hematies del receptor.
Se han descrito 2 tipos de prueba cruzada: mayor y menor.
La prueba cruzada mayor es la más importante y se aplica rutinariamente en los Bancos de

Sangre, ya que permite detectar en el receptor, anticuerpos clínicamente significativos que
pueden producir acortamiento de la sobrevida o destrucción de los hematíes a transfundir.
La prueba cruzada menor, consiste en detectar anticuerpos presentes en el componente a

transfundir que pudieran destruir los eritrocitos del receptor. Se usa solo en ocasiones muy
especiales.
PRUEBA CRUZADA (mayor):

TÉCNICA EN TUBO
MUESTRA:
- Sangre total sin anticoagulante, que represente bien el estado inmunológico del
receptor en el momento de realizar la transfusión.
MATERIALES:
- Tubos Kahn de vidrio (12x75mm)
- Centrífuga para inmunohematología.
- Baño termo regulable.
- Gradillas para tubos Kahn.
- Fuente de luz.
REACTIVOS:
- Suero Antiglobulina Humana poliespecífica.
- Suero fisiológico tamponado o PBS.
- Medio de baja fuerza iónica.(LISS)
- Suero control de reactividad débil
- Suero AB inerte.
- o en su defecto controles comerciales
MÉTODO:
1.- Marque un tubo con el nº de la unidad a transfundir. Prepare en él, una suspensión al
2% en LISS de los eritrocitos a transfundir, previamente lavados( 2 veces) y
concentrados. El último lavado debe ser en LISS.(0.5ml.de LISS + 10microltde GR)
2.- Marque un tubo con el Nº de la unidad a transfundir y las iniciales del receptor.
Deposite 2 gotas del suero del receptor y 2 gotas de la suspensión de eritrocitos a
transfundir.
3.- Mezcle, centrifugue a velocidad y tiempo establecidos. Lea en busca de hemólisis o
aglutinación, rotando suavemente el tubo frente a una fuente de luz. Anote los
resultados tubo en mano
4.- Incube a 37ºC por 10 -15 min; según tiempo establecido en estandarización de LISS.
97
5.- Proceda igual al pto. 3.

6.- Lave los tubos negativos 4 veces con abundante PBS. Elimine totalmente el
sobrenadante del último lavado.
7.- Agregue 1 gota de suero antiglobulina humana poliespecífico.
8.- Proceda igual al puntoNº 3.
9.- Agregue a los tubos que dieron resultados negativos, 1 gota de células control AGH
(Coombs).
10.- Proceda igual al punto Nº 3.
INTERPRETACIÓN
Las pruebas cruzadas con resultados negativos en todas sus etapas (excepto células
control), indican que las unidades estudiadas son compatibles.
CONTROL DE CALIDAD:
1.- Junto con cada prueba cruzada es necesario realizar un autocontrol o prueba
autóloga, bajo las mismas condiciones de trabajo que la muestra.
2.- El control de calidad, realizado diariamente y en cada turno, consta de un control
positivo que se obtiene contactando suero con Ac. débil pero clínicamente
significativo y eritrocitos con el ag. respectivo; y de un control negativo utilizando
suero AB inerte sin Ac. irregulares y los eritrocitos adecuados.
3.- Al utilizar PBS o salino en la suspensión de los hematíes, incubar por 60 min. en
proporción 2 de suero / 1 de suspensión.
4.- Al usar LISS la proporción suero/célula es 1/1.
PRUEBA CRUZADA(mayor): TÉCNICA EN GEL
MUESTRAS:
- Suero o plasma obtenido de muestras de sangre tomadas con EDTA.
- Glóbulos Rojos obtenidos de la tubuladura de la unidad a utilizar.
MATERIALES
- Pipetas automáticas de 25 y 50 microlitros.
- Puntas de pipetas desechables.
- Gradillas.
EQUIPOS:
- Centrífuga con soporte para geles.
- Incubador a 37°C.
REACTIVOS REVISAR
- Tarjeta Gel Coombs.
- solución diluyente de GR según inserto
METODO
1. Seleccionar una unidad de donante compatible.
2. Identifique las columnas de gel según corresponda, con el número de la unidad
seleccionada y las iniciales del paciente. Debe utilizar una columna para cada
muestra en estudio.
3. Obtener una alícuota desde la tubuladura en un tubo Khan (preparar suspensión
según indicaciones del inserto).
4. Dispense en otro tubo Khan, 200 ul
5. Tomar 5 ul de GR lavados, y traspasarlo al tubo con la solución diluyente (GR 1%).
6. Dispense en los pocillos de incubación de los microtubos (columna de gel)

correspondientes, 50 microlitros de glóbulos rojos diluidos.
7. Añada 25 microlitros de suero o plasma del paciente.
8. Incube por 15 minutos a 37ª C.
9. Centrifugue las tarjetas de geles.
10. Lea e interprete los resultados.
Se recomienda una lectura inmediata de los resultados después de la centrifugación de

las tarjetas, sin embargo se pueden leer hasta 24 horas después, si se conservan en
posición vertical, refrigeradas y selladas con parafilm, para evitar la evaporación del
sobrenadante.
99
ADSORCION DE ANTICUERPOS
Un anticuerpo puede ser removido del suero por medio de la unión con eritrocitos
apropiados que contengan el antígeno específico, formándose un complejo antígeno-
anticuerpo, permitiendo que al separar el suero sobrenadante, lo obtengamos libre del
anticuerpo que permanece unido a su antígeno.
Las técnicas de adsorción son usadas en diferentes situaciones:

- Remoción de autoanticuerpos de forma tal que permita la detección de aloanticuerpos
coexistentes en el suero.
- Confirmar la presencia de antígenos débiles en los eritrocitos, por medio de su habilidad
para remover su anticuerpo específico.
- Remoción de un anticuerpo no deseado de un suero clasificador.
- En combinación con las técnicas de elución, permítela separación de anticuerpos
múltiples presentes en un suero, para una posterior identificación.
- Etc.
MUESTRA:
Sangre sin anticoagulante
MATERIAL:
- Eritrocitos de fenotipo apropiado (que contengan el antígeno para el anticuerpo que
se quiere remover del suero)
- PBS
- Suero AGH poliespecífico.
PROCEDIMIENTO:
1.- Realice un TAD a los eritrocitos seleccionados, el que debe ser negativo.
2.- Lave los eritrocitos seleccionados con abundante PBS por 4 veces. Después del último
lavado elimine todo el sobrenadante que sea posible. Se recomienda centrifugar
nuevamente y retirar el sobrenadante introduciendo un papel filtro hasta absorber la
capa remanente de suero, esto es necesario para evitar la dilución del anticuerpo.
3.- Separe los eritrocitos en 3 alícuotas de 1 ml cada una.
4.- Mezcle volumen a volumen el suero a absorber y los eritrocitos ya seleccionados y
previamente marcados como alícuota 1.
5.- Incube a la temperatura óptima para el anticuerpo a absorber durante un mínimo de
60 minutos. La absorción será más efectiva si el área entre los reactantes es mayor,
por lo que se recomienda usar tubos de boca ancha y mezclar cada 10 minutos
aproximadamente.
6.- Centrifugue a 3.500 rpm por 10 minutos e idealmente a la misma temperatura que
utilizó en el punto 5.
7.- Transfiera el suero sobrenadante a un tubo limpio y previamente marcado para ser
estudiado. Si es necesario realizar una segunda o tercera absorción debe utilizar las
alícuotas de eritrocitos marcados como 2 y 3. Este sobrenadante es el suero
absorbido.
8.- Estudie el suero absorbido para investigar la efectividad de su método.
9.- Guarde los eritrocitos post absorción, si desea utilizar técnicas de elución.
ELUCION DE ANTICUERPOS
El objetivo de toda elución es interferir con la fuerzas no covalentes que mantienen unido el
complejo Ag-Ac. Estas interferencias pueden ser físicas (calor, ultrasonido, congelamiento y
descongelamiento, detergentes o solventes orgánicos), o una acción química directa sobre
las fuerzas de unión del complejo, usando alteración del Ph o concentraciones de sal.
En inmunohematología la elución se utiliza principalmente para remover anticuerpos de la

superficie de un eritrocito, que se han unido a él ya sea "in vivo" o "in vitro". El anticuerpo
obtenido es estudiado con diferentes fines.
El resultado de estos estudios son una parte importante del diagnóstico de laboratorio de la
destrucción inmune de eritrocitos, debido a la presencia de autoanticuerpos, aloanticuerpos
producidos en respuesta a transfusiones recientes, incompatibilidad materno fetal y
fenómenos inducidos por drogas.
En combinación con técnicas de absorción, la elución es usada en el laboratorio para

purificar anticuerpos de grupo sanguíneo, detectar antígenos débiles, concentrar
anticuerpos, o retirar anticuerpos de una mezcla de ellos.
En otras circunstancias, la elución se usa para retirar anticuerpos y dejar eritrocitos libres de
ellos (TAD -), y así poder estudiar las células no sensibilizadas.
Existen múltiples métodos de elución, por lo que no hay uno que sea eficaz en todos los
casos. Es importante por lo tanto elegir en forma adecuada la técnica de acuerdo al tipo de
anticuerpo que se quiere eluir.
ELUCION POR CALOR:
Se aplica preferentemente en el estudio de la enfermedad hemolítica del RN por ABO, y en

la elución de anticuerpos IgM de los eritrocitos.
En cada método la solución salina sobrenadante del último lavado se analiza en paralelo
con el eluido, para determinar si la reactividad encontrada en este último representa la
recuperación de anticuerpos de la superficie celular, o es el resultado de la contaminación
por suero residual , como puede ocurrir si los lavados previos a la elución no fueron realizados
correctamente. Sin embargo puede encontrarse reactividad en el sobrenadante del ultimo
lavado si el anticuerpo unido a las células es de baja afinidad para su antígeno y se eluye
durante el proceso de lavado.
MUESTRA:
Sangre con anticoagulante. (EDTA, Citrato de Na)
MATERIAL:
- Albúmina de bovino al 6%, preparada diluyendo albúmina al 22-30 % en PBS.
- PBS
PROCEDIMIENTO:
1.- Lavar 2 ml de eritrocitos concentrados por 6 veces con abundante PBS.
101
2.- Retirar completamente el sobrenadante cada vez y cuidar de guardar el

sobrenadante del último lavado como control negativo, para ser procesado en
paralelo con el eluado. Es aconsejable secar bien las paredes con papel absorbente.
3.- Mezclar volúmenes iguales de eritrocitos concentrados lavados y albúmina de bovino
al 6% en un tubo previamente marcado.
4.- Colocar el tubo a 56ºC durante 10 minutos. Agitar de vez en cuando durante este
período.
5.- Centrifugar el tubo a alta velocidad durante 2 minutos (1.000 g), preferentemente en
una centrífuga calentada.
6.- Transferir inmediatamente el sobrenadante a un tubo limpio y analizarlo en paralelo
con el sobrenadante del último lavado.
ELUCION POR CLOROFORMO:
La elución por cloroformo se usa en el estudio de un TAD asociado con anticuerpos reactivos
en caliente (IgG), ya sean auto o alo anticuerpos. En conjunto con técnicas de absorción,
sirve para separar mezclas de anticuerpos IgG presentes en un suero.
MUESTRA:
Sangre con anticoagulante
MATERIALES:
- Cloroformo (debe ser de muy alto grado)
- Albúmina de bovino al 6%.
- PBS Ph 7.2 - 7.3
PROCEDIMIENTO:
3.- Prepare una suspensión al 50% en albúmina al 6% de los eritrocitos previamente
lavados.
4.- Agregue un volumen igual de cloroformo.
5.- Tape el tubo con un tapón, y muévalo vigorosamente durante 15 a 20 segundos.
Posteriormente mezcle por inversión durante 1 minuto.
6.- Retire cuidadosamente el tapón y coloque el tubo en un baño a 56ºC, exactamente
por 5 minutos. (no debe exceder los 5 minutos a 56ºC). Mueva vigorosamente el
contenido del tubo con una bagueta durante este período.
7.- Centrifugue fuertemente el tubo (1.000 g) durante 5 minutos.
8.- Transfiera el eluado sobrenadante a un tubo limpio, y estúdielo en paralelo con el
sobrenadante del último lavado.
NOTA
El uso de LISS como diluyente de elución y LISS como medio de suspensión de las células del
sistema de detección puede facilitar enormemente la detección del anticuerpo eluido.
ELUCION ACIDA
Este método es aplicable en los mismos casos descritos para cloroformo, además se usa en
el tratamiento de eritrocitos recubiertos por IgG para realizar posteriormente autoabsorción.
MUESTRA:
Sangre con anticoagulante
MATERIALES:
- Solución de elución:
Ácido cítrico monohidratado 1.3 g
KH2PO4 0.65 g
Salino csp 100 ml
(almacenar a 4ºC)
- Solución de neutralización:
Na3PO4 13.0 g
H2O destilad csp 100 ml
(almacenar a 4ºC)
- PBS
PROCEDIMIENTO:
3.- Mantenga todos los reactivos en hielo a 4ªC.
4.- Coloque 1 ml de eritrocitos concentrados y previamente lavados en un tubo
marcado.
5.- Agregue 1 ml de solución de elución y tome el tiempo.
6.- Tape el tubo y muévalo por inversión exactamente por 90 segundos.
7.- Remueva el tapón y centrifugue rápidamente a alta velocidad (1.000 g) por 45
segundos.
8.- Transfiera el sobrenadante a un tubo limpio y agregue 5 a 6 gotas de la solución de
neutralización. Guarde los eritrocitos para absorciones si es necesario.
9.- Controle el pH, ajústelo a pH 7.0 si es necesario, agregando más solución de
neutralización.
10.- Centrifugue a igual velocidad que en 7 durante 2-3 minutos, para eliminar los
precipitados que se forman después de la neutralización.
11.- Recupere el eluido sobrenadante y analícelo en paralelo con el sobrenadante del
último lavado.
NOTAS:
1. Los eritrocitos obtenidos en el paso 8 pueden ser usados para estudiar fenotipo si el
TAD es negativo, salvo para el sistema Kell, ya que su expresión antigénica se ve
disminuida después del tratamiento con ácido cítrico.
2. Los eritrocitos obtenidos por la elución con ácido cítrico pueden ser tratados con
proteasas y luego usados en estudios de autoabsorción.
103
ESTUDIO Rh EN CELULAS CON TAD POSITIVO
Cuando las células están muy sensibilizadas con IgG, el estudio de antígenos que se revelan
con AGH o con reactivos de alto contenido proteico es impracticable. Es necesario disociar
el complejo Ag-Ac por medio de elución, sin dañar la integridad de la membrana celular o
alterar la expresión antigénica.
REACTIVOS:
- Sueros anti Rh de bajo contenido proteico
- Suero control Rh
- Suero AB inerte
- GR Ag.+ que sirva como control de daño en la reactividad celular.
- PBS o salino
PROCEDIMIENTO:
1.- Coloque en un tubo 1 volumen de eritrocitos sensibilizados concentrados,
previamente lavados y 3 volúmenes de PBS. Haga lo mismo con los GR control.
2.- Incube los tubos a 45ºC por 10-30 minutos, con agitación frecuente. El tiempo de
incubación es directamente proporcional a la intensidad de la sensibilización.
3.- Centrifugue para separar los GR del salino. Descarte el sobrenadante.
4.- Realice un TAD a las células obtenidas. Si este TAD continua +, repita los pasos 1 a 3.
5.- Estudie los antígenos Rh en las células test y control, con los antisueros apropiados.
NOTA:
1.- Puede hacerse la elución durante 3 minutos a 56ºC, sometiendo los tubos test y
control a este procedimiento.
DETERMINACION DE ESPECIFICIDAD DE AUTO ANTICUERPOS FRIOS
Puede determinarse la especificidad de un autoanticuerpo frío si este se pone en contacto

con una batería de células con antígenos relevantes para este tipo de inmunoglobulinas.
REACTIVOS:
1.- Suero en estudio. La muestra debe ser colocada a 37ºC para inducir la
coagulación. El suero debe ser separado a esa temperatura.
2.- Eritrocitos de prueba:
a) G.R. adultos grupo O I+, de 2 donantes.
b) G.R. del paciente (autólogos).
c) G.R. del mismo grupo sanguíneo del paciente, si no es grupo O. Use eritrocitos del
mismo subgrupo A, si es A o AB.
d) Eritrocitos grupo O I+, tratados con ficina o papaína.
e) Eritrocitos de cordón grupo O I(-)
PROCEDIMIENTO:
1.- Prepare una serie doble de diluciones del suero en salino. EL rango de dilución debe ir
desde 1/2 hasta 1/4096 (12 tubos), y el volumen en cada tubo no debe ser inferior a 1
ml.
2.- Mezcle 3 gotas de cada dilución con 1 gota de una suspensión al 5% en salino de
cada tipo de eritrocitos seleccionados.
3.- Incube a temperatura ambiente durante 15 min., centrifugue y examine
macroscópicamente en busca de aglutinación.
4.- Transfiera los tubos a 4ºC e incube a esta temperatura durante 1 hora. Centrifugue y
examine los eritrocitos en busca de aglutinación. Registre los resultados.
INTERPRETACION:
En la siguiente tabla se presentan las reacciones de los anticuerpos que comúnmente se
encuentran como autoanticuerpos fríos. El anti-I se presenta comúnmente en la enfermedad
de aglutininas frías. Las especificidades anti-i y anti-Pr también pueden presentarse. Algunos
ejemplos de anti-I muestran preferencia por eritrocitos con fuerte expresión del antígeno H
(O Y A2), estos anticuerpos se llaman anti-IH. La reactividad de todos los autoanticuerpos
con especificidad relacionada al sistema Ii, se ve incrementada al usar eritrocitos tratados
con enzimas.
REACCIONES PARA DEMOSTRAR ESPECIFICIDAD DE AUTOANTICUERPOS FRIOS
GR ANTI-I ANTI-i ANTI-H ANTI-IH ANTI-Pr
Oi adulto 0/< > = < =

Oi cordón 0/< > =/< < =
A = = < < =
OI trat/enz > > > > *
Autólogo = = < < =
0 : No reactivo
> : Más fuerte que G.R. OI
< : Más débil que G.R. OI
= : Igual que G.R. OI
* : Igual o más débil que G.R. OI
105
NOTAS:
1.- Cuando existen autoanticuerpos fríos muy potentes, la especificidad puede no ser
aparente cuando se realizan estudios de titulación a 4ºC o ambiente. En tales
circunstancias la incubación del test debe ser hecha a 30 - 37ºC, o prolongar los
tiempos de incubación y examinar posteriormente los tubos sin centrifugar.
2.- Se puede usar este procedimiento para realizar título y especificidad.
DEMOSTRACION DE AUTOAGLUTININAS FRIAS (CRIOAGLUTININAS) DE ALTO TITULO
Esta metodología se usa para demostrar un aumento de crioaglutininas con importancia

clínica. Se hacen diluciones seriadas del suero para determinar la fuerza de la autoaglutinina
fría. la fuerza expresada en título es de utilidad diagnóstica.
REACTIVOS:
- Plasma en estudio obtenido de una muestra con anticoagulante (EDTA), que se ha
dejado por 15 minutos a 37ºC, invirtiéndola periódicamente.
- Glóbulos rojos O, I positivos, lavados y suspendidos al 1% en salino. Los eritrocitos deben
obtenerse de una muestra tomada con ACD o CPD como anticoagulante y con no
más de 7 días de conservación.
- PBS, Ph 7,3
PROCEDIMIENTO:
1.- Diluya el plasma en estudio 1/5 en salino.
2.- Prepare dos series de diluciones , en salino, del suero ya diluido. Use volúmenes de 0,5
ml. para hacer estas diluciones. El rango final de diluciones debe estar entre 1/10 y
1/20.480 (12 tubos).
3.- Agregue a cada tubo 0,5 ml de la suspensión al 1% de eritrocitos OI.
4.- Mezcle e incube durante toda la noche a 4ºC.
5.- Examine macroscópicamente los tubos sin centrifugar, en busca de aglutinación.
Anote la intensidad de cruces y su puntaje.
INTERPRETACION:
El título es el valor recíproco de la máxima dilución en que se observa aglutinación

macroscópica. Con esta técnica, se consideran elevados los títulos sobre 40. Sin embargo, la
AHAI por anticuerpos fríos no se ve normalmente con títulos bajo 640. Los títulos inferiores a
640 pueden obtenerse cuando el autoanticuerpo tiene especificidad anti-i. En esta situación
deben usarse eritrocitos I-negativos (i-cord o i-adult) en vez de los OI para la titulación.
NOTA:
Es importante usar pipetas distintas para preparar cada dilución del suero, ya que si se usa una
pipeta única o la misma punta desechable para todas las diluciones, pueden obtenerse
resultados falsamente elevados por arrastre del suero de un tubo a otro. Pueden aparecer
diferencias como un título aparente de 100.000 usando una pipeta única en lugar del título
real de 4000 cuando se usan pipetas separadas. Diluciones más exactas del suero se logran
al usar mayores volúmenes en las diluciones (ej.: 0.5 ml).
ESTUDIO INMUNOHEMATOLÓGICO DE UNA MUESTRA
CON ANTICUERPOS FRIOS
Muestra de sangre con y sin anticoagulante

obtenida a 37ºC
Eritrocitos Suero o Plasma

Muestra con anticoagulante
Realizar Clasificación Uselos paraRealizar Realizar

ABO y Rh autoabsorción Clasificación ABO a 37ºC
TAD si es necesario Detección Ac.
Estudio Crioaglutinina
Aglutinina fria Aglutinina fria

de bajo rango térmico de amplio rango de Tº
reacción en diferentes
medios
PA positiva PA negativa Estudio de

Título
Rango térmico
Especificidad
Estudie frente Negativo con Estudio del suero

a eritocitos O eritrocitos A,B y AB luego de autoabsorción
de adulto y RN o absorción diferencias
según antecedentes de Tº
Realice Probable
Autoabsorción en frio anti-IH
si no ha sido
transfundido
107
ESTUDIO DE MUESTRAS CON TAD POSITIVO
TAD positivo
Realizar: Estudio Acs irregulares Realizar un TAD

Identificación de anticuerpos diferencial
Paciente NO transfundido Paciente transfundido en los últimos 3 meses
Autoabsorción para Elución Separar eritrocitos Absorción diferencial

identificar Ac libre Calor (56ºx 1' o 45ºx 1hr) autólogos de homólogos
enmascarado ZZAP
Difosfato Cloroquina, eter
Usar eritrocitos obtenidos Fenotipar GR paciente Estudio del eluado Fenotipar GR paciente Estudio del suero
en muestra con Elución Estudio del Eluado
anticoagulante
Detección Acs. Estudio del eluado Detección Acs.

Identificación Acs. Identificación Acs.
Paralelo con suero nativo Paralelo con suero nativo
Prueba de compatibilidad
Detección Acs.
Identificación Acs.
Paralelo con suero nativo
Todos los GR (-) Algunos GR + Todos los GR +
AHAI por drogas? Aloanticuerpo? Titulación Diferencial
1.-Auto o AloAc. contra

Ag. de alta
Revisar historia clínica del paciente y obtener muestra suficiente para pruebas inmunohematológicas incidencia
2.-Absorción incompleta
Anticuerpos pueden ser eliminados al realizar absorción diferencial
TÉCNICAS DE USO MENOS FRECUENTE EN INMUNOHEMATOLOGÍA
CALIBRACION DE CENTRIFUGAS SEROLOGICAS PARA INMUNOHEMATOLOGIA
Cada centrífuga debe ser calibrada al recibirla o después de un ajuste o reparación. La

calibración de una centrífuga evalúa el comportamiento de las células en soluciones de
diferente viscosidad por lo que cada procedimiento debe estandarizarse teniendo esto
presente.
A.- Calibración para lectura:

1.- Utilice un suero que contenga un anticuerpo que produzca una aglutinación
macroscópica de 1+.
2.- Seleccione eritrocitos positivos y negativos para el Ag en cuestión y prepara
suspensiones frescas en las concentraciones utilizadas rutinariamente en el laboratorio,
por ejemplo 2 y 3%:
a.- Para anticuerpos activos en salino: Utilice suero Anti-A diluido en albúmina al 6%, hasta
dar una reacción macroscópica de 1+. (3 ml de albúmina al 22% + 1 ml salino =
albúmina al 6%).
b.- Para anticuerpos reactivos en medios de alto contenido proteico: Utilice 1 parte de Anti-
D diluido con 25 a 30 partes de albúmina al 22 - 30% hasta dar una aglutinación
macroscópica de 1+.
3.- Para cada set de prueba (punto a y b), prepara 5 tubos Khan para reacciones positivas
y 5 para reacciones negativas. Agregue el suero y las células correspondientes justo
antes de centrifugar.
4.- En parejas, un positivo con un negativo, centrifugue los tubos a una misma velocidad
pero durante tiempos diferentes y observe en busca de aglutinación. Anote los
resultados en su registro de acuerdo al siguiente ejemplo:
CRITERIO TIEMPO EN SEGUNDOS

10 15 20 30 45
Sobrenadante claro NO NO SI SI SI
Botón celular claramente NO NO SI SI SI
delimitado
Células se re suspenden SI SI SI SI NO
fácilmente
Aglutinaciones + + 1+ 1+ 1+
Control negativo - - - - +
5.-El tiempo óptimo de centrifugación para lectura, es el tiempo mínimo necesario para
cumplir con todos los criterios establecidos. En el ejemplo corresponde a 20 segundos.
B.- Calibración para lavado de células:

El lavado es una fase fundamental de la técnica de Antiglobulina Humana, por lo que
es fundamental establecer claramente las condiciones de centrifugación para lavado y
lectura de este método. Puede determinarse en un solo procedimiento las condiciones
óptimas de lavado y lectura para el test AGH.
MATERIALES
1.- Suero antiglobulina humana
109
2.- Control positivo: Una suspensión al 2-4% en salino de eritrocitos D+ incubados durante 15
minutos a 37ºC, con un suero anti-D que presente una reacción de 1+ al agregarse
suero AGH.
3.- Control negativo: Una suspensión al 2-4% en salino de los mismos eritrocitos D+,
incubados durante 15 minutos a 37ºC con una solución de albúmina al 6%
4.- PBS.
METODO
1.- Prepare dos baterías de 5 tubos Khan, una para los controles positivos y la otra para los
negativos y márquelos de acuerdo al tiempo elegido
2.- Agregue a cada tubo los eritrocitos que correspondan.
3.- Llene los tubos con suero salino y centrifugue los pares por el tiempo estipulado.
CRITERIO TIEMPO EN MINUTOS

1 1,5 2 2,5 3
Línea de eritrocitos en la NO NO SI SI SI
pared del tubo
Botón celular claramente NO NO NO SI SI
delimitado
4.- Observe cuidadosamente los eritrocitos después de la centrifugación, ellos deben estar
en el fondo del tubo, formando un botón delimitado. No debe haber eritrocitos en la
pared formando una línea que atraviesa a lo largo del tubo. En el cuadro anterior se
seleccionaría el Tiempo de 2,5 Minutos.
5.- Lavar TODOS los tubos tres veces más por el tiempo seleccionado (2,5 minutos según el
ejemplo)
6.- Elimine la solución salina sobrenadante por inversión de todos los tubos, evitando perder
eritrocitos y el botón debe quedar seco.
7.- Agregue 1 o 2 gotas de suero AGH a cada tubo y centrifugue por diferentes tiempos (de
acuerdo al cuadro de lectura).
8.- Seleccione el tiempo óptimo aplicando los criterios descritos en los puntos 4 y 5 del
procedimiento de calibración de lectura.
CRITERIO TIEMPO EN SEGUNDOS

10 15 20 30 45
Sobrenadante claro NO NO SI SI SI
Botón celular claramente NO NO SI SI SI
delimitado
Células se resuspenden SI SI SI SI NO
fácilmente
Aglutinaciones + + 1+ 1+ 1+
Control negativo - - - - +
DETERMINACION DE ANTIGENOS SOLUBLES ABH Y LEWIS EN SALIVA
En Chile aproximadamente el 83% de la población presenta antígenos solubles del sistema

ABO en la saliva, y por lo tanto poseen el gen Se, quien es el responsable de su presencia en
este y otros fluidos corporales.
RECOLECCION DE LA SALIVA
1.- Obtenga entre 5 a 10 ml de saliva en un tubo ancho, de preferencia enjuagándose la
boca previamente con abundante agua. La mayoría de los individuos puede acumular
esta cantidad en varios minutos. Para fomentar la salivación, el paciente puede mascar
cera especial, lámina de parafina o cinta de goma, pero no chicle ni cualquier material
que contenga azúcar o proteínas.
2.- Centrifugue la saliva a alta velocidad durante 10 minutos. Transfiera el sobrenadante a un
tubo limpio.
3.- Coloque el tubo con la saliva en un baño María hirviendo por 10 min para inactivar las
enzimas salivares.
4.- Obtenga en otro tubo el sobrenadante claro y transparente, descartando la parte sólida
y opaca. Diluya la saliva con un volumen igual de salino.
5.- Refrigere si el test no se realizará en las próximas horas. Si este no se realiza en el día de
colección, congele la muestra la que permanecerá estable por varios años.
REACTIVOS:
-(seleccione el reactivo de acuerdo al antígeno que desee detectar)
-Anti-A y anti-B policlonal (humano).
-Lectina anti-H de Ulex europeus.
-Anti-Lea policlonal (conejo/cabra).
-GR testigos A1 y B, de iguales características a los utilizados en la clasificación ABO.
-GR grupo O, Lea +, con las características de los usados en detección de anticuerpos
irregulares.
PROCEDIMIENTO:
A.- Selección de la dilución del antisuero:
1.- Prepare diluciones seriadas del anticuerpo seleccionado. Puede usar lectina anti-H para
ABO y anti-Lea para el sistema Lewis.
2.- Coloque en tubos previamente rotulados con la dilución correspondiente una gota de
dilución y una gota de la suspensión al 2-5 % en salino de los eritrocitos apropiados.
3.- Centrifugue y observe en busca de aglutinación macroscópica.
4.- Seleccione para el test la menor dilución que presente una aglutinación de 2+.
B.- Estudio de la condición de secretor:

1.- Marque 4 tubos como: control+, control-, test y control de dilución.
2.- Agregue a cada uno de los tubos ya marcados, una gota del antisuero apropiado y
previamente seleccionado de acuerdo al procedimiento descrito en A.
3.- Agregue al tubo marcado control+ una gota de saliva control de un individuo no
secretor, al tubo control- una gota de saliva de un individuo secretor, al tubo test una
gota de la saliva en estudio y al tubo control dilución una gota de suero salino.
4.- Mezcle los tubos e incúbelos por 10 minutos a temperatura ambiente.
5.- Agregue una gota de suspensión al 3% en salino de eritrocitos que posean el antígeno
para el antisuero que se está utilizando.
6.- Mezcle el contenido del tubo e incube 30 a 60 minutos a temperatura ambiente.
111
7.- Centrifugue el tiempo estandarizado para lectura en salino en su centrífuga, y observe los
tubos en busca de aglutinación macroscópica. Registre los resultados.
INTERPRETACION DEL TEST DE SALIVA
Compare sus resultados con la siguiente tabla:
Saliva Test Saliva Se Saliva no SE Control Interpretación

Dilución
2+ - 2+ 2+ No Secretor
- - 2+ 2+ Secretor
1.- La aglutinación de los GR testigos en el tubo test indica ausencia del correspondiente Ag
en la saliva.
2.- No aglutinación de los GR testigos en el tubo test indica presencia del Ag
correspondiente en la saliva.
3.- Ausencia de aglutinación en el tubo control dilución indica que el reactivo (Ac)
empleado está demasiado diluido. Debe repetir el paso A de este procedimiento.
NOTA: Este test puede ser adaptado para hacer mediciones semicuantitativas de actividad
de grupo sanguíneo al estudiar diluciones seriadas en salino de la saliva. Mientras más
alta sea la dilución necesaria para eliminar la actividad neutralizante, mayor cantidad
de antígeno ABH soluble existe.
DETECCION DE ANTICUERPOS IRREGULARES EN PAPAINA
Técnica enzimática en dos etapas
REACTIVOS:
- Papaína al 1%
- PBS
- Eritrocitos de prueba seleccionados igual que en el método anterior (glóbulos rojos
comerciales para la detección de Acs. Irregulares (Pool I y II)).
- Suero AB inerte
- Suero control de reactividad débil.
A. Preparación de los eritrocitos papainizados.

1.- Descongelar 2 alícuotas de papaína al 1%
2.- Agregar a cada una 0.9 ml. de PBS y marcarlos con las siglas I y II respectivamente.
3.- Adicionar a cada solución de Papaína al 0.1%, 250 ul de eritrocitos reactivos
seleccionados como I y II, previamente lavados y concentrados, en el tubo
correspondiente.
4.- Incubar a 37ºC según los minutos establecidos al estandarizar la técnica con cada lote
de papaína. Ej. : 16 min.
5.- Centrifugar, eliminar el sobrenadante y lavar las células por 2 veces con PBS.
6.- Resuspenderlas al 2% en PBS. Mantener en refrigeración a 4ºC. En estas condiciones
duran 48 hrs.
7.- Efectuar los controles necesarios para el uso de papaína.
METODO
1.- Marcar dos series de 4 tubos cada una con las siglas I y II, + y -.
2.- Depositar en los tubos I y II, 2 gotas del suero en estudio, 2 gotas de suero reactivo débil
en el tubo + y 2 gotas de suero AB inerte en el tubo marcado -. Agregar a todos los
tubos de la primera serie 1 gota de los eritrocitos papainizados I y a la segunda serie 1
gota de los eritrocitos papainizados II.
3.- Incubar 1 hr. a 37ºC no centrifugar y leer en la forma estandarizada.
INTERPRETACIÓN
La presencia de anticuerpos se visualiza en forma de aglutinación o hemólisis en los tubos I

y/o II. Para un resultado válido, el tubo + debe resultar positivo y el - debe ser negativo.
CONTROL DE CALIDAD:
- Uso de técnicas enzimáticas previamente estandarizadas.
- Uso de controles positivos y negativos diarios en cada set de tests.
- Solo lecturas macroscópicas.
- Controlar las condiciones de almacenamiento de la solución stock de enzima (- 30ºC) y de
las células papainizadas (duración máxima 24 horas a 4ºC).
113
TECNICA DE IDENTIFICACION DE ANTICUERPOS EN BROMELINA
MUESTRA:
Suero en estudio
REACTIVOS:
• 1.- Solución stock bromelina al 0.5%
- Pesar 0.5 gr de bromelina en polvo (con al menos 2 cristalizaciones de pureza 2x).
- Disolver homogenizando en 90 ml de suero fisiológico (no agitar bruscamente ni agitar con
bagueta, demora aprox. 1 o 2 horas).
-Agregar 10 ml de buffer Soerensen 15 molar pH 5.5.
-Centrifugar o dejar decantar.
- Almacenar el sobrenadante en alícuotas y congelar a -30ºC, es estable por 2 - 3 meses.
• 2.- Buffer Soerensen 15 molar pH 5.5:

Solución A: KH2PO4 0.91 gr
H2O csp 100ml
Solución B: Na2HPO4 + 2H2O 1.2 gr

H2O csp 100 ml
Mezclar 97 ml de solución A con 3 ml de solución B.
Ajustar pH con las mismas soluciones.
• 3.- Bromelina al 0.1% :

- Diluir 1/4 bromelina al 0.5% recién descongelada con buffer Soerensen diluido 1/10 con suero
fisiológico, si no se dispone de buffer podría diluirse en solución fisiológica.
- Panel de células para identificación.
- Suero AB inerte.
- Células control AGH.
METODO:
1.- Marcar 11 tubos y agregar a cada uno el glóbulo rojo correspondiente del panel de
identificación, más 1 tubo para prueba autóloga.
2.- Agregar a cada tubo 1 o 2 ml de suero fisiológico (no PBS), centrifugar y eliminar todo el
sobrenadante, secando muy bien el borde del tubo.
3.- Agregar a cada tubo 1 gota de bromelina al 0.1% recién preparada y agitar.
4.- Incubar a temperatura ambiente por 5 minutos.
5.- Inmediatamente agregar a cada tubo 2 gotas del suero en estudio, agitar.
6.- Incubar a 37ºC por 20 minutos.
7.- Centrifugar el tiempo estandarizado para lectura.
8.- Leer contra controles positivos y negativos.
9.- Terminar el test en AGH si es necesario.
ESTANDARIZACION DEL MEDIO DE BAJA FUERZA IONICA (LISS)
Previo al uso de un medio LISS, más aún si es preparado en el propio laboratorio, es

necesario realizar una acuciosa estandarización para determinar el tiempo óptimo de
incubación necesario para revelar de buena forma la presencia de un anticuerpo irregular.
MUESTRA:
- LISS a estandarizar
MATERIALES:
- Tubos Khan
- Centrífuga y lector para inmunohematología.
- Pipetas pasteur y micropipetas.
- Baño termo-regulable.
- GR frescos R1r, Fy(a+b+), Kk. (heterocigotos para los antígeno involucrados).
- Anticuerpos controles anti-D, anti-Fya, anti-K, que presenten una reacción débil 1+ a
2+ en AGH.
- Suero AB inerte.
- Células control AGH
METODO:
A.- Selección del tiempo de óptimo incubación:
1.- Preparar 4 baterías de tubos marcados con diferentes tiempos de incubación: 5,

10, 15, 20 y 25 minutos. Ellas son para el anti-D, anti-Fya, anti-K y suero AB inerte.
2.- Preparar una suspensión al 2% en el LISS que se está probando de los eritrocitos de
prueba.
3.- Colocar en cada tubo una proporción idéntica (1:1) de suero y de eritrocitos
apropiados.
4.- Incubar a 37ºC por los tiempos previamente establecidos y marcados en cada
tubo. Conviene iniciar la incubación por el tiempo mayor, para procesar
posteriormente en forma simultánea todos los tubos.
5.- Hacer un test AGH a todos los tubos.
6.- Validar los resultados negativos con células control AGH.
7.- Registrar los resultados en intensidad de cruces.
INTERPRETACIÓN:
El tiempo de incubación a elegir es el mínimo que muestre una aglutinación igual o superior
a la lograda al incubar el mismo suero durante 1 hora en medio NISS (fuerza iónica normal), y
en AGH.
Ejemplo:
MEDIO Y AGH INDIRECTO
TIEMPO DE
REACCION
ANTI-D ANTI-Fya ANTI-K AB INERTE
LISS - 5' 1+ - - -
LISS - 10' 1+ - +/- -
LISS - 15' 2+ +/- 1+ -
LISS - 20' 2+ 1+ 1+ -
LISS - 25' 2+ 1+ +/- -
NISS -1 Hr 2+ 1+ 1+ -
115
En este caso el tiempo de incubación a elegir es 20 minutos.
B.- Otros parámetros a medir:

1.- pH entre 6.6 y 6.8
2.- Conductividad entre 3.4 y 3.8 mOhm/cm a 23ºC
3.- Osmolaridad entre 280 y 305 mosmol/Kg.
NOTAS:
1.- Los parámetros aquí indicados deben aplicarse a cada lote nuevo de reactivo o
cada vez que se prepara en el laboratorio.
2.- El control diario de su uso incluye trabajar en paralelo con la muestra problema,
sueros que posean anticuerpos de reactividad débil y suero AB inerte.
3.- Revisar las recomendaciones para trabajar con medios LISS, en la técnica
correspondiente.
PREPARACION Y ESTANDARIZACION DE SOLUCIONES ENZIMÁTICAS PARA USO EN

INMUNOHEMATOLOGÍA
Las enzimas proteolíticas modifican los antígenos de los eritrocitos de tal

forma que incrementan la reactividad de algunos sistemas antígeno-
anticuerpo (Rh, Kidd) y, deprimen la expresión antigénica de otros (M, N, Fya
y Fyb). El tratamiento enzimático también modifica las propiedades físicas de
la suspensión celular y puede causar agregación espontanea de las células.
Las preparaciones enzimáticas usadas en Banco de Sangre pueden variar de
lote a lote, de tal forma que cada vez que se prepara una solución, debe
estandarizarse su actividad y tiempo de incubación para garantizar una
óptima función del método.
MATERIALES Y REACTIVOS:
1. -Papaína tipo II Sigma Chem.
2. -Alfa Cisteína Hydrocloride (C3 H7 NO2 S HCl)
3. -Buffer de Soerensen: (pH: 5.4) o PBS pH 5.5.
El Buffer Soerensen se prepara:
a) Fosfato potásico dihidrogenado (KH2 PO4) 8.83 gr
b) Fosfato disódico hidrogenado
x 12 H2O 0.72 gr
x 2 H2O 0.36 gr
anhidro 0.29 gr
c) H2O destilada c.s.p. 1000 cc
4. - NaOH 1N
PREPARACION DE LA SOLUCION STOCK: (Papaína al 1%)

1.- Moler en un mortero 0.5 gr de papaína, con unos pocos ml de buffer de Soerensen
pH 5.4, o PBS pH 5.5.
2.- Lave la suspensión de papaína en un matraz de 250 ml, con 25 ml de buffer de
Soerensen pH 5.4, o con 190 ml de PBS pH 5.5.
3.- Agregue 0.219 gr de L - Cisteína, llevar a 50 ml con más buffer de Soerensen. Si ha
usado PBS, agregue 0.6 g L-cysteine hydrocloride disuelta en 10 ml de agua
destilada y neutralizada con NaOH 1N.
4.- Incube a 37ºC durante 1 hora. El tiempo de incubación debe considerarse a partir
del momento en que la solución alcance los 37ºC.
5.- Centrifugue la solución, conserve el sobrenadante y descarte la papaína no
disuelta.
6.- Guarde la solución de papaína activada a = o< de -20ºC en alícuotas de 0.1 ml.
Esta solución no es estable a 4ºC. Una vez que la solución es descongelada debe
eliminarse el resto al terminar el día, conservándola en vidrio. La solución puede
guardarse hasta por 6 meses.
ESTANDARIZACIÓN DEL PROCEDIMIENTO:

Para un test enzimático en dos etapas, el tiempo y condiciones de incubación y la
dilución óptima, debe determinarse para cada lote nuevo de solución stock.
MATERIALES:
1.-Solución stock de papaína (al 1%).
2.-Varios sueros sin anticuerpos irregulares
117
3.-Sueros anti-D débiles, que aglutinen solamente eritrocitos tratados con enzima.
4.-Sueros anti Fya de reactividad moderada o fuerte.
5.-Eritrocitos D y Fya positivos.
6.-Suero AB inerte.
7.-PBS pH 7.3
METODO:
1.- Diluya 1 volumen (0.1 ml) de solución stock de papaína (1%), con 9 volúmenes (0.9
ml) de PBS pH 7.3.
2.- Marque varios tubos con diferentes tiempos de tratamiento enzimático: 5, 10 y 15
minutos.
3.- Agregue a cada tubo 1 ml de papaína al 0.1% y 0.25 ml de eritrocitos adecuados,
concentrados y previamente lavados.
4.- Mezcle e incube a 37ºC el tiempo indicado en el tubo. La incubación es fácilmente
controlada si se comienza con el de 15 minutos, luego el de 10 y 5 minutos, de tal
forma que todos los tubos cumplen juntos su tiempo.
5.- Inmediatamente centrifugue, elimine el sobrenadante y lave los eritrocitos por 3
veces con cantidad adecuada de PBS.
6.- Resuspenda los eritrocitos al 3% en PBS.
7.- Marque 4 tubos para cada suero a investigar: sin tratar, 5, 10 y 15 minutos.
8.- Agregue a cada tubo 2 gotas del suero correspondiente. (anti-D, etc.)
9.- Agregue a todos los tubos 1 gota de la suspensión de eritrocitos que corresponda.
10.- Mezcle e incube por 15 minutos a 37ºC.
11.- Centrifugue y examine en busca de aglutinación de la forma previamente
estandarizada.
12.- Lave las células por 3 o 4 veces con PBS y realice un AGH.
INTERPRETACION:
Posibles resultados de este test:
GR+ENZIMA SUERO AB INERTE ANTI-D ANTI-Fya

Sin tratar 37ºC 0 0 0
AGH 0 1+ 3+
5 minutos 37ºC 0 1+ 0
AGH 0 2+ 1+
AGH 0 2+ 0
AGH w+ 2+ w+
En este caso el tiempo óptimo de incubación es de 10 minutos. La incubación por 5 minutos

no elimina totalmente la actividad Fya, ni incrementa al máximo la expresión del anti-D. La
incubación por 15 minutos causa reacciones falsas positivas en AGH con suero AB inerte. Si la
incubación de 5 minutos muestra un sobre tratamiento de los eritrocitos, es mejor usar una
dilución de la enzima que acortar el tiempo de incubación, ya que es difícil su monitoreo.
NOTA:
1.- La estandarización también puede realizarse efectuando diluciones seriadas de los
anticuerpos seleccionados (D, E, c, Fya y 2 muestras sin anticuerpos), los que se
someten a eritrocitos papainizados por diferentes tiempos de incubación,
seleccionando el tiempo de tratamiento en que funciona mejor la enzima.
EVALUACION DEL TRATAMIENTO DE LOS ERITROCITOS
Después de haber establecido los tiempos óptimos de incubación para un nuevo lote de
enzima, debe evaluarse los eritrocitos antes de ser usados para demostrar que ellos has sido
tratados adecuados y no excesivamente. Un tratamiento adecuado produce eritrocitos que
son aglutinados por un anticuerpo que se manifiesta solo en AGH con células no tratadas, y
no son aglutinadas o agregadas en presencia de suero inerte.
PROCEDIMIENTO:
1.- Seleccione un Ac. que aglutine solo eritrocitos tratados enzimáticamente, y que de
reacción positiva con células no tratadas solo en la fase AGH.
2.- Coloque 2 gotas del suero previamente seleccionado a un tubo marcado "positivo".
3.- Coloque 2 gotas de suero AB inerte en un tubo marcado "negativo".
4.- Agregue a cada tubo 1 gota de la suspensión al 3% de los eritrocitos previamente
tratados.
5.- Mezcle e incube durante 15 min. a 37ºC
6.- Centrifugue y observe en busca de aglutinación , según su técnica estandarizada.
INTERPRETACION:
Debe aparecer aglutinación solo en el tubo marcado "positivo". Si aparece aglutinación en
el "negativo", los eritrocitos fueron tratados en forma excesiva.
119
USO DE DTT PARA DIFERENCIAR ANTICUERPOS IgM DE IgG
Los anticuerpos de tipo IgM presentan en su estructura 5 subunidades unidas por enlaces de
azufre, llamados enlaces intersubunidades. Cada subunidad consta de 2 cadenas livianas y
2 cadenas pesadas que están unidas por puentes disulfuros, llamados intracatenarios.
Los reactivos tiol pueden romper enlaces disulfuros, los enlaces intersubunidades son
afectados más rápidamente que los intracadenas. Los enlaces intercatenarios de los
anticuerpos IgG e IgA, no son escindidos fácilmente por los reactivos tiol.
El tratamiento de los anticuerpos IgM por reactivos tiol anula las propiedades de
aglutinación y fijación de complemento, siendo útil para determinar la clase de Ig a la que
pertenece un anticuerpo presente en el suero. También pueden usarse para anular la
actividad de los anticuerpos IgM y permitir la detección de anticuerpos IgG coexistentes.
MUESTRA:
2 ml de suero a tratar
REACTIVOS:
- PBS a pH 8.0
- Ditiotreitol (DTT) 0.01 M, preparado disolviendo 0.154 g de DTT en 100 ml de PBS pH 8.0
Conservar a 4ºC.
PROCEDIMIENTO:
1.- Colocar 1 ml de suero a tratar en 2 tubos de ensayo.
2.- Agregar en uno de los tubos rotulados como control 1 ml de PBS pH 8.0.
3.- Agregar al otro tubo rotulado como test 1 ml de DTT 0.01 M.
4.- Mezclar e incubar a 37ºC durante 30 minutos a 2 horas. Las muestras que se
procesen deben investigarse después de 30 minutos y luego a los 60 minutos, para
detectar si se ha producido gelificación. Las muestras gelificadas no pueden usarse
para estudio de anticuerpos ya que el tratamiento ha denaturado todas las
proteínas séricas.
5.- Estudie la actividad de anticuerpo mediante titulación, en paralelo utilizando la
muestra tratada y la sin tratar.
NOTAS:
1.- Puede usarse 2-mercaptoetanol en vez de DTT para este propósito.
2.- Los reactivos tiol usados en baja concentración pueden deprimir ciertos antígenos
del sistema Kell.
3.- Puede observarse una gelificación del suero o plasma durante el tratamiento con
DTT. Esto puede ocurrir si se ha preparado incorrectamente el DTT 0.01M, y debe tener
una concentración superior a 0.01M. También puede aparecer por incubaciones
prolongadas en presencia de DTT.
4.- Estudie una alícuota de suero tratado con DTT a los 30 minutos de incubación. Si el
test muestra que la actividad de IgM ha desaparecido, no es necesario seguir la
incubación.
INTERPRETACION:
Se hace de acuerdo al siguiente esquema.
MUESTRA DILUCION
1/2 ¼ 1/8 1/16 1/32 INTERPRETACION
SUERO+DTT 3+ 2+ 2+ 1+ 0 IgG
(AGH)
SUERO+PBS 3+ 2+ 2+ 1+ 0 falta de incubación
SUERO+DTT 0 0 0 0 0 IgM
SUERO+PBS 3+ 2+ 2+ 1+ 0
SUERO+DTT 2+ 1+ 0 0 0 IgG+IgM
(AGH)
SUERO+PBS 3+ 2+ 2+ 1+ 0
121
TRATAMIENTO DE ERITROCITOS CON DTT
El DTT es uno de los agentes reductores más eficientes que se conocen. Puede reducir en
forma irreversible los enlaces disulfuro en grupos sulfhidrilos libres, produciéndose la ruptura
de la estructura terciaria de la proteína. Sin la estructura terciaria, las proteínas que tienen
actividad antigénica, no pueden unirse a su anticuerpo específico, y se elimina por
consiguiente la reactividad serológica.
Los eritrocitos tratados con DTT no reaccionan con anticuerpos del sistema Kell, ni con anti-
LW, Yta, Ytb, Doa, Dob y muchos anticuerpos con características de baja avidez y alto título
(BATA). Esta técnica puede ser útil en la identificación de alguno de estos anticuerpos, o en
determinar si existen conjuntamente otros anticuerpos.
MUESTRA:
Eritrocitos a tratar
REACTIVOS:
- PBS
- Ditiotreitol (DTT) 0.2 M, pH 8.0
PROCEDIMIENTO:
1.- Lave 1 volumen de células test con PBS. Elimine todo el sobrenadante. También trate
células k+ como control, también puede usarse otros Ag. Kell como control.
2.- Agregue 4 volúmenes de DTT 0.2M, pH 8.0.
3.- Incube a 37ºC por 30-45 minutos.
4.- Lave las células por 4 veces con PBS. Puede aparecer una leve hemólisis, si ella es
excesiva utilice eritrocitos frescos y baje la concentración del DTT.
5.- Resuspenda los eritrocitos a una concentración del 3% en PBS.
6.- Estudie los eritrocitos tratados con el suero apropiado, y los eritrocitos control con el
suero anti Kell correspondiente.
INTERPRETACIÓN:
1.- Las células control deben dar un resultado negativo, si esto no ocurre, no han sido
tratadas adecuadamente
2.- Este tratamiento es óptimo para denaturar todos los antígenos de los sistemas Kell,
Cartwright, LW y Dombrock, y muchos antígenos BATA.
AUTOADSORCION DE ANTICUERPOS CALIENTES (ZZAP)
Los autoanticuerpos calientes pueden enmascarar la presencia de aloanticuerpos

concomitantes de importancia clínica en el suero. Al absorber el suero con GR autólogos,
pueden retirarse del suero los autoanticuerpos, permitiendo la detección de aloanticuerpos
enmascarados. Sin embargo los GR autólogos circulantes generalmente están recubiertos
de autoanticuerpos.
La autoabsorción de anticuerpos calientes se hace más efectiva si se retiran primero los

autoanticuerpos, y luego se tratan las células con enzimas. Al dejar los sitios antigénicos libres
será más fácil unir los autoanticuerpos libres del suero. El tratamiento enzimático favorece el
proceso de adsorción.
El mejor procedimiento es usar reactivo ZZAP, que es una mezcla de enzima proteolítica y un
reactivo tiol. El tratamiento de los Ac. IgG con tiol, aumenta su susceptibilidad a la digestión
con proteasas. Cuando se tratan los eritrocitos recubiertos con IgG con el reactivo ZZAP, las
moléculas de Inmunoglobulinas pierden su integridad y se disocian de la superficie de la
célula. Simultáneamente los GR son tratados con enzimas para aumentar su capacidad de
absorber anticuerpos.
La autoabsorción no debe realizarse si el paciente ha sido recientemente transfundido, ya

que los eritrocitos transfundidos circulantes pueden absorber los aloanticuerpos libres
MUESTRA:
Muestra con y sin anticoagulante (EDTA) con autoanticuerpo.
REACTIVOS:
- Papaína al 1% activada con cisteína o Ficina al 1%. Revise el método de preparación
de las enzimas.
- PBS pH 6.5 y pH 8.0.
- DTT 0.2M preparado disolviendo 1 g de DTT en 32.4 ml de PBS pH 8.0. Guarde a -20ºC
en alícuotas de 3 ml
- GR R1R1, R2R2 y rr
PROCEDIMIENTO:
1.- Prepare el reactivo ZZAP mezclando 0.5 ml de papaína al 1% activada, con 2.5 ml de
DTT y 2.0 ml de PBS pH 6.5. Alternativamente puede usar 1 ml de ficina al 1%. 2.5 ml de
DTT y 1.5 ml de PBS pH 6.5. Controle pH y ajuste a 6.5 si es necesario.
2.- Lave 1 ml de los eritrocitos de prueba por 1 vez con abundante salino.
3.- A los eritrocitos lavados y concentrados, agregue 2 ml de solución de ZZAP. Invierta el
tubo varias veces para mezclar.
4.- Incube por 20-30 minutos a 37ºC, mezclando el tubo periódicamente.
5.- Saque los tubos y proceda a lavar las células por 3 veces con gran cantidad de PBS.
Elimine lo más posible el sobrenadante del último lavado, para prevenir diluciones del
suero. Separe los eritrocitos obtenidos en 3 alícuotas iguales.
6.- A 1 volumen de células tratadas con ZZAP agregue un volumen igual de suero del
paciente.
7.- Mezcle e incube a 37ºC por 20-45 minutos, mezcle ocasionalmente.
8.- Centrifugue a alta velocidad (1.000 g) durante 5 minutos y obtenga el suero
sobrenadante.
123
9.- Los puntos 6-8 deben repetirse usando el suero previamente absorbido, y frente a
diferentes alícuotas de eritrocitos tratados con ZZAP.
INTERPRETACION:
Generalmente con 2 absorciones se retiran del suero una cantidad suficiente de

autoanticuerpos permitiendo que la reactividad de aloanticuerpos pueda manifestarse. Si
todo el panel es positivo, deben hacerse un número mayor de autoabsorciones.
NOTAS:
1.- No es necesario lavar las células previo a su tratamiento con ZZAP.
2.- Ocasionalmente el tratamiento de eritrocitos con ZZAP puede ocasionar gelificación,
esto puede deberse a un gran contenido de glóbulos blancos.
3.- El tratamiento de los eritrocitos con ZZAP, hace que ellos pierdan los antígenos Kell,
MNSs, Duffy, Gerbich; muchos de los antígenos LW, Cartwright y Dombrock, y otro Ag
que se destruyen por acción enzimática.
ADSORCION DIFERENCIAL EN CALIENTE USANDO ZZAP
El tratamiento de los eritrocitos con ZZAP, hace que ellos pierdan los antígenos Kell, MNSs,
Duffy, Gerbich; muchos de los antígenos LW, Cartwright y Dombrock, y otro Ag que se
destruyen por acción enzimática. La adsorción del suero con GR seleccionados con
fenotipo conocido, removerán los autoanticuerpos y dejaran libres anticuerpos para muchos
sistemas sanguíneos. La especificidad de los Ac. que quedan en el suero luego de la
adsorción, puede ser confirmada con un panel de identificación de anticuerpos.
Este método se usa para retirar autoAcs. del suero de un individuo que presenta
autoanticuerpos calientes, para determinar si él presenta además aloanticuerpos de
importancia clínica. Este procedimiento se usa si el paciente ha sido recientemente
transfundido o no se consiguen suficientes GR autólogos y se desconoce el fenotipo del
paciente.
MUESTRA:
Muestra con y sin anticoagulante (EDTA)
REACTIVOS:
- Papaína al 1% activada con cisteína o Ficina al 1%. Revise el método de
preparación de las enzimas.
- PBS pH 6.5 y pH 8.0.
- DTT 0.2M preparado disolviendo 1 g de DTT en 32.4 ml de PBS pH 8.0. Guarde a -
20ºC en alícuotas de 3 ml
- GR R1R1, R2R2 y rr
PROCEDIMIENTO:
1.- Prepare el reactivo ZZAP mezclando 0.5 ml de papaína al 1% activada, con 2.5 ml de
DTT y 2.0 ml de PBS pH 6.5. Alternativamente puede usar 1 ml de ficina al 1%. 2.5 ml de
DTT y 1.5 ml de PBS pH 6.5. Controle pH y ajuste a 6.5 si es necesario.
2.- Lave 1 ml de los eritrocitos de prueba por 1 vez con abundante salino.
3.- A cada alícuota de eritrocitos lavados y concentrados, agregue 2 ml de solución de
ZZAP. Invierta el tubo varias veces para mezclar.
4.- Incube por 20-30 minutos a 37ºC, mezclando el tubo periódicamente.

5.- Saque los tubos y proceda a lavar las células por 3 veces con gran cantidad de PBS.
Elimine lo más posible el sobrenadante del último lavado, para prevenir diluciones del
suero.
6.- A 1 volumen de células tratadas con ZZAP agregue un volumen igual de suero del
paciente.
7.- Mezcle e incube a 37ºC por 30-60 minutos, mezcle ocasionalmente.
8.- Centrifugue a alta velocidad (1.000 g) durante 5 minutos y obtenga el suero
sobrenadante.
9.- estudie el suero absorbido frente a GR de igual fenotipo que los usados para la
absorción, si la reacción es positiva, repita los pasos 6 a 9 con una nueva alícuota de
GR tratados con ZZAP, hasta que el resultado sea negativo. El suero absorbido, puede
ser usado luego para identificación de el o los anticuerpos remanentes o para
crossmatching.
NOTAS:
1.- Si el autoanticuerpo es muy potente deben prepararse 3 o más alícuotas de células
tratadas.
2.- Para facilitar la remoción de anticuerpos puede aumentarse la cantidad de GR
tratados en relación al suero.
3.- Los GR. deben estar lo más concentrados posible para evitar la dilución de
anticuerpos que queden en el suero.
4.- Agitar la mezcla durante el proceso de absorción para aumentar la superficie de
contacto.
125
ESTUDIO DE CALIDAD DE UN SUERO ANTIGLOBULINA HUMANA
El control de calidad de un reactivo AGH poliespecífico consta de 4 partes: Especificidad,

Actividad, Sensibilidad y Potencia.
I.-ESPECIFICIDAD:
Debe controlarse cuidadosamente los niveles de anti-complemento que contienen los

sueros AGH, es especial la cantidad de anti-C4d y anti-C3d, ya que pequeñas cantidades
de ellos se acumulan en GR normales guardados a 4ºC lo que podría llevar a resultados
falsos positivos en pruebas de compatibilidad. Debe controlarse también la presencia de Ac.
heteroespecíficos.
a. Determinación de falsos positivos debido a complemento:
METODO:
1.- Preparar las siguientes suspensiones celulares: Seleccione 5 bolsas de sangre
almacenadas por 20-35 días a 4ºC extraídas con CPD o CPD-A, de los distintos grupos
sanguíneos (A,B,AB y O)
2.- Lave una cantidad de eritrocitos obtenidos de la tripa de la bolsa por 4 veces con
PBS.
3.- Prepare suspensiones al 3% en PBS y al 1.5% en LISS de cada tipo de eritrocito
seleccionado.
4.- Prepare un pool de sueros frescos compatibles con los eritrocitos seleccionados.
5.- Para cada uno de los sueros AGH a evaluar, prepare la siguiente serie de tubos, de
acuerdo con este ejemplo:
a.- Eritrocitos seleccionados:

Grupo A+ de 28 días de almacenamiento
Grupo B+ de 20 días de almacenamiento
Grupo O+ de 35 días de almacenamiento
Grupo O- de 20 días de almacenamiento
Grupo A- de 23 días de almacenamiento
b.- Sueros seleccionados:

Grupo AB fresco.
SUERO AB AB AB AB AB
GR A+ B+ O+ O- A-
SERIE I 1 2 3 4 5 SUSPENSION EN
SALINO
SERIE II 1 2 3 4 5 SUSPENSION EN
LISS
6.- Colocar 2 gotas de suero compatible (en el ejemplo AB)a cada uno de los tubos de
ambas series.
7.- Agregar 1 gota de los GR correspondientes suspendidos en salino para la serie I y en
LISS para la serie II.
8.- Centrifugar de la forma estandarizada para lectura, y observar los tubos en busca de
aglutinación y/o hemólisis.
9.- Incube todos los tubos de la serie II durante 15-20 minutos a 37ºC (el tiempo
previamente estandarizado para LISS), y la serie I por 45 minutos a 37ºC.
10.- Lave todas las células y realice un test AGH de acuerdo a las indicaciones del
fabricante.
11.- Examine en busca de aglutinación macroscópica. Registre los resultados.
12.- Incube todos los tubos por 5 minutos a temperatura ambiente.
13.- Centrifugue los tubos y lea en busca de aglutinación o lisis.
14.- Controles a usar: Todos los TAD de las células empleadas deben ser negativos previo
a la incubación con el suero fresco. Debe hacerse en paralelo con un suero AGH de
referencia.
INTERPRETACION:
Todas las reacciones deben ser macroscópicamente negativas.
Eventualmente pueden aparecer pequeños aglutinados al
microscopio; si bien ellos no son deseables, son aceptados.
II.-EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD ANTICOMPLEMENTO
Se evalúa la actividad anti-C3d, C3b y C4.
REACTIVOS:
1.- Solución stock de buffer fosfato para preparar las soluciones A,B,C y D:
Solución I: Fosfato dipotásico 1M
K2HPO4 -3 H2O 228 g
H2O destilada csp 1000 ml
Solución II: Fosfato potásico diácido 1M
KH2PO4 136.1 g
2.- Buffer fosfato pH 6.1:

Solución A: Solución II 5 ml
Solución B: Solución I 0.5 ml
La solución A se coloca en un recipiente de 1000 ml, sobre un

agitador magnético donde se pueda medir pH. Se agrega lentamente
solución B hasta lograr un pH de 6.1.
3.- Solución sucrosa-fosfato:

Sucrosa 92.4 g
Buffer fosfato pH 6.1 1000 ml
Guardar congelado a -20ºC en alicuotas de 10 ml.
4.- HCl 0.05 N:

Diluir 2.5 ml de HCl 1N hasta completar 50 ml con H2O destilada.
5.- Tripsina al 1%: (Sigma Nº Cat. T8253)

Tripsina cristalizada 0.1 g
HCl 0.05 N csp 10 ml
127
Disolver mezclando suavemente, guardar congelada a -20ºC en

alicuotas de 0.1 ml.
6.- Buffer fosfato pH 7.7 0.1 M:

Solución C: Solución I 5 ml
Solución D: Solución II 1 ml
A la solución C se le agrega la solución D hasta obtener un pH de 7.7.

Guardar congelado a -20ºC en alicuotas de 1 ml.
7.- Tripsina al 0.1%:

A 0.1 ml de tripsina al 1% agregar 0.9 ml de buffer fosfato 0.1 M pH 7.7 .
Mezclar cuidadosamente. Debe prepararse solo previo a su uso.
8.- Na3 EDTA 0.2 M:

Solución E: Na2 EDTAx2H2O 7.45 g
Solución F: Na4 EDTAx4H2O 9.05 g
Agregar un volumen de solución E a un volumen de solución F.

Guardar a 4ºC.
9.- Sucrosa al 10%:

Sucrosa 25 g
Guardar a 4ºC o congelar a -20ºC.
10.- Albúmina al 2%:

Diluir albúmina al 20-30% en PBS pH 7.3, almacenar a 4ºC. Preparar solo
la cantidad necesaria. Si se va a almacenar por mucho tiempo,
agregar azida de sodio al 1%.
11.- PBS pH 7.3:

Preparar de la forma habitual.
PROCEDIMIENTO:
A: PREPARACION DE GR RECUBIERTOS CON C3b - C4b:
1.- Marcar 1 tubo nuevo: C3b y C3d.

2.- Colocar en cada uno de los tubos:
Glucosa fosfato 8.5 ml
GR O suspendidos al 50% en PBS 1.0 ml
Suero Humano fresco compatible 0.5 ml
3.- Mezclar cuidadosamente e incubar por 30 minutos a 37ºC, agitando suavemente
cada 10 minutos durante la incubación.
4.- Centrifugar y eliminar el sobrenadante.
5.- Lavar los GR por 4 veces con PBS
6.- Preparar una suspensión al 3% en PBS con los GR del tubo 1. Guardarlas a 4ºC si es
necesario.
7.- Los GR del tubo 2 se tratarán con tripsina para obtener C3d-C4d.
B: OBTENCION DE GR RECUBIERTOS CON C3d - C4d:
8.- Agregar 1 ml de tripsina al 0.1%, Recién preparada a 0.5 ml de GR lavados y

concentrados, ya recubiertos con C3b-C4b. Corresponde al tubo 2 del procedimiento
anterior.
9.- Mezclar cuidadosamente e incubar por 30 minutos a 37ºC. Invertir 3 veces durante la
incubación.
10.- Centrifugar y eliminar el sobrenadante
11.- Lavar los GR por 4 veces con PBS.
12.- Preparar una suspensión al 3% en PBS con los GR. Guardarlas a 4ºC si es necesario.
C: PREPARACION DE GR RECUBIERTOS CON C4:
1.- Colocar en un tubo de centrífuga nuevo:

10 ml de sucrosa al 10%
0.15 ml de Na3 EDTA 0.2 M
0.5 ml de suero humano fresco compatible
0.5 ml de G.R. concentrados, lavados y frescos.
2.- Mezclar cuidadosamente e incubar por 5 minutos a 37ºC, mover 2 -3 veces durante la
incubación.
3.- Centrifugar y eliminar el sobrenadante
4.- Lavar los GR por 4 veces con PBS.
5.- Preparar una suspensión al 3% en PBS con los GR. Guardarlas a 4ºC si es necesario.
TEST CON LOS ERITROCITOS PREVIAMENTE PREPARADOS:
1.- Hacer diluciones seriadas de los sueros AGH en estudio (400ul).

2.- Agregar 50ul de las suspensiones celulares a tubos previamente marcados, y 50 ul de los
sueros AGH en estudio, de acuerdo al procedimiento del fabricante (las células ya están
lavadas).
3.- Preparar en paralelo sueros controles de referencia.
4.- Centrifugar todos los tubos el tiempo estandarizado para lectura. Incubar 15 segundos
después de agregar el SAGH.
5.- Leer inmediatamente, rotando suavemente el tubo.
6.- Preparar una serie de diluciones madres, de cada uno de los sueros AGH en estudio.
Ellas se enfrentarán a los eritrocitos recubiertos con C3b, C3d y C4 por separado. Se
preparan de la siguiente forma:
a) Colocar 300 microlitros de albúmina al 2% en PBS a cada uno de los tubos previamente
marcados: s/d, 2, 4, 8, 16, 32.
b) Agregar igual cantidad de suero AGH en estudio a los tubos marcados sin diluir y 2.
c) Mezclar suavemente el contenido del tubo 2 y proseguir de acuerdo a la técnica
estándar de titulación. Guardar la alícuota obtenida del último tubo.
7.- Colocar en 3 series de tubos previamente marcados 50 microlitros de dilución del AGH y
50 microlitros de los eritrocitos recubiertos correspondientes.
8.- Centrifugar todos los tubos el tiempo estandarizado para lectura.
129
9.- Leer inmediatamente, rotando suavemente el tubo. Registrar los resultados.

10.- Hacer una segunda lectura después de 5 min de incubación.
NOTA:
Se recomienda agregar los GR de cada serie, luego centrifugar y leer para no tener
diferencias con respecto al tiempo que permanecen en contacto las células con el suero
AGH.
INTERPRETACION:
1.- Se define el título como el valor recíproco de la máxima dilución del suero en la cual se
observa 1+ de aglutinación.
2.- Anti-C3b: título no mayor de 8 ni menor de 2
3.- Anti-C3d: título no mayor de 4 ni menor de 2
4.- Anti-C4: título no superior de 4.
5.- Estos resultados deben ser equivalentes a los obtenidos con los sueros de referencia.
III.- POTENCIA Y SENSIBILIDAD DEL SUERO AGH:
A: SELECCION DE UN SUERO ANTI-D: (Ac. IgG débil)

Es el suero con que se sensibilizarán los eritrocitos de prueba.
1.- El suero sin diluir no debe aglutinar directamente eritrocitos R1r en

suspensión al 3%, y debe tener un título de 16-32 en AGH de referencia.
2.- No se recomienda usar anti-D comercial, sino obtenido de una persona
sensibilizada.
3.- Es recomendable usar los mismos GR y el mismo suero anti-D cada vez
que se realice control de calidad.
4.- Idealmente usar 2 marcas de AGH para definir el título del anti-D
PROCEDIMIENTO:
1.- Preparar diluciones madres seriadas del anti-D, usando albúmina al 1% en PBS como
diluyente.
2.- Hacer una batería de tubos con 1 volumen (100 microlitros) de dilución y 1 volumen de
suspensión de GR R1r, (preparada usando un pool de 4 dadores de ese genotipo).
3.- Mezclar e incubar por 45 minutos a 37ºC
4.- Lavar las células por 4 veces y agregar 2 gotas del suero AGH.
5.- Centrifugar y leer de la forma estandarizada. Registrar los resultados.
INTERPRETACION:
El suero anti D ideal será el que presente un título de 16-32 en AGH.
B.-RECUBRIMIENTO DE LOS GR CON ANTI-D:

1.- Preparar diluciones seriadas hasta 64 con el suero anti-D previamente seleccionado.
2.- Preparar 1 ml de cada dilución de anti-D.
3.- Agregar a cada una de las diluciones de anti-D 1 ml de la suspensión de GR R1r al 3%
4.- Incubar por 45 minutos a 37ºC, con agitación ocasional.
5.- Lavar las células por 4 veces y resuspender hasta lograr una dilución al 3%. Controlar
sensibilización.
6.- Hacer un tubo control en paralelo, utilizando PBS en vez de anti-D.
NOTA:
Debe sensibilizarse GR con anti-D y otros GR con anti-Fya (Título 8-16 con células
heterocigotas) para hacer en paralelo 2 tableros de ajedrez.
C.-PREPARACION DE LAS DILUCIONES DEL SUERO AGH:

1.- Preparar diluciones seriadas hasta 512 del suero AGH en estudio y del suero de
referencia. Usar albúmina al 2% en PBS como diluyente. Trabajar con volúmenes de 2
ml.
D.-EVALUACION DE LA POTENCIA Y SENSIBILIDAD DEL AGH:

(tablero de ajedrez).
Preparar un tablero para cada tipo de eritrocitos sensibilizados: anti-D y anti-Fya.
1.- Trabajar de acuerdo al siguiente esquema:
DILUCIONES DEL SUERO AGH

GR SENSIBI- 2 4 8 16 32 64 128 256
LIZADOS
2 1 2 3 4 5 6 7 8
4 9 10 11 12 13 14 15 16
8 17 18 19 20 21 22 23 24
16 25 26 27 28 29 30 31 32
32 33 34 35 36 37 38 39 40
64 41 42 43 44 45 46 47 48
2.- Colocar en cada tubo de cada fila una gota de la suspensión de GR sensibilizados
Ej.: GR sensibilizados con una dilución 1/2 de anti-D se coloca en los tubos marcados
1, 2,3,4,5,6,7 y 8. Así sucesivamente.
3.- Agregar a cada tubo 2 gotas de la dilución del suero AGH, siguiendo el esquema
descrito.
4.- Centrifugar inmediatamente y leer cada fila.
5.- Repetir el procedimiento para cada fila.
INTERPRETACION:
Un suero AGH se considera adecuado si se obtiene una reacción equivalente a un suero
AGH de referencia, por ejemplo.
1.- Título de suero AGH: El suero a evaluar debe dar una reacción 1+ en la dilución
1/128 del suero AGH, contra GR sensibilizados con anti-D 1/2 (tubo 7).
2.- Sensibilidad: El suero evaluado debe dar al menos 1+ con los eritrocitos
sensibilizados con anti-D en dilución 1/32, contra el suero AGH diluido 1/2 (tubo 33).
131
INFORME CONTROL DE CALIDAD SUERO AGH: ACTIVIDAD ANTI-IgG
MARCA TIPO LOTE FECHA VENC.
Ac. G. ROJOS Ac. G. ROJOS
Anti-D Anti- Fya (anti-K)

SD 2 4 8 16 32 SD 2 4 8 16 32
S. SD S. SD
A A
G 2 G 2
H H
4 4
8 8
16 16
32 32
64 64
128 128
SENSIBILIDAD: SENSIBILIDAD:
TITULO: SCORE: TITULO: SCORE:
FECHA: FECHA:
T.M. T.M.
OBSERVACIONES:
CARACTERISTICAS GENERALES DE METODOS USADOS EN INMUNOHEMATOLOGIA
CARACTERISTICA TRADICIONAL GEL FASE SOLIDA COLUMNA

AFINIDAD
REACCION Tubo Tubo Microplaca Inmuno
Aglutinación Aglutinación Inmuno adherencia
adherencia
De fase sólida
MATRIZ DE Ninguna Gel dextran- Microplaca de Gel de sefarosa
REACCION GR/suero o acrilamida poliestireno, inmunoreactivo
plasma inmunológicame químicamente
nte inerte. modificado
DETECCIÓN AGH AGH GR recubiertos Proteína G y A
por anti-IgG
LAVADO SI NO SI NO
CENTRIFUGACIO SI SI SI SI
N
LECTURA Cuantitativa Cuantitativa Semicuantitativa Semicuantitativa

1+ a 4+, CM 1+ a 4+, CM +fuerte, +, - , no +fuerte, +, - , no
CM CM
ESTABILIDAD DE NO SI 2-3 días SI 2 días SI 7 días
REACCION
C. de CALIDAD + y -; CCC Nº lote tarjeta y +y- CC recubiertas

diluyente. de IgG
EQUIPOS ESP. NO SI SI SI
AUTOMATIZACIO NO NO SI NO
N
APROB x FDA
133
ERITROCITOS CONGELADOS PARA FINES DE LABORATORIO
Los eritrocitos pueden ser guardados usando glicerol, que por medio de aumentar la
tonicidad de las células, los protege contra la deshidratación excesiva y contra la
formación de cristales de agua durante el congelamiento y descongelamiento.
TÉCNICA A
REACTIVOS:
1.- Solución de glicerol al 40%, para congelar células:
Citrato trisódico 60.0 gr

Citrato monosódico 6.2 gr
Citrato disódico 5.6 gr
Glicerol 800 ml
H2O destilada 1200 ml
El reactivo se prepara de la siguiente forma:Disolver los 60 gr de

citrato trisódico en 100 ml de agua destilada precalentada a 56ºC,
agregue los otros reactivos y lleve a 1200 ml de agua; disuelva
completamente y adicione 800 ml de glicerol tibio (45ºC), guardar
a 4ºC.
2.- Soluciones de descongelación:

A) Citrato trisódico al 5% : 250 gr citrato trisódico 5 litros de agua
destilada
B) Solución 12% : A 1760 ml de solución A agregue 240 ml de

glicerol y 0.2 gr de azida de sodio.
C) Solución 6% : A 1880 ml de solución A agregue 120 ml de

glicerol y 0.2 gr de azida de sodio.
D) Solución 2% : A 96 ml de solución A agregue 120 ml de glicerol,

0.2 gr de azida de sodio y 1000 ml de agua destilada.
PROCEDIMIENTO:
1.- Lavar las células a congelar por 6 veces con salino tamponado.
2.- Mezclar volumen a volumen las células lavadas y concentradas con la solución de
glicerol al 40%.
3.- Congelar en alícuotas.
4.- Para descongelar, proceder a colocar las células en soluciones decrecientes de
glicerol : 40 - 12 - 6 - 2% , agregando siempre igual volumen del glicerol que
corresponde y de células a descongelar. Dejar 5min en cada paso.
5.- Una vez terminado este procedimiento, lavar las células una vez con PBS.
SANGRE Y COMPONENTES SANGUINEOS
135
PREPARACION Y CONSERVACION DE COMPONENTES SANGUINEOS
Los anticoagulantes y soluciones preservadoras(ver tabla) que en la actualidad se añaden a la

sangre del donante hacen posible su conservación por períodos más prolongados; esto junto al
uso de sistemas cerrados de recolección que llevan adosados otras bolsas satélites de forma
integral, permite la separación aséptica de los componentes sanguíneos.
Las condiciones óptimas de velocidad, tiempo y temperatura requeridos tanto para la

preparación como conservación y rendimiento de estos componentes, son diferentes para
cada uno y deben estar determinadas para cada centrífuga y cada laboratorio en particular y
revisarse periódicamente (ver tabla).
CONTENIDO DE LAS SOLUCIONES PRESERVADORAS (g/L)
CONTENIDO ACD-A CPD CP2D CPDA-1

Citrato trisódico 22.00 26.30 26.30 26.30
Ácidocítrico 8.00 3.27 3.27 3.27
Dextrosa 24.50 25.50 51.10 31.90
Fosfato de Sodio 2.22 2.22 2.22
adenina 0.275
CAMBIOS BIOQUIMICOS DE SANGRE CONSERVADA CON CPD Y CPDA-1
CPD CPDA-1
VARIABLES SANGRE ST GR ST GR
Dias conservación 0 21 0 0 35 35
% cel. viables a las 24 100 80 100 100 79 71
horas
pH a 37ºC 7.2 6.84 7.6 7.55 6.98 6.71
% ATP (del valor 100 86 100 100 56+/- 45+/-
inicial) 16 12
2,3DPG (del valor 100 44 100 100 <10 <10
inicial)
K+ plasma * 3.9 21.0 4.2 5.1 27.3 78.5 &
Na+ plasma * 168.0 156.0 169.0 169.0 155.0 111.0
Hb plasmática 17.0 191.0 82.0 78.0 461.0 658.0
* = mmol/L ; & =el plasma total de estas unidades es 70 ml.
PREPARACION DE COMPONENTES SANGUINEOS POR CENTRIFUGACIÓN
Centrifugación a "alta velocidad

Concentrado de Glóbulos Rojos estandarizar cada centrifuga
Concentrado de Plaquetas.
Plasma Ej.: 5000 x g, 7 minutos
Plasmaféresis
Crioprecipitado
Centrifugación "suave"
Plasma rico en plaquetas estandarizar cada centrifuga
Ej.: 2000 x g, 3 minutos.
METODOS
A. CONCENTRADO DE GLOBULOS ROJOS.
1. Extraer sangre en bolsa doble o triple y mantenerla en

refrigeración a 4ºC hasta ser procesada.
2. Centrifugar a "alta velocidad" y a 5ºC.
3. Colocar la bolsa principal que contiene la sangre centrifugada en
un compresor de plasma y soltar el muelle, dejando que la placa
del compresor entre en contacto con la bolsa.
4. Obturar el tubo entre la bolsa primaria y las satélites con una pinza
o hacer un nudo flojo. Si hay 2 bolsas satélites, colocar una pinza
para que el plasma entre a sólo una de ellas.
5. Marcar las bolsa satélites con la misma identificación que la bolsa
principal (Nº donante, fecha de preparación, tipo de
componente ) y romper el sello. La eliminación de 225-250 ml de
plasma dará lugar a unos hematíes residuales con 70- 80% de Hto.
6.- Volver a pinzar cuando haya entrado en la bolsa satélite la
cantidad de plasma deseada. Sellar la tubuladura entre ambas
bolsas en dos lugares y cortar en esa zona.
7.- Almacenar los componentes sanguíneos obtenidos a temperatura
adecuada para cada uno.
Si se extrae sangre en bolsa única: después de dejar la bolsa en
el compresor, colocar una pinza en la tubuladura de la bolsa de
trasferencia estéril, insertar en condiciones asépticas la cánula de
la bolsa transfer en el orificio de salida de la bolsa de sangre,
aflojar la pinza y continuar el procedimiento antes señalado. Esta
unidad preparada en "circuito abierto" debe ser transfundida
dentro de las 24 hrs.
B. CONCENTRADO DE GLOBULOS ROJOS POBRE EN LEUCOCITOS (bolsa invertida)
1.- Utilizar sangre con no más de 6 horas de extraída.

2.- Centrifugar la bolsa en forma invertida a "alta velocidad" y 5ºC.
3.- Colgar de un soporte la bolsa primaria que contiene la sangre
centrifugada y continuar el procedimiento igual al anterior a partir
del punto 4. Traspasar a la bolsa satélite o transfer estéril solo los
dos tercios de los glóbulos rojos eliminado así cerca del 75 % de
leucocitos.
Si se extrae sangre en bolsa única: seguir las indicaciones

arriba expuestas.
C. PLASMA FRESCO CONGELADO (PFC)
1.- Extraer sangre en bolsa doble o triple, mantenerla en refrigeración

a 4ºC y procesarla antes de 6 hrs de extraída.
2.- Proceder igual a método A.
3.- Congelar el plasma a -20ºC o más, de modo tal que éste quede
congelado en estado sólido en un plazo de 6 hrs. desde la extracción.
4. Almacenar el PFC a -20ºC .
NOTA: el plasma debe estar libre de glóbulos rojos
137
D. CRIOPRECIPITADO DE GLOBULINA ANTI HEMOFILICA(AHF) O FACTOR VIII.
1.- Extraer sangre en bolsa doble o triple, mantenerla en refrigeración

a 4ºC y procesarla antes de 6 hrs de extraída.
2.- Proceder igual a método A
3.- Congelar el plasma en forma rápida antes de 1 hr, esto se logra
con congeladores de aire forzado o congeladores mecánicos
capaces de mantener temperaturas de -65ºC o menos, hielo seco
o un baño de etanol-hielo seco.
4.- Dejar descongelar el plasma a 1-6ºC colocando la bolsa en un
refrigerador a 4ºC.
5.- Centrifugar el plasma a "alta velocidad" y 5ºC una vez
descongelado.
6.- Colocar la bolsa en una prensa de plasma y dejar pasar a la
bolsa satélite el 90% del plasma sobrenadante sin factor VIII
dejando 10 a 15 ml de plasma para resuspender el crioprecipitado
al momento de usar.
7.- Pinzar la tubuladura, comprobar que cada bolsa tenga la
identificación correcta (Nº donante, fecha elaboración, tipo de
componente). Sellar la tubuladura entre ambas bolsas en dos
lugares y cortar en esa zona.
8.- Congelar rápidamente el crioprecipitado a -65ºC y almacenar a -
20ºC. En estas condiciones dura 12 meses a partir de la fecha de
extracción.
Almacenar el plasma sin F VIII a - 20ºC o 4ºC
E. CONCENTRADO DE PLAQUETAS DE DONANTE AL AZAR:
1.- Extraer sangre en bolsa doble o triple, mantener a temperatura

ambiente (22ºC) antes de separar el plasma rico en plaquetas de
los hematíes. Procesar dentro de 6 hrs de extracción.
2.- Centrifugar mediante centrifugación "suave" a 20ºC para obtener
plasma rico en plaquetas.
3.- Ídem método A, puntos 3 - 4 -5
4.- Traspasar el plasma rico en plaquetas a la bolsa satélite prevista
como "Concentrado de Plaquetas" (CP). Evitar la contaminación
con glóbulos rojos. Sellar la tubuladura en dos puntos entre la bolsa
primaria y bolsa satélite CP y cortar entre ellos. Refrigerar los
hematíes a 4ºC.
5.- Centrifugar el plasma rico en plaquetas a 20ºC y "alta velocidad".
6.- Traspasar el plasma sobrenadante pobre en plaquetas a otra
bolsa satélite; dejar en el concentrado de plaquetas 50-60ml de
plasma. Sellar el tubo en dos puntos ente ambas bolsa y cortar
entre ellos.
7.- El concentrado plaquetario debe permanecer quieto a
temperatura ambiente por 1 hr; luego colocar en el agitador de
plaquetas a 20ºC. El plasma pobre en plaquetas puede
congelarse rápidamente y conservar como plasma fresco
congelado.
CARACTERISTICAS DE LOS PRINCIPALES COMPONENTES SANGUINEOS

COMPONENTE CONSERVACION VOLUMEN CONTENIDO CONTROL DE CALIDAD
(DIAS) (ML)
GLOBULOS CPD: 21 250 GR: 65-80% - Hto: < 80%
ROJOS CPD-A: 35 a PLASMA: -Cultivo
CONCENTRA- HEPARINA: 2 300 20-35% bacteriano según
DOS C.A.: 24 hr ALGUNAS: programa de
Tº:2-6ºC plaquetas y Con.Cal.
GB
G.R. POBRES C.C.: igual 175 GR: 80-95% -Recuperación:
EN LEUCO GR a PLASMA: 70-80% GR
C.A.: 24 Hr 245 5-20% -Remoción:
GB: < 30% 70% GB
Tº:2-6ºC (< 5x108 GB)
-Hto:>o= 80%
PLAQUETAS 3-5 50 -65 PLAQUETAS: -Recuento: &
Dadores al depende del 5.5 x 1010 5.5x1010 Plaq.
Azar plástico PLASMA: -pH: 6.0 o mas
24 Hrs (C.A.) 50-65ml al fin de su
GB: conservación
-Preparación:
antes de 6 hrs. de
Tº:22ºC extracción
-Volumen: 50-65 ml
PLAQUETAS 24 Hrs (C.A.) 300 PLAQUETAS: -Recuento: &
Donante 3 -5 depende del a 3.0 x 1011 3.0x1011 Plaq.
Único plástico 500 PLASMA: -pH: 6.0 ídem
300-500 ml
GB: *
PLASMA 1 año congelado 150 PLASMA: -Preparación:
fresco 6-24 hr líquido a todos los F. de antes de 6 hrs. de
congelado 250 coagulación extracción
F.I: 400 mg -Conservación:
Tº: -20ºC < 18ºC
- Descongelar:
30-37ºC
PLASMA 5 años 150 PLASMA: -Conservación:
Conservado congelado a Solo F. < 18ºC
líquido: 5 250 estables
díasmás que
sangre
Tº: -20ºC
CRIOPRECI- Congelado: 10-30 F.VIII C: - 80 UI F.VIII
PITADO 1 año 80-150 mg en el 75% de las
Descongelad F.XIII: unidades
6-8 hr 20-30% del estudiadas.
En pool: nivel st. (1 vez al mes)
4 hr FIBRINOGENO -Descongelar a
150-250 mg 37ºC.
F.VW:
40-70% del
tº:-20ºC nivel st.
139
C.A.: Circuito abierto, C.C.: Circuito cerrado

GR:Glóbulos rojos, GB: Glóbulos blancos
&: en el 75% de las unidades estudiadas.
CALIBRACION DE CENTRIFUGA PARA OBTENCION DE PLAQUETAS.
1.- Recoger un tubo de sangre del donante con EDTA. Realizar recuento de
plaquetas. Si es inferior a 133 X 103/ ul no debe utilizar esta unidad para
calibración.
2.- Calcular el Nº de plaquetas en la unidad de sangre total:
recuento de plaq/ul X 1000 X ml de sangre = Nº de plaq en la unidad de
sangre total.
3.- Centrifugar la unidad de sangre a velocidad y tiempo seleccionado ej.: 1200
rpm, 10 min.
4.- Obturar temporalmente la tubuladura de una bolsa satélite. Traspasar el
plasma rico en plaquetas (PRP) según técnica. No retirar el obturador
temporal hasta el paso siguiente.
5.- Exprimir la tubuladura varias veces hacia dentro de la bolsa para que
contenga una muestra representativa del PRP.
6.- Sellar un segmento del tubo y desconectarlo de manera que la bolsa de PRP
siga siendo estéril.
7.- Realizar recuento plaquetario de esta muestra y calcular el Nº de plaquetas
en la bolsa de PRP:
Recuento plaquetas/ul x 1000 x ml de PRP = Nº de plaquetas en el PRP
8.- Calcular el porcentaje de recuperación:
Nº de plaquetas en PRP X 100 = recuperación (%)

Nº plaquetas en sangre total
9.- Repetir el procedimiento anterior 3 o 4 veces con distintos donantes, utilizando

centrífugas, velocidades y tiempos distintos. Comparar los rendimientos de
cada ensayo
10.- Seleccionar el tiempo más corto y velocidad menor que dé el mayor
porcentaje de recuperación de plaquetas en PRP con un nivel aceptable de
contaminación de rojos.
11.- Proceder a la preparación del concentrado plaquetario(CP) en la forma
habitual, dejando un segmento largo de tubuladura conectado al
concentrado.
12.- Después de resuspender las plaquetas, exprimir varias veces la tubuladura
mezclando bien su contenido con el de la bolsa para obtener una muestra
representativa. Sellar un segmento del tubo y desconectarlo de manera que
la bolsa de CP siga siendo estéril.
13.- Realizar recuento plaquetario. Calcular el Nº de plaquetas en CP:
Recuento plaquetas/ul x 1000 x ml del CP = Nº de plaquetas en CP
14.- Calcular porcentaje de recuperación:
Nº de plaquetas en CP X 100 = recuperación (%)

Nº plaquetas en PRP
15.- Repetir los pasos 11 a 14 con distintas centrífugas, velocidades y tiempos

distintos. Comparar los rendimientos de cada conjunto de condiciones de
centrifugación.
16.- Seleccionar el tiempo más corto y velocidad menor que den mayor
porcentaje de recuperación de plaquetas en el concentrado.
Una vez calibrada la centrífuga, no es necesario volver a hacerlo a no ser que

se presente un problema de funcionamiento o que disminuya el rendimiento
de los concentrados.
CONTENIDO APROXIMADO DE LEUCOCITOS EN LOS COMPONENTES SANGUINEOS
COMPONENTE SANGUINEO LEUCOCITOS POR UNIDAD

Sangre total 109
Concentrado de eritrocitos 108
Eritrocitos lavados 107
GR congelados y desglicerolizados 10 - 107
6
Plaquetas por aféresis 106 - 108

Concentrados plaquetarios 107
REDUCCION DE LEUCOCITOS EN LOS COMPONENTES SANGUINEOS:
DEFINICIONES:
Leucocitos/ul: Nº de células en un volumen de 1 ul, se determina
por método de conteo microscópico directo.
Leucocitos/ml: Para determinar leucocitos por ml, multiplique el Nº
de leucocitos/ul por 1000. (1000ul = 1 ml)
Contenido residual (efluente): Se define como en Nº total de
leucocitos que permanecen en la unidad después de la filtración.
También se llama contenido efluente y se puede calcular :
Leucocitos/ul X 1000 X volumen de la unidad (ml).
Log (logaritmo) de reducción Es la reducción de leucocitos que se
logra por filtración, expresada en logaritmo. Log es el poder en
que el número 10 debe aumentar en orden de producir un
número dado. Ejemplo: log de 1000 = log 103 = 3; log de 10000 =
log 104 = 4
FORMULAS:
Eficiencia porcentual de reducción de leucocitos:
Se ha usado para indicarla fracción o porcentaje de leucocitos
que se retiran durante la filtración. Disponiendo de un método de
recuento apropiado y seleccionado, la eficiencia porcentual de
reducción de leucocitos se calcula:
Eficiencia % de reducción = 1 – (leuco efluentes/ul) * 100 de leucocitos

(leuco iniciales/ul)
EJEMPLO:
1.-Volumen de la unidad: 350 ml
2.-Recuento inicial (antes de la filtración):
1.750.000.000 (1.75x109) leucocitos inicial/unidad o
5.000.000 (5 x 106) leucocitos/ml o
5.000 (5 x 103) leucocitos/ul
3.-Recuento residual (efluente): 5 leucocitos/ul
4.-Cálculo:
141
a.-Eficiencia % de reducción de leucocitos:
(1 – 5/5000) * 100 = 99.9%
b.-Log de reducción:
log 10leucocitos iniciales/ul

leucocitos residuales/ul
log 105000 = 3.00

5
c.-Contenido residual:
leucocitos/ul * 1000 * Volumen de la unidad(ml)
5 * 1000 * 350 = 1.75 * 106 leuco/unidad
DATOS BIOLOGICOS DE ALGUNOS FACTORES DE COAGULACION
FACTOR CONCENTRA VIDA MEDIA NIVEL FRACCION RECUPE-

APROX. (Horas) RECOMEND INTRAVAS- RACION
PLASMA PARA CULAR
(mg/ml) CIRUGIA
FIBRINOGENO 2.8 99+/-3 1mg/ml 72%
PROTROMBINA 0.13 73+/-7 40-50% 58%
F-V 0.068 12-36 10-30% 83%
F-X 0.012 33 10-40% 51%
F - VII 0.0005 5 10-20% 100%
F - VIII 0.00024 13+/-3 30-100% 80-100%
F - IX 0.005 23+/-2 20-60% 22% 24-54%
F - XI 0.006 61 20-30% 100%
F - XIII 0.029 282 10% 50%
Von 0.006 20-40 20-50% 73%
WILLEBRAND
UNIDAD
EFECTOS ADVERSOS DE LA TRANSFUSION SANGUINEA
143
EFECTOS ADVERSOS DE LA TRANSFUSION SANGUINEA
INTRODUCCION:
La transfusión de sangre y sus componentes generalmente es una

forma segura y eficaz de corregir déficit hematológico, sin embargo no
está libre de riesgo debido a diferentes causas: ser un trasplante de un
tejido liquido presencia de nuevas enfermedades transmisibles,
incompatibilidades no pesquisable, donante en periodo de ventana
de una enfermedad transmisible y no detectada por las actuales
técnica de laboratorio, falla inherente a toda actividad humana etc.
Los efectos adversos que pueden presentarse con la administración de

sangre involucran aspecto y problemas más amplios que la común
mente llamado " reacciones transfusionales". Alrededor de un 10% de
los receptores transfundidos presentan reacciones; algunas son
evitables pero otras no.
El conocimiento de los efectos adversos a la transfusión es necesario y

obligatorio para el Tecnólogo Médico que ejerce en un servicio de
sangre, para su prevención, reconocimiento precoz, investigar las
causas y adoptar las medidas correctoras correspondientes.
A.- REACCIONES TRANSFUNSIONALES INMEDIATAS
Las reacciones transfusionales inmediatas generalmente ocurren dentro

las dos primeras horas de la transfusión, son de varios tipos y pueden
deberse a causas inmunológicas y no inmunológicas.
Las causas inmunológicas incluyen incompatibilidad del receptor con los

eritrocitos del donante, glóbulos blancos, plaquetas o componentes
plasmáticos.
En la mayoría de los casos, las reacciones agudas se deben a la

presencia de anticuerpos del receptor dirigidos contra antígenos
presentes en el producto transfundido. Menos frecuentemente puede
ocurrir por anticuerpos incompatibles en el plasma del donante.
Las reacciones transfusionales no inmunológicas pueden resultar de

sobrecarga circulatoria, contaminación bacteriana, acción de
citoquinas liberada en la sangre almacenada etc.
La observación del paciente durante la transfusión permitirá pesquisar las

reacciones adversas tempranas y tomar las medidas apropiadas para
limitar el daño. Pulso, temperatura y presión sanguínea deben registrarse
antes de iniciar la transfusión, 15 minutos después y repetir cada 30
minutos.
REACCION TRANSFUSIONAL HEMOLITICA
Es causada por la reacción antígeno - anticuerpo que activa el

complemento, los sistemas de coagulación y una respuesta endocrina,
provocando un aumento de la destrucción de los eritrocitos.
La hemólisis puede ser predominantemente intravascular, debida a

anticuerpos IgM que fijan y activan la vía clásica del complemento
hasta C9 provocando la ruptura de las células en el torrente sanguíneo
y liberación de hemoglobina al plasma.
Los anticuerpos IgG que no activan complemento (ej.: anti-Rh) o solo

parcialmente hasta la etapa C3 (ej.: anti Kell), causan hemólisis
extravascular, mediada por fagocitosis o citotoxicidad de los eritrocitos
por las células del sistema retículo endotelial (SRE) en el hígado y bazo.
Otras causas de hemólisis son el daño osmótico de eritrocitos por

inyección accidental de agua en la
circulación,contaminaciónbacteriana, sobrecalentamiento etc.
REACCION TRANSFUSIONAL HEMOLITICA AGUDA
Es causada por anticuerpos IgM dirigidos contra antígenos eritrocitarios

produciendo hemólisis intravascular; generalmente son el resultado de
incompatibilidad ABO aunque ocasionalmente otros anticuerpos IgM
pueden originarla.
Signos y síntomas de una reacción hemolítica
Fiebre Hemoglobinuria
Calofríos Shock
Dolor torácico Hemorragia generalizada
Hipotensión Oliguria o anuria
Nausea Dolor lumbar
Disnea Dolor en zona de punción
Enrojecimiento facial Hemoglobinemia
TRANSFUSIONES ABO INCOMPATIBLES
La incompatibilidad ABO es principalmente el resultado de una

incorrecta identificación del receptor, ya sea en la muestra de sangre
usada para realizar los exámenes pre transfusionales o en el momento
de administrar la transfusión.
Los signos clínicos seguidos a una transfusión ABO incompatible se

presentan en los primeros minuto; bastan solo 5 a 20 ml de infusión
para desencadenar la reacción. Algunos pacientes presentan los
signos clásicos y más característicos como son: disnea, dolor
precordial, angustia, dolor en la región lumbar. Otros se quejan de
145
dolor o malestar en el sitio de punción, enrojecimiento facial o leve

alza de la temperatura.
En pacientes que se encuentran anestesiados durante la transfusión,

dos importantes signos revelan este tipo de reacción: hipotensión a
pesar de una adecuada reposición de fluidos, y sangramiento
anormal.
Los efectos clínicos varían grandemente. Por un lado, menos del 10%
de los pacientes con esta incompatibilidad, desarrollan hemólisis
intravascular aguda, seguida de falla renal y muerte; mientras en
otros, los efectos clínicos no son fácilmente reconocibles.
Es difícil establecer la frecuencia exacta con que ocurre este

fenómeno; sin embargo es lejos la causa más común de reacción
hemolítica aguda y de muerte inmediata después de la transfusión.
REACCION FEBRIL NO HEMOLÍTICA
A.- Por anticuerpos HLA
Es causada por anticuerpos HLA del receptor que reaccionan

con el correspondiente antígeno ubicado en los glóbulos blancos
del donante. El complejo antígeno - anticuerpo activa
complemento y se une a monocitos activado liberando
citoquinas con propiedades pirogénicas.
Se produce en alrededor de 10 % de las transfusiones sanguíneas,

caracterizándose por un estado febril con calofríos. Es más
frecuente en multíparas y en pacientes politransfundidos. La
reacción febril se produce generalmente dentro de los 60 - 80
minutos de producida la transfusión, no es fatal y generalmente
provoca gran malestar al paciente.
B.- Por citoquinas
Fiebre y calofríos pueden ocurrir por acción de citoquinas tales

como IL-1 y TNF presentes en productos sanguíneos conservados.
Las citoquinas son producidas por los glóbulos blancos del
donante ; su efecto puede prevenirse usando productos
depletados de glóbulos blancos antes del almacenamiento.
REACCIÓN CAUSADA POR PROTEINAS: Anticuerpos a IgA .
Una de las complicaciones más comunes es la urticaria, producida por

un alergeno del receptor contra las proteínas plasmáticas del
donante, generalmente por anticuerpos Ig E.
La reacción anafiláctica severa puede aparecer inmediatamente

caracterizada por broncoespasmo, tos, cianosis, inestabilidad
muscular, nauseas, shock, pérdida de conciencia; es producida por
anticuerpos Ig A.
TRANSFUSION DE GLOBULOS ROJOS CONTAMINADOS
Los glóbulos rojos contaminados con bacterias se reconocen por la

presencia de hemólisis y la decoloración de ellos. Los efectos tóxicos
inmediatos que produce esta sangre al ser transfundida provocan a
veces un daño mayor que las otras reacciones hemolíticas.
La contaminación de la sangre no es frecuente, pero ocurre por las

siguientes razones:
- Bacteremia asintomática en donantes aparentemente sanos
con un pequeño número de bacterias, como por ej. Yersinia
enterocolítica.
- Contaminación de la unidad de sangre durante la recolección
con bacterias de la flora normal de la piel del donante (ej.:
staphylococcus epidermis, micrococcus o sarcina spp)
- solución anticoagulante contaminada
- Contaminación de los sellos de las bolsas de crioprecipitado o
plasma congelado, al descongelarlos en agua infectada
comúnmente con pseudomonas.
FALLA PULMONAR AGUDA (TRALI)
Esta reacción es poco usual, pero potencialmente fatal. Ocurre

inmediatamente después de la transfusión debido a anticuerpos
leucocitarios del donante contra leucocitos del receptor o viceversa,
produciéndose una leucoaglutinación .
El paciente puede presentar síntomas de distress respiratorio, fiebre,

calofríos, cianosis hipovolemia y edema pulmonar agudo.
HEMOLISIS CAUSADA POR LINFOCITOS PASAJEROS
Órganostrasplantados contienen linfocitos que pueden montar una

respuesta inmune contra los antígenos del huésped.
Algunos receptores de grupo A, B o AB, que reciben un órgano de

dadores del grupo O, pueden sufrir hemólisis a la semana del
trasplante como resultado de la producción de anti A, o anti B por
linfocitos pasajeros del órgano donado, estimulado por los antígenos A
o B de receptor.
Esta hemólisis se ha observado en pacientes que han sido

trasplantados de riñón, corazón, médula ósea y pulmón.
En estos casos hay una inesperada baja de la hemoglobina en el post

trasplante a pesar de la transfusión sanguínea.
147
HEMOLISIS CAUSADA POR UN EFECTO OSMOTICO
Inyección accidental de agua en la circulación , conduce a una

reacción hemolítica . Esto se presenta generalmente en operados de
prostactectomia transuretral.
HEMOLISIS CAUSADA POR DAÑO FÍSICO DE LA SANGRE
A.- Sobre calentamiento

En algunas ocasiones es preciso entibiar la sangre para
transfundirla, si la temperatura excede los 37ºC puede producirse
hemólisis de la unidad.
Aparte de considerar las razones clínicas para entibiar la sangre,

es necesario utilizar el equipo apropiado para esta operación, y
verificar el control de temperatura de éste.
En caso de utilizar un baño María, controlar la temperatura con un

termómetro durante todo el proceso.
B.- Congelación
La unidad de sangre puede congelarse por almacenamiento en
refrigerador no diseñado para esta función o dejada en el
congelador en forma accidental por desconocimiento de las
normas establecidas.
C.- Administración a presión

Transfundir la sangre y/o glóbulos rojos a presión y/o por una aguja
de calibre muy pequeño como las utilizadas para infundir suero,
provocan hemólisis de los eritrocitos.
B.- REACCIONES TRANSFUSIONALES RETARDADAS
Estas se presentan días o meses después de la transfusión y tienen

diversas etiologías tanto inmunológicas como no inmunológicas. Se
considera también en esta clasificación a las complicaciones
infecciosas de la transfusión
REACCION TRANSFUSIONAL HEMOLITICA RETARDADA
Se debe a la acción de aloanticuerpos IgG clínicamente significativos

(ej.: anti-D, anti Jka) presentes en el paciente y que pueden provocar
hemólisis extravascular de eritrocitos incompatibles del donante.
Existen dos tipos de reacción hemolítica retardada.
El primero se produce semanas después de la transfusión como

resultado de una aloinmunización primaria. La producción de
anticuerpos comienza 7 o 10 días post transfusión y a medida que
aumenta el título y avidez de éste se produce la hemólisis de los

eritrocitos
El segundo tipo tiene lugar en sujetos ya inmunizados, pero la

concentración de anticuerpos es tan baja que no puede ser
detectada por los tests pre transfusionales; o bien se produce una
respuesta anamnéstica, elevándose la concentración de anticuerpos
3 días más tarde.
Síntomas y signos más comunes de esta reacción
Fiebre
Ictericia leve
Descenso de la Hemoglobina
Hemoglobinuria
ENFERMEDAD INJERTO VERSUS HUESPED
Es una complicación no habitual y tiene lugar en pacientes

inmunodeprimidos, en los cuales los linfocitos inmunocompetentes del
donante, anidan y se multiplican, reaccionando contra los tejidos
“extraños” del huésped.
El síndrome clínico puede incluir fiebre, erupción cutánea, diarrea,

supresión de la medula ósea.
PURPURA POST TRANSFUSIONAL
Se presenta casi exclusivamente en mujeres multíparas. Producto de

anticuerpos anti plaquetarios, que provocan una caída vertiginosa de
plaquetas, dando lugar a un púrpura generalizado aproximadamente
una semana después de la transfusión.
149
CUADRO RESUMEN DE LOS EFECTOS ADVERSOS DE LA TRANSFUSIÓN SANGUÍNEA
EFECTOS INMEDIATOS
EFECTOS INMUNOLOGICOSETIOLOGIA HABITUAL
Hemólisis sintomática G. Rojo Incompatibles
Febril no Hemolítica Granulocitos Donante
Anafiláctica Ac Anti Ig A
Urticaria Ac Anti Proteínas Plasma
Edema Pulmonar no cardiológico Ac. Anti Leucocitos o Activación del C
EFECTOS NO INMUNOLOGICOS
Alza Febril-Shock Contaminación Bacteriana
Insuficiencia Cardiaca Congestiva Sobrecarga de líquidos
Hemólisis Sintomática Destrucción física de la sangre
EFECTOS RETARDADOS
EFECTOS INMUNOLOGICOSETIOLOGIA HABITUAL
Hemólisis sintomática Ac. Anamnésicos frente antígenos

eritrocitarios
Reacción injerto / huésped Prolif. Linfocitos funcionales del donante
Púrpura post transfusional Anticuerpos anti plaquetarios

Aloinmunización contra ag. de eritrocitos
Leucocitos, plaquetas, proteínas plasma Exposición a antígenos del donante
EFECTOS NO INMUNOLOGICOS
Sobrecarga de hierro Múltiples transfusiones
Hepatitis Virus hepatitis B, C
Síndrome inmunodeficiencia adquirida VIH - I, VIH-II
Infección por protozoos Malaria, Chagas

INVESTIGACIÓN DE UNA REACCION TRANSFUSIONAL
En toda UMT o Banco de Sangre o Servicio de Transfusiones, las reacciones

transfusionales adversas se presentan de tiempo en tiempo, porque aunque el
donante es compatible, no es posible tener todos los antígenos eritrocitarios,
leucocitarios y plaquetarios, idénticos con el receptor.
Las reacciones alérgicas y febriles son las más comunes y en muchos casos
inevitables, al menos inicialmente. Las reacciones hemolíticas tardías ocurren con
cierta frecuencia pero no siempre son fáciles de detectar o prevenir
Las pruebas cruzadas solo sirven para reducir considerablemente la posibilidad de

que ocurra una reacción hemolítica mayor; pero no para eliminar errores
administrativos.
Cualquier síntoma o signo físico que se presente durante o inmediatamente

después de la transfusión de sangre o productos sanguíneo debe considerarse
como una potencial reacción hemolítica hasta que se demuestre lo contrario y
deben tomarse las siguientes medidas:
A.- Junto al paciente
1. - Detener la transfusión.
2. - Mantener abierta la vía venosa
3. - Notificar al médico tratante y a la UMT
4. - No eliminar la unidad ni el infusor.
5. - No transfundir otras unidades destinadas al paciente
6. - Comprobar datos del paciente con etiquetas, formularios, y
unidad(s) destinada al paciente:
• Nombres y apellidos
• Nº de historia clínica
• Indicación de transfusión y tipo de producto sanguíneo
• Sala - Nº cama
• Grupo sanguíneo ABO y RhD
7. - Tomar muestras de sangre con anticoagulante (EDTA) y sin

anticoagulante, evitando la hemólisis mecánica y en lo posible de
otra vía venosa .
8. - Recolectar muestra de orina fresca a las 0, 6 y 12 hrs para
investigar Hb libre. La presencia de glóbulos rojos intactos en las
muestra de orina debido a hematuria del tracto urinario y su
posterior hemólisis in vitro , puede falsear el examen.
9. - Enviar al Banco de Sangre la unidad sospechosa, el infusor, las
muestras de sangre del paciente y el protocolo de reacción con
los datos requeridos.
151
B.- En la UMT o Banco de Sangre

Registrar fecha y hora de llegada del protocolo de reacción adversa.
Observar las condiciones de las unidades devueltas y filtro utilizado
1. - Efectuar investigación administrativa comprobando los datos
del paciente y de la (s) unidad (es) con:
- los registros existentes en el banco de sangre

- muestra post transfusión
- muestra pre transfusión
- unidad (s)transfundida (s)
- informe de reacción adversa
- etiquetas de la unidad transfundida
- resultado de la prueba cruzada
Si hay discrepancia en este punto, en especial en la identificación

nominal y/o de grupo sanguíneo, avisar inmediatamente al
médico tratante y descartar que no estén otros pacientes
involucrados, verificando las transfusiones hechas cercanas al
caso en cuestión.
4. - Iniciar investigación serológica
a) Comparar color y aspecto del plasma de la muestra pre y

post transfusión para detectar hemólisis. La manipulación y
centrifugación de las muestras debe ser cuidadosa, evitando
provocar hemólisis mecánica que falsee el resultado. Una
coloración rosada o roja solo del plasma post transfusión
significa Hb libre. En muestras tomadas 4 a 10 hrs post
transfusión, el color amarillo o café proviene de aumento de
bilirrubina y productos de degradación de la Hb.
b) Realizar Test Antiglobulina Directa a ambas muestras. Un
resultado 1+ débil con campo mixto , se puede encontrar en
muestras tomadas en los inicios de la reacción , en especial
tratándose de una reacción hemolítica aguda
TAD negativo puede producirse por rápida destrucción
intravascular de los eritrocitos ej.: incompatibilidad ABO
c) Repetir clasificación ABO y Rh y pruebas cruzadas, en pre,

post y unidad (s) transfundidas.
d) Identificar anticuerpo irregular
5. -Utilizar técnicas de detección más sensibles sí la situación lo amerita

como por ejemplo: aumento proporción suero/células
6. -Cultivo microbiológico sí los síntomas del paciente indican

bacteriana del producto transfundido
7. - Conocer resultado resiente de uro análisis del paciente y presencia

de eritrocitos, hemoglobina o estroma y pos transfusional.
8. - Registre los resultados de cada paso de la investigación y

analícelos cuidadosamente.
ENFERMEDADES DE TRANSMISION SANGUINEA
NOTA: En todos los procedimientos de detección de enfermedades de transmisión sanguínea

debe seguirse cuidadosamente TODAS las instrucciones del fabricante.
153
EXAMENES MICROBIOLOGICOS
(Basada en Orientaciones para centros de sangre y UMT, ministerio de Salud)
La sangre y sus componentes deben ser sometidos a los exámenes microbiológicos obligatorios;
ellos no serán liberados para su uso hasta que estos no se hayan realizado y sus resultados sean
negativos.
La ausencia o presencia de los marcadores microbiológicos descritos anteriormente debe
determinarse en el suero del donante. Si se utiliza plasma, se deben seguir las instrucciones del
fabricante del kit y si hay alguna desviación de esas instrucciones, esta variación debe ser
validada para asegurar que cumple con las condiciones de sensibilidad y especificidad y ser
formalmente aprobada por el fabricante.
Muestras reactivas al tamizaje inicial
Toda muestra reactiva debe ser re estudiada en duplicado, usando la misma técnica que el
examen original. Este es un paso muy importante y requiere especial atención para asegurar
que :
• se está repitiendo la muestra correcta
• que el procedimiento de dispensación de muestra para la repetición se está
realizando con el debido cuidado, por ej. algunos equipos dispensadores no aceptan el mismo
código de barras 2 veces.
• los resultados son verificados cuidadosamente
• se mantiene la integridad del traspaso de la información
Si ambos exámenes de repetición están claramente negativos, la sangre y sus componentes

pueden ser liberados para su almacenamiento.
Si uno o ambos exámenes de repetición están reactivos, la sangre y todos sus componentes
deben ser etiquetados “ No usar para transfusión”, y mantenido en un lugar exclusivo de
productos para no uso clínico. Se debe aplicar los puntos recién enumerados.
Se evaluará concordancia de resultados entre muestra de tubo y tubuladura de bolsa madre.
Si se considera que el donante es reactivo para cualquiera de los exámenes obligatorios

descritos anteriormente, las muestras deben ser enviadas a confirmación a un laboratorio de
referencia del Instituto de Salud Pública (ISP), salvo que el Instituto no esté en condiciones de
realizar la confirmación requerida.
• Si se confirma un resultado positivo el registro del donante debe ser rotulado como
“rechazo definitivo, no extraer sangre para uso clínico”. Se debe organizar la consejería del
donante y extraer muestras para confirmar su infección (muestra de identidad).
• Si el resultado de la confirmación es negativo, se debe proceder a reintegrar al

donante como donante activo según el procedimiento que sigue.
Reintegración de donantes
Consiste en reinsertar los donantes cuyo suero ha sido confirmado como falso reactivo en
exámenes microbiológicos. El procedimiento a seguir es:
Los componentes cuyas muestras de tamizaje son repetidamente reactivas (RR) no deben ser
usados para transfusión, la ficha del donante debe ser rotulada de acuerdo con los
procedimientos y el donante debe ser retirado del listado de donantes activos.
No se puede usar en clínica ningún otro material proveniente de este donante hasta que sea
reintegrado a dicho listado.
• Se debe enviar una alícuota de la muestra RR al laboratorio de referencia designado
para ello. Si el resultado de la confirmación es un falso reactivo, se puede considerar la
reintegración del donante tras un período de seguimiento.
Se tomará una nueva muestra después de al menos 12 semanas para reconsiderar su
reintegración.
• Al menos 12 semanas después de la muestra inicial se obtendrá una nueva muestra y
se enviará al laboratorio de referencia. Para reintegrar al donante al listado de los activos,
dependerá de los resultados de los exámenes realizados en el seguimiento, tanto en el CS
como en el laboratorio de referencia. Todo esto de acuerdo a la política de reinserción de
donantes del CS.
REQUERIMIENTOS ESPECIFICOS PARA HBs Ag
El laboratorio de referencia debería, realizar exámenes específicos de neutralización para

HbsAg y debería ademas determinar el nivel de anti HBc. Las muestras que contienen HbsAg
neutralizable, con o sin anti HBc, indican infección con VHB.
Pruebas específicas
HbsAg
Control de calidad del tamizaje para HbsAg : cada lote de reactivos debería estar certificado
que cumple con los criterios mínimos de especificidad y sensibilidad establecidos a nivel
nacional.
ANTI VIH 1 Y 2
Control de calidad del tamizaje para VIH 1 y 2 :

• cada lote de reactivos debería estar certificado que cumple con los criterios mínimos
de especificidad y sensibilidad establecidos a nivel nacional
• una serie de exámenes no debe ser validada si los resultados del control del fabricante
y el control interno adicional no logran los criterios esperados.
ANTI HCV
Control de calidad del tamizaje para VHC :

155
ANTICUERPOS DE SIFILIS
Control de calidad del tamizaje para Sífilis :

ANTICUERPOS ANTI Trypanosoma cruzi
1. Se debe investigar la presencia o ausencia de anticuerpos anti T. Cruzi examinando

suero o plasma del donante.
2. Una serie de exámenes no debe ser validada si los resultados del control del
fabricante y el control interno adicional no logran los criterios esperados.
Exámenes microbiológicos adicionales para casos especiales
Anticuerpos anti citomegalovirus (anti CMV)
Se debe investigar la presencia o ausencia de anti CMV, examinando suero o plasma del
donante. Aunque es aconsejable tener listados de donantes anti CMV negativos, no debe
rotularse los productos como tal, a menos que se haya realizado el examen y este resulte
negativo.
Control de calidad para pruebas anti CMV

TESTS SEROLOGICOS EN EL DIAGNOSTICO DE HEPATITIS VIRAL
AGENTE REACTIVIDAD DEL TEST INTERPRETACION

HBsAg Anti-HBc Anti- HBeAg Anti-
Tot. IgM HBs HBe
VIRUS B + +/- +/- - +/- - HB aguda
antes de síntomas
+ + + - + - HB aguda
- + + - +/- +/- Convales.
o posible portador
crónico
+ + - - +/- +/- Portador
Crónico &
- + - + - + Recuperado
- - - + - - Vacunado o
Recuperado
- + - - - - Recuperado
?
Virus D " Anti-HBc " Anti-delta
+ + - + HD aguda o crónica
- + + + Recuperado
Virus A Anti – VHA
Total IgM
+ + HA aguda
+ - Vacunado o
recuperado
Virus C Anti-VHC Ags. Recombinantes
(Screening) C-100-3 5-1-1 C22-3 C33-c
+ HC aguda o crónica
+ + + + + Probable HC
crónica
+ + + + -
+ + + - - ¿HC aguda?
+ - - + +
+ - - - - Falso positivo?
Virus E Anti – VHE
Total IgM
+ + HE aguda
+ - Recuperado
157
CAUSAS POSIBLES DE RESULTADOS FALSOS EN TEST ELISA
1.- Dos resultados no coincidentes:

PROBLEMAS TECNICOS:
- Lavado incorrecto
- Mala preparación del sustrato/conjugado
- incubación a temperatura incorrecta
- Material sucio
- Mantener los reactivos en forma incorrecta
- Omisión de la muestra
- Registros incorrectos
- Error humano
- Mantención y calibración adecuada de los equipos
2.- Repetidamente reactivos:

- Baja de especificidad en el reactivo
- Presencia de Ac contra HLA-DR (en VIH)
- Ac. de reacción cruzada con contaminantes del cultivo celular o
¿epitopos virales?
- Pacientes con niveles elevados de Igs.
- Acs adquiridos pasivamente
- Receptores de vacunas
3.- Características de la muestra:

- Lipemia
- Hemólisis
- Contaminación
EVALUACION DE PROCEDIMIENTOS DE TAMIZAJE O SCREENING
Sensibilidad, especificidad, valor predictivo positivo y negativo
Las pruebas de tamizaje utilizadas en Banco de Sangre para detectar en los

donantes de sangre enfermedades de transmisión sanguínea, deben cumplir con
condiciones básicas de sensibilidad, especificidad, valor predictivo positivo y valor
predictivo negativo, que nos permiten conocer cuales son sus márgenes de error.
Ellos pueden calcularse de acuerdo a los resultados expresados en una tabla
cuadricelular:
ENFERMOS SANOS TOTAL
PRUEBA A B A+B
POSITIVA Verdaderos positivos Falsos positivos Total de positivos
PRUEBA C D C+D
NEGATIVA Falsos negativos Verdaderos negativos Total de negativos
TOTAL A+C B+D A+B+C+D
Total de enfermos Total de sanos Total
• La sensibilidad
Es la proporción de enfermos cuya prueba de screening resulta positiva
(verdaderos positivos) en relación al total de enfermos (A+C). Corresponde a
la relación A/A+C. Define la capacidad de la prueba de identificar a los
enfermos.
• La especificidad
Es la capacidad de la prueba de dar un resultado negativo en personas que
no presentan la enfermedad en el momento del estudio. Corresponde a la
relación del número de verdaderos negativos sobre el total de sanos D/B+D.
• La concordancia
Es la suma de los verdaderos positivos y los verdaderos negativos en el total de
personas estudiadas. Corresponde a A+D/A+B+C+D.
• El valor predictivo positivo(VPP)

Corresponde a la proporción de enfermos que existen en el total de personas
con prueba positiva. Se calcula relacionando A/A+B.
• El valor predictivo negativo (VPN)

Expresa la proporción de sanos en el conjunto de personas cuyo resultado
fue negativo. Se calcula relacionando los verdaderos negativos con el total
de negativos, D/C+D.
El poder predictivo de una prueba depende de la frecuencia del daño a la

salud. Cuando la prevalencia es alta aumenta el VPP y disminuye el VPN y
viceversa a medida que baja la prevalencia de la enfermedad.
La detección de enfermedades de transmisión sanguínea en dadores en el

Banco de Sangre, presenta características especiales por lo que
generalmente se privilegia la sensibilidad sobre la especificidad, esto implica
necesariamente el uso de métodos de confirmación para las pruebas de
screening empleadas.
159
BIBLIOGRAFIA
1- Race R. and Sanger "Blood groups in man"6th Ed.

2.- Neville J. Bryant "An introduction of immunohematology" 2th
3.- Petz L. "Clinical pratice of blood transfusion".
4.- Genetet B., Mannon P., "La transfusión" 2ª Ed. Ediciones Toray S.A. Barcelona. 1980.
5.- Marletta J. "Hemoterapia e Inmunohematología", Ed. Científico-técnicas americanas.
1981.
6.- Linares J. "Inmunohematología y transfusión, principios y procedimientos"
7.- Greenwald T.J. "Blood transfusion", 1 Ed, 1988
8.- AABB "Blood groups systems:
ABO and Lewis
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"Progress in immunohematology"
"Transfusion therapy: from donor to patient"
9.- Contreras M. "ABC of transfusion". Published by the British Medical Journal. 1990.
10.- Technical Manual of the American Association of Blood Banks. .
11.- Standards of Blood Banks and Transfusion Services. American Association of Blood
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12.- Guidelines for the Blood Transfusion Services in the United Kingdom. UKBTS and
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13.- Pautas para la organización de un servicio de transfusión de sangre. OMS Ginebra, 1993.
14.- Mollison P.L, Engelfriet C.P., Contreras M. Blood Transfusion in Clinical Medicine. Blackwell
Scientific Publications. 9th edition 1993
15.- Mollison P.L, Engelfriet C.P., Contreras M. Blood Transfusion in Clinical Medicine. Blackwell
Scientific Publications. 11th edition 2005
15.- News Briefs. American Association of Blood Banks. 1993-1994.
16.- Acreditation Manual. American Association of Blood Banks. 1993.
17.- Manual de procedimientos de Banco de Sangre. Ministerio de Salud de Chile. 1985.
18.- " Laboratory Haematology" section Nº 4 . Técnicas en Inmunohematología, serología de
grupos sanguíneos. Churchill Livingstones. 1989.
19.- Judd W.J. Methods in Immunohematology. Montgomery Scientific Publications, Miami FL.
1988.
20.- Medina Lois Ernesto. Métodos epidemiológicos en clínica y en Salud Pública. 2ª edición.
Escuela de Salud Pública. Universidad de Chile. 1987.

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___________________________________________________________________________________INMUNOHEMATOLOGIA Y MEDICINA TRANSFUSIONAL

TMs: Leonor Armanet, Juana Vargas, Amalia Cárcamo, Carolina Hernández

Actualizado por TMs Josefina Barrera, Catalina Salinas y Silvana Lillo

La Medicina Transfusional es un área de la Medicina que ha sufrido

En el presente Manual se describen aspectos básicos de

Pretendemos además hacer reflexionar a quienes se inician en esta

ANTICUERPOS DE SIFILIS 156

SELECCION DE UN DONANTE DE SANGRE

El proceso de atención de donantes de sangre consta de las siguientes etapas:

c.- Entrevista y aplicación del cuestionario: Comprende una serie de preguntas

f.- Prevención y control de reacciones adversas a la donación: Debe estar atento a

g.- Identificación del profesional que selecciona y del flebotomista: El responsable de la

a.- Quién: El Tecnólogo Médico responsable de la sección.

3.- SELECCION DEL DONANTE:

a.- Se entrevistará al donante de sangre, utilizando un cuestionario basado en las normas de

b.- Se evaluará la información recogida, determinando la aceptación o exclusión del posible

d.- Si no hay motivos de exclusión, se someterá al donante a un examen físico dirigido la

4.- CONDICIONES DE LA ENTREVISTA DEL DONANTE DE SANGRE

La entrevista se diferencia de la conversación corriente en que está dirigida y orientada

5.- PRINCIPIOS DE UNA ENTREVISTA:

1) Iniciar -CEOR: Cállese, escuche, observe, registre.

Este principio permite que el donante le hable, se explaye. Es importante observar su

Puede obtener información a nivel consciente o subconsciente; esta última se conoce

2)Mantener el control de la entrevista:

Frente a un donante agresivo, prepotente, seductor, coqueto, amistoso, lloroso,

5)Cuidar la comunicación no verbal:

Cuide especialmente las facilitaciones no verbales, debe administrarlas en momentos

9) Desanimar la comunicación improcedente:

Cuando el donante se emociona, desvíe su atención empleando preguntas directas a

10) Atmósfera adecuada:

6.- CRITERIOS DE SELECCIÓN

1.- EDAD: - entre 18 y 60 años.

2.- FRECUENCIA DE DONACIÓN: debe existir un intervalo mínimo entre donaciones de

5.- PRESION ARTERIAL: (Tomada en reposo)

7.- HEMOGLOBINA:sobre 13,5 grs/dL en hombres

8.- MICROHEMATOCRITO: 40% en hombres; 38% en mujeres

7.- REGISTROS EN LA FICHA DE DONANTE Y APLICACION DEL CUESTIONARIO AL POSIBLE DONANTE

A continuación, usted podrá analizar las diferentes partes de un modelo de ficha de

Ficha de donante de sangre

ALGUNAS PREGUNTAS A REALIZAR DURANTE LA ENTREVISTA AL DONANTE

§ ¿HA LEÍDO Y COMPRENDIDOEL INFORMATIVO?

§ ¿DURMIÓ MÍNIMO 5 HORAS?

§ ¿HA BEBIDO ALCOHOL EN LAS ÚLTIMAS 24 HORAS?

§ ¿HA DONADO SANGRE ANTES?

§ ¿SE HA SENTIDO MAL DURANTE O DESPUÉS DE DONAR SANGRE?:

SI: No debe donar si tiene historia de un desmayo severo o 2 desmayos consecutivos.

SI: Preguntar la causa y verificar si es causal o no de rechazo.

§ ¿HA TOMADO ASPIRINA O ANTINFLAMATORIOS EN LOS ÚLTIMOS 3 DÍAS?

SI: Se acepta como donante, rotulando la bolsa "NO PREPARAR PLAQUETAS".

NO: Se acepta como donante.

§ ¿EN LAS ÚLTIMAS 8 SEMANAS, LE HAN PUESTO ALGUNA VACUNA O INYECCIÓN?

NO: Se acepta como donante.

OBLIGATORIO: no debe donar si han transcurrido menos de 8 semanas de la vacunación

A CRITERO: aceptar si la vacunación se realiza con microorganismos no vivos:

CASOS ESPECIALES: consultar NGT 146 para mayores detalles:

§ ¿EN LOS ÚLTIMOS12 MESES HA SIDO OPERADO U HOSPITALIZADO?

OBLIGATORIO: no debe donar si

NO: Acepte al donante

§ ¿EN LOS ÚLTIMOS 12 MESES SE HA REALIZADO ENDOSCOPIA?

NO: Se acepta como donante

§ ¿SE HA REALIZADO EXAMEN DE SANGRE U OTRO TIPO DE EXAMEN?

§ ¿EN LOS ÚLTIMOS 6 MESES HA RECIBIDO ALGÚN TRATAMIENTO MÉDICO?