Actividad antiinflamatoria tópica del ácido quillaico Quillaja

saponaria Mol. y algunos derivados

Resumen
Objetivos El ácido quilaico es la principal aglicona de las saponinas ampliamente estudiadas
de Árbol indígena chileno Quillaja saponaria Mol. La disponibilidad industrial de quillaja
Las saponinas y la amplia funcionalización de este triterpenoide proporcionan oportunidades
únicas.
Lazos para la modificación estructural y plantean un desafío desde el punto de vista de la
selectividad en respecto a uno u otro grupo de alcohol secundario, el aldehído y el ácido
carboxílico funciones La actividad antiinflamatoria de esta sapogenina no se ha estudiado
previamente y nunca se ha usado para obtener potenciales derivados antiinflamatorios.
Métodos Se prepararon una serie de derivados del ácido quilaico y se sometieron a ensayos
tópicos para la inhibición de la inflamación inducida por el ácido araquidónico o el éster de
forbol.
Hallazgos clave El ácido quilaico exhibió una fuerte actividad antiinflamatoria tópica en
ambos modelos. La mayoría de sus derivados eran menos potentes, pero la hidrazona 8
mostró una potencia similar al ácido quilaico en el ensayo de TPA.
Conclusiones
Las modificaciones estructurales realizadas y los resultados biológicos sugieren que los
grupos aldehído y carboxilo son relevantes para la actividad antiinflamatoria en estos
modelos.
Palabras clave: actividad antiinflamatoria; ácido araquidónico; acetato de forbol; ácido
quilaico derivados; Quillaja saponaria

Introducción
Quillaja saponaria Molina D. Don (1831), Quillajaceae, es un árbol autóctono de la costa
Cordillera y las estribaciones de los Andes en el semiárido centro de Chile, la corteza interior
(también conocida como la corteza de jabón, Seifenrinde, corteza de Panamá, bois de
Panamá), que se ha utilizado durante mucho tiempo para lavar el cabello y la lana. [1] El
pueblo mapuche, el principal grupo étnico del centro-sur de Chile, tiene lo usó para el dolor
de muelas y contra la "inflamación del sistema respiratorio". [2] En moderno veces, la
abundancia de este árbol lo ha convertido en una importante fuente comercial de crudo
saponinas utilizadas como agentes espumantes, humectantes y emulsionantes, y, en una
forma más purificada, en la preparación de emulsiones fotográficas, cosméticos, vacunas y
otros productos medicinales. ucts. [3,4] Las saponinas de Quillaja se presentan como mezclas
complejas de glucósidos y ésteres de azúcar, principalmente del ácido triterpeno quilaico
pentacíclico (1, 3b, 16a-dihidroxi-23-oxoolean-12-en-28-oic ácido). [5] El ácido quilaico ha
sido reconocido como la principal aglicona de los árboles de quillaja durante al menos 80
años, mucho antes de que su estructura se estableciera claramente, pero estudios recientes
han demostrado presencia de varias otras sapogeninas que comparten su esqueleto de
oleanane. [6] Muchos triterpenos pentacíclicos son de interés medicinal, tanto en sus formas
naturales como derivados hemisintéticos. [7–13] La actividad antiinflamatoria de varios de
estos compuestos tiene reportado, subrayando su interés como ingredientes farmacéuticos y
farmacológicos composición. [14,15] Dado que las saponinas de quillaja se extraen
actualmente a escala industrial, su Las sapogeninas pueden ser materiales de partida
económicos para la preparación de derivados con aplicaciones medicas. Además, el ácido
quilaico es un compuesto altamente funcionalizado que permite Una amplia gama de
modificaciones químicas para modular la actividad farmacológica. El objetivo principal de
este estudio fue demostrar por primera vez los efectos antiinflamatorios tópicos de quillaic
ácido y varios de sus derivados, la mayoría de ellos nuevos, centrando nuestra atención en
los anillos A y D más funcionalizados como rasgos característicos de las estructuras
modificación tural. A pesar del uso tradicional de saponina rica extractos acuosos de Q.
saponaria para tratar la inflamación, no Se han publicado estudios científicos al respecto, y
el uso potencial de su principal sapogenina o sus derivados como agentes antiinflamatorios
no se han explorado hasta ahora. La actividad antiinflamatoria tópica fue evaluada por ácido
araquidónico (AA) y 12-O-tetradecanoil phorbol-13 ensayos de inflamación inducida por
acetato (TPA) en orejas de ratón. [16] TPA actúa principalmente como un activador de la
proteína quinasa C y factor nuclear kB (NF-kB), que promueve la expresión mejorada sión
de enzimas proinflamatorias. Por otro lado, AA presumiblemente actúa como un precursor
de mediadores inflamatorios como como prostaglandinas y leucotrienos. Además, los
neutrófilos. que alcanzan rápidamente el sitio inflamado liberan mieloperoxidasa y NADPH
oxidasa como parte de la respuesta inflamatoria.

Materiales y métodos
Procedimientos generales
Los reactivos y solventes de grado de síntesis se compraron en Merck (Darmstadt, Alemania).
El comercial semipurificado Q. La mezcla de saponaria saponaria UltraDry 100Q fue donada
por Desert King Chile (Quillota, Chile). Detalles de la preparación. y la purificación del ácido
quilaico y sus derivados se dan abajo. Todos los productos químicos disponibles
comercialmente se usaron sin Purificación adicional. 1 Se registraron los espectros de RMN
H y 13C a 500 y 126 MHz o a 400 y 100 MHz, respectivamente, en espectrómetros
comerciales. Los cambios químicos (d) se informan en ppm en relación con la señal de
tetrametilsilano, utilizando el disolvente como Referencia interna. Los espectros de masas se
obtuvieron usando un ESI-IT Instrumento de trampa de iones de electrospray Esquire 4000
de Bruker Daltonik (Bremen, TFG). La cromatografía en columna (CC) fue llevado a cabo
con gel de sílice Merck 60 (0.015–0.040 mm) y Se realizó una cromatografía analítica de
capa fina (TLC) en Merck gel de sílice 60 F254 láminas de aluminio. Las manchas fueron
detectadas por pulverización con reactivo de p-anisaldehído / ácido sulfúrico, seguido de
calentamiento durante 1 min a 120 ° C. Los espectros IR se registraron para muestras
preparado en discos KBr, utilizando un espectrómetro PerkinElmer 1310. Detector de diodos
de cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC-DAD) se realizaron determinaciones en
un Hewlett Cromatógrafo Packard serie 1100 (Waldbronn, Alemania). Se utilizaron dos
columnas: (1) Nova-Pak C18 (300 ¥ 3.9 mm, Columna de 4 mm) (Waters, Milford, MA, EE.
UU.); y (2) simetría Columna C18 (150 ¥ 3.9 mm, 5 mm) (Aguas). La fase móvil fue un
gradiente de AcOH acuoso al 2%, MeCN / AcOH / agua (20: 2: 78) y 100% de MeOH. El
caudal se ajustó a 1 ml / min. y el detector UV a 280 nm. El volumen de inyección fue de 20
ml. El método estándar de trabajo fue el siguiente: el orgánico la fase se lavó con solución
acuosa saturada de NaHCO3 (tres veces) seguido de solución acuosa saturada de NaCl (tres
veces), luego se secó sobre Na2SO4 anhidro y se filtró. El filtrado se concentró al vacío en
un evaporador rotativo. Para los estudios farmacológicos, se compraron TPA y AA de Sigma
(St Louis, MO, EE. UU.). Indometacina y nime- el sulfuro fue donado por el Laboratorio
Chile (Santiago, Chile). Aislamiento y caracterización del ácido quilaico (1)
UltraDry 100Q (20 g) se calentó a reflujo con HCl al 9% (500 ml) durante 3 h, enfriado a
temperatura ambiente y filtrado. El sólido era se lava con agua y se seca para obtener un
residuo que pesa 8 g. El residuo se sometió a CC en Sephadex LH-20.
La fracción eluyó con hexano / diclorometano / metanol (6: 2: 1) mostró una RF similar =
0.52 en TLC (CH2Cl2-EtOAc 1: 1) a un estándar de ácido quilaico. Polvo blanco amorfo
(3,5 g; 17,5%); pf 291–295 ° C; IR (KBr) 3506 (-OH), 2945, 1721 (CO), 1589, 1452 cm-1
; 1 H-NMR (500 MHz, CDCl3, CD3OD) d 0.84, 0.88, 0.95, 1.04, 1.10, 1.40 (3H cada uno,
s, Me-26, 29, 30, 25, 24, 27), 2.23 (1H, t, J = 14.2 Hz, 19-H), 3,01 (1H, dd, J = 4,1; 14,2 Hz,
18-H), 3,80 (1H, dd, J = 5,4; 9.5 Hz, 3-H), 4.46 (1H, t, J = 4.4; 2.9 Hz, 16-H), 5.35 (1H, t, J
= 3,4 Hz, 12-H), 9,33 (1H, s, 23-H); 13C-NMR (125.6 MHz, CD3OD) d 9.40, 16.20, 17.70,
24.88, 26.95, 56.76, 59.75, 72,78, 75,21, 123,1, 145,2, 208,5; HREIMS calculados para
C30H45O5: 485.3272481; encontrado: 485,3273220.

Preparación de derivados del ácido quilaico.

Éster metílico del ácido quilaico (2) Se añadió yoduro de metilo (25 ml, 0,41 mmol) a una
solución de ácido quilaico (1, 200 mg, 0,41 mmol) y Cs2CO3 (401 mg, 1,23 mmol) en DMF
(10,3 ml) a 0 ° C. La mezcla de reacción se agitó a 0ºC durante 45 minutos, se trató como se
describe anteriormente y luego purificado por gel de sílice CC (CH2Cl2-EtOAc 1: 1) a
proporcionar 2 (190 mg, 95%) como un sólido blanco, RF = 0.83 (CH2Cl2- EtOAc 2: 1); pf
174-177 ° C; IR (KBr) 3422, 2947, 2363, 1717, 1654 cm-1 ; 1 H-NMR (CDCl3, 500 MHz)
d 0.73, 0.88, 0.96, 0.99, 1.00, 1.40 (3H cada uno, s, Me-24, 26, 29, 30, 25, 27) 3.01 (1H, dd,
J = 4.2; 14.1 Hz, 18-H), 3.57 (3H, s, -CH3), 3.77 (1H, m, 3-H), 4.44 (1H, m, 16-H), 5.30 (1H,
t, J = 3.3 Hz, 12-H), 9,29 (1H, s, 23-H). 13C-NMR (CDCl3, 126 MHz) d 9.40, 16.18, 17.57,
24.82, 27–29, 33.40, 49.90, 52.33, 56.75, 72,78, 75,14, 123,3, 145,0, 179,3, 208,5; HREIMS
calculados para C31H48O5: 523.3387280; encontrado: 523.3393957. Metil 3b, 16a, 23-
trihidroxiolean-12-en-28-oate (16a-hidroxihederagenina metil éster, 3) Se añadió NaBH4 (15
mg, 0,39 mmol) a una solución de 2 (129 mg, 0.26 mmol) en MeOH (7.0 ml) a 0 ° C. La
reacción La mezcla se agitó durante 2 ha 0ºC. Entonces el agua fría (70 ml) fue añadido, y la
mezcla se trató y el residuo sólido fue purificado por gel de sílice flash CC (CH2Cl2-EtOAc
2: 1) a dar 3 (120 mg, 93%), RF = 0.36 (CH2Cl2-EtOAc 1: 1); mp 150-155 ° C; IR (KBr)
3422, 2947, 2363, 1717, 1654 cm-1 ; 1 H-NMR (CDCl3, 500 MHz) d 0.70, 0.76, 0.88, 0.96,
0.98, 1.38 (3H cada uno, s, Me-24, 26, 29, 30, 25, 27), 3.00 (1H, dd, J = 4.4; 14,3 Hz, 18-H),
3,29 (1H, d, J = 11,0 Hz, 24-H), 3,52 (1H, d, J = 11,0 Hz, 24-H), 3,57 (3H, s, CH3), 3,63
(1H, dd, J = 5,1; 11,0 Hz, 3-H), 5,30 (1H, t, J = 3,3 Hz, 12-H); 13C-NMR (CDCl3, 126 MHz)
d 12.75, 16.36, 17.75, 24.84, 27.31, 33.40, 67.30, 73.86, 75.23, 123.5, 145.0, 179.4; HREIMS
calculados para C31H49O5: 501.3578930; encontrado: 501.3585483.

Ácido 3,16-dihidroxioleano-12-en-23,28-dioico 28-metil éster (4a) y metilo 4-nor-3,16-

dicetoolean-12-en-28-oate (4b) A una solución de 2 (100 mg, 0.199 mmol) en acetona (9.7
ml) en un baño de hielo se añadió reactivo Jones (0,54 ml / mmol sub- estratos, 1.75 ml) gota
a gota hasta el color de la solución cambiado a marrón pálido de verde. La mezcla se agitó.

Actividad antiinflamatoria del ácido quilaico Maité Rodríguez-Díaz et al. 719 a temperatura
ambiente durante 20 min, y después de retirar el acetona, se añadió agua. La mezcla acuosa
se extrajo. con EtOAc (3 ¥ 10 ml) y el extracto se trató para dar un sólido amorfo que fue
fraccionado por gel de sílice flash CC (CH2Cl2-EtOAc 2: 1) para dar 4b (25 mg, 25%), RF
= 0.81 (CH2Cl2-EtOAc 2: 1) y 4a (10 mg, 10%), RF = 0.17(CH2Cl2-EtOAc 1: 1). 4a: pf
180-190 ° C; IR (KBr) 3447, 2925, 2854, 2361, 1712 cm-1 ; 1 H-NMR (CDCl3, 500 MHz)
d 0.72, 0.90, 0.97, 1.25, 1.34 (3H cada uno, s, Me-26, 30, 29, 27, 25), 2.04 (1H, s, 24-H),
2.71 (1H, d, J = 15.2 Hz, 19-H), 3.35 (1H, dd, J = 3.8, 14.4 Hz, 18-H), 3.61 (3H, s, CH3),
4.30 (1H, t, 16-H), 4,51 (1H, s, 3-H), 5,38 (1H, t, J = 3,3 Hz, 12-H); 13C-NMR (CDCl3, 126
MHz) d 51.92, 72.24, 74.96, 175.5, 177,4, 122,7, 142,7. 4b: pf 240–246 ° C; IR (KBr) 3411,
2956, 2924, 2855, 1719, 1715 cm-1 ; 1 H-NMR (CDCl3, 500 MHz) d 0.87, 0.92, 0.93, 1.17,
1.19 (3H cada uno, s, Me-30, 25, 29, 26, 27), 1.00 (3H, d, J = 6.4 Hz, 24-H), 2.71 (1H, d, J =
15,2 Hz, 19-H), 3,33 (1H, dd, J = 3,8; 14,4 Hz, 18-H), 3,67 (3H, s, CH3), 5,56 (1H, t, J = 3,3
Hz, 12-H); 13C-NMR (CDCl3, 126 MHz) d 52.44, 124.1, 140.5, 173.3, 208.6, 213.6.
Metil 3b, 16a-dihidroxi-23- (t-butildimetilsililoxi) -olean-12-en- 28-oate (5) Una mezcla de
3 (100 mg), cloruro de terc-butildimetilsililo (96 mg, 1.3 mmol) e imidazol (170 mg, 2.5
mmol) en DMF anhidro (0,5 ml) se agitó a temperatura ambiente bajo N2 durante 18 h.
Luego, se añadió hexano (30 ml) y el la solución se lavó sucesivamente con salmuera (2 ¥
10 ml) y agua destilada (20 ml) y secada con Na2SO4. Después de la evaporación ración del
disolvente, el residuo se purificó por gel de sílice CC (hexano-EtOAc, 90: 10) para dar 5 (60
mg, 63%), RF = 0.80 (CH2Cl2-EtOAc 2: 1); pf 290–294 ° C; IR (KBr) 3542, 3467, 2951,
2927, 2856, 1710 cm-1 ; 1 H-NMR (CDCl3, 400 MHz) d 0.05 (9H, s, Si- (CH3) 3), 0.72,
0.88, 0.90, 0.96, 1.33 (3H cada uno, s, Me-30, 25, 29, 26, 27), 3.03 (1H, dd, J = 3.8, 14.4 Hz
18-H), 3.33 (1H, dd, 2H, -CH2O), 3.5 (1H, t, 3-H), 3.70 (3H, s, CH3), 4.50 (1H, s, 16-H),
5.40 (1H, t, J = 3.3, 12-H); 13C- RMN (CDCl3, 126 MHz) d 11.20, 16.04, 16.98, 23.40,
24.80, 27.05, 52.91, 56.45, 68.85, 72.79, 75.15, 123.7, 145.2, 178.0. EMAR [M-Na] + =
639,31305 (C37H64O5Si = 616,45230430).
Metilo 3b, 16a-dihidroxi-23- (t-butildimetilsilil) -12,13-epoxiolean-28-oate (6)
Una mezcla de 5 (50 mg, 0.06 mmol) y m-cloroperoxiácido benzoico (mCPBA) (60%) (43
mg, 0.5 mmol) en CH2Cl2 (3 ml) se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Entonces
el la mezcla se diluyó con CH2Cl2-Et2O (1: 2) y se trabajó hasta dar un producto (65 mg)
que fue sometido a preparación TLC (hexanos-EtOAc 1: 5: 1) para dar epóxido 6 como un
cristal-línea sólida Una muestra analíticamente pura e incolora fue obtenido por
recristalización en MeOH, RF = 0,60 (CH2Cl2-EtOAc 2: 1), pf 295–297 ° C; IR (KBr) 3411,
2948, 2862,; 1 H-NMR (DMSO-d6, 400 MHz) d 0.55, 0.88, 0.92, 0.96, 1.22 (3H cada uno,
s, Me-30, 25, 29, 26, 27), 3.42 (2H, dd, -CH2O), 4.03 (1H, dd, J = 3.8; 14.4 Hz, 18-H), 4.34
(1H, s, 16-H), 5,21 (1H, brt, 12-H); 13C-NMR (CDCl3, 126 MHz) d 11.45, 16.09, 16.18,
23.35, 26.57, 52.90, 55.47, 56,36, 67,98, 72,24, 75,12, 178,6; EMAR [M-Na] + = 655.72304
(C37H64O6Si = 632.45623432).
Ácido 3b, 16a, 23-trihidroxioleano-12-en-28-oico (16a-hidroxihederagenina, 7)
Obtuvimos el compuesto 7 en las mismas condiciones utilizadas para obtener el compuesto
3. Se añadió NaBH4 (1,15 mg, 0,03 mmol) a una solución de 1 (10 mg, 0.02 mmol) en MeOH
(1.0 ml) a 0 ° C. La mezcla de reacción se agitó durante 2 ha 0ºC. Luego agua fría (10 ml) se
añadió, y la mezcla se trató y el El residuo sólido se purificó mediante CC flash de gel de
sílice (CH2Cl2- EtOAc 2: 1) para dar 7 (8 mg), RF = 0,50, pf 200-204 ° C; IR (KBr) 3420,
2947, 2370, 1715, 1654 cm-1; 1H-NMR (DMSO- d6, 400 MHz) 5.50 (1H, t, H-12), 4.45 (H-
16), 4.03 (1H, dd, H-3), 3.50 (d, CH2), 3.30 (d, CH2 J = 11.0 Hz), 3.00 (1H, dd, H-18), 0.70–
1.3 (6 señales, 3H cada una, s). 23- (1-amino-4-metilpiperazinil) imino-3b, Ácido 16a-
dihidroxiolean-12-en-28-oico (8)
Compuesto 1 (100 mg, 0,205 mmol), 1-amino-4-metilpiperazina (61.2 mg, 0.6 mmol), etanol
absoluto (43 ml) y ácido acético glacial (1,7 ml) se calentaron bajo reflujo durante 24 h. La
mezcla de reacción se concentró hasta sequedad y el residuo se purificó por gel de sílice CC
eluyendo con CH2Cl2-EtOAc (1: 1) para dar 8 (35 mg, 35% de rendimiento) como polvo
amarillo pf 200-210 ° C; IR (KBr) 3424, 2944, 2862, 2361, 1610 cm-1 ; 1 H-NMR (CD3OD,
400 MHz) d 0.77, 0.83, 0.94, 0.95, 0.97, 1.31 (3H cada uno, s, Me-30, 25, 29, 24, 26, 27),
2,41 (3H, s, N-CH3), 2,63 (4H, m, -CH2-N-CH3), 3,04 (4H, m, -CH2-N-CH2-), 3.27 (3H, s,
CH3), 3.52 (1H, t, J = 5.1 Hz, H-3), 3.67 (1H, dd, J = 3.8; 14.2 Hz, H-18), 4.40 (1H, s, H-
16), 5,27 (1H, t, J = 3,5 Hz, H-12), 6,70 (1H, s, H-23); 13C-NMR (CD3OD, 100 MHz) d
11.09, 14.18, 17.03, 19.49, 22.35, 50.70, 51.76, 53.47, 74.25, 75.32, 121.4, 144.2, 152.6,
179,4. HREIMS calculado para C35H57N3O4: 583.4303220; encontrado: 583.4300958.
Bis-acetato de ácido quilaico (9)
El compuesto 1 (100 mg, 0,21 mmol) se trató con Ac2O (0,5 ml, 0,41 mmol) en piridina seca
(1,5 ml) en presencia de 4-dimetilaminopiridina (25 mg) a temperatura ambiente durante 12
h. La mezcla se trató para dar un sólido amorfo, que se purificó por cromatografía en columna
de gel de sílice eluyendo con CH2Cl2-EtOAc (2: 1) para dar 9 (96 mg, 80% rendimiento);
RF = 0,85 (CH2Cl2-EtOAc 2: 1); pf 180-186 ° C; IR (KBr) 3431, 2950, 2861, 1736, 1656
cm-1; 1 H-NMR (CDCl3, Pyr-d5, 400 MHz) d 0.70, 0.85, 0.94, 1.00, 1.07, 1.27 (3H cada
uno, s, Me-30, 25, 29, 24, 26, 27), 2.07 (6H, s, acetoxi), 3.05 (1H, dd, J = 3.6; 14.2 Hz, 18-
H), 4.51 (1H, s, 3-H), 5.39 (1H, s, 16-H), 5,64 (1H, t, J = 3,4 Hz, 12-H); 9,23 (1H, s, 23-H);
13C-NMR (CDCl3, Pyr-d5, 100 MHz) d 9.48, 15.65, 16.93, 20.38, 21.96, 23.24, 73.27,
76.25, 123.1, 142.1, 170.0, 170.4, 180,1, 204,5. EMAR [M-Na] + = 593,3448750
(C34H50O7 = 570.367643025).
Bishemisuccinato de ácido quilaico (10)
Una mezcla de 1 (100 mg, 0.21 mmol) y piridina (138 ml) con anhídrido succínico (200 mg,
2,03 mmol) y 25 mg de La 4-dimetilaminopiridina se agitó a 90 ° C durante 5 días. Entonces
la mezcla se trató para dar un sólido crudo. El residuo se fraccionó mediante gel de sílice CC
eluyendo con CH2Cl2-EtOAc (2: 1) que contiene ácido acético (1%) para dar 10 (40 mg,
20%); pf: 200-203 ° C; IR (KBr) 3433, 2929, 2863, 2359, 1708, 1637 cm-1; 1 H-NMR
(CDCl3, 400 MHz) d 0.80, 0.85, 0.90,0.92, 1.00, 1.10 (3H cada uno, s, Me-30, 25, 29, 24,
26, 27), 2,50 (4H, s, OOC-CH2-CH2-COOH), 3,03 (1H, dd, J = 3,6; 14,2 Hz, 18-H), 4,31 (s,
3-H), 4,50 (s, 16-H), 5,25 (1H, t, J = 3,3 Hz, 12-H), 9,20 (1H, s, 23-H); 13C-NMR (CDCl3,
100 MHz) d 8.41, 15.43, 16.85, 17.98, 20.06, 21.60, 22.49, 41.53, 43.72, 53.15, 54.10, 68.88,
73.80, 124.3, 148.5, 171.9, 174,7, 179,2, 205,0.

Animales
Ratones machos adultos CF-1 (20-25 g) derivados de un stock principal en el Instituto de
Salud Pública (Chile) estaban acostumbrados a Evaluar los efectos antiinflamatorios de los
compuestos. Todos los animales se mantuvieron en un ciclo de luz-oscuridad de 12 h, con
agua y alimentos proporcionados ad libitum; los animales estuvieron en ayunas durante la
noche antes de los experimentos. Todos los experimentos con animales fueron realizados
formado de acuerdo con las pautas éticas de la Internacional Principios rectores para la
investigación biomédica con animales promulgado por los CIOMS (1990) y los de Bioética
Comités del Instituto de Salud Pública de Chile y el Facultad de Ciencias Químicas y
Farmacéuticas.
Actividad antiinflamatoria tópica.
La actividad antiinflamatoria tópica se evaluó in vivo. como se describió anteriormente. [16]
Brevemente, grupos de ocho animales. fueron tratados con una dosis única de cada
compuesto de prueba (dosis equimolares con respecto a los medicamentos de referencia),
dis- resuelto en acetona y aplicado tópicamente en el interior (10 ml) y superficies externas
(10 ml) de la oreja derecha de los animales de cada grupo Después de 5 min, 2 mg de AA o
5 mg de TPA fueron administrado tópicamente en el oído derecho y acetona en el izquierdo
oído como control solvente. Las muestras se aplicaron antes aplicando cualquiera de los
agentes proinflamatorios para perturbar la absorción de los principios activos a través de la
piel tan poco como posible. Los animales de control fueron tratados de manera similar, pero
lo hicieron No recibir las muestras. Otros dos grupos de ocho animales. fueron tratados con
nimesulida o indometacina, medicamentos utilizados como referencias para la inhibición
tópica de la actividad inflamatoria inducido por AA o TPA, respectivamente. Después de 1
y 4.5 h para AA y TPA, respectivamente, todos los animales fueron sacrificados por cervical
dislocación y una sección (6 mm de diámetro) de la derecha y las orejas izquierdas fueron
golpeadas y pesadas. La dermal El efecto antiinflamatorio (% E) se evaluó de acuerdo con el
siguiente ecuación:
% E W W W 100 = - () c sc ×
donde Wc es la mediana de las diferencias de peso de la derecha y secciones del oído
izquierdo de los controles, y Ws es la mediana de la diferencias de peso de las secciones de
oreja derecha e izquierda de la animales tratados análisis estadístico
Los datos se expresaron como valores medianos SEM calculados del peso de los discos
auditivos para los tratados y no tratados animales que consideran valores de control como
100% de inflamación. UNA Se utilizó un método de análisis no paramétrico. Firma
estadística La importancia de más de dos grupos se evaluó utilizando el Prueba de Kruskall-
Wallis, seguida de la prueba múltiple de Dunnett para comparaciones individuales (versión
de prueba de GraphPad Prism 5 fue utilizado). [20] Se estableció el criterio de significación
estadística. en P 0.05.

Figura 1 Estructura del ácido quilaico (1), la aglicona principal de la saponina quillaja y
derivados.

Tabla 1 Efecto inhibitorio del ácido quilaico y derivados contra la inflamación dérmica
El% EAA y el% ETPA se refieren al efecto inhibitorio contra la inflamación dérmica
inducida por el ácido araquidónico (AA) y el 12-O-tetradecanoil phorbol-13 acetato (TPA),
respectivamente. Cada valor representa la mediana SEM de los resultados obtenidos de ocho
animales tratados con muestras o medicamentos de referencia.
(indometacina y nimesulida). * P 0.05, significativamente diferente en comparación con el
grupo control. †P 0.05, significativamente diferente en comparación con el grupo tratado
con el compuesto 1.

Resultados
El ácido quilaico (1, Figura 1) se aisló por hidrólisis ácida. de una saponina Quillaja saponaria
semipurificada comercial mezcla seguida de cromatografía. El compuesto 1 se obtuvo como
un polvo amorfo blanco. La pureza (95%) de El ácido quilaico se estableció por HPLC. Los
datos espectrales fueron de acuerdo con los datos publicados. [21,22] Como no había
información disponible sobre la derivación específica dosis de ácido quilaico que podrían
constituir compuestos de plomo, centramos nuestra atención en los más altamente
funcionalizados anillos A y D como rasgos característicos para estructuras modificación,
cuya relevancia para antiinflamatorio la actividad podría deducirse de la actividad de la nueva
empresa libras (Figura 1). El éster metílico del ácido quilaico (2) fue pre reducido de 1 para
facilitar la purificación CC. Espectral los datos de 2 estaban de acuerdo con los datos
publicados. [3] Algunos los derivados se prepararon a partir de 2, algo más lipo- compuesto
filico que puede actuar como profármaco si es un sustrato para esterasas tisulares. Otros
derivados (3, 5 y 6) fueron pre reducido de 2 para explorar la influencia del grupo aldehído
en el anillo A y la probable actividad antiinflamatoria del compuestos obtenidos.
El compuesto 3 (éster metílico de 16a-hidroxihederagenina) fue obtenido por reducción del
grupo aldehído de 2 con sodio borohidruro en metanol. El grupo hidroxilo primario de 3 se
protegió con terc-butilclorodimetilsilano para proporcionar 5, que por reacción con mCPBA
dio epóxido 6. Jones oxida- La porción 2 dio una mezcla de dos productos, 4a y 4b, de los
cuales 4b es el producto de descarboxilación del b-cetoácido formado por oxidación de la
función secundaria de alcohol C-3 de 4a. Su estructuras se establecieron sobre la base de su
1 H y 13C
Espectros de RMN y espectros de masas.
Para ampliar el rango de derivados con modificaciones- de la función aldehído C-23, los
compuestos 7 y 8 fueron preparado a partir del 1. El compuesto 8 incorpora un 4-metil-1-
grupo piperazinilimino, que se ha utilizado para mejorar la solubilidad de medicamentos
como el antibiótico rifampicina. Para disuadir mina la influencia de los grupos hidroxilo de
alcohol secundario en C-3 y C-16, se esterificaron, manteniendo el aldehído y grupos
carboxilo intactos. Acetilación de 1 con acético el anhídrido en piridina dio diacetato 9.
Finalmente, el ácido quilaico
Se obtuvo bis-hemisuccinato (10) con bajo rendimiento utilizando suc- anhídrido cómico en
piridina con 4-dimetilaminopiridina. Como es el caso de las piperaziniliminas, los
hemisuccinatos están bien profármacos conocidos, que proporcionan una solubilidad
mejorada, pero con un perfil de carga opuesta (pKa). La tabla 1 muestra los resultados de los
ensayos farmacológicos. para ácido quilaico y derivados, y los medicamentos de referencia
(indometacina y nimesulida). En aras de la comparación, todos los compuestos se aplicaron
a dosis equimolares a la referencia compuestos. La nimesulida fue el fármaco de referencia
contra Inflamación inducida por AA, ya que este compuesto es más eficiente cauteloso que
la indometacina en este modelo; la indometacina es más eficaz que la nimesulida contra la
inflamación inducida por TPA ción, y se utilizó como fármaco de referencia en este modelo.
Dosis- Las curvas de respuesta se llevaron a cabo con fármacos de referencia.
El ácido quilaico (1) mostró el anti-tópico más fuerte. actividad inflamatoria en modelos AA
y TPA, superior a La eficacia de la nimesulida contra la inflamación inducida por AA.
El éster metílico del ácido quilaico (2) fue considerablemente menos activo en ambos
ensayos. Los compuestos 3 y 4a mostraron una actividad significativa. contra la inflamación
inducida por TPA, pero no contra la inflamación mación inducida por AA. El compuesto nor
4b, que era formado junto con 4a en la reacción de oxidación, también fue evaluado
farmacológicamente, exhibiendo un antiinflamatorio efecto contra TPA que no alcanzó
significación estadística. Los compuestos 5 y 6 estaban inactivos en ambos ensayos.
Compuestos 7 y 8, obtenidos después de modificar el grupo aldehído de ácido quilaico (1),
solo mostró un importante antiinflamatorio actividad contra TPA. En particular, el
compuesto 8 tenía el mayor actividad contra la inflamación inducida por TPA, práctica
prácticamente idéntico al de 1. El ácido quilaico diacetato 9 y bis-hemisuccinato 10 mostró
actividad significativa contra ambos Inflamación inducida por TPA y AA; esta actividad fue
más débil que el exhibido por 1 pero en el mismo rango que el de éster metílico del ácido
quilaico (2).

Discusión
Estudios farmacológicos in vivo de ácido quilaico (1) y un conjunto de derivados utilizando
la ruta tópica nos permitió obtener una Estimación preliminar del potencial de estos
compuestos para trabajo más avanzado en animales y también investigación in vitro sobre
Sus mecanismos de acción. Tal conocimiento es fundamental si Los estudios clínicos se
realizarán en una etapa posterior. No obstante menos, el uso de dos agentes inflamatorios,
TPA y AA, tiene arrojó datos que proporcionan una idea de los niveles en los que El ácido
quilaico y sus derivados interfieren con la inflamación. cascada tory. [23] En cuanto a los
medicamentos de referencia utilizados, la indometacina es un potente inhibidor de la
ciclooxigenasa (COX), mientras que la nimesulida es bastante débil en este sentido. Sin
embargo, la indometacina era mucho más potente en las pruebas antiinflamatorias de lo
esperado de su capacidad para inhibir la COX, lo que sugiere que actúa en gran medida en
un etapa inicial en la cascada de eventos que conducen a la inflamación. Esto fue confirmado
por el hecho de que, en ensayos tópicos, similar para aquellos utilizados por nosotros, la
indometacina fue muy activa contra Inflamación inducida por TPA pero fue prácticamente
inactiva en el Modelo AA. En contraste, la nimesulida fue efectiva en este último modelo y
mostró poca o ninguna actividad contra la inflamación inducido por TPA. La inflamación se
desarrolla mucho más lentamente. cuando es inducido por TPA que cuando se usa AA,
presumiblemente debido al hecho de que TPA actúa principalmente como un activador de
proteínas quinasa C y NF-kB, promoviendo la expresión mejorada de enzimas
proinflamatorias como el óxido nítrico inducible syn-thase y COX-2. Por otro lado, la acción
de AA es más probablemente ejercido aguas abajo como precursor de inflamación
prostanoides. [17,19] Inhibición de AA o, más usualmente, inflamación inducida por TPA
mation ha sido demostrado en las últimas dos décadas por un cantidad de ácidos triterpénicos
pentacíclicos con urano, oleano y esqueletos lupanos. Algunos de estos exhibieron potentes
actividad en comparación con el anti sintético no esteroideo fármacos inflamatorios. [24–27]
Ya se habían observado informes anteriores que la actividad antiinflamatoria de los
triterpenoides depende en gran medida en el método utilizado para generar inflamación, con
un efecto más fuerte contra la inflamación inducida por TPA. [17] Además de- Además, una
investigación más reciente ha implicado la reducción de la liberación de un Número de
mediadores tempranos en la actividad de los productos naturales. contra la inflamación del
oído del ratón inducida por TPA. [23,28] Nuestro el estudio respalda los resultados anteriores
en el sentido de que la mayoría de nuestros triterpenoides fueron más activos en el modelo
TPA que contra la inflamación inducida por AA, lo que sugiere que pueden actuar en eventos
tempranos como la inhibición de NF-kB y / o Activación de COX-2. Un ejemplo
particularmente bien estudiado de un triterpenoide pentacíclico que ejerce su acción
antiinflamatoria por este mecanismo es el de a-amyrin, que parece actuar por suprimiendo la
expresión de COX-2 mediante la inhibición de ERK, p38 MAPK y PKCa, y bloqueo de la
activación de NF-kB. [28] Curiosamente, sin embargo, el ácido quilaico (1) también
demostró ser muy eficaz en el modelo AA. Aunque menos activo que el ácido quilaico, el
éster metílico (2), el diacetato (9) y el bis-hemisuccinato (10) fueron los únicos otros
derivados que exhibieron actividad significativa contra Inflamación inducida por AA. Esto
podría explicarse por el probable carácter profármaco de estos compuestos que podrían ser
hidrolizado in vivo para liberar ácido quilaico. Farmacocinética diferencias de estos
derivados relacionados con sus diferentes lipo- Filosidades y tasas de hidrólisis apuntan a la
posibilidad de modulando la actividad del ácido quilaico mediante modificaciones racionales
ción en el carboxilo C-28 y / o el secundario C-3 y C-16 funciones de alcohol La disminución
de la actividad biológica de 2 con respecto a 1 contra los ensayos de TPA y AA sugiere que
el grupo carboxilo debe ser libre para obtener un fuerte efecto antiinflamatorio Compuestos
7 y 3, 16a-hidroxihederagenina y sus el éster metílico, respectivamente, difiere del ácido
quilaico (1) y su éster metílico (2) en que el grupo aldehído C-23 se reduce a Una función
primaria del alcohol. Estos dos derivados reducido no solo fueron menos potentes que el
ácido quilaico en el modelo TPA,pero también prácticamente inactivo contra la inflamación
inducida por AAción Por lo tanto, la reoxidación metabólica para proporcionar los aldehídos.
No parece ser un proceso probable. Con oxidación de la aldehído a un grupo carboxilo, como
en 4a, alguna actividad es también retenido en el modelo TPA y perdido contra AA. El débil,
actividad estadísticamente no significativa de 4b contra TPA- la inflamación inducida es más
difícil de interpretar, ya que no solo es grupo aldehído perdido, pero además los dos alcohol
secundario los grupos se oxidan a las funciones de cetona. Lo anterior Los resultados parecen
sugerir que la presencia de un aldehído intacto grupo en C-23 favorece el anti tópico
aparentemente inusual actividad inflamatoria para los compuestos 1, 2, 9 y 10 en el Modelo
AA. En los compuestos 5 y 6, con el voluminoso butildim- grupo etilsililo unido al átomo de
oxígeno C-23, anti-yo La actividad inflamatoria queda completamente abolida. En este
momento nosotros solo se puede especular sobre un papel para el grupo carbonilo C-23 en
La inhibición de la inflamación inducida por AA. La actividad antiinflamatoria del
compuesto 8, con el El grupo aldehído enmascarado como una hidrazona es intrigante. Esta
compuesto no se ha informado antes y es el primero ejemplo de una hidrazona triterpénica
pentacíclica aldehídica. Eso fue tan activo como el ácido quilaico contra la inflamación
inducida por TPA ción, pero estaba inactivo en el modelo AA. Considerando lo último
observación, y también por motivos químicos, hidrólisis de La funcionalidad imino parece
poco probable. Sin embargo, en el Modelo TPA, el voluminoso grupo 4-metil-1-
piperazinilimino es claramente bien tolerado. Por lo tanto, modificaciones análogas de ácido
quilaico con otros reactivos formadores de imina podrían descubrir relaciones útiles entre
estructura y actividad.
Es importante tener en cuenta que en un estudio anterior demostramos En primer lugar, 1, 2
y 4b mostraron antinoccio dependiente de la dosis. actividades de acogida en dos modelos
térmicos murinos (movimiento de cola y prueba de placa caliente). [29] Estos efectos fueron
similares a los producidos. por el fármaco de referencia (sal de sodio ibuprofeno). El hecho
de que estos compuestos mostraron antiinflamatorios y analgésicos Los efectos podrían
deberse a la inhibición de la COX. Por último, queremos enfatizar que después de realizar el
análisis estadístico de la resultados se puede concluir que 1 es significativamente más activo
como antiinflamatorio que todos sus derivados contra la inflamación mación inducida por
AA y TPA, con la excepción de 8, que mostró un efecto contra TPA que no fue
estadísticamente diferente del efecto de 1.

Conclusiones
Este estudio es el primero en demostrar que el ácido quilaico es un inhibidor altamente
efectivo de la inflamación in vivo inducida por Actividad antiinflamatoria del ácido quilaico
Maité Rodríguez-Díaz et al. 723
Aplicación tópica de TPA o AA. Su aparente dual el modo de acción es inusual y puede
resultar de alguna relevancia clínica, y su efecto máximo observado contra La inflamación
inducida por AA es particularmente atractiva cuando en comparación con el medicamento
de referencia nimesulida. Alguna derivación Las dosis de ácido quilaico también son activas,
aunque generalmente con un sesgo hacia la inflamación inducida por TPA en lugar de AA.
La aparición de un grupo aldehído libre en el C-4 parece ser un requisito para la actividad en
el modelo AA y el C-28 libre el grupo carboxilo también parece ser importante para ambos
ensayos (contra AA y TPA). Derivatización del grupo aldehído a la hidrazona formada con
4-metil-1-aminopiperazina conduce a un compuesto que es tan activo como el ácido quilaico
en el TPA ensayo, pero inactivo contra la inflamación inducida por AA. Los resultados de
este estudio de detección junto con la disponibilidad y bajo costo de quillaja saponina, la
fuente más conocida de ácido quilaico, son un estímulo para futuros estudios de novela
potenciales compuestos antiinflamatorios basados en este natural producto.