Evaluación de La Actividad Antimicrobiana de Aceites Esenciales e Hidrosoles de Rosmarinus

Evaluación de la actividad antimicrobiana de aceites esenciales e hidrosoles de Rosmarinus
officinalis y Taraxacum officinale frente a microorganismos patógenos
ADRIANA MARCELA RAMOS PENCUE

TRABAJO DE GRADO
Presentado como requisito para optar al título de

MICROBIÓLOGO INDUSTRIAL
PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA

FACULTAD DE CIENCIAS BÁSICAS
BACTERIOLOGÍA-MICROBIOLOGÍA INDUSTRIAL
Bogotá D.C. Colombia
Mayo de 2013
1
___________________________
MARIA CONCEPCIÓN PUERTA PhD.
Decana Académica Facultad de Ciencias
______________________________
JANNETH ARIAS
Directora Carrera de Microbiología
Facultad de Ciencias
2
_______________________ ________________
Luis Gonzalo Sequeda M.Sc Jorge Robles PhD
Director Par Académico
3
NOTA DE ADVERTENCIA
Artículo 23 de la Resolución No. 13 de Julio de 1994
“La Universidad no se hace responsable por los conceptos emitidos por sus alumnos en sus
trabajos de tesis. Sólo velará por que no se publique nada contrario al dogma y a la moral
católica y por que las tesis no contengan ataques personales contra persona alguna, antes bien
se vea en ellas el anhelo de buscar la verdad y la justicia”.
4
DEDICATORIA
Tal vez aún me falte mucho camino por recorrer, tantas cosas que aprender pero sobre todo
valoro lo que significan los momentos agradables y los no tan agradables, que han hecho
de esta vida universitaria un espacio de desarrollo holístico en el que se aprende a valorar
cada persona, cada sentimiento y cada situación que paso, buena o no tan buena, y
reflexionar sobre lo que se ha realizado para sacar una muy buena enseñanza de todo.
Por los momentos inolvidables, dedico este trabajo de grado a mi familia que aunque no ha
estado muy presente cada día conmigo, sabe que somos una unidad y que pese a las
dificultades, unidos enfrentamos las adversidades y salimos adelante.
A mi madrina, quien ha sido como mi madre, una persona incondicional, siempre está para dar
una voz de aliento, esperanzas y para preocuparse por mí.
Mis amigos que no me han desamparado que siempre han sido mi apoyo, en los que confío y a
los que quiero mucho, a Moni, Diani, Aleja, Lau que han sido las más cercanas en estos
momentos, y a los demás que siempre me reciben con un abrazo, confiando en mí y
apreciándome como soy.
A mi novio Ivan quien durante este tiempo con una sonrisa y una muy buena actitud hace que
todo sea una aventura, conociendo conmigo que cada dificultad y cada oportunidad es
parte del crecimiento personal; enseñándome que la paciencia y la inteligencia emocional
son valores que hacen de cada uno una persona reflexiva.
Adriana Marcela Ramos Pencue

Colombiana con pasión
5
AGRADECIMIENTOS
Agradezco a Dios por permitirme desarrollar mis capacidades por darme la vida y la fuerza
para seguir aun cuando los momentos fueron difíciles, a mi familia quien con esfuerzo logró
brindarme los recursos necesarios para asistir a las actividades académicas que debo enfrentar
y a las personas incondicionales que han estado apoyándome siempre y con una sonrisa me han
hecho sentir que vale la pena vivir en un mundo de caos porque es allí donde se valora lo que se
tiene, en medio de las necesidades.
Agradezco al proyecto de productos fitoterapéuticos, por permitirme ser parte de ese inmenso
conocimiento generado bajo el apoyo de COLCIENCIAS
Agradezco a la Doctora María Claudia Campos Pinilla y a su equipo de Laboratorio, por la

colaboración en este proceso
Al laboratorio de Química Microbiológica, del departamento de química, por brindar apoyo en

cuanto a recursos físicos y técnicos a su alcance.
A la profesora Andrea Aguirre quien me brindo ayuda en cuanto estuvo en sus manos
6
TABLA DE CONTENIDO
No. Pág
1. Introducción 11
2. Planteamiento y justificación 12
3. Marco Teórico 13
3.1 Generalidades del metabolismo en plantas 13
3.1.1 Metabolismo Primario
3.1.2 Metabolismo Secundario
3.1.3 Defensa en plantas
3.2 Antimicrobianos 15
3.2.1 Generalidades
3.2.2 Estructuras y formas de acción
3.2.3 De la resistencia de los microorganismos a los antibióticos
3.3 Plantas con potencial antimicrobiano 18
3.4 Sobre la obtención de aceites esenciales 18
3.4.1 Definiciones
3.4.2 Composición de un aceite esencial
3.5 Sobre las plantas a evaluar 21
3.5.1 Romero, Rosmarinus officinalis
3.5.2 Diente de león, Taraxacum officinale
3.6 De los microorganismos a evaluar 21
3.6.1 Escherichia coli
3.6.2 Pseudomonas aeruginosa
3.6.3 Bacillus cereus
3.6.4 Staphylococcus aureus
4. Objetivos 23
5. Metodología 23
6. Análisis Estadístico 25
7. Resultados 25
8. Discusión 28
9. Conclusiones 29
10. Recomendaciones 30
11. Referencias Bibliográficas 30
12. Anexos 35
7
ÍNDICE DE FIGURAS
No. Pág
Figura 1. Esquema de producción de aceites esenciales a nivel industrial. 19
Figura 2. Comparación de cromatogramas con diclorometano y hexano. 27
8
ÍNDICE DE TABLAS
No. Pág
Tabla 1. Comparación de contenido de aceites esenciales en diferentes 20

órganos respecto a las familias de vegetales.
Tabla 2. Resultados comparativos entre hidrosol de romero y aceite 26
esencial de romero
9
RESUMEN
Este trabajo se realizó amparado bajo el proyecto: Desarrollo de alternativas de conservación en
productos fitoterapéuticos 100% naturales, financiado por COLCIENCIAS, con el fin de
observar y determinar el efecto antimicrobiano de aceites esenciales e hidrosoles a partir de dos
especies vegetales: Rosmarinus officinalis y Taraxacum officinale contra Escherichia coli,
Bacillus cereus, Staphylococcus aureus y Pseudomonas aeruginosa, proporcionadas por el
cepario de bacterias de la facultad de Ciencias de Pontificia Universidad Javeriana.
Rosmarinus officinalis o comúnmente llamado romero, es una planta ampliamente distribuida en

las tierras del mediterráneo, Turquía y en el continente Americano. Los aceites esenciales de esta
planta han sido investigados, tanto su actividad antimicrobiana como antioxidante, sin embargo
existe un subproducto derivado de la obtención del aceite esencial por hidrodestilación, sobre el
cual hay gran interés, el hidrosol. El diente de león es una planta que al igual que el romero, tiene
amplia distribución, y posee diversos usos a nivel de medicina tradicional, con diversas
aplicaciones tanto gastronómicas como medicinales. El objetivo de este trabajo fue la evaluación
antimicrobiana de los hidrosoles y aceites esenciales de Rosmarinus officinalis y de Taraxacum
officinale contra 4 bacterias patógenas: Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Pseudomonas
aeruginosa y Bacillus cereus. El aceite esencial obtenido del romero, se extrajo a partir de hojas
de la planta durante 3 horas mediante el uso de un aparato de Clevenger, y el hidrosol como
subproducto de la destilación; para diente de león se realizó el mismo procedimiento por
hidrodestilación por 3 horas encontrando únicamente hidrosol. Se realizó la evaluación de
densidad como parámetro donde la densidad del aceite esencial de romero fue de 0.881g/mL ±
0.016, la densidad del hidrosol de romero fue de 0.9955g/mL ± 0.00098 y la densidad del
hidrosol de diente de león fue de 0.9953g/mL ± 0.00065, y el rendimiento en cuanto a la
obtención del aceite esencial de Rosmarinus officinalis fue de 0.594 mL/g± 0.04.
Complementaria a estas evaluaciones, se realizó la técnica de extracción por microgota, mediante
la cual se emplearon 150 µL de hexano y de diclorometano a temperatura ambiente de 20°C y
3000 rpm en 5 mL de hidrosol, y a través de un cromatógrafo de gases acoplado a masas, se
determinaron los compuestos presentes en el hidrosol que se encuentran en el solvente. Para la
evaluación de la actividad antimicrobiana tanto del aceite esencial como de los hidrosoles, se
realizó por difusión de disco en agar, de 3 concentraciones 100ppm, 10ppm y 1 ppm, se realizó la
lectura por halos de inhibición. La actividad antimicrobiana no se evidenció con las
concentraciones evaluadas.
PALABRAS CLAVES: Rosmarinus officinalis, Taraxacum officinale, Actividad

antimicrobiana, hidrodestilación, CMI, CMT
10
1. INTRODUCCIÓN
La medicina tradicional hace referencia al uso de conocimientos ancestrales para mantener la

salud, es decir que los conocimientos sobre los beneficios de las plantas son tan antiguos
como el hombre mismo. En la actualidad los avances científicos y la posibilidad de analizar
los componentes presentes en las plantas y demás seres vivos, nos acercan a descubrir
soluciones a problemas en el campo de la salud o de aplicación industrial, y teniendo en
cuenta la diversidad natural presente en el continente americano se da el impulso hacia la
investigación sobre todo en plantas como alternativas medicinales.
En regiones tropicales y sub tropicales, o en los países denominados del tercer mundo, la
prevalencia de las enfermedades de tipo infeccioso son mayores, y los agentes causales o
etiológicos son microorganismos como bacterias o párasitos, por ejemplo la tuberculosis
pulmonar o extrapulmonar, meningitis, o malaria (OMS, 2012). Dichas enfermedades
infecciosas han comenzado a ser mucho mas difíciles de combatir debido a la naturaleza del
agente que mediante mecanismos genéticos, ha cambiado para hacerse resistente a los
tratamientos con antibióticos de rutina. (Torres, 2002)
A medida que aumenta la población en una región, es más difícil el acceso a servicios de
salud pública integral, y es necesario buscar alternativas de atención primaria para suplir
dicho déficit. En adición a lo anterior, se suma la dificultad de tratamiento frente a
enfermedades de tipo infeccioso que han manifestado variaciones y mutaciones
imposibilitando el tratamiento, y por ello se abre una oportunidad para el uso de alternativas
naturales para contrarrestar este fenómeno ya que los productos de origen natural son
complejos y tienen varias estratégias para combatir dichos agentes infecciosos.
Microorganismos como Staphylococcus aureus, quién frecuentemente está involucrado en

infecciones de importancia, han sido tratadas con antibióticos de uso común como la
meticilina; y según la Organización Mundial de la Salud (2013), hay preocupación porque un
alto porcentaje de casos presentan resistencia a este antibiótico generando cepas que
dificultan el tratamiento de la infección, prolongando la enfermedad y por lo tanto el
tratamiento.
Por otra parte, productos como: cosméticos y alimentos, pueden actuar como vehículos o
fuente de nutrientes para microorganismos, generando riesgos para la comercialización y el
posterior consumo de dichos productos (Kang et al 2013). Tanto los alimentos como los
productos farmacéuticos se rigen por normas nacionales dictadas por el INVIMA (Instituto
Nacional de Vigilancia de Medicamentos y Alimentos) e internacionales como lo son
CODEX Alimentarius y Farmacopeas. Compuestos como parabenos (Watanabe et al, 2013),
benzoatos y triclosan (Orvos et al, 2002; Tutarazako et al, 2004; Dusalt et al, 2008) son de
11
origen sintético, y buscan ser reemplazados ya que se han encontrado evidencias científicas
de su carácter perjudicial para la salud, sin embargo existe la posibilidad de emplear otro tipo
de conservantes como compuestos naturales derivados de plantas que no causen perjuicios a
la salud de los seres vivos.
Algunos conservantes utilizados en las industrias tanto de alimentos como de cosméticos

poseen características nocivas para la salud ocasionando dermatitis foto-alérgica causada por
el uso de productos de cuidado personal (PCP) (Biesterbos et al, 2013) como: cremas solares,
en las que se encuentran bencenofenonas y cinamatos; o parabenos que están relacionados
con cáncer de seno, y unión a receptores de estrógenos y andrógenos, que generan cambios
hormonales. Los parabenos se emplean en ambas industrias, tanto en cosméticos como en
alimentos. Dichos compuestos son incorporados por piel, en el caso de los productos
cosméticos, se eliminan en orina parcialmente (Watanabe et al, 2013), o el uso combinado de
colorantes y preservantes como el benzoato de sodio puede generar hiperactividad y cambios
de comportamiento en niños (El-Wahab et al, 2013).
Debido a lo anterior hay interés por el desarrollo de conservantes naturales para ser usados en
industrias como alimentos y el desarrollo de fitoterapéuticos, para industria farmacéutica.
Este proyecto tiene como fin evaluar actividad antimicrobiana de los aceites esenciales e
hidrosoles de romero y diente de león sobre Escherichia coli, Staphylococcus aureus,
Pseudomonas aeruginosa y Bacillus cereus.
2. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA – JUSTIFICACIÓN
Algunos conservantes utilizados en las industrias tanto de alimentos como de cosméticos poseen
características nocivas para la salud ocasionanado dermatitis foto-alérgica en productos de
cuidado personal (PCPs), además que algunos de estos compuestos poseen metales pesados como
mercurio o cadmio que generan neurotoxicidad (Biesterbos et al. 2013). Por otra parte, los
parabenos tienen un uso extendido tanto para cosméticos como para alimentos, debido a su
eficiente acción antimicrobiana y a su fácil eliminación por orina luego de su ingestión, sin
embargo estudios como los realizados por Watanabe et al. (2013) indica una relación de este
conservante con el cáncer de seno, por la unión a receptores de estrógenos. En alimentos, el uso
combinado de colorantes y preservantes como el benzoato de sodio puede generar hiperactividad
y cambios de comportamiento en niños (El-Wahab et al, 2013). Y a nivel de salud, el fenómeno
de la resistencia de los microorganismos a antibióticos usados constantemente para el tratamiento
de infecciones (OMS, 2012).
Con base en los inconvenientes anteriores, se genera una oportunidad para la búsqueda de
ingredientes de origen natural para la conservación de productos tanto en las industrias
12
farmacéuticas y de cosméticos como de alimentos para encontrar alternativas naturales,
económicas y confiables de reemplazo de ingredientes sintéticos e igualmente para el tratamiento
de infecciones provocadas por resistencia microbiana. Existen numerosas publicaciones con
resultados importantes de actividad antimicrobiana de tipo bactericida, fungicida y actividad
antioxidante en distintos extractos vegetales (Sagdic et al 2003; Hu et al 2005; Bradley et el
2006; Celikas et al 2007; Oral et al 2008; Zaovali et al 2010; Okoh et al 2010; Jiang et al 2011;
Astafieva et al 2012; Varona et al 2013; Haddouchi et al 2013), en adición a estas utilidades, se le
da un uso de conservante natural para la productos como alimentos o cosméticos por dichas
capacidades (Galbis, 2004). Otra de las oportunidades se resalta, con relación al desarrollo
nacional o regional se encuentra el desarrollo abierto y estandarizado de producción y
comercialización de aceites esenciales e hidrosoles, con base en la riqueza en flora y fauna que
existe en el país.
Rosmarinus officinalis (Romero) es una planta de amplia distribución geográfica, de la que se han
realizado estudios sobre actividad antioxidante y antimicrobiana, tanto de los aceites esenciales y
extracto etanólico, en diversas partes del mundo, como de hidrosoles (Ojeda et al 2013). Aunque
los hidrosoles, que son un subproducto de la obtención de aceites esenciales por hidrodestilación,
tienen actividad antimicrobiana (Sagdic, 2003 y 2013), pero se presentan reportes en relación a
concentraciones bajas, lo anterior aumenta el interés sobre el estudio de la actividad
antimicrobiana de este subproducto. De otro lado, Taraxacum officinale (Diente de león), es una
planta de amplia distribción geográfica, crece comúnmente en pastizales, ya sea en el área rural o
urbana y según estudios realizados por Bylka en 2010, posee aceite esencial a partir de flores, sin
embargo, no se encuentran reportes de hojas, y su actividad antimicrobiana se ha demostrado
sobre ese aceite esencial (Bylka et al 2010), dando lugar a una inquietud sobre el hidrosol
obtenido por hidrodestilación sobre su actividad antimicrobiana.
Este trabajo tiene como fin, la evaluación de la actividad antimicrobiana de aceites esenciales e
hidrosoles de Rosmarinus officinalis y Taraxacum officinale a partir de hojas, contra bacterias
patógenas como Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa y Bacillus
cereus, con el fin de conocer la capacidad inhibitoria que poseen estos extractos a
concentraciones determinadas que generen conocimiento científico sobre estas especies y en un
futuro sean una alternativa para aditivos naturales en industrias de alimentos, farmacéutica y de
cosméticos asi como en el tratamiento de infecciones, contribuyendo al desarrollo regional.
3. MARCO TEÓRICO
3.1 GENERALIDADES SOBRE METABOLISMO EN PLANTAS
3.1.1 Metabolitos Primarios

Los seres vivos, están constituidos sobre una unidad fundamental que es la célula, dicha
estructura cumple con funciones básicas como: absorción, respiración, reproducción y terminan
13
su ciclo de vida con la muerte celular, que significa que se pierden las anteriores funciones. El
metabolismo es el proceso completo a través del cual los seres vivos adquieren y utilizan energía
libre para realizar diversas funciones básicas. (Melo, 2007)
Los animales, las plantas, los microorganismos y demás organismos poseen un metabolismo
primario necesario para cumplir con las funciones básicas de: crecimiento, desarrollo de órganos,
respiración, reproducción entre otros, y para ello emplean los nutrientes de los alimentos o suelo
en el caso de las plantas. Dentro de este metabolismo se reconocen sustancias o compuestos que
sin ellos no podría funcionar una célula, por ejemplo en vegetales, la ausencia de la ruta
metabólica de la fotosíntesis ocasionaría la muerte del espécimen, debido a que no sería posible
la formación de compuestos de tipo carbonado, orgánico, necesario para estructuras y funciones
básicas. (Sadava, 2008)
3.1.2 Metabolismo Secundario

Específicamente para las plantas, el metabolismo primario comprende la producción de
carbohidratos a partir de carbono fijado por fotosíntesis o para la formación de estructuras de
sostén, la producción de ácidos grasos y ácidos nucleicos necesarios para la división celular.
Como indica la palabra primario se refiere a los componentes necesarios para la vida (Bonilla
2011), y en contraste se encuentran los metabolítos secundarios provenientes del metabolismo
secundario, es decir, no fundamental en la vida del organismo, de manera que luego de los
procesos de crecimiento, se llevan a cabo procesos adicionales de los que se generan compuestos
usados como ventajas frente a los demás seres en el ecosistema para su supervivencia en el
entorno, y algunos son de interés en el uso de productos naturales (Taiz, 2006).
En un ecosistema, coexisten mediante diferentes relaciones interespecíficas: microorganismos,

insectos, mamíferos y plantas; los cuales por relaciones de predación en el caso de algunos
insectos y animales herbívoros al atacar un individuo vegetal, desencadenan una serie de
reacciones dentro de la planta en respuesta a esos estímulo y si bien los cambios
medioambientales y nutricionales generan de igual forma una adaptación a dichas condiciones,
con la formación de compuestos secundarios, es mucho mas probable que les permitan sobrevivir
a las plantas frente a ataqes contra su supervivencia, ya sea por predadores o por cambios en el
entorno (Anaya, 2003).
Los metabolitos secundarios vegetales, pueden dividirse en tres grupos químicamente diferentes:
Terpenos, por la unión de varias unidades de isoprenos por la via del ácido mevalónico luego de
degradación de ácidos grasos; fenoles, derivado de la degradación de carbohidratos por la via del
ácido shikimico, y compuestos que contienen nitrógeno como los alcaloides, derivado de la
degradación de aminoácidos (Taiz, 2006).
Los metabolitos secundarios, se creía que no cumplían ninguna función, sin embargo se han
identificado que protegen a las plantas de la ingestión por herbívoros y de la infección de
patógenos microbianos, de otro lado, contribuyen a la polinización, dispersión de semillas y
14
como factores de competencia planta-planta. (Taiz, 2006) Dichos metabolitos, difieren en cuanto
a su distribución en el reino vegetal ya que no están presentes en todos los organismos, solamente
los metabolitos primarios quienes son necesarios para el funcionamiento básico del organismo es
conservado en las plantas (Celis et al y Sadava, 2008).
3.1.3 Defensa en plantas

En la defensa de las plantas se encuentran metabolitos secundarios, estos compuestos son
derivados de compuestos menos complejos, sin embargo necesarios para el desarrollo de las
plantas como los metabolitos primarios; como dichos compuestos no eran tóxicos para la propia
planta y su formación no demandaba mayor gasto de energía, la producción no era extenuante, de
modo que plantas con estas características escogidas por selección natural, presentaban una
ventaja reproductiva frente a las que no poseían este mecanismo de defensa (Taiz, 2006).
Los animales herbívoros son los principales responsables de pérdidas de cosechas, ya sean
insectos o mamíferos, sin embargo la evolución trajo consigo un desarrollo de sustancias que
favorecen la subsistencia del vegetal, debido a su incapacidad para movilizarse, algunos
compuestos son de sabor desagradable que alejan los depredadores, o de alta viscosidad que
impiden que los insectos avancen por la planta evitando la destrucción total del individuo. En
algunos casos estas propiedades de protección son atribuidas a aceites esenciales o gomas
producidos por la planta y que pueden ser aprovechados por el ingenio humano para industrias o
aplicaciones medicinales (Celis et al, 2008).
La competencia es una relación que se da entre individuos de diferente especie y tiene lugar en un
ecosistema diverso, de allí la competencia por luz, y nutrientes de los componentes bióticos, en
plantas, por ejemplo la familia de las Piperaceas sintetizan productos naturales o metabolitos
secundarios que tienen acción directa sobre el crecimiento de otras plantas, algunas de interés
agrícola por ser competencia que retardan cultivos agrícolas de interés; esta propiedad inhibitoria
es denominada relación alelopática (Celis et al, 2008), ya que las plantas adyacentes a las
siembras, limítan los nutrientes en suelo, por lo que los cultivos no absorben adecuadamente los
nutrientes necesarios para la formación de frutas, hortalizas, raíces o tubérculos que generan
detrimento en la cosecha en cuanto a tamaño del fruto o al desarrollo de la planta de interés
(Anaya, 2003).
3.2. ANTIMICROBIANOS
3.2.1 Generalidades
El término antimicrobiano, se refiere a cualquier agente que interfiera con el crecimiento y la
actividad de los microorganismos, y dependiendo del grupo de microorganismos sobre los que se
ejerza control recibe un nombre específico, asi por ejemplo para las bacterias será bactericida y
para hongos, fungicida. (Montoya, 2008).
15
Los mecanismos de acción de dichos agentes son diversos, entre los cuales se encuentra la acción
bactericida, entendida como la acción mediante la cual se eliminan los microorganismos de una
matriz, y en contraste, el término bacteriostático, se refiere únicamente a la supresión del
crecimiento y desarrollo bacteriano, de tal modo que mientras el agente antimicrobiano este en
contacto con el microorganismo se impide la proliferación. (Montoya, 2008).
3.2.2 Formas de acción

Existen diversas clasificaciones de los compuestos que tienen acción inhibitoria sobre bacterias y
otros microorganismos, es decir antibióticos, que se clasifican con base en características
comunes entre ellos: fuente de obtención, espectro o capacidad de acción, composición química,
familias de antibióticos o por carga eléctrica. Los compuestos bactericidas, que inhiben el
crecimiento y acaban con la población de microorganismos, pueden ser de dos clases, los que son
activos solamente en fase activa de multiplicación bacteriana (crecimiento exponencial), como
las penicilinas, cefalosporinas, rifamicinas, fosfomicinas, y las que son activas igualmente sobre
bacterias con metabolismo lento como los aminosidos y polimixina-colistina. (De la rosa, 2003)
Si se dividen los antimicrobianos por fuente encontramos, hongos y bacterias, dentro de los
hongos algunos ejemplos son la penicilina, producida por Penicilium sp., fumagilina, producida
por Aspergillus fumigatus o bacteriana por especies de Bacillus sp. como la bacitracina y
polimixina-colistina, Otro importante grupo de microorganismos productores de este tipo de
compuestos son los actinomicetos, quienes producen una gran cantidad como por ejemplo la
estreptomicina (Linares, 2002).
Si la clasificación se refiere al lugar de ataque sobre el microorganismo, existen antibióticos que

inhiben por diferentes mecanismos como los siguientes: inhiben la síntesis de los mucopéptidos
de la pared celular bacteriana, como las penicilinas, cefalosporinas, bacitracina, novobiocina,
vancomicina. Si alteran la membrana celular citoplasmática bacteriana, está la anfotericina,
bacitracina, canidina, colicina, polimixinas entre otras. Existen antibióticos que inhiben los
mecanismos de replicación y transcripción del ARN, como el cloranfenicol, gentamicina,
novobiocina, entre otros, sin embargo, por otra parte se encuentran bacterias y microorganismos
que poseen ADN, y algunos antibióticos atacan la replicación y transcripción de éstos, como la
novobiocina, actidione, polofiromixina. Cuando se atacan específicamente funciones como la
síntesis de proteínas, se encuentran las tetraciclinas, streptomicina, spectinomicina, los
antimicrobianos que actuan inhibiendo la respiración celular, como la pioacianina o que inhiben
la fosforilación oxidativa bacteriana como la rutamicina, colicina; sin embargo como es de
observarse hay varios compuestos que tienen diferentes formas de acción como la novobiocina o
la bacitracina y están en varios de los grupos de clasificación. (De la Rosa, 2003)
Las acciones que poseen los antimicrobianos, lo deben a posiciones y componentes estructurales
que le permiten acceder al microorganismo, y algunos se agrupan por especificidad con
diferentes formas químicas como las siguientes: Los betalactámicos, en las que se incluyen
penicilinas, cefalosporinas, cefamicinas, carbapenémicos y monobactamas, los cuales comparten
16
en su estructura, la presencia de un enlace betalactamico incorporado a un anillo central de 4 ß-
Lactam, donde su principal modo de acción es la inhibición de síntesis de la pared celular.
Anillos adicionales a la estructura o grupos agregados al anillo ß-Lactam determina si el agente
es penicilina, cefem, carbapenem, o monobactam. (Koneman 2006).
Por otra parte se encuentran los aminoglucósidos, entre los que encontramos la amikacina,
netilmicina, tobramicina, gentamicina, estreptomicina y kanamicina, quienes están constituidos
por dos o más aminoazúcares unidos por enlaces glucosidicos a un nucleo de hexosa y se
diferencian por los amioazúcares unidos al núcleo de hexosa (Linares, 2002). Las quinolonas y
fluorquinolonas, son un grupo de antibióticos que poseen un grupo carboxilo en la posición 3 del
anillo básico, un sustituyente fluorinado en la posición 8 y muchos tienen un grupo piperazina en
la posición 7; algunos ejemplos de estos antimicrobianos son ácido nalidixico, ácido pipemídico,
acido oxonílico, en cuanto a quinolonas y para las fluorquinolonas, encontramos ciprofloxacino,
norfloxacino, enoxacino aminofloxacino entre otros que no han sido aprobados por la FDA
(Linares, 2002).
Los glucopéptidos son otro grupo de antimicrobianos entre los que encontramos la vancomicina,
y el teicoplanin. Por otra parte se encuentran las tetraciclinas, que son derivados de la
naftacenocarboxamida policíclica. El núclo de la molécula esta formada por 4 anillos carboxílicos
y cada miembro difiere según la naturaleza de sus sutituyentes, es importante tener en cuenta que
este tipo de antimicrobianos han cambiado su potencia y espectro de acción, sobre lo cuál se
encuentran diferentes antibióticos pertenecientes a esta familia que son de diversas generaciones,
por ello, compuestos como la tetraciclina, clortetraciclina y oxitetraciclina son de primera
generación. Otra de las familias de importancia se encuentra la de los macrólidos, que posee un
anillo de lactona de muchos miembros al que se unen uno o más deoxiazúcares y ejemplos de
este tipo de compuestos se encuentran la metimicina, azitromicina, eritroicina y oleandomicina,
entre otros (Linares 2002).
A través del desarrollo de la industria farmacéutica, se han generado antibióticos a partir de los
primeros ensayos como el realizado por Alexander Fleming, dando lugar a la primera generación
de antibióticos. El término generaciones es ampliamente usado en la industria farmacéutica en
cuanto a antibióticos se refiere, para resaltar las ventajas de los nuevos antibióticos frente a los
anteriores en orden de aparición; por ejemplo, las cefalosporinas de segunda generación
aumentan la actividad sobre los estafilococos, las cefalosporinas de tercera generación aumentan
la actividad frente a microorganismos Gram negativos y las cefalosporinas de cuarta generación
pueden poseer actividad antianaerobia y frente a Pseudomonas aeruginosa.
3.2.3 De la resistencia de los microorganismos a los antibióticos

Los microorganismos poseen diversos mecanismos naturales que les permiten resistir a las
condiciones de su entorno, a lo que se denomina resistencia intrínseca o natural, dicha resistencia
es conservada entre especies de la misma familia, asi por ejemplo es de saberse que la
Pseudomonas es resistente a la penicilina o a la vancomicina. Sin embargo, en adicion a lo
17
anterior, los microorganismos son sensibles a otro tipo de antibióticos, que evita su
multiplicación o que los elimina por completo, de modo que se dieron mutaciones a nivel
genético, y se desarrollaron microorgaismos mutagenicos con capacidad de crecimiento en
presencia de los antimicrobianos que antes eran tóxicos para ellos, a esta resistencia se le
denomina resistencia adquirida. (Forbes, 2009).
Existen diversas vías de resistencia, las siguientes son las frecuentes en cuanto a resistencia
enzimática:
1. Degradacion enzimática o medificación del agente antimicrobiano

2. Disminución de la captación o la acumulación del agente antimicrobiano
3. Alteración del sitio de acción del antimicrobiano
4. Evación de las consecuencias del efecto antimicrobiano
5. Desconexión de las interacciones agente – sitio de acción y de los efectos resultantes
sobre el metabolismo bacteriano
6. Cualquier combinación de los anteriores mecanismos
(Forbes, 2009)
3.3 PLANTAS CON POTENCIAL ANTIMICROBIANO

Estudios llevados a cabo en Turquía (Sagdic et al 2003, 2013) hacen referencia de plantas como
la lavanda, que ha mostrado efectividad contra la adherencia de E. coli O157:H7 que es un
conocido microorganismo patógeno con un impacto importante sobre la salud de los seres
humanos a nivel mundial, debido a que es el agente etiológico causante de intoxicación
alimentaria por la producción de verotoxina, generando una infección enterohemorrágica, que
ocasionalmente produce falla renal. Recientes estudios como el realizado en Argelia, indicó que
plantas del genero Ruta, y sus aceites esenciales han tenido actividad antimicrobiana tanto contra
bacterias como contra hongos (Haddouchi et al 2013).
Las plantas como orégano, tomillo, laurel, romero, pimienta o azafrán usadas como condimentos
poseen compuestos que son de interés, como ácidos orgánicos o aceites esenciales, que
proporcionan un agradable sabor y aroma a los alimentos. Dentro de la familia de las Lamiaceas
se encuentran especies como el romero (Rosmarinus offcinalis), el orégano (Origanum vulgare) y
el tomillo (Thymus vulgaris) que son de interés y se han evaluado sus capacidades tanto
antimicrobianas como antioxidantes (Celikas, 2007; Jamshidi, 2009).
3.4. SOBRE LA OBTENCIÓN DE ACEITES ESENCIALES

3.4.1. Definiciones
Hidrodestilación, método de separación químco-físico, en el que el material vegetal, su estado
puede ser molido, cortado, entero o en diferentes combinaciones, está en contacto con el agua, en
el que el uso de vapor de agua saturado a presión atmosférica producido luego de un
calentamiento hasta el cambio de estado del agua, se usa para arrastrar el aceite proveniente del
18
material, debido a su comportamiento volátil en las condiciones de temperatura usadas, donde el
generador de calor no hace parte del recipiente donde se almacena la materia prima (Cerpa 2007).
Figura 1. Esquema industrial general de la producción de aceites esenciales (Tomado de Cerpa

2007). En el que se evidencia el sistema de funcionamiento en una industria, mostrando que a
escala de laboratorio se tienen proporciones diferentes; sin embargo es el mismo principo de
acción del método de extracción de aceites esenciales.
Arrastre por vapor, se llama al proceso de extracción de aceites esenciales mediante el cual vapor
de agua sobrecalentado se inyecta a flujo constante y su presión es superior la atmosférica; sin
embargo el vapor que fluye y entra en contacto con el material está presión atmosférica, que es la
presión fuera del equipo principal, es decir, a diferencia de la hidrodestilación, el vapor de agua
entra por un desprendimientmo lateral del recipiente que contiene el material vegetal y realiza la
extracción de los aceites volátiles (Cerpa 2007).
Hidrosol, en química significa dilución en agua, del latin hydro que significa agua y sol que
significa solución; en ocasiones es usado como sinónimo del hidrolato (Catty 2001), sin embargo
para este trabajo se tomó como: sub-producto de la obtención del aceite esencial por el método de
hidrodestilación, es el vapor de agua condensado y recogido al final junto con el aceite esencial,
es decir es la fracción acuosa de la obtención del aceite esencial.
Hidrolato, sub producto, de la ontencion de aceite esencia, también llamado té; es decir, la
fracción de agua que está en contacto con el material vegetal sin evaporar (Catty 2001).
Agua aromática, Tambien llamado hidrolato, es la fracción que esta en contacto con el material
vegetal luego de la obtención del aceite esencial y de hidrosol (Catty 2001).
19
3.4.1. Composición de un aceite esencial
Los aceites esenciales e hidrosoles son mezclas homogéneas de compuestos químicos orgánicos,
provenientes de una misma familia química los terpenoides (Parry, 1921; Muñoz 2002, Peter,
2004). Estos terpenoides tienen la propiedad en común de generar diversos aromas, en
condiciones ambientales son líquidos menos densos que el agua, pero más viscosos que esta,
poseen un color amarillo o transparente (Günther, 1948; Teushcer et al., 2005), Los terpenoides
son una familia de hidrocarburos oxigenados o no, con uno o varios anillos insaturados y
formados de la condensación de isoprenos, donde se encuentran 10 o más carbonos en su
estructura. Son inflamables, no tóxicos, inocuos mientras la dosis suministrada no supere los
límites de toxicidad.
Por otro lado los aceites esenciales son mezclas de compuestos complejos alrededor de 20 a 60
componentes en diferentes proporciones (Cerpa, 2007). Y según Bakkali F, et al (2008), por
ejemplo, carvacrol (30%) y timol (27%) son los componentes principales del aceite esencial de
Origanum compactum, linalol (68%) del aceite esencial de Coriandrum sativum, 1-γβ-thuyone
(57%) y alcanfor (24%) de aceite esencial de la Artemisia herba-alba, 1,8-cineol (50%) del aceite
esencial de Cinnamomum camphora, one-felandreno (36%) y limoneno (31%) de la hoja y
carvona (58%) y limoneno (37%) del aceite esencial de las semillas de Anethum graveolens,
mentol (59%) y mentona (19%) de aceite esencial de Mentha piperita (Mentha =· Piperita)
(Bakkali et al 2008). De modo que, son diversos los compuestos y sus proporciones dentro de
estas especies vegetales.
Los aceites esenciales, son sensibles y pueden sufrir degradación química en presencia de la luz
solar, aire, calor, ácidos y álcalis fuerte, son solubles en disolventes orgánicos comunes y casi
inmiscibles en disolventes polares asociados como agua o amoniaco (Cerpa, 2007).
Tabla 1. Principales estructuras vegetales donde se localiza los productos aromáticos (Bonilla
2011)
Estructura celular Ejemplos
Pelos glandulares Labiatae, Verbenaceae, Geraniacea
Cavidades esquizógenas (células seoaradas Myrtaceae, Gramineae, asteraceae

unas de otras)
Canales lisígenos (Espacios resultantes por Rutaceae

disolución celular)
Canales resinosos Coniferae
Canales gomosas Cistaceae, Burseraceae
20
3.5 SOBRE LAS PLANTAS A EVALUAR
3.5.1 Romero, Rosmarinus officinalis

El romero es un arbusto perenne perteneciente a la familia de las Lamiaceas, en esta familia se
encuentra el orégano y la menta. Sus condiciones óptimas de cultivo son de altitud entre 0 a 3000
msnm, con precipitación anual de 250 a 2500 mm, con un pH de suelo de 4,5 a 8,7; crece en
suelos arenosos, es decir, suelos secos, y pedregosos y con buen drenaje. (Villamil, 2010).
A lo largo de muchos años se ha trabajado tradicionalmente con esta planta en la parte culinaria,
sin embargo, en esta última década se han realizado diversos estudios, principalmente en Turquía,
mediante investigaciones se ha encontrado que los aceites esenciales como los hidrosoles poseen
actividad antimicrobiana (Sadig et al, 2013) y antioxidante (Ojeda et al, 2013).
3.5.2 Diente de león, Taraxacum officinale

Esta es una planta perteneciente a la familia Asteraceae, en la que se encuentran las margaritas,
los girasoles y la caléndula. Posee una gran capacidad de adaptabilidad, crece en zonas urbanas,
en orillas de las carretas y son considerados maleza para los cultivos, se cree que es originaria de
Grecia, sin embargo, su aparición es extendida en las diferentes regiones del mundo; dicha planta
tiene historia a nivel de tradición oral en el continente europeo, por diferentes beneficios como
sus propiedades de regulación hepática, sin embargo en Colombia es considerada en general
como maleza.
Dentro de sus aplicaciones se encuentra su acción anti-inflamatoria por la presencia de

sesquiterpen lactonas (Williams et al 1995), actividad antioxidante (Hu et al 2005), protección
contra lipopolisacárido inducido por lesión pulmonar en ratones (Liu et al 2010) también posee β-
sitosterol y β-cumarina usados para tratar disminuir colesterol en sangre y disminuir problemas
cardiacos (Simandi et al 2002).
3.6 DE LOS MICROORGANISMOS A EVALUAR

Los microorganismos poseen diversos mecanismos que generan interés y a nivel industrial tienen
un amplio potencial, para el desarrollo de nuevos productos, sin embargo solo un pequeño
porcentaje de los microorganismos son patógenos, generando problemas a nivel sanitario. Las
enfermedades infecciosas son causadas por microorganismos entre los que se distinguen 4
grupos; los virus, los parásitos, los hongos y las bacterias.
Las bacterias están presentes constantemente en los seres vivos, y, en los humanos, se estima que
3 kilogramos aproximadamente de nuestro peso corporal son bacterias, ya que ellas viven en piel,
en la capa externa, en el tracto digestivo, y algunas son eliminadas en la evacuación.
21
Los primeros, son altamente incidentes en infecciones como la gripe, asociados a cáncer, como el
de cuello uterino o a enfermedades graves y difíciles de controlar como el VIH/SIDA. Los
parásitos, generan actualmente preocupaciones sobre todo en lugares donde no se tiene acceso a
agua potable y alcantarillado o en zonas endémicas como las selvas de las Americas donde está
presentes la malaria y la enfermedad de chagas. Las bacterias son los microorganismos sobre los
que se trabaja habitualente y de los que se tienen mayores reportes de resistencia a antibioticos, y
los hongos que son microorganismos eucariotas sobre los que se tiene interés por su potencial
biotecnológico, además de ser causantes de pérdidas en cultivos, cuando son fitopatógenos u
oportunistas en algunas infecciones dadas en mamíferos.
Los microorganismos evaluados en el presente estudio se encuentran en el grupo de los

procariotas, teniendo en cuenta los microorganismos de diferentes características, Gram positivas
y negativas, fermentadoras y no fermentadoras de glucosa, de forma bacilar, cocobacilar y cocos.
3.6.1 Escherichia coli

Un representante de interés tanto alimentario como sanitario es la presencia de Escherichia coli,
este microorganismo es Gram negativo, perteneciente a la familia de las enterobacterias, es el
representante del grupo de los coliformes, y es constituyente de la flora intestina normal de los
seres humanos, por ello su clasificación familiar, sin embargo cuando se encuentra en un lugar
inadecuado, es decir fuera del intestino, puede generar infecciones como lo que ocurre en las
urinarias, generadas por este microorganismo (Koneman, 2008); no es un microorganismo muy
exigente de modo que es cultivable en un medio básico con fuentes de carbono, nitrógeno y
fósforo. Esta relacionado con meningitis en neonatos, con manifestaciones normales de infección
en diichos pacientes, septicemia e infecciones (Baker, 2009).
3.6.2 Pseudomonas aeruginosa

Este microorganismo es un bacilo Gram negativo, no fermentador de lactosa, es causante de
infecciones en pabellones de quemados, pacientes con fibrosis quística, leucemia aguda,
transplantes de órganos y adicción a drogas intravenosas, también en un fenómeno denominado
“oído de nadador”. Al igual que E. coli genera infecciones unrinarias y respiratorias (Koneman,
2008). Causa frecuente de neumonía asociada con cuidados asistenciales en adultos, se encuentra
en las heridas quirúrgicas asociadas a cuidados asistenciales. (Baker, 2009).
3.6.3 Bacillus cereus

Este microorganismo posee un gran impacto a nivel de salud pública y por estar relacionado en
intoxicaciones en alimentos por la producción de toxina exogénica (Koneman, 2008). Forma
estructuras de resistencia, como esporas, que sobreviven en los alimentos, usándolos como
vehículos para el ingreso al sistema digestivo.
22
3.6.4 Staphylococcus aureus
Éste microorganismo esta involucrado en infecciones de importancia a nivel clínico, y es de
evaluación constante en la industria de alimentos. Uno de los fenómenos que le ocurren a los
microorganismos es la resistencia adquirida frente a los antibióticos de uso común para el
tratamiento de infecciones, es el caso de los S. aureus meticilín resistentes, que han generado
preocupación desde la OMS.Los factores de riesgo para las infecciones graves por S. aureus son
enfermedades crónicas como diabetes mellitus y cirrosis, inmundeficiencias, trastornos
nutricionales, cirugía y trasplantes.
4. OBJETIVOS
4.1 General
Evaluar la actividad antimicrobiana de aceites esenciales e hidrosoles de Rosmarinus officinalis y
Taraxacum officinale contra Staphylococcus aureus, Bacillus cereus, Escherichia coli y
Pseudomonas aeruginosa.
4.2 Específicos
 Obtener aceites esenciales e hidrosoles a partir de hojas tanto de Rosmarinus officinalis y de
Taraxacum officinale.
 Determinar parámetros fisicoquímicos de densidad, absorbancia en UV-visible y composición
mediante GC/MS, de los aceites esenciales e hidrosoles de Rosmarinus officinalis y
Taraxacum officinale.
 Determinar la concentración mínima inhibitoria de los aceites esenciales e hidrosoles de
Rosmarinus officinalis y Taraxacum officinale.
5. METODOLOGÍA
 Colecta del material vegetal
Las plantas de Rosmarinus officinalis (Romero) se recolectaron a las afueras de Bogotá en Chía
(Cundinamarca), de enero a mayo del 2013 y Taraxacum officinale (Diente de León), en la
localidad de Kennedy de Bogotá, en el barrio la Floresta Sur, entre los meses de febrero a mayo
de 2013. Para realizar la recolección de las plantas se tuvo en cuenta que estuvieran frescas, sin
signos de enfermedades evidentes como pigmentos café, amarillos u oscuros en las hojas,
presencia de hojas sin flores para Taraxacum officinale. Seguido de esto se llevaron al Herbario
de la universidad Nacional de Colombia, con certificado de identificación de las plantas y
corrobora su clasificación taxonómica, de Taraxacum officinale, voucher No COL. 568243.
23
 Obtención de aceites esenciales e hidrosoles de Rosmarinus officinalis y Taraxacum
officinale por medio de la técnica de hidrodestilación.
Los aceites esenciales e hidrosoles de Rosmarinus officinalis y Taraxacum officinale fueron

obtenidos por medio de la técnica de hidrodestilación, con el uso de un aparato de Clevenger.
Aproximadamente 300 g de cada planta, fueron colocados en un balón de 5 L y fueron
adicionados 1000 mL de agua destilada por cada 100 gramos de material. La mezcla fue
calentada a temperatura constante de 93-95°C durante 3 horas de extracción, los aceites
esenciales e hidrosoles se separararon por diferencia de densidades. Los extractos obtenidos se
depositaron en frascos color ámbar, los cuales se rotularon y almacenaron a 4º C, hasta su
evaluación (Cerpa, 2007).
 Determinación de parámetros fisicoquímicos de los aceites esenciales e hidrosoles de

Para determinar la densidad, en los hidrosoles, se empleó un picnómetro de 10mL, mientras que
para el caso del aceite esencial, se pesó en viales de 0,5mL adicionando diferentes volúmenes en
microlitros y con base en su relación masa/volumen se determinó la densidad del aceite.
Adicional a lo anterior, para los hidrosoles por medio de la técnica de extracción por microgota
bajo la interacción con dos solventes: hexano y diclorometano, se realizó la extracción con
volúmenes de 50µL, 100 µL y 150 µL en 5 mL de hidrosol durante diferentes periodos de
tiempo: 10, 15 y 30 segundos en vortex a 3000rpm.
La identificación de los compuestos químicos fue realizado, en un cromatógrafo de gases

acoplado un espectrómetro de masas (GC/MS), 6850 Series II / 5975B (Agilent Tech., USA).
Usando una columna capilar de sílice fundida (fase estacionaria): HP-5MS (Agilent Tech., USA),
de 30 m x 0,25 mm x 0,25 µm. El GC/MS fue operado bajo condiciones programadas de
temperatura, y consistió en 50°C por 1 minuto y desde 50° hasta 250°C a 8°C/min, y de 250°C a
300°C a 35°C/minuto. El gas portador fue helio, con un caudal de 1,2 mL/min. La temperatura
del inyector fue 250ºC. Los parámetros del detector selectivo de masas (MSD), incluyeron un
rango de masas de 40 a 350 uma.
 Identificación de la capacidad antimicrobiana de los aceites esenciales e hidrosoles de

Para identificar la capacidad antimicrobiana de los hidrosoles de romero y de diente de león,

además del aceite esencial de romero, se pesaron 10 mg de aceite esencial, en un balón aforado
de 10mL para generar una solución stock de 1000 ppm, el solvente usado fue diclorometano.
A partir de la anterior concentración se realizaron 3 tratamientos con 3 concentraciones diferentes
para cada extracto de 1, 10 y 100 ppm (Farmacopea, 2008) y se evaluaron mediante un ensayo
por difusión en disco de papel (Whatman N.1) de 0.5 cm de diámetro, se tomaron 3 controles
(agua desionizada, cloranfenicol para S. aureus, B. cereus y E. coli, para S. aeruginosa se utilizó
estreptomicina y diclorometano para todas las evaluaciones). Los discos, 3 por cada tratamiento,
24
se situaron en una caja de Petri, la cual ya había sido inoculada (Masivo) con la bacteria
correspondiente (S. aureus ATCC 25923, B. cereus ATCC 10876, P. aeruginosa CMPUJ 055 y
E. coli ATCC 5789) a una concentración de 3x108 UFC/mL. Las cajas de Petri primero tuvieron
un tratamiento over nigth a 4°C de 12 horas y posteriormente, un tiempo de incubación a 37°C
por 12 horas. Cada prueba tuvo tres repeticiones y tres réplicas en el tiempo. La lectura se realizó
a las 24 horas luego del tratamiento completo, midiendo el halo de inhibición de las bacterias.
6. ANÁLISIS ESTADÍSTICO
El análisis estadístico se evaluó mediante el cálculo del valor medio, teniendo en cuenta la
desviación estándar entre los datos, de 3 ensayos independientes.
7. RESULTADOS
Al realizarse la hidrodestilación de las hojas frescas de Rosmarinus officinalis se obtuvo aceite
esencial con un rendimiento de 0.594 % ± 0.047mL/g, junto con hidrosol de aproximadamente
100mL en las 3 horas de tratamiento; por otro lado al realizarse la hidrodestilación para
Taraxacum officinale no se obtuvo aceite esencial a partir de las hojas, sin embargo se obtuvo
150 mL de hidrosol. El pH en el hidrosol de romero fue de 6.8 y de diente de león fue de 6.7. La
densidad del aceite esencial de romero fue de 0.881 ± 0.016 g/mL, la densidad del hidrosol de
romero fue de 0.9955 ± 0.00098 g/mL y la densidad del hidrosol de diente de león fue de 0.9953
± 0.00065 g/mL (Anexos 1, 2 y 3).
En el análisis realizado por cromatografía de gases acoplado a masas del aceite esencial de
romero, se encuentran compuestos como camfor, camfeno, alfa pipeno, entre otros que se
evidencian en la tabla 2. Para el análisis realizado a los hidrosoles por medio de la técnica de
extracción por microgota, se realizó la detección de compuestos.
Anterior a las extracciones con solventes de los hidrosoles de cada una de las plantas, se realizó
una evaluación de los compuestos obtenidos en el aceite esencial, en la tabla 2 se evidencian
dichos compuestos. Se realizó la extracción de compuestos afines con los solventes usados a
partir de los hidrosoles de romero y diente de león, con hexano y diclorometano mediante la
técnica de microgota. En la tabla 2, se encuentran compuestos comunes extraidos por los dos
solventes, en el hidrosol de romero como el eucaliptol, vervenona, y camfor que son
componentes mayoritarios. Para el hidrosol de diente de león solo un compuesto cumplió con el
criterio de coincidencia de más del 90%, llamado elemol.
25
Tabla 2. Compuestros presentes en el aceite esencial e hidrosol de Rosmarinus officinalis,
mediante el análisis por cromatografía de gases acoplado a espectrometría de masas.
Aceite esencial de Romero Hidrosol de Romero
Compuesto Porcentaje de Porcentaje de Porcentaje de Porcentaje de

abundancia correlación con abundancia correlación con
bibliotecas* bibliotecas*
Camfor 22.21% 98% 30.3% 98%
Eucaliptol 17.9% 96% 27.1% 99%
α-pineno 9,7% 97% - -
Camfeno 7.86% 97% - -
β-pineno 7.17% 97% - -
Bornil acetato 4.38% 98% 0.183% 98%
Borneol 4.26% 90% 5.3% 91%
α-pelandreno 2,2% 91% - -
γ-Terpineno 2.1% 95% - -
Verbenona 1.84% 98% 30.88% 98%
α-Terpineol 1.43% 90% 1.95% 90%
(+)4-careno 1.23% 97% - -
α-Cariofinelo 0.85% 99% - -
Cis-β-Terpineol 0.6% 97% - -
Geraniol - - 1.16% 93%
Linalol - - 1.1% 90%
* Biblioteca Nist5 y Wiley7
Los valores resaltados corresponden a compuestos comúnes entre el hidrosol y el aceite esencial.
Luego de la realización de los ensayos correspondientes a los diferentes tiempos y volúmenes de

solvente, se encuentra que con 150 µL y 30 segundos en el vortex a 3000rpm es donde se obtiene
una gota estable para ser analizados los compuestos presentes en ésta, por cromatografía de gases
26
acoplada a espectrofotometría de masas, dicho pocedimiento se realizó en un cromatógrafo de
gases acoplado un espectrómetro de masas (GC/MS), 6850 Series II / 5975B (Agilent Tech.,
USA). Usando una columna capilar de sílice fundida (fase estacionaria): HP-5MS (Agilent Tech.,
USA), de 30 m x 0,25 mm x 0,25 µm.
En la figura 2 se evidencia la comparación entre los compuestos encontrados en el hidrosol de

romero con los dos solventes luego del uso de la técnica de extracción por microgota. Es
importante resaltar que todos los compuestos que se evidencian en la tabla 2 cumplieron con el
criterio de coincidencia superior al 90% teniendo en cuenta las bases de datos del equipo,
bibliotecas Nist5 y Wiley7, usadas. Se realizó la comparación entre los compuestos obtenidos en
cuanto a proporción por muestra, de cada uno de los solventes utilizados.
Figura 2. Comparación entre los compuestos obtenidos luego de la extracción por microgota en
hidrosol de romero con diclorometano (negro) y hexano (azul). En el eje independiente se
encuentra el tiempo (minutos) en condiciones generales y en el eje dependiente la abundancia del
compuesto en la muestra.
Es importante resaltar que no todos los compuestos que se evidencian en la tabla 2, cumplieron
con el criterio de coincidencia superior al 90% teniendo encuenta la base de datos del equipo
usado, y se evidencia que corresponden a los mismos compuestos extraídos en cada uno de los
solventes usados.
27
8. DISCUSIÓN
La medición de la densidad del aceite esencial es inferior a la del agua medida que fue de 0,999
g/mL, respecto a la del aceite esencial de romero que fue de 0.881 ± 0.016 g/mL. Para la
densidad de los hidrosoles, se encuentra una correlación con la matriz, dando como resultado la
densidad del hidrosol de romero fue de 0.9955 ± 0.00098 g/mL y la densidad del hidrosol de
diente de león fue de 0.9953 ± 0.00065 g/mL.
La técnica de extracción por microgota ha comenzado a ser una alternativa económica y eficaz
para identificar presencia de compuestos de interés (Farajzadeh et al 2013; Kaykhaii 2013); y se
uso para determinar los compuestos presentes en la gota de cada uno de los solventes. Las
características de los solventes.
La tabla 2 muestra los compuestos que están presentes tanto en el aceite esencial como en el
hidrosol del romero, siendo los siguientes: el camfor, bonil acetato y la verbenona. Mediante el
análisis por cromatografía se encuentran 3 compuestos mayoritarios mostrados en la tabla 2, y
que en el hidrosol fueron encontrados bajo las mismas condiciones de evaluación con hexano y
diclorometano, dichos compuestos según Bakkali et al (2008) y Ojeda et al (2013), son
componentes mayoritarios del aceite esencial; de allí su aparición en el hidrosol.
Los resultados encontrados para hidrosol de diente de león mediante diclorometano y hexano solo
refieren un resultado y es la extracción de un compuesto llamado elemol que apenas alcanzó al
91% de coincidencia con la base de datos del equipo, sin embargo ni su porcentaje en la muestra
ni su porcentaje de asertividad fueron notables.
Los aceites esenciales están compuestos por monoterpenos y son producto del metabolismo
secundario de las plantas y está sujeto a las condiciones del medio ambiente ya que su producción
esta relacionada con las condiciones adversas de crecimiento por tal razón se debe tener en cuenta
las condiciones medio ambientales a las que se encuentre sometido el organismo (Bonilla, 2011).
Por otro lado las condiciones nutricionales que aporta el suelo son parte importante del desarrollo
vegetal; altas concentraciones de nitrógeno aumenta la susceptibilidad de las plantas a las
enfermedades ya que causa una alta demanda de carbono dejando poco para la síntesis de
metabolitos secundarios (Arauz, 1998), teniendo en cuenta lo anterior, este tipo de variables son
de gran impacto por lo que en la medida de lo posible, evaluarlas daría un mayor control sobre
los metabolitos secundarios.
En cuanto a los componentes del aceite esencial del romero, éstos pueden cambiar su proporción
o tipo, de una variedad a otra o en plantas de la misma especie y especialmente cercanas.
Estudios relacionados con este fenómeno, sobre dos variedades de romero en las que variaban las
proporciones de compuestos presentes en los aceites esenciales, realizado por Ojeda et al (2013).
Los aceites típicos de romero tienen componentes como borneol y verbenona (Bradley 2006), en
plantas de Turquia, Túnez e Italia el 1,8-cineol está alrededor del 40% del aceite, se encuentra en
menor medida en Francia, España y Grecia junto a α-pineno y camfor.
28
Respecto a la actividad antimicrobiana del aceite esencial y de los hidrosoles de romero es
atribuido a las condiciones específicas de crecimiento y desarrollo del vegetal, ya que bajo las
condiciones del ensayo no se evidenciaron resultados concluyentes. Cambios climáticos,
nutricionales y genéticos son factores determinantes en las características de los metabolitos
secundarios, ya que se encuentran variaciones significativas (Ojeda 2013), en cuanto a
composición de los aceites esenciales de R. officinalis relacionado con las ubicaciones
geográficas (Ojeda 2013), y en adición otras variables como el tiempo de cosecha, la etapa de
desarrollo de las plantas, el método de extracción y las metodologías utilizadas para evaluar sus
actividades biológicas generan variaciones en los resultados. (Ojeda, 2013; Burt, 2004; Celikas et
al 2007; Jamshidi, Afzali y Afzali, 2009; Okoh, Sadimenko, y Afolayan, 2010; Zaouali,
Bouzaine, y Boussaid 2010).
Por otra parte las concentraciones sobre las que se ha reportado actividad para el caso del aceite
esencial, está relacionado con relaciones de 0.4 a 40 µL /mL que representa un rango de 3524
ppm a 35240 ppm (Ojeda 2013); siendo esta una concentración muy superior a la requerida por
la farmacopea debido a que puede causar toxicidad, de manera que si la aplicación de aceite
esencial como conservante potencial en la industria de alimentos, es de gran importancia
evidenciar que a una menor concentración de compuesto con una acción inhibitoria similar a la
presentada por un conservante químico, se genera un mayor interés por su obtención e
investigación (Farmacopea, 2008).
De la planta de diente de león, según la investigación realizada por Astafieva A et al (2012), se

encuentra la determinación de péptidos con presencia de puentes disulfuro ubicados en las flores
del vegetal, y al ser evaluado genera inhibición de crecimiento de microorganismos, en contraste
con lo anterior, en el presente estudio se tomaron principalmente hojas como órganos a evaluar, a
fin de tener diferencias entre los metabolitos acumulados en la planta, se realizaron ensayos en
hojas de Taraxacum officinale en dos estadios, en etapa de no florecimiento y en etapa de
florecimiento, a fin de evaluar si el estadio influía sobre la obtención del aceite, concluyendo que
afectaba en las características de olor del subproducto, hidrosol, sin embargo no se encontraba
aceite esencial en dicho órgano.
Con base a las pruebas toxicológicas es necesario realizarse una evaluación de las
concentraciones actualmente aprobadas para la implementación de romero como aditivo regular
en alimentos y cosméticos, ya que el uso constante de romero es tóxico, por lo que representa un
riesgo para la salud (Bakkali 2008). Se hace necesario realizar un estudio interrelacionado entre
las condiciones ambientales, otros métodos de evaluación de actividad antimicrobiana.
8. CONCLUSIONES.
Al obtener aceite esencial de romero e hidrosoles de diente de león y de romero, se encuentra que
no hay aceite esencial en las hojas de diente de león. La técnica de microgota es una gran opción
para la identificación de compuestos naturales, y su composición química; encontrando que en
29
comparación entre los dos solventes el diclorometano, tiene una mayor capacidad de extracción a
las condiciones dadas en el ensayo y por los componentes que se encuentran en dicho extracto.
Respecto a la actividad antimicrobiana, mediante las concentraciones de ensayo a las que se

sometiéron los microorganismos, no hay una respuesta de inhibición.
9. RECOMENDACIONES.
Debido a la importancia de las condiciones de crecimiento de las plantas, se sugiere que con base
en la asociación empresa- universidad, que ampara el proyecto, se recolecten los especímenes con
base en un tipo de recolección y a fin de controlar las variables para asegurar una población
homogénea de prueba, además de tener encuenta si hay una aplicación industrial de estos
resultados sean lo mayormente controlables. De otro lado se recomienda realizar una
comparación entre el método de pozos y el de difusión en agar con el fin de generar una visión
más completa sobre la reacción de los extractos respecto a las diferentes condiciones de ensayo,
como los componentes del medio y las diferencias entre las reacciones de los microorganismos,
así como incluir hongos como microorganismos a evaluar. Y finalmente modificar condiciones
con el fin de identificar los compuestos de aceite esencial e hidrosol de Taraxacum officinale.
10. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
Anaya AL (2003) Ecología química. Consejo nacional de Ciencia y Tecnología. México D.F,
México
Arauz L (1998) Fitopatología, un enfoque agroecológico. Editorial de la Universidad de Costa

Rica. San Jose de Costa Rica, Costa Rica
Astafieva AA, Rogozhin EA, Odintsova TI, Khadeeva NV, Grishin EV, Egorov TA (2012)
Discovery of novel antimicrobial peptides with unusual cysteine motifs in dandelion Taraxacum
officinale Wigg. flowers. Peptides 8;36 (2):266-271
Baker C (2009) Atlas de enfermedades infecciosas en pediatría. Editorial Panamericana. Madrid,

España
Bakkali F, Averbeck S, Averbeck D, Idaomar M (2008) Biological effects of essential oils – A

review. Food and Chemical Toxicology 2;46(2):446-475
Biesterbos JWH, Dudzina T, Delmaar CJE, Bakker MI, Russel FGM, von Goetz N, et al. (2013)
Usage patterns of personal care products: Important factors for exposure assessment. Food and
Chemical Toxicology 5;55(0):8-17
Bonilla C (2011) Romero, Rosmarinus officinalis L. Editorial Universidad Nacional, Bogotá,

Colombia
30
Bylka W, Matlawska I and Franski R (2010) Essential oil composition of Taraxacum officinale.
Acta Physiologic of Plants 32: 231-234
Burt, S. (2004). Essential oils: their antibacterial properties and potential applications in foodsea
review. International Journal of Food Microbiology, 94, 223-253.
Bradley, P. H. (2006). British herbal compendium. A handbook of scientific information on

widely used plant drugs. Bournemout: British Herbal Medicine Association.
Bruneton J (2001) Pharmacognosie. Phitochimie. Plantes médicinales, 3ra Edición, Tecnique et

Documentation-Lavoisier, Paris, France
Catty S (2001) Hydrosols the next aromatherapy. Healing arts press, NJ, USA
Celikas OY, Kocabas EEH, Bedir E, Sukan FV, Ozek T, Baser KHC (2007) Antimicrobial
activities of methanol extracts and essential oils of Rosmarinus officinalis, depending on location
and seasonal variations. Food Chemical;100(2):553-559
Celis A, Mendoza C, Pachón M, Cardona J, Delgado W y Cuca LE (2008) Extractos vegetales

utilizados como biocontroladores con énfasis en la familia Piperaceae. Una revisión. Agronomía
Colombiana 26 (1), 97-106
Cerpa MG (2007) Hidrodestilación de aceites esenciales: Modelado y caracterización. Tesis de

Doctorado. Facultad de Ciencias, Universidad de Valladolid, España
De la Rosa M (2003) Microbiología en ciencias de la salud, conceptos y aplicaciones. 2da

Edición. Editorial El Sevier. Madrid España
El-Wahab H, Moram GSE (2013) Toxic effects of some synthetic food colorants and/or flavor
additives on male rats. Toxicol and Healt; 29(2):224-32.
Farmacopea Europea (2008)
Farajzadeh MA, Mogaddam MRA, Aghdam AA. (2013) Comparison of air-agitated liquid-liquid
microextraction technique and conventional dispersive liquid-liquid micro-extraction for
determination of triazole pesticides in aqueous samples by gas chromatography with flame
ionization detection. Journal of Chromatography A.
Forbes, Sahm, Weissfeld (2009) Baley & Scott’s Diagnostic Microbiology Editorial Médica
Panamericana, Buenos Aires, Argentina
31
Galbis JA (2004) Panorama actual de la química farmacéutica
Günther, E. (1948) The Essential Oils. Vol. 1: History and origin in Plants Production Analysis.
Krieger Publishing: New York, USA.
Haddouchi F, Chaouche TM, Zaouali Y, Ksouri R, Attou A, Benmansour A (2013) Chemical

composition and antimicrobial activity of the essential oils from four Ruta species growing in
Algeria. Food Chem 11/1;141(1):253-258
Hu C, Kitts DD. (2005) Dandelion (Taraxacum officinale) flower extract suppresses both reactive
oxygen species and nitric oxide and prevents lipid oxidation in vitro. Phytomedicine 8/2;
12(8):588-597.
Jamshidi, R., Afzali, Z., & Afzali, D. (2009). Chemical composition of hydrodistillation essential
oil of rosemary in different origins in Iran and comparison with other countries. American-
Eurasian Journal of Agriculture & Environment Sciences, 5(1), 78-81.
Jiang Y, Wu N, Fu Y, Wang W, Luo M, Zhao C, et al. (2011) Chemical composition and

antimicrobial activity of the essential oil of Rosemary. Environmental Toxicology and
Pharmacology 7;32(1):63-68
Kang S, Kim S, Park J, Kim H, Lee J, Choi G, et al. (2013) Urinary paraben concentrations
among pregnant women and their matching newborn infants of Korea, and the association with
oxidative stress biomarkers. Sci Total Environ 9/1;461–462(0):214-221.
Kaykhaii M, Abdi A (2013) Rapid and sensitive determination of acrylamide in potato crisps
using reversed-phase direct immersion single drop microextraction-gas chromatography.
Analytical Methods 5(5):1289-1293
Koneman (2006) Koneman´s coor atlas and textbook of diagnostic microbioogy 6tn Edition, NJ,
USA
Linares A (2002) Temas de antimicrobianos. Colección salud y sociedad. Barranquilla, Colombia
Liu L, Xiong H, Ping J, Ju Y, Zhang X. (2010) Taraxacum officinale protects against

lipopolysaccharide-induced acute lung injury in mice. J Ethnopharmacology 7/20;130(2):392-
397
Madigan M, Martinko J, Parcker J (2010) Brock, Microorganisms biology. Pearson Prentice hall.
NJ, USA
Melo V (2007) Bioquímica de los procesos metabólicos. Editorial Revertré S.A. Mx D.F,
Mexico.
32
Montoya H (2008) Microbiología Básica para áreas dea salud y afines. Editorial Universidad de
Antioquia, Medelllín, Colombia
Muñoz, F (2002) Plantas medicinales y aromáticas: Estudio, cultivo y procesado. 4ª

Reimpresión. Ediciones Mundi-Prensa: Madrid, España
OMS (2012) Organización Mundial de la Salud.

http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs194/es/. Consultado el 12 de Febrero 2013. Nota
Descriptiva No.194
Ojeda-Sana AM, van Baren CM, Elechosa MA, Juárez MA, Moreno S (2013) New insights into
antibacterial and antioxidant activities of rosemary essential oils and their main components.
Food Control 5;31(1):189-195.
Okoh, O. O., Sadimenko, A. P., & Afolayan, A. J. (2010). Comparative evaluation of the
antibacterial activities of the essential oils of Rosmarinus officinalis L. obtained by
hydrodistillation and solvent free microwave extraction methods. Food Chemistry, 120 (1), 308-
312.
Oral N, Vatansever L, Güven A and Gülmez M (2008) Antibacterial activity of some turkish
plants hydrodols. Kafkas Üniv Vet Fak Derg 14(2): 205-209
Parry, E. J (1921) The Chemistry of Essential Oils and Artificial Perfumes. 4th Edition. Van
Nostrand Co., NY, USA
Peña, Arroyo, Gómez, Tapia, Gómez (2004) Bioquímica. Editorial Limusa S.A, Segunda
Edición. México D:F, Mexico.
Sadava D, Purves W (2008) Life: The science of biology. Sinauer Associates Sunderland, USA
Sagdıc O, Özcan M (2003) Antibacterial activity of Turkish spice hydrosols. Food Control
4;14(3):141-143
Sagdic O, Ozturk I, Tornuk F. (2013) Inactivation of non-toxigenic and toxigenic Escherichia

coli O157:H7 inoculated on minimally processed tomatoes and cucumbers: Utilization of
hydrosols of Lamiaceae spices as natural food sanitizers. Food Control 3;30(1):7-14
Servicio Científico de FARMA S.A. (1977) Antibióticos. FARMA S.A. Madrid, España
Sharapin N (2000) Fundamentos de tecnología de productos fitoterapéuticos. Área de ciencia y

tecnología del Convenio Andrés Bello & Red Iberoamericana de productos fitofarmacéuticos
(RIPROFITO) del subprograma X del CYTED, Bogota, Colombia
33
Stewart D (2005) The chemistry of Essential Oils. Made simple Care Publications. Missouri,
USA
Taiz L, Zeiger E (2006) Plant phisiology thirth edition, Sinauer Associates inc, Sunderland, USA
Teuscher, E. Anton, R. Lobstein, A.(2005) Plantes Aromatiques. Épices, aromates, condiments et

huiles essentielles. Editions Tec & Doc, Paris, France.
Tornuk F, Cankurt H, Ozturk I, Sagdic O, Bayram O, Yetim H (2011) Efficacy of various plant
hydrosols as natural food sanitizers in reducing Escherichia coli O157:H7 and Salmonella
Typhimurium on fresh cut carrots and apples. Int J Food Microbiol 7/15;148(1):30-35
Torres L (2002) Cuidados críticos y emergencias II. Editorial Arán. España
Tortora G, Fuke B, Case C (2007) MICROBIOLOGY: an Introduction 9th edition, Pearson

Education., Inc. NJ, USA
Varcacel M, Gómez H (1988) Técnicas analíticas de separación. Editorial Reverté, Madrid,

España
Varona S, Rodríguez Rojo S, Martín Á, Cocero MJ, Serra AT, Crespo T, et al. (2013)
Antimicrobial activity of lavandin essential oil formulations against three pathogenic food-borne
bacteria. Industrial Crops and Products 3;42(0):243-250
Villamil J (2010) Plan de siembra de plantas aromáticas, romero. Cartillas del corredor.
Universidad Nacional de Colombia.
Watanabe Y, Kojima H, Takeuchi S, Uramaru N, Ohta S, Kitamura S (2013)Comparative study

on transcriptional activity of 17 parabens mediated by estrogen receptor α and β and androgen
receptor. Food and Chemical Toxicology 2013 7;57(0):227-23
Zaouali, Y., Bouzaine, T., & Boussaid, M. (2010). Essential oils composition in two Rosmarinus
officinalis L. varieties and incidence for antimicrobial and antioxidant activities. Food and
Chemical Toxicology, 48, 3144-3152.
34
ANEXOS
Anexo 1. Datos para determinación de densidad del aceite esencial.
Determinación de Densidad ACEITE ESENCIAL

Romero
Replica Replica Replica
1 2 3
Promedio DS %CV
Peso Densidad Peso Densidad Peso Densidad
(mg) ul AE (mg/ul) (mg) ul AE (mg/ul) (mg) ul AE (mg/ul)
9.6 10 0.960 8.5 10 0.850 9.2 10 0.920 0.910 0.056 6.118
18.8 20 0.940 17.7 20 0.885 17.5 20 0.875 0.900 0.035 3.889
27.4 30 0.913 26.4 30 0.880 26.1 30 0.870 0.888 0.023 2.556
36.5 40 0.913 34.9 40 0.873 35.1 40 0.878 0.888 0.022 2.456
44.1 50 0.882 44.2 50 0.884 43.7 50 0.874 0.880 0.005 0.601
52.7 60 0.878 52.7 60 0.878 52.3 60 0.872 0.876 0.004 0.439
60.9 70 0.870 61.8 70 0.883 59.6 70 0.851 0.868 0.016 1.820
70.1 80 0.876 70.5 80 0.881 67.3 80 0.841 0.866 0.022 2.516
78.8 90 0.876 79.5 90 0.883 75.9 90 0.843 0.867 0.021 2.445
87.2 100 0.872 87.2 100 0.872 84.3 100 0.843 0.862 0.017 1.942
Densidad definitiva 0.881 0.016 1.788
Anexo 2. Datos para la determinacion de la densidad de los hidrosoles, tanto de Romero como de
diente de león.
Determinación de densidad de Hidrosoles
Tiempo total de
destilación 2h30min Romero Picnometro (ml) 10
40°C T cte 0.025ml error
Peso (g) Densidad Peso (g) Densidad (mg/ul) Peso (g) Densidad Promedio DS %CV
9.9839 0.9984 9.9814 0.9981 9.9320 0.9932 0.9966 0.00293 0.293700
9.9558 0.9956 9.9647 0.9965 9.9436 0.9944 0.9955 0.00106 0.106411
9.9107 0.9911 9.9433 0.9943 9.9552 0.9955 0.9936 0.00230 0.231859
9.9606 0.9961 9.9765 0.9977 9.9760 0.9976 0.9971 0.00090 0.090652
9.9600 0.9960 9.9416 0.9942 9.9534 0.9953 0.9952 0.00093 0.093669
9.9650 0.9965 9.9543 0.9954 9.9482 0.9948 0.9956 0.00085 0.085420
9.9509 0.9951 9.9538 0.9954 9.9589 0.9959 0.9955 0.00041 0.040686
9.9778 0.9978 9.9451 0.9945 9.9669 0.9967 0.9963 0.00167 0.167114
9.9544 0.9954 9.9372 0.9937 9.9480 0.9948 0.9947 0.00087 0.087400
9.9637 0.9964 9.9407 0.9941 9.9585 0.9959 0.9954 0.00121 0.121169
Densidad Definitiva 0.9955 0.00098 0.098757
35
Picnometro
Diente
Tiempo total de destilación 2h30min (ml) 10
de león
40°C Tcte 0.025ml error
Peso Densidad Peso

Peso (g) Densidad (g) (mg/ul) (g) Densidad Promedio DS %CV
9.9467 0.9947 9.9586 0.9959 9.9703 0.9970 0.99585 0.00118 0.11849
9.9607 0.9961 9.9349 0.9935 9.9311 0.9931 0.99422 0.00161 0.16199
9.9488 0.9949 9.9547 0.9955 9.9216 0.9922 0.99417 0.00177 0.17759
9.9474 0.9947 9.9655 0.9966 9.9527 0.9953 0.99552 0.00093 0.09347
9.9514 0.9951 9.9646 0.9965 9.9624 0.9962 0.99595 0.00071 0.07101
9.9627 0.9963 9.9577 0.9958 9.9286 0.9929 0.99497 0.00184 0.18508
9.9406 0.9941 9.9638 0.9964 9.9739 0.9974 0.99594 0.00171 0.17144
9.9483 0.9948 9.9502 0.9950 9.9609 0.9961 0.99531 0.00068 0.06825
9.9618 0.9962 9.9462 0.9946 9.9597 0.9960 0.99559 0.00085 0.08503
9.9481 0.9948 9.9517 0.9952 9.9644 0.9964 0.99547 0.00086 0.08602
Densidad
Definitiva 0.9953 0.00065 0.06570
Anexo 3. Datos recolectados para rendimiento
Datos de rendimientos
Peso de
mL de aceite % de Desviación
material
obtenidos rendimiento
Promedio
Estándar
%CV
vegetal (g)
310 2 0.64516129
472.4 2.5 0.52921253
0.594 0.04791045 8.07125579
250 1.5 0.6
500 3 0.6
36
Anexo 4. Evaluación de la actividad anrtimicrobiana
Escherichia coli.
a. Control de solventes y de sensibilidad de la cepa b. Evaluación de las 3 concentraciones de hidrosol
d. Evaluación de las 3 concentraciones de hidrosol de diante de león

c. Evaluación de las 3 concentraciones de aceite esencial
37
Pseudomonas aeruginosa.
a. Control de solventes y de sensibilidad de la cepa b. Evaluación de las 3 concentraciones de hidrosol de romero
c. Evaluación de las 3 concentraciones de aceite esencial d. Evaluación de las 3 concentraciones de hidrosol de diente de león
38
Bacillus cereus
c. Evaluación de las 3 concentraciones de aceite esencial d. Evaluación de las 3 concentraciones de hidrodol de Diente de león
39
Staphylococcus aureus
d. Evaluación de las 3 concentraciones de aceite esencial d. Evaluación de las 3 concentraciones de hidrodol de Diente de león
40
ANEXO 2
CARTA DE AUTORIZACIÓN DE LOS AUTORES

(Licencia de uso)
Bogotá, D.C.,
Señores
Biblioteca Alfonso Borrero Cabal S.J.
Pontificia Universidad Javeriana
Cuidad
Los suscritos:
Adriana Marcela Ramos Pencue , con C.C. No 1018442906
, con C.C. No
, con C.C. No
En mi (nuestra) calidad de autor (es) exclusivo (s) de la obra titulada:

(por favor señale con una “x” las opciones que apliquen)
Tesis doctoral Trabajo de grado X Premio o distinción: Si No X
cual:
presentado y aprobado en el año 2014 , por medio del presente escrito autorizo
a la Pontificia Universidad Javeriana para que, en desarrollo de la presente licencia de uso parcial,
pueda ejercer sobre mi (nuestra) obra las atribuciones que se indican a continuación, teniendo en
cuenta que en cualquier caso, la finalidad perseguida será facilitar, difundir y promover el
aprendizaje, la enseñanza y la investigación.
En consecuencia, las atribuciones de usos temporales y parciales que por virtud de la presente
licencia se autorizan a la Pontificia Universidad Javeriana, a los usuarios de la Biblioteca Alfonso
Borrero Cabal S.J., así como a los usuarios de las redes, bases de datos y demás sitios web con los
que la Universidad tenga perfeccionado un convenio, son:
AUTORIZO (AUTORIZAMOS) SI NO
1. La conservación de los ejemplares necesarios en la sala de tesis y trabajos
X
de grado de la Biblioteca.
2. La consulta física (sólo en las instalaciones de la Biblioteca) X
3. La consulta electrónica – on line (a través del catálogo Biblos y el
X
Repositorio Institucional)
4. La reproducción por cualquier formato conocido o por conocer X
5. La comunicación pública por cualquier procedimiento o medio físico o
X
electrónico, así como su puesta a disposición en Internet
6. La inclusión en bases de datos y en sitios web sean éstos onerosos o
gratuitos, existiendo con ellos previo convenio perfeccionado con la
Pontificia Universidad Javeriana para efectos de satisfacer los fines
X
previstos. En este evento, tales sitios y sus usuarios tendrán las mismas
facultades que las aquí concedidas con las mismas limitaciones y
condiciones
De acuerdo con la naturaleza del uso concedido, la presente licencia parcial se otorga a título
gratuito por el máximo tiempo legal colombiano, con el propósito de que en dicho lapso mi
(nuestra) obra sea explotada en las condiciones aquí estipuladas y para los fines indicados,
respetando siempre la titularidad de los derechos patrimoniales y morales correspondientes, de
PUJ– BG Normas para la entrega de Tesis y Trabajos de grado a la Biblioteca General – Junio de 2013 1
acuerdo con los usos honrados, de manera proporcional y justificada a la finalidad perseguida, sin
ánimo de lucro ni de comercialización.
De manera complementaria, garantizo (garantizamos) en mi (nuestra) calidad de estudiante (s) y

por ende autor (es) exclusivo (s), que la Tesis o Trabajo de Grado en cuestión, es producto de mi
(nuestra) plena autoría, de mi (nuestro) esfuerzo personal intelectual, como consecuencia de mi
(nuestra) creación original particular y, por tanto, soy (somos) el (los) único (s) titular (es) de la
misma. Además, aseguro (aseguramos) que no contiene citas, ni transcripciones de otras obras
protegidas, por fuera de los límites autorizados por la ley, según los usos honrados, y en proporción
a los fines previstos; ni tampoco contempla declaraciones difamatorias contra terceros; respetando
el derecho a la imagen, intimidad, buen nombre y demás derechos constitucionales.
Adicionalmente, manifiesto (manifestamos) que no se incluyeron expresiones contrarias al orden
público ni a las buenas costumbres. En consecuencia, la responsabilidad directa en la elaboración,
presentación, investigación y, en general, contenidos de la Tesis o Trabajo de Grado es de mí
(nuestro) competencia exclusiva, eximiendo de toda responsabilidad a la Pontifica Universidad
Javeriana por tales aspectos.
Sin perjuicio de los usos y atribuciones otorgadas en virtud de este documento, continuaré
(continuaremos) conservando los correspondientes derechos patrimoniales sin modificación o
restricción alguna, puesto que de acuerdo con la legislación colombiana aplicable, el presente es
un acuerdo jurídico que en ningún caso conlleva la enajenación de los derechos patrimoniales
derivados del régimen del Derecho de Autor.
De conformidad con lo establecido en el artículo 30 de la Ley 23 de 1982 y el artículo 11 de la

Decisión Andina 351 de 1993, “Los derechos morales sobre el trabajo son propiedad de los
autores”, los cuales son irrenunciables, imprescriptibles, inembargables e inalienables. En
consecuencia, la Pontificia Universidad Javeriana está en la obligación de RESPETARLOS Y
HACERLOS RESPETAR, para lo cual tomará las medidas correspondientes para garantizar su
observancia.
NOTA: Información Confidencial:

Esta Tesis o Trabajo de Grado contiene información privilegiada, estratégica, secreta,
confidencial y demás similar, o hace parte de una investigación que se adelanta y cuyos
resultados finales no se han publicado. Si No X
En caso afirmativo expresamente indicaré (indicaremos), en carta adjunta, tal situación con el fin
de que se mantenga la restricción de acceso.
No. del documento

NOMBRE COMPLETO FIRMA
de identidad
Adriana Marcela Ramos Pencue 1018442906
FACULTAD: Ciencias Básicas

PROGRAMA ACADÉMICO: Microbiología Industrial
ANEXO 3
BIBLIOTECA ALFONSO BORRERO CABAL, S.J.
DESCRIPCIÓN DE LA TESIS O DEL TRABAJO DE GRADO
FORMULARIO
TÍTULO COMPLETO DE LA TESIS DOCTORAL O TRABAJO DE GRADO

Evaluación de la actividad antimicrobiana de aceites esenciales e hidrosoles de
Rosmarinus officinalis y Taraxacum officinale frente a microorganismos patógenos
SUBTÍTULO, SI LO TIENE
AUTOR O AUTORES
Apellidos Completos Nombres Completos
Ramos Pencue Adriana Marcela
DIRECTOR (ES) TESIS O DEL TRABAJO DE GRADO

Apellidos Completos Nombres Completos
Sequeda Castañeda Luis Gonzalo
FACULTAD
Ciencias
PROGRAMA ACADÉMICO
Tipo de programa ( seleccione con “x” )
Pregrado Especialización Maestría Doctorado
X
Nombre del programa académico
Microbiología Industrial
Nombres y apellidos del director del programa académico
Janeth del Carmen Arias Palacios
TRABAJO PARA OPTAR AL TÍTULO DE:
Microbióloga Industrial
PREMIO O DISTINCIÓN (En caso de ser LAUREADAS o tener una mención especial):
CIUDAD AÑO DE PRESENTACIÓN DE LA TESIS NÚMERO DE PÁGINAS

O DEL TRABAJO DE GRADO
Bogotá D.C. 2014 40
TIPO DE ILUSTRACIONES ( seleccione con “x” )
Tablas, gráficos y
Dibujos Pinturas Planos Mapas Fotografías Partituras
diagramas
X
SOFTWARE REQUERIDO O ESPECIALIZADO PARA LA LECTURA DEL DOCUMENTO
Nota: En caso de que el software (programa especializado requerido) no se encuentre licenciado por
la Universidad a través de la Biblioteca (previa consulta al estudiante), el texto de la Tesis o Trabajo
de Grado quedará solamente en formato PDF.
MATERIAL ACOMPAÑANTE
DURACIÓN FORMATO
TIPO CANTIDAD
(minutos) CD DVD Otro ¿Cuál?
Vídeo
Audio
Multimedia
Producción
electrónica
Otro Cuál?
DESCRIPTORES O PALABRAS CLAVE EN ESPAÑOL E INGLÉS

Son los términos que definen los temas que identifican el contenido. (En caso de duda para designar
estos descriptores, se recomienda consultar con la Sección de Desarrollo de Colecciones de la
Biblioteca Alfonso Borrero Cabal S.J en el correo biblioteca@javeriana.edu.co, donde se les
orientará).
ESPAÑOL INGLÉS
Rosmarinus officinalis, Rosmarinus officinalis,
Taraxacum officinale, Taraxacum officinale,
Actividad antimicrobiana antimicrobial activity,
Hidrodestilación hydrodistilation,
CMI, CMT CMI, CMT
RESUMEN DEL CONTENIDO EN ESPAÑOL E INGLÉS
(Máximo 250 palabras - 1530 caracteres)
Resumen
Este trabajo se realizó amparado bajo el proyecto: Desarrollo de alternativas de conservación

en productos fitoterapéuticos 100% naturales, financiado por COLCIENCIAS, con el fin de
observar y determinar el efecto antimicrobiano de aceites esenciales e hidrosoles a partir de
dos especies vegetales: Rosmarinus officinalis y Taraxacum officinale contra Escherichia coli,
Bacillus cereus, Staphylococcus aureus y Pseudomonas aeruginosa, proporcionadas por el
cepario de bacterias de la facultad de Ciencias de Pontificia Universidad Javeriana.
Rosmarinus officinalis o comúnmente llamado romero, es una planta ampliamente distribuida
en las tierras del mediterráneo, Turquía y en el continente Americano. Los aceites esenciales
de esta planta han sido investigados, tanto su actividad antimicrobiana como antioxidante, sin
embargo existe un subproducto derivado de la obtención del aceite esencial por
hidrodestilación, sobre el cual hay gran interés, el hidrosol. El diente de león es una planta que
al igual que el romero, tiene amplia distribución, y posee diversos usos a nivel de medicina
tradicional, con diversas aplicaciones tanto gastronómicas como medicinales. El objetivo de
este trabajo fue la evaluación antimicrobiana de los hidrosoles y aceites esenciales de
Rosmarinus officinalis y de Taraxacum officinale contra 4 bacterias patógenas:
Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa y Bacillus cereus. El
aceite esencial obtenido del romero, se extrajo a partir de hojas de la planta durante 3 horas
mediante el uso de un aparato de Clevenger, y el hidrosol como subproducto de la destilación;
para diente de león se realizó el mismo procedimiento por hidrodestilación por 3 horas
encontrando únicamente hidrosol. Se realizó la evaluación de densidad como parámetro donde
la densidad del aceite esencial de romero fue de 0.881g/mL ± 0.016, la densidad del hidrosol
de romero fue de 0.9955g/mL ± 0.00098 y la densidad del hidrosol de diente de león fue de
0.9953g/mL ± 0.00065, y el rendimiento en cuanto a la obtención del aceite esencial de
Rosmarinus officinalis fue de 0.594 mL/g± 0.04. Complementaria a estas evaluaciones, se
realizó la técnica de extracción por microgota, mediante la cual se emplearon 150 μL de
hexano y de diclorometano a temperatura ambiente de 20°C y 3000 rpm en 5 mL de hidrosol,
y a través de un cromatógrafo de gases acoplado a masas, se determinaron los compuestos
presentes en el hidrosol que se encuentran en el solvente. Para la evaluación de la actividad
antimicrobiana tanto del aceite esencial como de los hidrosoles, se realizó por difusión de
disco en agar, de 3 concentraciones 100ppm, 10ppm y 1 ppm, se realizó la lectura por halos de
inhibición. La actividad antimicrobiana no se evidenció con las concentraciones evaluadas.
Abstract
This work was done under the project: Development of alternatives of conservation in 100%
natural fitoterapeutics products, funded by COLCIENCIAS, the objective was to observe and
determine the antimicrobial effect of essential oils and hydrosols from two vegetables species:
Rosmarinus officinalis y Taraxacum officinale against Escherichia coli, Bacillus cereus,
Staphylococcus aureus y Pseudomonas aeruginosa, the species were provided by Bacteria
conservation of Faculty of Science of Pontificia Javeriana University.
Rosmarinus officinalis or commonly called rosemary, is a plant widely distribued in many
lands of the Mediterranean, Turkey and American continent. The essential oils of this plant
have been investigated, both its antimicrobial activity and its antioxidant, however it exists a
subproduct derived of the obtaining of essential oil by hydrodistilation, which has a lot of
scientifically interest, the hydrosol. The dandelion is a plant that as well as the rosemary, is
widely distributed, and has many uses in traditional medicine, with different applications both
gastronomic and medicinal. The objective of this work was the antimicrobial evaluation of
hydrosols and essentials oils of Rosmarinus officinalis and Taraxacum officinale against 4
pathogenic bacterial: Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa y
Bacillus cereus. The essential oil obtained from rosemary was extracted from leaves of the
plant, during 3 hours, it was used a Clevenger system, and hydrosol was obtained as a
subproduct of distillation. For the dandelion the same procedure was used, by hydrodistilation,
3 hours, but only we found hydrosol. A density evaluation was made as a parameter where the
density of rosemary was 0.881g/mL ± 0.016, the density of rosemary hydrosol was
0.9955g/mL ± 0.00098 and the density of dandelion hydrosol was 0.9953g/mL ± 0.00065, the
yield by extraction of the essential oil of Rosmarinus officinalis was 0.594 mL/g± 0.04.
Complementary to these experiments, the extraction by “micro droplet” technic was used. I
was used 150 µL of hexane and dichloromethane at 20°C and 3000 rpm in 5 mL of hydrosol.
Through a gas chromatograph with a masas spectrometer, it was evaluated the components of
the hydrosol presents in the solvent. For the evaluation of antimicrobial activity, both its
essential oil and its hydrosols, a diffusion in agar plate was used, 3 concentrations were tested:
100ppm, 10ppm and 1 ppm, the reading was made by inhibition of halos. The antimicrobial
activity was not found in these conditions.

Evaluación de La Actividad Antimicrobiana de Aceites Esenciales e Hidrosoles de Rosmarinus

Încărcat de

Informații document

Drepturi de autor

Formate disponibile

Partajați acest document

Partajați sau inserați document

Opțiuni de partajare

Vi se pare util acest document?

Este necorespunzător acest conținut?

Drepturi de autor:

Formate disponibile

Evaluación de La Actividad Antimicrobiana de Aceites Esenciales e Hidrosoles de Rosmarinus

Încărcat de

Drepturi de autor:

Formate disponibile

Evaluación de la actividad antimicrobiana de aceites esenciales e hidrosoles de Rosmarinus

officinalis y Taraxacum officinale frente a microorganismos patógenos

ADRIANA MARCELA RAMOS PENCUE

Presentado como requisito para optar al título de

PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA

ADRIANA MARCELA RAMOS PENCUE

ADRIANA MARCELA RAMOS PENCUE

Artículo 23 de la Resolución No. 13 de Julio de 1994

Adriana Marcela Ramos Pencue

Agradezco a la Doctora María Claudia Campos Pinilla y a su equipo de Laboratorio, por la

Al laboratorio de Química Microbiológica, del departamento de química, por brindar apoyo en

Tabla 1. Comparación de contenido de aceites esenciales en diferentes 20

Rosmarinus officinalis o comúnmente llamado romero, es una planta ampliamente distribuida en

PALABRAS CLAVES: Rosmarinus officinalis, Taraxacum officinale, Actividad

La medicina tradicional hace referencia al uso de conocimientos ancestrales para mantener la

Microorganismos como Staphylococcus aureus, quién frecuentemente está involucrado en

Algunos conservantes utilizados en las industrias tanto de alimentos como de cosméticos

2. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA – JUSTIFICACIÓN

3.1.1 Metabolitos Primarios

3.1.2 Metabolismo Secundario

En un ecosistema, coexisten mediante diferentes relaciones interespecíficas: microorganismos,

3.1.3 Defensa en plantas

3.2.2 Formas de acción

Si la clasificación se refiere al lugar de ataque sobre el microorganismo, existen antibióticos que

3.2.3 De la resistencia de los microorganismos a los antibióticos

1. Degradacion enzimática o medificación del agente antimicrobiano

3.3 PLANTAS CON POTENCIAL ANTIMICROBIANO

3.4. SOBRE LA OBTENCIÓN DE ACEITES ESENCIALES

Figura 1. Esquema industrial general de la producción de aceites esenciales (Tomado de Cerpa

Estructura celular Ejemplos

Pelos glandulares Labiatae, Verbenaceae, Geraniacea

Cavidades esquizógenas (células seoaradas Myrtaceae, Gramineae, asteraceae

Canales lisígenos (Espacios resultantes por Rutaceae

Canales resinosos Coniferae

Canales gomosas Cistaceae, Burseraceae

3.5.1 Romero, Rosmarinus officinalis

3.5.2 Diente de león, Taraxacum officinale

Dentro de sus aplicaciones se encuentra su acción anti-inflamatoria por la presencia de

3.6 DE LOS MICROORGANISMOS A EVALUAR

Los microorganismos evaluados en el presente estudio se encuentran en el grupo de los

3.6.1 Escherichia coli

3.6.2 Pseudomonas aeruginosa

3.6.3 Bacillus cereus

 Colecta del material vegetal

Los aceites esenciales e hidrosoles de Rosmarinus officinalis y Taraxacum officinale fueron

 Determinación de parámetros fisicoquímicos de los aceites esenciales e hidrosoles de

La identificación de los compuestos químicos fue realizado, en un cromatógrafo de gases

 Identificación de la capacidad antimicrobiana de los aceites esenciales e hidrosoles de

Para identificar la capacidad antimicrobiana de los hidrosoles de romero y de diente de león,

Aceite esencial de Romero Hidrosol de Romero

Compuesto Porcentaje de Porcentaje de Porcentaje de Porcentaje de

Camfor 22.21% 98% 30.3% 98%

Eucaliptol 17.9% 96% 27.1% 99%

α-pineno 9,7% 97% - -

Camfeno 7.86% 97% - -

β-pineno 7.17% 97% - -

Bornil acetato 4.38% 98% 0.183% 98%

Borneol 4.26% 90% 5.3% 91%

α-pelandreno 2,2% 91% - -

γ-Terpineno 2.1% 95% - -

Verbenona 1.84% 98% 30.88% 98%

α-Terpineol 1.43% 90% 1.95% 90%

(+)4-careno 1.23% 97% - -

α-Cariofinelo 0.85% 99% - -