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BIOMARCADORES REDOX.
VALOR DIAGNÓSTICO
Y APLICACIONES CLÍNICAS
Dra. C. Olga Sonia León Fernández
2do. TÍTULO DE LA SERIE

“BALANCE ANTIOXIDANTE PRO-OXIDANTE: SALUD Y ENFERMEDAD”
Primera Edición, Mayo 2010

Diagnóstico Clínico Redox
Primera Edición en el 2010
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la Autora.
2
Dedicatoria,
A mi Madre, por ser el punto de partida de

todas mis buenas acciones,
A mis Estudiantes, por reafirmarme cada

día que el ser Maestra fue la mejor elección de
mi vida.
3
INDICE
Prólogo /6
Introducción /8
CAPÍTULO I. El Glutatión (GSH)
Estructura y Funciones / 11
Funciones Antioxidantes / 12
El GSH como regulador del crecimiento y la muerte celular / 14
La pérdida en la regulación de la síntesis del GSH. Envejecimiento
y Enfermedades / 17
Interpretaciones, en el orden diagnóstico, sobre las concentraciones
de GSH / 22
.
CAPÍTULO II. El Óxido Nítrico (ON )
Síntesis, Regulación y formación de Peroxinitrito / 23

Citotoxicidad inducida por Peroxinitrito / 27
Dianas Biológicas del Peroxinitrito / 28
Óxido Nítrico y Peroxinitrito en Enfermedades / 31
Interpretaciones en el orden diagnóstico, sobre las concentraciones de
Óxido Nítrico/Peroxinitrito / 45
CAPÍTULO III. Malondialdehído (MDA) y los Hidroxialquenales (HAL)
Formación y Funciones / 46
El MDA / 51
Los HAL y sus funciones fisiológicas y enfermedades / 52
Interpretaciones, en el orden diagnóstico, sobre las concentraciones de
MDA y los HAL / 58
CAPÍTULO IV. DAÑO OXIDATIVO A PROTEÍNAS
Factores asociados al daño a proteínas / 59

Grupos carbonilos como marcadores del daño a proteínas / 64
Productos avanzados de la oxidación de proteínas / 65
Interpretaciones, en el orden diagnóstico, sobre el daño a proteínas a
través de la determinación de grupos carbonilo y de los productos
avanzados de la oxidación de proteínas / 67
4
CAPÍTULO V. LA SUPERÓXIDO DISMUTASA (SOD), CATALASA (CAT) Y

EL PERÓXIDO DE HIDRÓGENO
La Superóxido Dismutasa / 69
La Superóxido Dismutasa Extracelular en estados fisiopatológicos / 72
Aplicaciones Terapéuticas de la SOD extracelular / 78
Interpretaciones, en el orden diagnóstico, de la actividad de SOD / 81
El Peróxido de Hidrógeno / 82
Funciones fisiológicas / 82
Sistemas de defensa antioxidante involucrados en la detoxificación
del peróxido de hidrógeno / 84
El peróxido de hidrógeno en las enfermedades / 85
Interpretaciones, en el orden diagnóstico, de las concentraciones
plasmáticas del peróxido de hidrógeno / 89
La Catalasa / 90
La Catalasa. Funciones y su papel en enfermedades / 90
Interpretaciones, en el orden diagnóstico, de las concentraciones
plasmáticas de la catalasa / 91
Algunas aplicaciones clínicas de la tríada SOD/Peróxido de Hidrógeno/

Catalasa / 92
CAPÍTULO VI. MANIPULACIONES DIETÉTICAS QUE INFLUYEN EN EL

REESTABLECIMIENTO DEL ESTADO REDOX CELULAR
Relacionadas con GSH / 96

Asociadas a la Peroxidación Lipídica / 100
Los hábitos dietéticos y el daño a proteínas / 110
Referencias / 115
Relación de siglas y símbolos / 117
5
PRÓLOGO
Las Especies Reactivas de Oxígeno (ERO) participan en funciones

esenciales para la vida, como es el mantenimiento del tono vascular, la
síntesis de hormonas y la regulación de importantes Factores de
Transcripción como el NF-κB y el HIF-1, entre otros. Una pérdida del Balance
entre los sistemas que generan ERO y aquéllos que los secuestran, para
mantener la homeodinámica redox, conduce a un Estrés Oxidativo Crónico
que se asocia a la generalidad de las enfermedades conocidas, entre ellas
las que poseen una notable incidencia en la morbi-mortalidad de la población
mundial [cáncer, accidentes cardio y cerebrovasculares, enfermedades
neurodegenerativas (Alzheimer, Parkinson y otras) diabetes, desórdenes
autoinmunes, VIH, etc].
La comunidad científica, a nivel mundial, ha realizado importantes aportes en

la identificación y cuantificación de las sustancias endógenas redox que se
asocian a estas enfermedades, con vista a lograr un diagnóstico que exprese
tanto el estadio de desarrollo de una enfermedad así como los riesgos de su
debut y grado de progresión, en el paciente.
El presente libro da continuación al primero, publicado en el 2004, titulado

“Balance Antioxidante/Pro-oxidante: Salud y Enfermedad”, denominación que
le hemos dado a una Serie de títulos que proyectamos elaborar sobre la
temática de Estrés Oxidativo. El segundo título de esta serie, es el libro que
ahora presentamos, donde se recogen no solo los hallazgos de la literatura
científica más actualizada sino también nuestros propios aportes dados a
conocer a través de más de 50 publicaciones internacionales. El libro
“Biomarcadores Redox. Valor Diagnóstico y Aplicaciones Clínicas” aborda el
6
estudio de aquellos mediadores redox endógenos más reconocidos

internacionalmente por su participación en las enfermedades antes referidas.
Estos indicadores, que se determinan en suero/plasma y otros fluidos
biológicos, son abordados en el libro a través de una didáctica pragmática
que enseña cómo analizar estos parámetros, qué significan funcionalmente
incrementos o disminuciones y cómo relacionarlos, entre sí, en el momento
del diagnóstico clínico del paciente.
El EO crónico, en una enfermedad dada, puede ser controlado, y

reestablecidas las condiciones fisiológicas, por diferentes vías que van
desde la Dieta, la administración de Suplementos Nutricionales y
Medicamentos; éstos últimos con propiedades antioxidantes.
En el libro se incluye un último capítulo denominado “Algunas

manipulaciones dietéticas que influyen o determinan el reestablecimiento
del estado redox celular” y se brindan diferentes indicaciones de cómo
proceder, a través de los alimentos/suplementos, para resolver las carencias
de antioxidantes esenciales, asociados a enfermedades, contribuyendo a la
mejoría del cuadro clínico y/o a su prevención.
Dra. Olga Sonia León Fernández

Profesora Titular de Farmacología
Instituto de Farmacia y Alimentos,
Universidad de la Habana, Cuba
7
INTRODUCCIÓN
El Estrés Oxidativo es el resultado de una pérdida del Balance

Antioxidante/Prooxidante o también del estado redox celular. La
homeodinámica redox es un proceso indispensable para la vida; sin embargo
cuando se produce un exceso de generación de Especies Reactivas de
Oxígeno (ERO), que sobrepasa las capacidades de los sistemas
antioxidantes, sobreviene entonces el conocido Estrés Oxidativo Crónico
(EOC), asociado a la generalidad de las enfermedades que exhiben una alta
morbi-mortalidad.
Por lo antes expuesto se viene desarrollando, en los últimos 50 años, una

intensa investigación acerca del papel EOC en diferentes estados
fisiopatológicos, qué biomoléculas son dañadas en estos desórdenes por
estas ERO y cómo se puede diagnosticar el nivel o estado de estrés oxidativo
en organismos vivos, fundamentalmente en humanos.
Un análisis del estado del conocimiento sobre el papel del EOC en diferentes
desórdenes, a través del número de artículos referenciados en PubMED en el
período 1999-Febrero/2010, se presenta en la figura 1.
Como se puede observar, las tres enfermedades más asociadas a un EOC

son el cáncer, la isquemia (principalmente miocardio y cerebro) y la diabetes
y sus complicaciones vasculares. Cuando se analizó qué marcadores
poseían una mayor incidencia en las enfermedades investigadas se
obtuvieron los resultados que se muestran en la figura 2.
8
9%
C ANCER
21%
46% ISQ UEMIA
DIABETES
O TRAS(*)
24% CANCER > ISQUEMIA > DIABETES
Figura 1. Artículos publicados, (en %) , de Enfermedades asociadas

con un Estrés Oxidativo Crónico, en los últimos 10 años.
(*) Otras enfermedades incluyen: Artritis y Neurodegenerativas.

Fuente: PubMED (1999-2010). Datos tomados en Febrero/2010
28 % 29 % G LUTATIÓN
ON
15 % 27 % MDA
OTROS(*)
GSH > ON. > MDA
Figura 2. Artículos publicados, (en %), de Marcadores de Estrés Oxidativo

asociados a enfermedades, en los últimos 10 años.
(*) Otros marcadores incluyen: Hidroperóxidos Totales (HT), Superóxido

Dismutasa (SOD), Catalasa (CAT), Productos Avanzados de la Oxidación
de Proteínas (PAOP) y Potencial de Reducción (FRAP).
PubMED (1999-2010). Datos tomados en Febrero/2010
9
El Glutatión Reducido (GSH), el Óxido Nítrico (ON.) y el Malondialdehído

(MDA), éste último uno de los productos terminales de la peroxidación
lipídica, fueron los que recibieron una mayor atención, a nivel internacional,
en cuanto al número de publicaciones referenciadas en PubMED.
Con estos antecedentes se estructuró el presente libro que persigue, como

propósito fundamental, contribuir al análisis del significado en el orden
funcional de estos biomarcadores redox; a no interpretarlos solamente a nivel
cuantitativo sino, tan importante como esto, establecer su significado
fisiológico y qué nos está indicando acerca del riesgo o progresión de una
enfermedad dada.
10
CAPÍTULO I. EL GLUTATIÓN (GSH)
Estructura y Funciones del GSH
El GSH es un tripéptido conformado por 3 aminoácidos, a saber: Glutámico,

Cisteína y Glicina (figura 3)
O O
HOOC-CH(NH2)-CH2-CH2-C-NH-CH-C - NH-CH2-COOH
CH2
γ-glutamil glicina
SH
cisteinil
Figura 3. Estructura química del glutatión
Este tripéptido se encuentra presente en todos los tejidos de mamíferos y, en

particular, altamente concentrado en el hígado. El GSH existe en las formas
de tiol (reducido, GSH) y disulfuro (oxidado, GSSG). El GSH es la forma
predominante, existiendo en concentraciones milimolares en la mayoría de
las células (en el hígado de 5-10 mM). Las células eucarióticas poseen 3
sitios de almacenamiento de GSH: alrededor del 90% del GSH celular se
encuentra en el citosol, 10% está en la mitocondria y un pequeño % en el
retículo endoplasmático.
El GSH es susceptible de ser hidrolizado por solo una enzima conocida, a

saber la γ-Glutamiltranspeptidasa (GGT) la cual está solo presente en las
11
superficies externas de ciertos tipos de células. Como consecuencia el GSH

es resistente a la degradación intracelular y es solo metabolizado
extracelularmente por órganos con GGT.
El GSH participa en funciones esenciales, incluyendo:
Detoxificación de sustancias electrofílicas,

Captura de Especies Reactivas de Oxígeno (ERO),
Mantenimiento del estado tiol esencial de proteínas.
Constituye un depósito del aminoácido cisteína,
Modulador de procesos celulares críticos, tales como síntesis de
ADN, procesos relacionados con los microtúbulos y la respuesta
inmune.
Regula la homeodinámica del ON.

Modula la actividad de proteínas por modificación postraslacional, y
Modula la actividad de receptores de neurotransmisores.
Considerando el alcance y los objetivos de este libro se centrará la atención

en las funciones esencialmente antioxidantes del GSH.
Funciones antioxidantes del GSH
Todos los organismos están sometidos a un cierto nivel de estrés oxidativo

fisiológico derivado de la propia respiración mitocondrial. Los intermediarios
que son formados incluyen al radical superóxido (O2.-) y al peróxido de
hidrógeno (H2O2) los que pueden conducir a la generación de ERO tóxicas
causando peroxidación lipídica y daño celular. Para prevenir esto, el
peróxido de hidrógeno, producido endógenamente es reducido a agua por
12
GSH en la presencia de la GSH-Peroxidasa (GSH-Px) dependiente de

selenio. En este proceso el GSH es oxidado a GSSG el cual a su vez, en una
ruta inversa, es reducido a GSH por la GSSG-Reductasa a expensas de
NADPH, formando un ciclo redox (figura 4).
H2O2 GSH NADP

+
Glutatión peroxidasa GSSG Reductasa Glucosa-6-Fosfato

(dependiente de Selenio) Deshidrogenasa
GSSG NADPH
H2O
Figura 4. Ciclo de utilización y regeneración de GSH
Los peróxidos orgánicos pueden ser reducidos por GSH-Px y GSH-S-

Transferasa. Por otra parte, el peróxido de hidrógeno también puede ser
reducido por catalasa, la cual está solo presente en peroxisomas.(figura 5).
En la mitocondria el GSH es particularmente importante debido a la ausencia

de catalasa en este organelo celular. Ciertamente el GSH es crítico en las
defensas contra el estrés oxidativo generado, tanto fisiológico como
fisiopatológico.
13
Daño
tisular
NADP NADPH
HOCl GR
MPO H2O + ½ O2
Cl-
Catalasa GSH GSSG
Daño
Dep. Se
a -SH
H2O2
SOD H2O
O2.- (MITOCONDRIA
Y CITOSOL)
Figura 5. Interacción entre los sistemas antioxidantes endógenos
Un estrés oxidativo severo puede sobrepasar la capacidad de la célula para

reducir el GSSG a GSH, conllevando a la acumulación de GSSG. Para
proteger la célula de este estado oxidante el GSSG puede ser exportado
activamente hacia el exterior de la célula y reaccionar con grupos sulfidrilos
de proteínas conllevando a la formación de disulfuros mezclados. De esta
forma el estrés oxidativo agota el GSH celular.
El GSH como un regulador del crecimiento y la muerte celular
En células, tales como linfocitos y fibroblastos, un incremento en los niveles

de GSH se asocia con una respuesta proliferativa temprana y es esencial
para que la célula entre en la fase “S” (replicación del ADN). El “status” del
GSH correlacionó directamente con el crecimiento de las células del cáncer
14
de hígado. También se ha demostrado que concentraciones elevadas de

GSH promueven el crecimiento de células de melanoma metastásico en el
hígado. El mecanismo molecular de cómo el GSH modula la proliferación
celular todavía permanece con un alto grado de especulación. Es
conocido que el GSH modula la síntesis de ADN manteniendo en su estado
de reducción a la glutaredoxina o tioredoxina las cuales son requeridas para
la actividad de la ribonucleótido reductasa, la enzima que marca el paso de
velocidad limitante en la síntesis de ADN. Alternativamente un incremento en
el GSH celular puede cambiar el estado redox tiol de la célula, la cual en
respuesta puede afectar la expresión o actividad de importantes factores para
la progresión del ciclo celular, la respuesta inmune y otras funciones
esenciales. En este sentido, el mejor ejemplo de que no se debe utilizar
antioxidantes de forma indiscriminada, por la influencia que sobre el estado
redox de la célula ejercen estas sustancias, lo constituye la necesaria
activación del Factor de Transcripción Nuclear NF-κB por un estado oxidante
en el citosol y cómo cuando este factor se transloca al núcleo, para que se
enlace al ADN y reconozca los genes asociados a la expresión de proteínas
esenciales para la vida, se requiere de un estado reductor (figura 6). Si este
factor no se activa fisiológicamente se producen profundas alteraciones, en el
tiempo, relacionadas con la respuesta inmune frente a tumores malignos y a
otras enfermedades
El GSH también se ha asociado con la regulación de la muerte celular. La

depleción de GSH juega un importante papel en la iniciación de la apoptosis
en algunos tipos de células. Sin embargo, una profunda depleción convierte
la muerte celular, inducida por una variedad de agentes, de apoptosis a
necrosis, sugiriendo que concentraciones muy elevadas de ERO pueden
sobrecargar la maquinaria apoptótica. Un profundo agotamiento del GSH
mitocondrial conduce a un elevado incremento en la producción de
15
ERO, disfunción mitocondrial y depleción de ATP. Este proceso puede

transformar la ruta de muerte celular de apoptosis a necrosis.
H2O2, otras ERO, otros estímulos

Inhibidores de Fosfatasas + PKC
TNF-α,PMA/PHA, PMA/Ionomicin/A2137
RCT/CD3 + CD28
CITOPLASMA
IκB
QUINASAS SER/TREO QUINASAS H2O2 y otras ERO

IκB QUINASAS TIROSINA Intracelular
FOSFORILAN
Ser 32, Ser 36 Tir 42
ACTIVACIÓN NF-κB
IκB
SISTEMA UBIQUITINA 36 CONDICIONES OXIDANTES
32
GSSG
Ubiquitinacion BLOQUEADO/ANTIOXIDANTES
23 IκB Lis 21, Lis 23 N-Acetilcisteína
36
21 32 Vitamina E
IκB BHT
NÚCLEO
ENLAZAMIENTO AL ADN
CONDICIONES REDUCTORAS
GSH
BLOQUEADO/IκB libre
GSSG
Figura 6. Mecanismos señalización asociados a la activación de NF-κB y la

influencia del estado redox celular sobre la activación del Factor
16
La pérdida en la regulación de la síntesis de GSH. Envejecimiento y

Enfermedades
Se debe enfatizar, ante todo, que el GSH es un marcador redox indicativo de

protección contra el estrés oxidativo crónico, asociado a diferentes
enfermedades.
1. ¿Qué significan Bajos niveles de GSH con respecto al intervalo de

referencia?
Concentraciones de GSH por debajo del rango de referencia se han referido

en enfermedades tan diversas como el Parkinson, VIH/SIDA y fibrosis cística,
entre otras. Evidentemente, una disminución en las concentraciones de
GSH trae aparejada una ruptura del balance antioxidante-prooxidante y un
estrés oxidativo que puede progresar a un estado crónico. Ahora bien, cuál
es la causa, a nivel molecular, de este decrecimiento en los niveles de GSH.
Una atención preferencial la ha recibido el polimorfismo encontrado en la
subunidad catalítica (GCLC) de la enzima Glutamato Cisteína Ligasa (GCL)
que es la enzima que cataliza el primer paso en la biosíntesis de GSH y es
considerada como la enzima que marca el paso de velocidad limitante. Una
disminución en la expresión de esta enzima se ha encontrado en:
Anemia hemolítica,
En la resistencia a la farmacoterapia antitumoral en algunas líneas
celulares de tumores,
En la esquizofrenia,
En el deterioro de la función vasomotora coronaria mediada por ON. y
riesgo de infarto del miocardio, entre otros desórdenes.
17
En el Envejecimiento,
Las concentraciones de GSH experimentan una caída, en todos los tejidos,

con la edad, debido a una disminución en la expresión de los genes que
codifican para la GCL y la GSH-Sintetasa (GS). No se han observado
disminuciones en la expresión de las enzimas γ-glutamil transpeptidasa
(GGT), [única enzima localizada en la superficie externa de las células
epiteliales capaz de hidrolizar el enlace peptídico del GSH para producir
cisteína y que se emplea como un marcador de daño hepático], GSH-
reductasa, disponibilidad de cisteína para la resíntesis de GSH o GSSG como
un indicador de daño oxidativo. Se ha sugerido que la disminución
dependiente de la edad en los niveles de GSH puede contribuir a muchas de
las enfermedades asociadas con la edad. Cómo el envejecimiento afecta la
expresión de GCL y GS, a nivel molecular, permanece todavía poco
claro.
En la Diabetes Mellitus
Ha sido referido que la deficiencia de insulina disminuye la expresión de

GCLC y reduce el contenido de GS en eritrocitos de pacientes diabéticos. La
hiperglicemia crónica incrementó la apoptosis en células endoteliales del
cerebro en humanos y fue atenuada la muerte celular programada por
insulina. Se relacionó la capacidad de la insulina para inducir GCLC. La
disminución en la expresión de GCLC, debido a la hiperglicemia y la
deficiencia de insulina, puede conducir a una disminución en las
concentraciones de GSH que deteriora las defensas antioxidantes. Una
importante acción de la insulina, desde el punto de visita del balance
redox, la constiuye su capacidad de incrementar la expresión de GCLC.
18
Enfermedades del hígado en alcohólicos
Los pacientes con enfermedades hepáticas, por alcoholismo, exhiben bajos

niveles de GSH en hígado y plasma. El estrés oxidativo en el alcoholismo
es una de las razones que conduce a una depleción de GSH. Otra, es la
disponibilidad de cisteína, la cual puede ser debida a una deficiencia
nutricional y anormalidades múltiples en la ruta metabólica de la metionina.
Los pacientes hospitalizados por hepatitis alcohólica poseen un
decrecimiento de un 50% en los niveles de ARNm hepático para las enzimas
GCL y GS. El mecanismo no ha sido esclarecido pero dado que el GSH es
requerido para la función linfocitaria normal, estas anormalidades pueden de
forma adicional contribuir a elevar la morbilidad y mortalidad de este
desorden.
En la Artritis Reumatoide (AR)
La AR es la forma más común de artritis inflamatoria, una enfermedad

autoinmune sistémica caracterizada por inflamación crónica de las
articulaciones sinoviales, conllevando a destrucción e incapacidad
permanente en el 1% de la población mundial. En la AR los sistemas
antioxidantes están deteriorados, se instala un estrés oxidativo crónico que
posee un papel esencial en la etiología de la AR. Se ha referido una
disminución en las tres enzimas que contribuyen al ciclo de utilización y
regeneración del GSH (figura 3), a saber: GSH-Px (reduce los
organoperóxidos) , GSH-Reductasa (regenera el GSH) y Glucosa 6 Fosfato
Deshidrogenasa (aporta el NADPH para la regeneración del GSH). Se
19
considera que estos marcadores redox, conjuntamente con la SOD y la CAT,

puede ser indicadores efectivos y tempranos en el diagnóstico de la AR.
En la Enfermedad de Parkinson
La enfermedad de Parkinson (EP) es la segunda enfermedad

neurodegenerativa más común en los Estados Unidos. La característica
neuropatológica fundamental es la pérdida de neuronas dopaminérgicas de
la sustancia nigra pars compacta. La patogénesis de esta pérdida no está
totalmente esclarecida. Uno de los cambios bioquímicos más tempranos,
vistos en la EP, es la reducción en los niveles de GSH total. Se ha
pensado que esta disminución en los niveles de GSH es la consecuencia de
un estrés oxidativo incrementado, un proceso fuertemente implicado en la
patogénesis de la EP. Sin embargo, evidencias más recientes sugieren
que la disminución de GSH puede por sí misma, ya no ser solo una
consecuencia del estrés oxidativo crónico, sino jugar un papel activo en
la patogénesis de esta enfermedad neurodegenerativa.
2. ¿Qué indican altos niveles de GSH con respecto al intervalo de

referencia?
La resistencia a fármacos quimioterapéuticos, con platino o agentes

alquilantes, es a menudo multifactorial involucrando transporte alterado del
antitumoral, biotransformación e incrementada capacidad de detoxificación.
Los niveles incrementados de GSH y la expresión de GCL ocurre en muchos
tumores y han estado implicados en la resistencia de los tumores a los
fármacos antitumorales y/o a las radiaciones en tumores de ovario, pulmón,
20
próstata y colorectal. También se han encontrado concentraciones más altas

de GSH en cáncer de hígado humano. Esto fue debido a la expresión
incrementada de GCLC y GS a nivel transcripcional. El incremento en el
GSH celular es un factor mayoritario de resistencia a la quimioterapia
antitumoral por:
Enlazamiento o reacción con el fármaco,

Interacción con oxígeno reactivo,
Previniendo el daño a proteínas o al ADN,
Participando en los procesos de reparación del ADN
La Proteina de Resistencia Multifármaco Humana (PRMH) puede conferir

resistencia a múltiples clases de agentes quimioterapéuticos. Se ha
demostrado una sobreexpresión coordinada de GCLC y PRMH en tumores
colorectales y en cáncer de pulmón humanos.
La importancia del GSH en el tratamiento del cáncer es mejor ilustrada por el

hecho de que BSO, un inhibidor irreversible de GCL, lo que disminuye la
síntesis de GSH y por ende sus concentraciones, es ahora a menudo
empleado como un adyuvante de agentes quimioterapéuticos para
sensibilizar las células tumorales a los efectos de la quimioterapia.
Estos resultados indican que las concentraciones de GSH pueden resultar un

criterio de pronóstico en cuanto al fracaso o no de la quimioterapia empleada
así como de la propia progresión del tumor maligno.
21
INTERPRETACIONES, EN EL ORDEN DIAGNÓSTICO, SOBRE LAS CON-

CENTRACIONES DE GSH
o Las alteraciones en los niveles de GSH se asocian a enfermedades de una

elevada morbi-mortalidad (cáncer, isquemia y diabetes, entre otras).
o La disminución de las concentraciones de GSH indican un estrés oxidativo

instalado que debe estar ocasionando una disminución en la actividad de
GSH-Px y enzimas detoxificantes de xenobióticos (nutricionales /ambientales)
como la GSH-S-Transferasa (GST), lo que origina que se acumulen ERO y
otros metabolitos que desencadenan diferentes enfermedades.
o Un incremento de las concentraciones de GSH pueden indicar, al menos,

2 situaciones clínicas diferentes: (1) hay un estrés oxidativo que dispara los
mecanismos de defensa antioxidantes y esto se corrobora con el incremento
en todos, o en algunos, de los parámetros de lesión (daño a proteínas, lípidos,
incremento de la suceptibilidad lipídica y aumento de los hidroperóxidos orgá-
nicos,. La persistencia del estrés oxidativo, a pesar del incremento en GSH,
indica que a pesar de este aumento no se logró reestablecer el estado redox
basal y, (2) el mismo cuadro pero, si hay un tumor maligno presente, indica
una gran probabilidad de resistencia del tumor a la quimioterapia (farmacoló-
gica o con radiaciones).
o En el Capítulo VI sobre manipulaciones dietéticas se consideran

recomendaciones nutricionales dirigidas a mejorar el estado redox
dependiente de GSH. Para el caso de la resistencia a tumores se han
empleado inhibidores irreversibles (BSO) de la enzima GCL que marca el paso
de velocidad limitante en la síntesis de GSH. BSO es a menudo utilizado como
un adyuvante para sensibilizar las células tumorales.
o En particular, en los tumores malignos, la determinación de GSH posee un

valor de especial importancia, en el orden diagnóstico, ya que permite
predecir resistencia a la quimioterapia.
22
CAPÍTULO II. El Óxido Nítrico (ON.)
Síntesis, Regulación y formación de Peroxinitrito
El ON. es un mensajero intracelular presente en todos los vertebrados

modulando el flujo sanguíneo y la actividad neuronal. El ON. identificado
inicialmente como el Factor Relajante del Endotelio Vascular, es un gas
incoloro que posee un electrón no pareado deslocalizado entre el átomo de N
y el O2 molecular. Posee un t½ entre 3-5 segs. Los productos de su reacción
con el oxígeno molecular son poderosos agentes nitrantes (NO2., dióxido de
nitrógeno; N2O3, trióxido de dinitrógeno y N2O4, tetraóxido de dinitrógeno) que
dañan proteínas y son carcinogénicos.
En 1987 se descubre que el ON. es una molécula que participa en la

señalización celular y modula el tono vascular. Se genera a partir del
aminoácido básico Arginina, catalizando la reacción la enzima Óxido Nítrico
Sintetasa (ONS), la cual existe en 3 isoformas y se localiza en endotelio
vascular, neuronas y fagocitos activados (figura 7).
El endotelio vascular puede formar pequeñas cantidades de radical

.
superóxido e interactuar con el ON a través de una reacción radical-radical
para dar lugar al peroxinitrito (ONOO-). Este es uno de los mecanismos
patológicos de la disminución de ON, en la hipertensión arterial,
aterosclerosis y otras insuficiencias vasculares. Las células vasculares
producen la enzima SOD que transforma el radical superóxido en peróxido de
hidrógeno. Sin embargo su velocidad de reacción es menor que la de la
formación de ONOO-, luego el secuestro de ON. por el O2.- es una reacción
altamente probable en disfunciones vasculares (figura 8).
23
Receptores Variaciones en el Flujo

(Acetilcolina, Bradicinina, Sustancia P etc.) Sanguíneo Intravascular
[Ca2+]i
CÉLULA
ENDOTELIAL (+) (+)
Calmodulina Ca2+-Calmodulina
(+) Akt
NOS NOS
(activa) (inactiva)
(+)
CITRULINA + .NO ARGININA
(+)
GC GC
(basal) (activada)
CÉLULA (+)
MUSCULO
LISO cGMP GTP
RELAJACION
Figura 7. Control de la ONS constitutiva por calcio-calmodulina
24
S OD
O2.- + 2H+ H2O2
2 . 109 M-1 . S-1
6.7 . 109 M-1 . S-1

O2.- + ON .
ONOO-
Figura 8. Velocidad de reacción entre el radical anión superóxido y el óxido

-
nítrico, predominando la formación de peroxinitrito (ONOO )
Ni el radical superóxido ni el ON. son particularmente tóxicos in vivo, debido a

que existen mecanismos eficientes que minimizan su acumulación. El
superóxido es rápidamente removido por altas concentraciones de enzimas
capturadoras de superóxido, denominadas superóxido dismutasas con
isoenzimas distintivas localizadas en mitocondria, citosol y de naturaleza
extracelular. El ON. es rápidamente removido por su rápida difusión a través
de los tejidos en las células sanguíneas, donde es convertido a nitrato por
reacción con oxihemoglobina, esto limita el tiempo de vida media biológica
del ON. in vivo a poco menos de unos segundos. Sin embargo, cuando el
radical superóxido y el ON. son sintetizados dentro de células, separadas
unos pocos diámetros una de otra, ellos se combinan espontáneamente para
formar peroxinitrito por una reacción limitada por procesos de difusión.
25
Ninguna enzima es requerida para formar peroxinitrito ya que ninguna enzima

puede catalizar posiblemente una reacción tan rápida. Consecuentemente la
cinética y termodinámica de la reacción O2.- / ON. hace inevitable la formación
de peroxinitrito in vivo.
Una idea de lo antes señalado se expresa en que modestos incrementos en

superóxido y óxido nítrico, 10 veces cada uno , incrementará la formación de
peroxinitrito 100 veces. Ahora bien, bajo condiciones proiinflamatorias la
producción simultánea de superóxido y óxido nítrico puede ser fuertemente
activada para incrementar la generación de ambos mediadores 1000 veces,
lo cual incrementará la formación de peroxinitrito por un millón de veces.
.
El ON es a menudo considerado como solo otra molécula señalizadora, pero
es importante conocer cómo el ON. comunica la información para
comprender el por qué de sus múltiples funciones fisiológicas in vivo. Solo de
5 a 10 nM de ON. es necesario para activar la enzima guanilato ciclasa y
producir cGMP el cual activa las quinasas dependiente de cGMP, modula los
niveles de calcio intracelular y regula una gran diversidad de funciones
esenciales para la célula en los tejidos diana. Por otra parte, las distancias
relativamente cortas, en las que el ON. puede difundir, limita su acción solo a
unas pocas células cercanas a su fuente de producción. Así el ON. producido
en el intestino, por ejemplo, no ejercerá sus acciones sobre el Sistema
Nervioso Central.
Muchos de los efectos tóxicos, atribuidos al ON., están más probablemente

mediados por sus productos de oxidación. Así el ON. no ataca directamente
al ADN. Sin embargo puede reversiblemente inhibir enzimas con
26
metales de transición o con intermediarios de radicales libres en sus sitios

catalíticos. El ON., en concentraciones micromolares, inhibe
reversiblemente a la catalasa. En el rango submicromolar puede también
inhibir reversiblemente a la Citocromo c Oxidasa la cual puede incrementar,
de forma trasciente, el drenaje de superóxido desde la cadena de transporte
electrónico. El superóxido así formado pudiera entonces reaccionar con el
ON. para generar peroxinitrito el que promueve un daño irreversible a la
mitocondria.
Citotoxicidad Inducida por Peroxinitrito
Como ya se señaló la asociación del ON. a diferentes enfermedades está

profundamente influenciada por la presencia de un estrés oxidativo crónico
caracterizado por una alta producción de radical superóxido y de ON. que,
como resultante, da lugar a la formación de peroxinitrito.
Bajo condiciones fisiológicas, la producción de peroxinitrito será baja y, por lo

tanto, el daño oxidativo mínimo por la participación de las defensas
antioxidantes endógenas. Recordar que modestos incrementos en la
producción simultánea de superóxido y óxido nítrico estimularán
grandemente la formación de peroxinitrrito. Consecuentemente las
condiciones patológicas pueden incrementar notablemente la producción de
peroxinitrito. Aún la producción de un flujo moderado de peroxinitrito, por
largos períodos de tiempo, dará como resultado una sustancial oxidación y
potencial destrucción de los constituyentes celulares, conllevando a la
disfunción de procesos celulares críticos, pérdida de vías de señalización
celular y la inducción de muerte celular por APOPTOSIS y NECROSIS
(figura 9).
27
PEROXIDACIÓN LIPÍDICA
MITOCONDRIA OXIDACIÓN DE PROTEÍNAS
NADPH-OXIDASAS NITRACIÓN DE PROTEÍNAS
XANTINA OXIDASA INACTIVACIÓN DE ENZIMAS
DESACOPLE ONSe ACTIVACIÓN MMP
L-Arginina
ON. + O2 .-
ONOO-
H2O2 MITOCONDRIA
Citrulina ∆ψ ↓
DAÑO MODERADO DAÑO SEVERO
CITOPLASMA
AIF
PARP-1
DAÑO HO (Inactiva) G
C Cit c
A
C
G
P
HOARP-1 APOPTOSIS
G
(Activa)
G FRAGMENTACIÓN ADN
REPARAR A
ACTIVACIÓN
GC
CASPASAS
TA
G
C
GC
↓NAD+ ↓ATP
T
NÚCLEO NECROSIS
EXPRESIÓN
GENES
Figura 9. Mecanismos moleculares de muerte celular mediada por

peroxinitrito. Diversas condiciones patológicas están
asociadas con la generación simultánea de radicales
superóxido y óxido nítrico.
Dianas Biológicas del Peroxinitrito
Proteínas
El peroxinitrito reacciona, de forma directa, con centros que poseen metales

de transición. De esta forma el peroxinitrito modifica proteínas que poseen
hierro como grupo prostético, tales como: hemoglobina, mioglobina, citocromo
c y otras.
28
Reacciones con amionoácidos (cisteína y tirosina, entre otros)
- Oxidación de Cisteína
El peroxinitrito puede alterar la estructura y función de las proteínas

reaccionando con varios aminoácidos en la cadena peptídica. La reacción
más prevalente es con cisteína, haciendo de la oxidación de los grupos tiol
una de las modificaciones predominantes, por parte del peroxinitrito.
Además del enlace tiol de proteínas, el peroxinitrito puede oxidar

directamente tioles de bajo peso molecular, más notablemente el GSH que
analizamos en el epígrafe anterior. El GSH va a servir como un
secuestrador endógeno eficiente del peroxinitrito y va a jugar un papel
fundamental en las defensas celulares contra esta ERO. Es así como la
susceptibilidad de las células a la toxicidad del peroxinitrito va a
depender, de forma sustancial, de la cantidad de GSH intracelular. El
agotamiento del GSH incrementando la toxicidad del peroxinitrito ha sido
propuesto como un factor contribuyente al desarrollo de algunas
enfermedades neurodegenerativas tales como el Parkinson y la
Esclerosis Lateral Amiotrófica.
En otras situaciones patológicas la oxidación de cisteína por peroxinitrito

puede resultar en activación de enzimas, en lugar de inhibición, como es el
caso de las Metaloproteinasas que degradan la matriz celular y que,
recientemente han sido implicadas como un mecanismo importante de la
toxicidad dependiente del peroxinitrito en enfermedades del corazón.
- Nitración de tirosina
La nitración de tirosina ha sido identificada en al menos 50 enfermedades

humanas. La nitración de tirosina afecta la estructura y función de proteínas,
29
dando como resultado la generación de epitopes antigénicos, cambios en la

actividad catalítica de enzimas, una organización alterada del citoesqueleto y
un deterioro en los mecanismos de señalización celular y, por lo tanto, un
proceso esencial en la citoxicidad mediada por el peroxinitrito.
Un ejemplo importante, en el contexto de los marcadores redox, es la pérdida

de la actividad enzimática de la SOD dependiente de manganeso
mitocondrial, la cual fue la primera proteína nitrada encontrada in vivo. La
nitración de un simple residuo tirosina (Tyr-34) conduce a una completa
inactivación de la enzima, y este es un proceso a favor de la generación de
más peroxinitrito en la mitocondria debido a una deteriorada dismutación del
radical superóxido. La nitración de la superóxido dismutasa dependiente
de manganeso ha sido detectada en roedores y humanos, en riñones
trasplantados y rechazados por el huésped, en fluido cerebroespinal de
pacientes con Esclerosis Lateral Amiotrófica así como también en las
enfermedades de Parkinson y Alzheimer, en cardiopatías asociadas a
diabetes, por el humo del cigarro y en desórdenes vasculares durante el
envejecimiento.
Lípidos
Un proceso fundamental de la citotoxicidad dependiente de peroxinitrito es su

capacidad de disparar la peroxidación lipídica en membranas por sustracción
de un átomo de hidrógeno desde ácidos grasos poliinsaturados (AGPI). Los
productos resultantes incluyen hidroperoxiradicales lipídicos, dienos
conjugados y aldehídos. El peroxinitrito puede jugar un papel crucial en
enfermedades inflamatorias del sistema nervioso por iniciación de la
peroxidación de lípidos, asociados a mielina, conduciendo a la
desmielinización. También actúa como un potente agente oxidante sobre
30
liproteínas de baja densidad (LDL). Esta LDL oxidada se enlaza con alta
afinidad a receptores secuestradores de LDL-oxidada y, en consecuencia, se
produce la acumulación de ésteres de colesterol oxidados y formación de
células espumosas, las cuales representan un evento clave temprano en la
aterogénesis.
- Ácidos Nucleicos
El peroxinitrito puede dañar el ADN por introducción de modificaciones

oxidativas tanto en las nucleobases como en el esqueleto fosfato-azúcar.
Óxido Nítrico y Peroxinitrito en Enfermedades
- Cardíacas
Las Óxido Nítrico Sintetasas, dependientes de calcio, son responsables de la

generación de ON. en cardiomiocitos, endotelio endocardial, endotelio
coronario y nervios cardíacos. El ON. desempeña importantes funciones
fisiológicas en la regulación cardíaca, incluyendo vasodilatación coronaria,
inhibición de la adhesión plaquetaria y activación de neutrófilos, modulación
de la función contráctil e inhibiendo el consumo de oxígeno, entre otros
efectos (figura 10).
31
DAÑO CARDÍACO
Infarto del Miocardio, Enfermedad Cardíaca Isquémica,
Sobrecarga Hemodinámica (Hipertensión, Estenosis
Aórtica, Valovulopatía, Cardiomiopatía, etc.
MITOCONDRIA
.
ON. SINTETASA NAD(P)H
XANTINA OXIDASA
L-Arginina
GMPc GCs ON. + O2. PEROXIDACIÓN LIPÍDICA

- OXIDACIÓN DE PROTEÍNAS E INACTIVACIÓN
SOD POR NITRACIÓN DE ENZIMAS
ACTIVACIÓN DE MPP
ACTIVACIÓN DE SEÑALIZ ACIÓN POR ESTRÉS
- H2O2 DISMINUIDA DISPONIBILIDAD DE ON.,
VASODILATACIÓN ONOO RELAJACIÓN VASCUL AR DETERIORADA
INCREMENTADA OXIDACIÓN DE LDL Y
INHIBICIÓN AGREGACIÓN
ATEROGÉNES IS
PLAQUETARIA
EFECTO ANTIAPOPTÓTICO
ANTIINFLAMATORIO
DAÑO MODERADO
DAÑO SEVERO MITOCONDRIA
NÚCLEO CITOPLASMA ∆ψ ↓
PROTECCIÓN ROTURA DISFUNCIÓN
CARDIOVASCULAR ADN
CARDIOVASCULAR
PARP-1
(Activa)
AIF
Cit c
REPARAR FRAGMENTACIÓN
ACTIVACIÓN
Apoptosis CASPASAS
FALLO
+ Necrosis CARDÍACO
↓NAD
NF-κB
↓ATP
EXPRESIÓN GENES
↑TNF-α il-6, IL-1β, ONSi, ICAMP-1, P-SELECTINA,etc
Figura 10. Papel del Óxido Nítrico y el Peroxinitrito en la fisiopatología

Cardiovascular.
Por otra parte, se ha referido que el peroxinitrrito dispara la apoptosis en

cardiomiocitos así como también en células del músculo liso vascular
y endoteliales, induce disminución de las contracciones espontáneas de
cardiomiocitos y origina inhibición irreversible de la cadena respiratoria
mitocondrial.
32
- Isquemia/Reperfusión
El daño por reperfusión es la causa que conduce a la lesión del tejido en

condiciones tales como infarto del miocardio, isquemia cerebral, trasplante de
órganos y “bypass” cardiopulmonar así como también un mecanismo
patológico principal, en el daño terminal del órgano, complicando el curso del
shock circulatorio de varias etiologías. Desde el punto de vista clínico no hay
una terapia disponible que limite el daño por reperfusión, lo cual enfatiza la
importancia de una mejor comprensión de los mecanismos patológicos
básicos y su relación con marcadores, en este caso de naturaleza redox, que
permitan establecer estrategias terapéuticas efectivas y seguras.
El daño por reperfusión está mediado por numerosos factores incluyendo a

las ERO, entre ellas: radical anión superóxido, peróxido de hidrógeno, radical
hidroxilo, peroxinitrito y dióxido de nitrógeno así como también una rápida
activación transcripcional de una red de genes proinflamatorios.
Una incrementada expresión de ONSi, y formación de nitrotirosina, fueron

demostradas en arterias coronarias humanas de pacientes trasplantados con
enfermedad arterial coronaria, causa fundamental de mortalidad tardía
después del trasplante cardíaco y durante el rechazo al trasplante. De forma
interesante, los niveles de urato séricos se encontraron elevados en
pacientes sometidos a trombolisis y angioplastia coronaria transluminal
percutánea. Debido a que el urato es un bien conocido
inhibidor de la nitración dependiente de peroxinitrito, este hallazgo
conduce a la posibilidad de que una incrementada producción de
urato, durante la hipoxia, puede representar un mecanismo endógeno
protector contra el daño mediado por peroxinitrito.
33
- Insuficiencia Cardíaca Crónica
La insuficiencia cardíaca crónica (ICC) representa un problema de salud

pública fundamental y en constante crecimiento, siendo considerada la causa
principal de hospitalización, morbilidad y moralidad, a nivel mundial. La ICC
es considerada un síndrome multiorgánico y multicelular caracterizado por
anormalidades estructurales y funcionales del miocardio, retención de sodio,
mal adaptación neurohumoral y disfunción vascular.
Las complejas interacciones de diversas vías secundarias (neuropéptidos,

neurohormonas, citoquinas, ONS inducible (ONSi), estrés oxidativo y
peroxinitrito, metaloproteinasas de la matriz y la enzima poly(ADP-ribosa)
polimerasa (PARP) están involucradas en las rutas deletéreas de la
progresión de la disfunción cardiovascular al fallo cardíaco. Estos procesos
dan como resultado anormalidades en varios receptores cardíacos y vías de
señalización, homeostasis del calcio, proteínas contráctiles, alteraciones
estructurales adicionales tales como remodelación cardiovascular con
hipertrofia, fibrosis, necrosis y dilatación cardíaca. La incrementada
resistencia periférica (como resultados de vasoconstricción y remodelación
vascular), acoplada con remodelación cardíaca adversa, exacerba
adicionalmente el fallo cardíaco, iniciando un círculo vicioso autodestructivo
(figura 11)
34
CARGA
?
ENERGÍA
SOBRECARGA
HEMODINÁMICA DAÑO CARDÍACO
Hipertensión Infarto Miocardio

Estenosis Aórtica Isquemia
Cardiomiopatía Miocarditis
Valvulopatía Cardiomiopatía
CITOQUINAS ESTRÉS OXIDATIVO ACTIVACIÓN

PROINFLAMATORIAS PEROXINITRITO NEUROHUMORAL
IL-6, TNF-α, etc. EFECTORES DESENCADENANTES NE, AII, ET
PARP-1, MMP, etc.
DISFUNCIÓN ENDOTELIAL DISFUNCIÓN DEL MIOCARDIO

MIOCARDIO
Incremento Resistencia Periférica Contractilidad Disminuida
Alteraciones Periférica Utilización Anormal del Calcio
(Rinón, Pulmón Músculo, Edema) Muerte Celular del Cardiomicito
Proteolisis de la Matriz Extracelular y
del Sarcolema (MMPs)
FALLO CARDÍACO
Figura 11. Progresión de la Insuficiencia Cardíaca y el papel del

Estrés Oxidativo y el Peroxinitrito
Numerosos estudios, experimentales y clínicos, han demostrado la

producción incrementada de ERO (radical superóxido, peróxido de hidrógeno,
radical hidroxilo), tanto en modelos experimentales como en pacientes. Las
fuentes de ERO en la ICC son múltiples e incluyen Xantina Oxidasa, NADPH
Oxidasas, Ciclooxigenasas, cadena de transporte electrónico mitocondrial,
neutrófilos activados, ON Sintetasas y auto-oxidación de ciertos metabolitos
en el tejido (figura 11).
35
- Óxido Nítrico y el Envejecimiento
Estudios epidemiológicos han revelado que la edad avanzada, por sí misma,

eleva la morbilidad cardiovascular. El estrés oxidativo vascular, inducido por
la edad, incrementa la actividad de NAD(P)H Oxidasas, decrece los
mecanismos antioxidantes tales como SOD extracelular y una expresión
incrementada de ONSi. El aumento del estrés oxidativo en el envejecimiento
también conduce a la inactivación funcional del ON. por elevadas
concentraciones de superóxido, favoreciendo la generación de peroxinitrito.
De forma notable el decline, relacionado con la edad, en la expresión de la
Óxido Nítrico Sintetasa Endotelial (ONSe) y/o la disminución en la
disponibilidad de arginina intracelular agrava, adicionalmente, el deterioro en
la disponibilidad de ON. limitando el suministro de sangre al corazón,
alterando el consumo de oxígeno por el miocardio y la contractilidad cardíaca
así como aumenta la apotosis de las células endoteliales.
- Óxido Nítrico y Peroxinitrito en el Cáncer
Es bien conocido que los tejidos malignos están infiltrados por leucocitos los
cuales secretan localmente citoquinas, enzimas degradantes de la matriz
celular, factores de crecimiento y ERO. Estos generan un medio
ambiente que puede incrementar la proliferación celular,
supervivencia y migración así como la angiogénesis y, consecuentemente, la
promoción del desarrollo de tumores.
Un papel particularmente importante de un incremento en la generación de

.
ON , en el microambiente tumoral, es ahora reconocido como un paso
esencial que inicia la transformación neoplásica. De forma importante, no
solo las células inmunes, infiltrantes del tumor, sino también los fibroblastos
36
estromales asociados al tumor, y las células tumorales por ellas mismas,

notablemente cánceres de pulmón, mama, tiroides, estómago y colon son
capaces de producir grandes cantidades de ON. debido a la expresión
inducida de la ONSi. La influencia del ON. va a depender de la duración y el
nivel de exposición de ON., el tipo de células expresando ONSi (tumor vs
células inflamatorias o estromales), la sensibilidad celular a la actividad
citotóxica al ON. y el “status” del gen supresor de tumor p53, en la célula
tumoral.
- Óxido Nítrico y Preoxinitrito en la Isquemia Cerebral
El infarto cerebral isquémico agudo es la segunda causa de muerte en los

países industrializados y la causa médica que conduce a la discapacidad
adquirida en adultos. En los Estados Unidos ocurren anualmente 600 000
nuevos infartos cerebrales, representando un costo de 40 billones de dólares
en gastos directos e indirectos, por este concepto.
El infarto isquémico es el resultado de una reducción del flujo sanguíneo en el

territorio de una arteria cerebral mayor debido a su oclusión, trasciente o
permanente, por trombosis local.
El incremento masivo del calcio intracelular activa varias enzimas

(fosfolipasas, ciclooxigenasas, ON Sintetasa y enzimas proteolíticas) y
estimula la liberación de ERO las cuales provocan peroxidación lipídica, daño
al ADN y mitocondrial así como también contribuye al rompimiento de la
barrera hematoencefálica y al desarrollo del edema cerebral.
.
En el cerebro el ON es fisiológicamente producido por dos isoformas de ONS
dependientes de calcio, presentes en las células endoteliales (ONSe, tipo III)
37
y en neuronas (ONSn tipo I), las cuales producen pequeñas cantidades de

ON. (nanomolar) por cortos períodos en respuesta a incrementos trascientes
del calcio intracelular. El ON. generado por ONSe y ONSn, es esencial para
el control del flujo cerebral, mientras que el ON derivado de la ONSn también
funciona como neurotransmisor y está involucrado en la plasticidad sináptica,
modulación de funciones neuroendocrinas, formación de memoria y actividad
conductual.
Bajo condiciones patológicas , incluyendo la isquemia cerebral, grandes

.
cantidades de ON son producidas en el cerebro como un resultado de la
expresión inducida de la ONSi, relacionada con un incremento en la
transcripción del gen de la ONSi en respuesta a citoquinas inflamatorias
producidas localmente.
Está claramente demostrado que el ON. desempeña funciones tanto

neuroprotectoras como neurotóxicas en la isquemia cerebral,
dependiendo de qué isoforma está siendo producida. Pequeñas cantidad
de ON. producido por ONSe en la vasculatura, durante la fase temprana de
isquemia cerebral es esencial para limitar la extensión del daño
.
cerebral, mientras concentraciones más altas de ON , generadas
inicialmente por ONSn y más tarde por ONSi ejercen efectos
esencialmente neurotóxicos en la isquemia cerebral. La evidencia demuestra
que gran parte de la rápida reacción del ON. es el resultado de su reacción
con el radical superóxido para producir peroxnitrito (figura 12).
38
Isquemia-
Neuroprotección Reperfusión
↑ Flujo Sanguíneo Colateral E

Hipoxia
↓ Apoptosis Neuronal
Estrés Oxidativo
↓ Agregación Plaquetaria ↑ Glutamato, Calcio
Mit d Citoquinas (TNF-α, IL-1β)
Células Microglía
Endoteliales Neutrófilos
Neurona Células Glía
(astrocitos, etc)
Baja
Arginina
Bajo BH4
Hipoxia
Nitración Tirosina
Disfunción
Mitocondrial
Neurotoxicidad
Daño ADN
Activación PARP
Peroxidación
Lipídica
Figura 12. Papel del ON y el Peroxinitrito en la fisiopatología de la

Isquemia Cerebral.
- El ON. y el Peroxinitrito en la diabetes y sus complicaciones
La Diabetes Mellitus es una de las enfermedades crónicas más costosas con

un estimado de prevalencia, a nivel mundial, de 170 millones de pacientes en
el 2002, cifra que se espera que se duplique en el 2030 de acuerdo a
estimados de la Organización Mundial de la Salud.
Existe un gran cúmulo de evidencias que soportan el papel del ON., el radical
superóxido, peroxinitrito y una cascada de efectores tales como la enzima
poli(ADP-ribosa) polimerasa (clave en la síntesis de ADN), en la
39
patogénesis de la diabetes y sus complicaciones. El ON. y otras ERO

constituyen efectores principales en la muerte de las células β pancreáticas.
La hiperglicemia dispara el estrés oxidativo, de carácter crónico, a través de

múltiples vías, a saber: Ruta del Poliol, Auto-oxidación de la glucosa,
alteración del estado redox celular, incrementada formación de diacilglicerol y
subsecuente activación de PKC y una acelerada formación de Productos
Terminales de la Glicosilación Avanzada.
Múltiples evidencias suportan el papel patogénico del radical anión

superóxido y el peroxinitrito en las complicaciones macro y microangiopáticas
del diabético (figura 13).
40
Hiperglicemia
Autoxidación Glucosa
Cadena Respiratoria Mitocondrial
Glicación (PTGA)
.
Xantina Oxidasa ↓ Disponibilidad ON.
NAD(P)h Oxidasa Deterioro
Ciclooxigenasa Vasodilatación
Desacople ONSe ↑ Oxidación Lldl
Aterogénesis Disfunción
Cardiovascular
Peroxidación Lipídica
Oxidación Proteínas
Nitración Proteínas
Daño ADN Inactivación Enzimas
Activación MMP
Mitocrondria
Núcleo
Expresión Genes Inflamatorios
Citoplasma
Figura 13. Mecanismos de disfunción vascular en la diabetes. Papel

del radical superóxido y el peroxinitrito.
- Óxido Nítrico y Peroxinitrito en los desórdenes Neurodegenerativos

Esclerosis Múltiple (EM)
La EM es una enfermedad inflamatoria, mediada por el sistema inmune, que

causa daño focal en la sustancia blanca, atacando diferentes regiones del
SNC aparentemente al azar. La capacidad de las neuronas, para conducir los
impulsos nerviosos, se ve seriamente comprometida a través de la pérdida de
sus láminas de mielina y una pérdida secundaria de axones La enfermedad
41
afecta entre 2-3 millones de personas, a nivel mundial. Los síntomas

comprometen seriamente la calidad de vida del paciente portador de EM,
entre ellos: tremor, ataxia, pérdida de la visión, visión doble, debilidad y
parálisis, dificultad al hablar, etc.
Aunque los fármacos, con diana en el sistema inmune, disminuyen la

progresión de la enfermedad, el tratamiento de la EM permanece, por lo
común, sintomático y lejos de ser satisfactorio.
Las placas inflamatorias en pacientes con EM mostraron una

inmunoreactividad incrementada para la ONSi y nitrotirosina, acompañado de
elevados niveles de nitratos y nitritos (una medida del nivel de ON.) en líquido
cefaloraquídeo, orina y suero. La nitración de tirosina contribuye al daño de la
barrera hematoencefálica, permitiendo el influjo de células inflamatiorias, la
cual es una característica esencial de la EM activa.
- Enfermedad de Parkinson (EP)
La EP es la segunda enfermedad neurodegenerativa más común en el

adulto. Aún cuando el estrés oxidativo, la inflamación, excitotoxicidad,
disfunción mitocondrial y factores medio ambientales y hereditarios están
implicados en la patogénesis de la EP, la causa exacta de la pérdida de
neuronas dopaminérgicas permanece oscura. Los estudios postmortem han
demostrado el daño oxidativo, mediado por peroxinitrito, y/o nitrosativo en la
EP. El peroxinitrito puede inducir nitración de Tirosina Hidroxilasa, la enzima
que marca el paso de velocidad limitante en la biosíntesis de dopamina,
conduciendo a la inhibición de la actividad enzimática y subsiguiente caída en
la síntesis de dopamina.
42
- Enfermedad de Alzheimer (EA)
La EA es una desorden neurodegenerativo progresivo. El estrés oxidativo

incrementado está presente y parece ser un evento temprano en el proceso
de neurodegeneración asociado con la EA. Parece que la ONS, neuronal y
de la glía, puede jugar un papel en la patogénesis de la EA y la formación de
peroxinitrito. Una incrementada expresión de ONSn fue referida en neuronas
con “marañas” neurofibrilares, en el hipocampo y corteza entorinal, de
pacientes con EA así como también astrocitos reactivos cercanos a placas
amiloides. La presencia de placas neuríticas se ha asociado también con una
incrementada expresión de ONSi y ONSe, en astrocitos.
- Esclerosis Laterial Amiotrófica (ELA)
La ELA es la enfermedad neuronal motora más común en el humano adulto,

la cual está caracterizada por una rápida degeneración progresiva de
neuronas motoras, en la corteza motora, células madre del cerebro y médula
espinal. La muerte sobreviene dentro de los 3-5 años después de la aparición
de los síntomas.
Aunque varios mecanismos, incluyendo estrés oxidativo y mutaciones de la

SOD han sido invocados, la patogénesis de la ELA es todavía
insuficientemente comprendida. La enfermedad, causada por las mutaciones
en la SOD, es generalmente no clínicamente o patológicamente distinguible
de los casos esporádicos de ELA. Las mutaciones de SOD son dominantes y
casi todos los mutantes dan por resultado una proteína SOD activa.
El peroxinitrito puede participar en la patogénesis de ELA, debido a que éste
puede activar los astrocitos de la médula espinal, la cual normalmente
suministra un soporte trófico excelente a las neuronas motoras para asumir
un fenotipo reactivo que induce la muerte de las estas células.
43
Óxido Nítrico y Peroxinitrito en la Artritis Reumatoidea (AR)
Líneas de evidencias indican que una sobreproducción de ON. contribuye a la

patogénesis de la Artritis Crónica. En humanos, están presentes altos niveles
circulantes de nitritos/nitratos en pacientes artríticos y los tejidos sinoviales de
pacientes con AR expresan ONSi y producen concentraciones anormalmente
altas de ON.. El papel patogénico de la producción incrementada de ON. en la
artritis ha sido comprobada, mediante estudios farmacológicos, donde se han
evaluado los efectos de inhibidores de la ONS.
Hay evidencias adicionales de nitración de proteínas en articulaciones de

pacientes con AR, quienes mostraron niveles incrementados de nitrotirosina,
en plasma y fluido sinovial, así como formación de nitrotirosina localizada
dentro de macrófagos y músculo liso vascular en el sinovium inflamado.
44
INTERPRETACIONES, EN EL ORDEN DIAGNÓSTICO, SOBRE LAS CON-

CENTRACIONES DE ÓXIDO NÍTRICO (ON.)/O2.-/ONOO-
La asociación del ON., a enfermedades de una notable morbi-mortalidad, está

dada fundamentalmente por su capacidad de promover la formación de peroxinitrito.
Un incremento en las concentraciones plasmáticas de ON., conjuntamente con

una inhibición de la SOD nos está indicando producción de peroxinitrito por
acumulación del radical anión superóxido.,
Cuando hay un incremento del ON. y una disminución de la SOD hay riesgos de:
o Daños a Hemoproteínas (Hb, Cit c y otras)

o Daños a cisteína que, si también coincide con una disminución del GSH,
nos indica una mayor producción de peroxinitrito y amplificación adicional
del daño a moléculas esenciales.
El incremento en peroxinitrito conduce a la formación de nitrotirosina, o sea, nitración

de aminoácidos tirosina. Este marcador (nitrotirosina) se incrementa en
enfermedades inflamatorias del Sistema Nervioso, Aterogénesis y otras muchas más.
Incrementos en ON. o en ONOO- , también en ON. + disminución de SOD, es un

Factor de Riesgo,
o Durante el envejecimiento, como desencadenante de enfermedades cardíacas.

.
o En el Cáncer (incrementos de ON , inician transformaciones neoplásicas)
o En la Isquemia Cerebral (aumentos de ON. por incremento de ONSi)
o En la Diabetes y sus complicaciones.
o En Enfermedades Neurodegenerativas.
o En la Artritis Reumatoidea.
Frente a elevados niveles de peroxinitrito se pueden valorar, como estrategias

nutricionales, lograr una ingesta con bajos contenidos de nitratos y nitritos (≤ 180
μmol/día, en humanos) o un incremento en la ingesta de alimentos que promueven
generación de uratos, por ejemplo una dieta rica en proteínas (vegetal o productos
del mar). Los uratos son eficientes secuestradores de peroxinitrito.
45
CAPÍTULO III. MALONDIALDEHÍDO (MDA) Y LOS HIDROXI-

ALQUENALES (HAL)
Formación y Funciones
El MDA y los HAL son productos terminales, y marcadores, de la

Peroxidación Lipídica (POL).
El proceso de POL, el cual también da como resultado la producción de

radicales libres, es el mejor conocido de los daños mediados por ERO. El
MDA es el producto de la POL, mejor estudiado. Este aldehído es una
molécula tóxica que interactúa con el DNA y proteínas y a menudo es referido
como mutagénico.
La POL ha sido reconocida, en las últimas 3 décadas, como un evento de

gran importancia, tanto desde el punto de vista fisiológico como
fisiopatológico. El incremento de la POL se considera como una importante y
esencial causa de la iniciación del estrés oxidativo relacionado con el daño a
varios tejidos, la muerte celular y la progresión adicional de muchas
enfermedades agudas y crónicas.
En una definición más amplia la POL, en los sistemas biológicos,

involucra toda la oxidación de ácidos grasos que ocurre en los
organismos vivos. Es bien conocido que los Ácidos Grasos Poliinsaturados
(AGPI) con dos o más dobles enlaces son más susceptibles a la oxidación
que los ácidos grasos saturados o monoinsaturados.
La POL en los organismos vivos (figura 14), a través de la ruta no enzimática

de formación de radicales libres, es una reacción que requiere un AGPI y un
inductor oxidante que forme un radical libre intermediario. Este intermediario
reacciona con el oxígeno para formar un radical peroxilo (LOO .). Los
46
COOH
Lípido (L) H ·OH
INICIACIÓN
H2O
COOH
Radical Lipídico ·
(L·)
COOH
·
Dieno conjugado P
O2 R
O
Radical Peroxilo OO·
|
P
COOH A
G
L
A
C
L·
Hidroperóxido I
lipídico OOH Ó
|
COOH N
Fe2+
Fe2+ Radical LO·

Alcoxilo
L LOO·
L·
O O| LOH
| COOH TERMINACIÓN
Endoperóxido
Fe2+
Etano OH
Pentano O=C CH2 C=O +
Etileno H H C=O
Malondialdehído (MDA) 4-Hidroxinonenal (4-HAL)
Figura 14. Secuencia de reacciones durante la peroxidación lipídica que

conducen a la generación de MDA y 4-Hidroxialquenales.
47
electrones no pareados de los radicales peroxilo sustraen un átomo de

hidrógeno adicional desde otro AGPI para formar un hidroperóxido lipídico
(LOOH), el cual puede descomponerse para formar radicales alcoxil (LO.) o
peroxil. Estos radicales pueden también atraer proteínas de membrana. Esta
reacción del radical peroxilo con ácidos grasos genera un radical centrado en
el carbono, el cual en respuesta puede reaccionar con el oxígeno para formar
otro radical peroxilo. Este radical continúa su reacción con los AGPIs y se
inicia una reacción de propagación hasta que se produce la reacción de
terminación por factores tales como la presencia de antioxidantes de
rompimiento de cadena (por ejemplo, la vitamina E (figura 15). Mientras estas
reacciones peroxidativas parecen ser meramente destructivas en naturaleza,
ellas son también parte esencial del cuerpo humano en la vida diaria. En los
últimos años, varias evidencias sugieren que los radicales libres, de forma
controlada, son fisiológicamente relevantes y ejercen una variedad de
reacciones bioquímicas que regulan muchas de nuestras funciones
fisiológicas incluyendo defensa contra microorganismos, señalización celular,
control vascular, generación y degeneración celular, entre otras.
Las ERO, generadas de forma controlada, parecen ser esenciales para

mantener el balance antioxidante basal y las defensas del huésped. Sin
embargo, cuando estas reacciones exceden un cierto nivel fisiológico, varios
productos de reacción primarios, de naturaleza diversa, y con diferentes
tiempos de vida media, son generados o inactivados. Cuando la producción
en exceso de estos productos de la oxidación sobrepasan la capacidad de los
mecanismos antioxidantes celulares endógenos, éstos pueden hacer diana y
dañar células y órganos; de forma tal que se inician o aceleran los procesos
48
H2O
OO OH
R R
Cuando un radical ataca a

X H un ácido graso de la
membrana, el radical
X peroxil «flota» en la
interfase
O2 OO
Vitamina
a b c
- Asc x
H2O AscH
GP
PhGP
OOH O OH
R R R R F
L
R R A2
O O
Lípido Hidroperóxido
La vitamina E elimina el
radical peroxil, el ascorbato
puede reciclar la vitamina E. Vitamin E
Varias enzimas pueden
eliminar de la membrana el
ácido graso dañado e
insertar otro.
d e
Figura 15. Participación de la vitamina E y el ascorbato (AscH-) en la regeneración de la
membrana celular dañada, como resultante de la peroxidación lipídica, mediada por el
.
RO2 . •X, radical libre; FLA2, fosfolipasa A2; GPx, glutatón preroxidasa; PhGPx, GPx
específica para fosfolípidos hidroperóxidos.
49
de enfermedad.
Es importante señalar que la POL puede tener lugar por rutas enzimáticas
como la conocida Cascada del Ácido Araquidónico y la producción de
Eicosanoides (Prostaglandinas, Tromboxanos y Leucotrienos) (figura 16).
Fosfolípidos
FOSFOLIPASA A2 GLUCOCORTICOIDES
(Induce Lipocortina)
Araquidonato Liso-gliceril-
fosforilcolin
12-Lipooxigenasa Ciclo-oxigenasa AINEs 5-Lipoxigenasa Antagonistas

FAP
15-Lipooxigenasa Endoperóxidos
5-HPETE
Cíclicos
Glucocorticoides Inhibidores FAP

Inhibidores (Vasodilatador,
Inhibe TXA2 5-Lipoxigenasa
Inducción Sintetasa (ej Zileutina) ↑ Permeabilidad
Vascular,
Broncoconstrictor,
Quimotaxina
Lipoxinas
12-HETE TXA2 Antagonistas
AyB PGI2 Trombótico,
(Quimotaxina) TXA2
(Vasodilatador, Vasoconstrictor
Hiperalgésico, LTA4
Antiagregante
Plaquetario)
LTB4 Antagonistas
(Quimotaxina) Receptor
Leucotrienos
(ej. Zafirlukast
Montelukast)
Antagonistas PGF2α PGD2 PGE2
Broncconstrictor Inhibe Agregación Vasodilatador LTC4 (Broncoconstrictor,
PGs
Contracción Vasodilatador Hiperalgesia Incremento
Permeabilidad↓
Miometrio) LTD4 Vascular)↓
LTE4
Figura 16. Ruta biosintética de los Eicosanoides (Prostaglandinas,

Tromboxanos y Leucotrienos) y sitios de la ruta que
constituyen dianas terapéuticas de diferentes fármacos.
50
Las moléculas aldehídicas (MDA y 4-Hidroxialquenales, figura 14), generadas

durante la peroxidación lipídica, se han implicado como agentes causales en
procesos citotóxicos iniciados por la exposición de los sistemas biológicos a
agentes oxidantes. Comparados con los radicales libres, los aldehídos son
relativamente estables y pueden difundir, o aún escapar, a sitios distantes de
la célula que los generó para atacar otras dianas. Estos aldehídos exhiben
fácil reactividad con biomoléculas tales como proteínas, ADN y fosfolípidos,
generando una variedad de aductos covalentes intra e intermoleculares.
Estos aldehídos son considerados como mediadores terminales de los
efectos tóxicos, provocados por un estrés oxidativo, en materiales biológicos.
Es importante señalar que como otras ERO estos aldehídos pueden

modular, a concentraciones muy bajas y no tóxicas, algunas funciones
celulares incluyendo transducción de señales, expresión de genes y, de
forma más general, la respuesta de las células dianas.
El MDA
El MDA es un metabolito terminal de la peroxidación lipídica (no enzimática,

(figura 14) así como la catalizada por enzimas (figura 16). A altas
concentraciones es considerado como mutagénico y carcinogénico por su
capacidad de reaccionar con el ADN para formar aductos (deoxiguanosina,
deoxiadenosina y deoxicitidina).
Una atención preferencial, en el orden fisiológico y patológico, la ha recibido

otra familia de aldehídos que se forman concomitantemente con el MDA,
éstos son los 4-Hidroxialquenales (4-HAL) (figura 14).
51
Los HAL. Funciones fisiológicas y Enfermedades
En la actualidad los 4-HAL han alcanzado el status de uno de los más

reconocidos y estudiados productos citotóxicos de la peroxidación lipídica.
Los 4-HAL están presentes en el plasma humano en concentraciones de 0.1

a 1.4 μM y estos niveles pueden incrementar hasta más de 10 veces,
durante el estrés oxidativo in vivo.
Los efectos fundamentales de los 4-HAL, producidos durante el estrés

oxidativo, están asociados al daño de componentes celulares esenciales,
tales como el GSH y las proteínas. Debido a que el GSH es importante en
el metabolismo y regulación de enzimas, así como también en la
detoxificación de materiales citotóxicos, su agotamiento conduce a un
incremento en la suceptibilidad de las células al insulto por los 4-HAL.
Es así que la depleción de GSH está asociada con la modificación, por estos
productos terminales de la peroxidación lipídica, de proteínas celulares y
concentraciones milimolares de GSH pueden representar una significativa
ruta biológica para la protección de la célula contra el daño inducido por los 4-
HAL. Por otra parte, el incremento del GSH intracelular, por la administración
de N-acetil cisteína, promovió una resistencia de la célula a la modificación
de proteínas inducida por 4-HAL. Esto indica que la utilización de
suplementos, o estrategias nutricionales, que incrementen las
concentraciones de GSH son efectivas para prevenir el daño celular
originado por estos mediadores lipídicos. La importancia de la
manipulación nutricional, o con suplementos, contra el daño por productos
terminales de la peroxidación lipídica, se refuerza por los hallazgos
relacionados con los efectos de inhibidores naturales del daño inducido por
52
los 4-AHL. Los polifenoles presentes en el té, tales como las

epigalocatequinas y teflavinas, y sus ésteres, ejercieron importantes efectos
citoprotectores con potencial antioxidantes y anticarcinogénicos.
Funciones fisiológicas de los HAL
Es importante enfatizar que los 4-HAL son una ERO que, en función de sus
concentraciones, pueden ejercer importantes acciones fisioilógicas.
Los 4-HAL, a concentraciones fisiológicas, son capaces de activar

importantes mecanismos de señalización celular tales como la ruta MAP
Kinasa (p38), mecanismos de detoxificación, la respuesta inflamatoria,
inducción de la enzima detoxificante GSH-S Transferas, clase π y otros
(figura 17) los cuales están asociados con la supervivencia de la célula contra
el estrés oxidativo.
Uno de los progresos más importantes, en el campo de los 4-HAL incluye el

hallazgo de que sus aductos con proteínas constituyen uno de los
biomarcadores más útiles para evaluar la existencia y/o extensión del
estrés oxidativo. Es así que se consideran involucrados en muchos de los
efectos fisiopatológicos, mediados por estrés oxidativo crónico, en células y
tejidos.
53
MUERTE CELULAR
APOPTOSIS
RESPUESTA
INFLAMATORIA RECAMBIO
(Regulación hacia la Disminución) PROTEÍNAS
↑p53
↓NF-κB ↓Proteosoma
HAL
↑p38 ↑Nrf2/ERA
↑JNK
RESPUESTA DETOXIFICACIÓN
INFLAMATORIA
(Regulación hacia el Incremento)
CRECIMIENTO CELULAR
SUPERVIVENCIA CELULAR
Figura 17. Funciones Biológicas de los Hidroxialquenales
En Aterosclerosis
Se ha propuesto que la LDL, el componente clave de la lesión rápida grasa

en la ateroesclerosis, debe sufrir una modifcación oxidativa antes que ésta dé
lugar a la célula espumosa. Ciertamente el uso de anticuerpos contra la LDL
modificada por HAL demostraron la presencia de epitopes, derivados de
HAL, en lesiones ateroescleróticas que se colocalizaron con apoB.
54
En Enfermedades Neurodegenerativas
La presencia de epitopes, derivados de HAL, incluyendo aductos pirrólicos,

han sido referidos en la mayoría de las enfermedades neurodegenerativas
tales como Enfermedad de Alzheimer, Parkinson y Esclerosis Lateral
Amiotrófica. Estos hallazgos fundamentan la asociación de la peroxidación
lipídica en la patogénesis de las enfermedades neurodegenerativas.
En otras Enfermedades
Epitopes, derivados de HAL, se han detectado en pacientes con cáncer

(figura 18) mientras que productos de la peroxidación lipídica se han
asociado a diferentes tipos de neoplasias malignas (tabla1).
↑ ROMPIMIENTO LÍPIDOS ↑ RESPUESTA

DE
DEL OXIDADOS PROLIFERATIVA
ADN DE SIMPLE LO2. EN MUCOSA
Y LO. COLÓNICA
DOBLE HEBRA LOOH
DESCOMPONEN
MDA
DA MUTÁGENOS
+ (ADUCTOS DE ADN)
GENOTÓXICO 4 - HIDROXIALQ
LQUENAL
Figura 18.Lipoperóxidos como promotores de cáncer
55
Tabla 1. Niveles de Peroxidación lipídica en paciente portadores de

difrentes tipos de cáncer y en una población Control
PEROXIDACIÓN LIPÍDICA
n (ηmol/ml)
PACIENTES 208 6.79 ± 1.22
Cáncer de Mama 59 6.85 ± 1.31

Cáncer de Cabeza y Cuello 38 6.65 ± 1.4
Cáncer Genitourinario 46 6.69 ± 1.12
Cáncer Pulmón 12 6.38 ±1.05
Cáncer Gastrointestinal 20 6.83 ± 1.08
Otros 33 7.09 ± 0.95
CONTROLES 156 3.52 ± 0.97
De igual forma, altos niveles de peróxidos lipídicos se han demostrado en

neuropatía diabética, cirrosis biliar primaria, en el daño hepático inducido por
el alcoholismo (experimental y clínico) y, más recientemente, en pacientes
con episodios de depresión aguda. En la Artritis Reumatoidea, enfermedad
autoinmune muy influenciada por el daño a las articulaciones, mediado por
ERO, se ha referido una correlación, directamente proporcional, de los
productos terminales de la peroxidación lipídica y el incremento del Indice de
Actividad de la Enfermedad (figura 19).
56
ÍNDICES DE
ACTIVIDAD DE LA
ARTRITIS REUMATOIDE
↑ [MDA]
↑ [4-OH-NONENAL]
Figura 19. Índice de Actividad de la Artritis Reumatoidea y su

relación con los niveles de productos terminales
de la Peroxidación Lipídica
57
INTERPRETACIONES, EN EL ORDEN DIAGNÓSTICO, ACERCA DE LAS CON-

CENTRACIONES DE MALONDIALDEHÍDO (MDA) Y 4-Hidroxialquenales (4-HAL)
La peroxidación lipídica constituye una medida del nivel de oxidación de los

lípidos en los organismos vivos
El MDA y los 4-HAL, son productos terminales de la POL y la determinación de

sus concentraciones representan una medida del nivel de estrés oxidativo de
un paciente.
Un incremento, por encima del intervalo de referencia, de MDA y 4-HAL se

interpreta como un factor de riesgo para enfermedades vasculares,
neurodegenerativas, depresivas y del sistema inmune.
La determinación de ambos mediadores tipifica la intensidad de la POL, ya que

en ocasiones se incrementa uno de ellos y en otros estadíos más severos
ambos (MDA y los HAL).
Un inrcremento en HAL, con una disminución en las concentraciones de GSH

y un aumento del daño a proteínas, indica un severo estrés oxidativo y una
agudización de la enfermedad de base o la necesidad de profundizar en el
diagnóstico ya que se está en presencia del debut de cualquiera de las
enfermedades antes referidas.
Un valor de HAL, por encima del intervalo de referencia, puede ser

manipulado, a través de la dieta o mediante suplementos para lograr un
incremento en la disponibilidad de GSH, o con una dieta rica en Polifenoles,
como se refiere en el capitulo VI.
58
CAPÍTULO IV. DAÑO OXIDATIVO A PROTEÍNAS
Factores asociados al daño a proteínas
La modificación oxidativa de proteínas por sustancias reactivas,

especialmente las ERO, está implicada en la etiología o progresión de una
variada colección de desórdenes y enfermedades. Estas ERO se forman a
través de un gran número de reacciones fisiológicas y no fisiológicas. Un
incremento en la velocidad de su producción o una disminución en la
velocidad de captura, incrementará la modificación oxidativa de moléculas
celulares, incluyendo a las proteínas.
En su mayoría las proteínas modificadas oxidativamente no son reparadas y

deben ser eliminadas por degradación proteolítica; por lo que una
disminución en la eficiencia de la proteolisis originará un incremento en el
contenido celular de proteínas modificadas oxidativamente. La acumulación
de proteínas modificadas altera la función celular ya sea por pérdida de la
actividad catalítica o integridad estructural.
Algunos de los sistemas generadores de ERO más comunes, asociados a la

modificación de proteínas se muestra en la figura 20. Estos incluyen un
número de factores medio ambientales tales como irradiaciones (rayos X,
rayos γ, luz UV) y contaminantes atmosféricos (dióxido de nitrógeno, humo
de cigarros, ozono, etc). Sin embargo muchos son simples subproductos de
procesos metabólicos normales tales como autoxidación de formas
reducidas de transportadores de electrones [NAD(P)H], flavinas reducidas,
citocromos (P-450), reacciones inflamatorias, peroxidación lipídica,
reacciones de glicación/glucoxidación y reacciones catalizadas por metales.
59
PROOXIDANTES ANTIOXIDANTES
PROTEÍNAS Y ENZIMAS METABOLITOS Y

VITAMINAS
Irradiación SOD, CAT, GSH-Px,
Rayos γ, X,UV GST, Vitaminas C, E, A,
MSR, RSH-Px, Bilirrubina, Ácido Úrico
Inflamación Ceruloplasmina GSH/GSSG,
Neutrófilos Ferritina NAD(P)H/NAD(P)
Macrófagos Transferrina Mg, Mn, Zn,Ácido Lipoico
PROTEÍNAS
Arginina
ONS
ENZIMAS
Auooxidación de
Transportadores
de Electrones y
“Carriers”
ERO
PROTEÍNA
Contamina PROTEÍNAS
ntes
OXIDADA
Ambientale
RESISTENTES A Carbonilos
PROTEASAS Péptidos
(entrecruzadas) AA
Oxidasas modificados
FACTORES
REGULATORIOS
Peroxidación Ubiquitina (?)
Lipídica Síntesis
RSH, Mg2*, PROTEASAS
Transcripción
Productos
AA
Glicooxidción,
Glicación PÉPTIDOS
Figura 20. Factores que afectan la producción de ERO y el nivel

de proteínas modificadas oxidativamente.
Para evitar el daño celular, por estos procesos, la mayoría de los sistemas
biológicos han desarrollado una batería de antioxidantes que pueden
convertir ERO en derivados inactivos. Estos incluyen un número de enzimas
tales como SOD, GSH-Px, GSH-S Transferasa (GST), Peroxidasa específica
de tioles RSH-Px), Metionina sulfóxido reductasa (MSR), tioredoxina
reductasa y glutatión reductasa, varias proteínas enlazantes de metales como
ceruloplasmina, ferritina y transferrina, varios metabolitos y cofactores
+
(NADP /NADPH, NAD+/NADH, ácido lipoico, ácido úrico, bilirrubina,
2+ 2+ 2
quercetina) e iones metálicos (Mg , Mn , Zn ´).
60
Es por lo tanto evidente que la cantidad de proteína oxidada, que

ocurre bajo un conjunto de condiciones dadas, reflejará el balance entre
las actividades oxidantes y antioxidantes las que, a su vez, están
determinadas por la prevalencia de factores medio ambientales,
genéticos y dietéticos.
La reparación del daño a proteínas parece estar limitada a la reducción de

derivados oxidados de los residuos aminoacídicos conteniendo azufre. La
reparación de otras clases de proteínas oxidadas no ha sido demostrada. En
su lugar las proteínas dañadas son marcadas para ser degradadas a sus
aminoácidos constituyentes por acción de varias proteasas endógenas
(catepsina c, calpaína, tripsina y especialmente el proteosoma 20S). En
consecuencia, como se ilustró en la figura 20, la acumulación intracelular de
formas de proteínas oxidadas es una función compleja de actividades
prooxidantes y antioxidantes así como de las concentraciones y actividades
de las proteasas que degradan estas proteínas oxidadas.
Altas concentraciones de proteínas oxidadas se han asociado con un

número de enfermedades relacionadas con la edad y, a menudo, han
correlacionado con la progresión de la enfermedad. Un incremento en la
oxidación de proteínas se ha identificado en Alzheimer, Parkinson, Diabetes,
Artritis Reumatoidea, Distrofia Muscular, Cataractogénesis, Tumores Renales
inducidos, Displasia Broncopulmorar, Amiloidosis, Alcoholismo, Toxicidad por
CCl4, Esclerosis Lateral Amiotrófica y otras. En algunas de estas
enfermedades más de una modificación oxidativa ha sido
demostrada, lo que significa que el daño ocurre por diferentes
mecanismos y de forma simultánea. Por ejemplo, a la Enfermedad de
61
Alzheimer se ha asociado un incremento en el contenido de grupos

carbonilos, en Productos Terminales de la Glicosilación Avanzada (PTGA),
formación de aductos Proteína-Hidroxialquenales, derivados nitrados de
tirosina y activación de metales. En la cataractogénesis se observó un
incremento en el daño a proteínas y en la actividad de la metionina sulfóxido.
La Enfermedad de Parkinson está asociada con un incremento en la
oxidación de proteínas y la formación de aductos con Hidroxialquenales. Es
de notar que los estudios disponibles evidenciaron que todos los pacientes,
portadores de Parkinson incluidos en el estudio, eran tratados con dopa, el
cual es un conocido inductor de la oxidación de proteínas. De esta forma, en
la Enfermedad de Parkinson la oxidación de proteínas puede ser una
consecuencia de la fisiopatología de base o una iatrogenia derivada del
tratamiento farmacológico.
El nivel de proteínas oxidadas puede ser evaluado por diferentes vías. Entre
las más reconocidas se encuentran la determinación de grupos carbonilos
y la cuantificación de proteína clorinada. En ambos se produce
acumulación de proteínas dañadas que pueden seguir diferentes rutas (figura
21).
62
PROTEÍNA MUTADA
MODIFICADA DEGRADACIÓN
MEDIO AMBIENTE Y METABOLISMIO INSUFICIENTE
(2)
RNAm MUTADO
PROTEÍNA MUTADA DEGRADACIÓN
(1) Mutación
INSUFICIENTE
PROTEÍNAS
GENES RNAm DEGRADACIÓN
(2) (3) ´Pérdida Regulación Metabólica

(3) ´Pérdida Regulación Metabólica
DEGRADACIÓN
PROTEÍNA INSUFICIENTE
MEDIO AMBIENTE Y METABOLISMIO MODIFICADA
Figura 21 . Posibles mecanismos que ocurren como consecuencia de la

acumulación de proteínas oxidadas. Si una proteína dada se acumula, el
gen correspondiente puede ser mutado (Ruta 1); la proteína puede sufrir
una excesiva o artificial modificación postraslacional (Ruta 2) o el balance
entre la síntesis y la degradación pudiera ser alterada debido a una pobre
regulación metabólica (Ruta 3). El resultado final de cualquiera de las 3
rutas es proteína acumulada (no degradada) la que pudiera, en todos los
casos, sufrir una oxidación secundaria.
63
Grupos Carbonilos como Marcadores del Daño a Proteínas
La oxidación de algunos aminoácidos (lisina, arginina y prolina) conduce a la

formación de derivados carbonilos. Los derivados carbonilos pueden
también ser formados como una consecuencia de reacciones
secundarias de algunas cadenas laterales de aminoácidos con
productos de la peroxidación lipídica como los hidroxialquenales, que
examinamos en el capítulo anterior, así como con azúcares reductores o
sus productos de oxidación. Es de notar que la generación de grupos
carbonilos, producidos por estos mecanismos, pueden reaccionar
adicionalmente con grupos α-aminos de residuos lisina, de la misma
proteína o de otra proteína, para formar derivados de proteínas con cadenas
entrecruzadas intra o intermoleculares. Algunos de estos derivados no son
solo resistentes a la degradación proteolítica por el proteosoma 20S
sino pueden también inhibir la capacidad del proteosoma para degradar
las formas oxidadas de otras proteínas. Estas proteínas modificadas
contribuyen a la acumulación de formas oxidadas de proteínas durante
el envejecimiento y enfermedades relacionadas con la edad.
En cualquier caso, el hecho de que los grupos carbonilos son productos

mayoritarios de reacciones de oxidación, mediadas por ERO, ha conllevado
al desarrollo de algunos métodos altamente sensibles para la determinación
de grupos carbonilo y la presencia de estos grupos ha sido una medida,
ampliamente aceptada, de daño oxidativo bajo condiciones de estrés
oxidativo, envejecimiento y enfermedades.
64
Productos Avanzados de la Oxidación de Proteínas (PAOP)
Los PAOP aparecen como marcadores del estrés oxidativo asociados a la

uremia y otros mediadores inflamatorios capaces de amplificar la activación
de monocitos. Los PAOP pueden ser inducidos en proteínas del plasma por
oxidantes clorinados tales como cloraminas y ácido hipocloroso, mediadores
de procesos inflamatorios crónicos como los que se producen en la
ateroesclerosis, la artritis reumatoidea donde los monocitos y neutrófilos
están involucrados en la pérdida de colágeno y otras proteínas de la matriz
celular que han sido clorinadas y entrecruzadas oxidativamente, en los sitios
de inflamación así como en otros procesos fisiopatológicos (figura 22).
o2 POLIMORFONUCLEAR
(NEUTRÓFILO)
NADPH-OXIDASA PÉRDIDA
REGULACIÓN
INMUNE
O2 . - H2O2 + Cl MIELOPEROXIDASA
LINFOCITOS T
HOCl
ACTIVACIÓN ?
AB2m PROTEÍNA APOPTOSIS ?
AB2m
AB2m
AMILOIDOSIS
OXIDADA PAOP LINFOCITOS B
LDL
MONOCITO
IL-1 IL-1 - R
ATEROESCLEROSIS TNF TNF - R
IL-6 IL-6 - R
LDL
OXIDADA
Apoptosis OSTEODISTROFIA
Figura 22. PAOP como mediadores entre NEUTRÓFILOS y

MONOCITOS y el ESTRÉS OXIDATIVO, asociado a
diferentes enfermedades
65
Se ha demostrado que los PAOP mostraron una alta correlación con el

aclaramiento de creatinina en un estudio de cohorte en 162 pacientes
urémicos no dializados con diferentes estadios de insuficiencia renal crónica.
De igual forma se obtuvieron altas correlaciones con citoquinas

proinflamatorias tales como el TNF-α y sus receptores solubles, sugiriendo
que in vivo la formación de PAOP está claramente relacionada o contribuye
a la activación de monocitos.
Se debe enfatizar en la importancia crucial de los oxidantes clorinados en el

formación de los PAOP. In vivo la generación de oxidantes clorinados es una
característica de las células fagocíticas la cuales poseen mieloperoxidasa, la
única enzima capaz de generar oxidantes clorinados (figura 22). Trabajos
recientes han apuntado la importancia potencial de los oxidantes clorinados,
derivados de mieloperoxidasa, en los mecanismos fisiopatológicos de la
ateroesclerosis, demostrándose la presencia de mieloperoxidasa en las
lesiones ateroescleróticas así como también subproductos de lipoproteínas,
inducidos por oxidantes clorinados. La correlación encontrada entre la
actividad oxidativa de neutrófilos circulantes, medidos en sangre total por
quimioluminiscencia, y las concentraciones de PAOP plasmáticos sugieren
que los neutrófilos, células fagocíticas circulantes que constituyen la fuente
más importante de oxidantes clorinados por su alto contenido en
mieloperoxidasa, están involucrados en la formación de los PAOP en plasma.
66
INTERPRETACIONES, EN EL ORDEN DIAGNÓSTICO, ACERCA DE

DEL DAÑO A PROTEÍNAS (GRU POS CARBONILO [C = O] Y PRODUC-
TOS AVANZADOS DE LA OXIDACIÓN DE PROTEÍNAS (PAOP)
Las proteínas oxidadas son expresión de un estrés oxidativo

crónico patológico que dan como resultado la acumulación de
estas proteínas alteradas, por la imposibilidad del organismo de
poder eliminarlas.
El incremento en las concentraciones de proteínas oxidadas

acumuladas están presentes en personas de edad avanzada y se
relacionan con enfermedades asociadas con la edad y su propia
progresión.
El daño a proteínas, por la determinación de grupos carbonilo

(C = O),
O), es expresión de un estrés oxidativo que modifica,
fundamentalmente, a los aminoácidos lisina, arginina y prolina
así como también por reacciones secundarias de cadenas
laterales de aminoácidos con productos terminales de la
peroxidación lipídica como los hidroxialquenales.
En el análisis de resultados asociados con el incremento de

grupos carbonilo se deben de examinar, simultáneamente, las
concentraciones de Hidroxialquenales y de Productos Terminales
de la Glicosilación Avanzada, por la relación que existe entre
estos tres marcadores de estrés oxidativo. En ausencia de la
medición de hidroxialquenales se puede valorar si las concentraciones
de MDA caen dentro del intervalo de referencia y el
Potencial de Peroxidación está elevado. Si esto es así entonces
los productos terminales de la POL se están desviando
preferencialmente hacia la formación de hidroxialquenales, indicando
que adicionalmente al daño oxidativo a aminoácidos de proteínas se
están formando Aductos. Estas exploraciones son de especial
valor en pacientes con enfermedades neurodegenerativas, de las
articulaciones y en la diabetes.
67
Se considera que los PAOP son expresión, fundamentalmente,

de un daño a proteínas plasmáticas por mecanismos
clorinantes que involucran la existencia de un estrés oxidativo.
Un incremento en los PAOP son indicativo de un estado

fisiopatológico de carácter inflamatorio, con activación de
neutrófilo circulantes y clorinación de proteínas plasmáticas.
Los PAOP aparecen como marcadores del estrés oxidativo

asociados con la uremia así como también constituyen
verdaderos mediadores de la inflamación capaces de amplificar
la activación de monocitos.
68
CAPÍTULO V. LA SUPERÓXIDO DISMUTASA (SOD), CATA -

LASA (CAT) Y EL PERÓXIDO DE HIDRÓGENO
Aunque las enzimas antioxidantes endógenas (SOD y CAT) representan,

cada una de ellas, moléculas antioxidantes individuales “per se”, éstas se
encuentran metabólicamente relacionadas, conjuntamente con el peróxido de
hidrógeno. Es por esto que al abordarlas en este libro le daremos un
tratamiento diferenciado, al desarrollar los 3 biomarcadores en el mismo
capítulo, con respecto a los marcadores ya analizados que aunque se
relacionan entre sí no guardan el grado de dependencia que muestran estos
3 indicadores redox (figura 23). Es así que cuando se caracteriza el estado
redox celular de un organismo vivo, principalmente cuando se utilizan como
criterio diagnóstico en humanos, el análisis hay que realizarlo en términos de
cómo se modifican estos marcadores para poder inferir qué vía(s) está (n)
siguiendo el radical anión superóxido (sustrato de la SOD) o el peróxido de
hidrógeno (producto de reacción de la SOD y sustrato de la CAT) y su
significado en el orden fisiopatológico.
SOD CAT
2 O2.- + 2 H+ H2O2 H2O + ½ O2
Figura 23. Relación metabólica y funcional entre los marcadores

redox SOD-Peróxido de Hidrógeno-Catalasa
V.1 La Superóxido Dismutasa
El metabolismo celular involucra la producción de ERO. El anión superóxido,

(O2.-) producido a partir de la reducción del oxígeno molecular puede
69
experimentar una dismutación, espotánea o o de naturaleza enzimática, para

generar peróxido de hidrógeno o puede reaccionar con el Óxido Nítrico para
formar el metabolito tóxico peroxinitrito (figura 24).
K ~ 1 09
SOD-EC O2 + H2O2
2 O2.-
2H+
O2 + ON. K ~ 1 01 0 ONOO-
H+
.
OH + NO2
Figura 24. Dismutación enzimática del anión superóxido por la
Superóxido Dismutasa Extracelular (SOD-EC)., Se muestra la
reacción de O2.- con el ON. para producir ONOO- y sus
productos de degradación
70
La combinación del peróxido de hidrógeno con iones metálicos (hierro) o el

rompimiento del peroxinitrito pueden generar el radical .OH, altamente tóxico.
Estas ERO pueden reaccionar con una variedad de macromoléculas tales
como lípidos, proteínas, ADN y centros [Fe-S]4, conduciendo a la disrupción
de las membranas celulares, inapropiada activación o inactivación de
enzimas y mutaciones genéticas. Por lo tanto la persistencia de estas ERO
alrededor de las células y tejidos pueden tener severas consecuencias
fisiopatológicas.
Una familia de enzimas antioxidantes, denominadas superóxido dismutasas

(SODs) son capaces de secuestrar el radical libre superóxido. Las SODs son
las primeras y más importantes líneas de defensa antioxidantes de carácter
enzimático. Hasta el presente se reconocen 3 isoformas distintivas de SOD. 2
isoformas de SOD tienen Cu y Zn en sus centros catalíticos y son localizadas
en compartimentos citoplasmáticos intracelulares (SOD-Cu/Zn o SOD1) o
extracelulares SOD-EC o SOD3). Una tercera isoforma de SOD posee Mn
como cofactor y ha sido localizada en mitocondria de células aeróbicas
(SOD-Mn o SOD2). La pérdida o disfunción de las SOD dependientes de
Cu/Zn y Mn se ha asociado a diferentes patologías mediadas por ERO. Por
ejemplo la SOD-Cu/Zn mutada ha sido unida a la Esclerosis Lateral
Amiotrófica mientras que la pérdida de la SOD-Mn se ha asociado con
muerte neonatal.
Considerando que la SOD que se determina en suero/plasma, con carácter

diagnóstico, es la de localización extracelular (SOD-EC), se dedicará la
atención fundamentalmente a esta isoforma.
71
La SOD-EC (SOD3) fue descubierta por Marklund y col. en 1982 y detectada,

por vez primera, en humanos en fluidos extracelulares tales como plasma,
linfa, sinovial y cerebroespinal. El patrón de expresión de la SOD3 está
altamente restringido a tejidos y tipos celulares específicos donde su
actividad puede exceder a aquéllas de SOD1 y SOD2.
La SOD-EC, en células del músculo liso vascular (CMLV) y células tipo 2

alveolares de pulmón, es regulada, hacia un incremento, por
citoquinas inflamatorias tales como el IFN e IL-4. Por el contrario es
regulada, hacia un decrecimiento, por TNF. La SOD-EC puede ser inhibida
por una variedad de agentes incluyendo azida y cianuro e inactivada por
dietilditiocarbamato y peróxido de hidrógeno. De igual forma, la expresión de
SOD-EC puede ser regulada por ciertas hormonas como la FSH, el cAMP y
una amplia variedad de agentes oxidantes tales como xantina oxidasa,
paraquat y t-butil hidroperóxido en fibtroblastos así como el consumo de zinc
dietético.
SOD-EC y Estados Fisiopatológicos
1. Vasculares
La SOD-EC está altamente expresada en vasos sanguíneos, particularmente

en las paredes arteriales y es la forma predominante en las aortas de mandril
y en humanos constituyendo hasta un 70% de la actividad de la SOD en este
tejido. Las CMLV secretan grandes cantidades de SOD-EC y se considera
que estas células son la fuente principal de la enzima de la pared vascular.
La expresión de la esta enzima, en las CMLV, puede ser controlada por una
variedad de factores vasoactivos, entre ellos: histamina, vasopresina,
72
oxitocina, endotelina-1, angiotensina II y serotonina que incrementan su

actividad.
El mecanismo preciso por el cual la SOD-EC protege contra las

enfermedades vasculares no ha sido aún resuelto. Las teorías más
aceptadas soportan la idea de que, secuestrando el radical superóxido, la
SOD-EC protege la bioactividad del ON.. Como ya se mencionó el ON. es
exquisitamente sensible a la inactivación por superóxido. Los estudios de
localización inmunohistoquímica demuestran que la SOD-EC está presente
en altas concentraciones entre el endotelio y el músculo liso que rodea los
vasos sanguíneos. Este es el mismo recorrido que el ON. debe seguir para
estimular la relajación del músculo liso. Por lo tanto, altas concentraciones
de SOD-EC en esta región puede ser importante en mantener bajas
concentraciones de superóxido y preservar la función del ON. En este
sentido una disminución de la SOD-EC plasmática puede ser un
marcador de riesgo de enfermedades vasculares, con mayor énfasis
cuando existen enfermedades de base, como la diabetes y otras.
El estrés oxidativo ha sido implicado en la patogénesis de la aterosclerosis y

algunos antioxidantes inhiben la aterogénesis. Debido a que el superóxido,
solo o en combinación, se ha asociado con la progresión de la aterosclerosis
la regulación de sus concentraciones en los vasos puede ser particularmente
importante en la patogénesis de esta enfermedad. Por ejemplo, la expresión
de la SOD-EC es sustancialmente reducida en pacientes con
enfermedad arterial coronaria (EAC), sugiriendo que una actividad
reducida de SOD-EC contribuye a la disfunción endotelial en estos
pacientes. Por otra parte, la sobrexpresión de la SOD-EC, en células
73
endoteliales vasculares, puede proteger contra la oxidación de LDL un factor

esencial en la formación de ateromas.
Se considera que un nivel elevado de homocisteína en

plasma constituye un factor de riesgo, para una incidencia
incrementada, de enfermedad vascular coronaria. La homocisteína es
formada durante el metabolismo de la metionina. Se ha documentado que
la autoxidación de homocisteína genera estrés oxidativo en la forma de
superóxido y peroxinitrito. Un estudio clínico reciente demostró la
existencia de una correlación positiva entre los niveles de homocisteína
plasmática y las concentraciones de la SOD-EC del plasma, en
pacientes con EAC. Además, los tratamientos que disminuyeron los niveles
de homocisteína marcadamente también disminuyeron la actividad de la
SOD-EC. De manera inversa, estos mismos pacientes mostraron una
correlación inversa entre los niveles de SOD-EC con otras condiciones
relacionadas con enfermedades vasculares tales como la incidencia de
infarto del miocardio. Otros factores de riesgo para EAC tales como
género masculino y tabaquismo, también correlacionaron con
concentraciones más bajas de SOD-EC.
Hipertensión
La activación de la NADPH-Oxidasa, enlazada a membrana, por angiotensina

II ha evidenciado ser una fuente significativa de ERO en los vasos
sanguíneos y la hipertensión mediada por angiotensina II puede ser anulada
por tratamiento con formas de SOD dirigida a sitios específicos de
membrana. Pacientes diagnosticados con EAC, tratados con Losartán o
Ramipril, incrementaron la actividad de la SOD-EC y mejoró la función de las
74
células endoteliales. Además, ambos medicamentos incrementaron la

biodisponibilidad del ON., después de 4 semanas de terapia. Esto sugiere
que las concentraciones de SOD-EC, en el plasma de pacientes con
estas disfunciones cardiovasculares, pueden poseer un valor
diagnóstico sobre la respuesta al tratamiento, con antagonistas de
receptores de angiotensina II e inhibidores de la enzima convertidora de
angiotensina, así como con respecto a la mejoría de la función de las
células endoteliales.
2. Diabetes
Los estudios en pacientes diabéticos han revelado concentraciones más

elevadas de SOD-EC glicosilada en el suero, lo que se traduce en una
disminución de la actividad de la enzima. Esta disminución de la SOD-EC se
expresa en una incrementada susceptibilidad de las células vasculares a los
radicales superóxido producidos en el espacio extracelular. La producción de
superóxido promueve destrucción de los islotes y la disminución de la
actividad de la SOD-EC se asocia a una incrementada progresión de la
insuficiencia renal y disminuye la supervivencia después de iniciada la
hemodiálisis.
Por otra parte, la generación de superóxido es dramáticamente incrementada

en la presencia de proteínas glicosiladas (SOD-EC glicosilada). Por lo tanto,
se producen: concentraciones vasculares de SOD-EC disminuidas, una
disminución de las concentraciones de la SOD-Cu/Zn y, en consecuencia, un
incremento en la producción de superóxido; todos estos procesos como un
resultado directo del incremento de la glicosilación de proteínas en la
diabetes. Estos efectos interferirán con el balance superóxido/óxido nítrico en
75
los vasos de pacientes diabéticos y puede jugar un importante papel en la

patogénesis de enfermedades vasculares periféricas en diabetes (figura 25).
Sin embargo el papel de la SOD-EC, en el desenlace y progresión de la

diabetes juvenil puede ser más complejo en sujetos más jóvenes, ya que su
comportamiento es irregular.
DIABÉTICO NO DIABÉTICO
GLUCOSA GLU NIVELES NORMALES DE GLUCOSA
SOD-EC
.- GLU
O2 SOD-EC
PLASMA
ENDOTELIO
GLU
SOD-EC RESPUESTAS
RESPUESTAS
O 2 .- ON.
HIPERTENSIÓN
AGREGACIÓN SOD-EC ++ VASODILATACIÓN
ANTI-TROMBÓTICO
PLAQUETARIA
OXIDACIÓN DE LDL SOD-EC ++ ANTI-ATEROSCLEROSIS
-
ATEROSCLEROSIS ONOO +++
+ SOD-EC
SOD-EC SOD-EC++
++
SOD-EC
MÚSCULO LISO
Figura 25. Diagrama que muestra los efectos de la glicosilación de la SOD-EC en

las complicaciones vasculares diabéticas. La pared arterial no diabética contiene
altas concentraciones de SOD-EC. Esta enzima previene que el superóxido inactive el
óxido nítrico y así permite que la relajación vascular normal ocurra, previniendo la
complicación vascular. La glicosilación de la SOD-EC disminuye la actividad de la
enzima en la arteria debido a su difusión hacia el plasma. La disminución de la SOD-EC
en arterias permitirá la formación incrementada de peroxinitrito, a partir de la
inactivación del óxido nítrico, dando como resultado hipertensión y las patologías
vasculares asociadas a las complicaciones diabéticas.
76
3. SOD-EC en las funciones neurológicas y las enfermedades
El estrés oxidativo juega un papel central en una variedad de desórdenes

neurológicos incluyendo Alzheimer, Parkinson, Esclerosis Lateral Amiotrófica
y Enfermedad de Huntington, entre otras. De esta forma los mecanismos
antioxidantes del cerebro pueden ser de considerable importancia en la
prevención de ciertos desórdenes neurológicos.
Las concentraciones de la SOD-EC, y su regulación en el cerebro, poseen

una importancia en términos de función congnoscitiva. Se ha demostrado que
una expresión incrementada o disminuida de la SOD-EC, en ratones
genéticamente manipulados, exhiben deterioro en las funciones de
aprendizaje y memoria.
En la isquemia cerebral se genera una sobreproducción de ERO que

sobrepasan las capacidades de los sistemas antioxidantes endógenos. En
estas condiciones la SOD-EC juega un importante papel definiendo la
extensión de la necrosis en poblaciones neuronales seleccionadas
La Polineuropatía Amioloidótica Familiar Tipo 1 es caracterizada,

clínicamente, por polineuropatía sensorial y motora, disfunción nerviosa
autonómica severa e insuficiencia orgánica. Esta enfermedad es una
amiloidosis sistémica autosómica dominante, causada por una mutación en
Transtiretina. En 1998 se refirieron los resultados de la autopsia de un caso
de 38 años que desarrolló esta enfermedad con un rápido desenlace de los
síntomas y una muy marcada deposición amiloide, alrededor de varios
órganos y tejidos, especialmente vasos sanguíneos y tejido intersticial. La
enfermedad estuvo acompañada por un incremento, en 10 veces,
77
con respecto al intervalo de referencia, de la actividad plasmática de la

SOD-EC.
4. La SOD-EC en la Artritis Reumatoide (AR)
La acumulación de células inflamatorias , particularmente neutrófilos en el

fluido sinovial, entre las articulaciones, es observado consistentemente en
pacientes con AR. La activación de los neutrófilos acumulados en el fluido
sinovial produce radicales superóxido, los cuales pueden reaccionar con
otros componentes, tales como el hierro, para generar más ERO. Los
estudios de Marklund mostraron que los pacientes con AR tienen hasta un
50% de reducción en las concentraciones de SOD-EC, comparados con
controles normales. Estos resultados sugieren que la reducción en la
actividad enzimática de SOD-EC puede incrementar la susceptibilidad del
fluido sinovial y el colágeno, de las articulaciones, al daño por ERO. Otros
han referido un incremento en la actividad de la enzima, que se atribuye a la
liberación de la SOD-EC, desde los neutrófilos.
5. Aplicaciones Terapéuticas de la SOD-EC
Diferentes estudios han demostrado que el t½ de la SOD-EC, en la

vasculatura, es de aproximadamente 20 horas. El largo t½ y la alta afinidad
por el sulfato de heparina, en las paredes vasculares, de la SOD-ECr (SOD-
EC recombinante), conjuntamente con intentos exitosos de producción, en
gran escala, pudo hacer posible la administración de esta enzima
parenteralmente en desórdenes asociados con una producción incrementada
de radicales superóxido. Algunos de estos estados fisiopatológicos ya fueron
mencionados anteriormente.
78
Por otra parte, la lista de condiciones fisiopatológicas, asociadas con la

sobreproducción de superóxido, se expande cada día más. Mucho del
conocimiento recopilado sobre el papel de este radical en enfermedades ha
sido alcanzado utilizando la enzima SOD nativa y, más recientemente, a
través del uso de modelo “knockout” o transgénicos que sobre-expresan las
diferentes isoformas de esta enzima. Basándose en el concepto de que la
eliminación de superóxido modula el curso de la inflamación, se han
desarrollado nuevos compuestos sintéticos, de bajo peso molecular, que
mimetizan la actividad de la SOD con lo que se ha podido minimizar algunas
de las limitaciones asociadas con el uso de la enzima nativa, desde el punto
de vista de la respuesta inmune a una proteína extraña al organismo (figura
26).
Figura 26. Compuestos sintéticos que mimetizan la actividad de

la enzima SOD
79
Estos nuevos antioxidantes representan una estrategia alternativa para

atenuar el daño oxidativo del pulmón in vivo. Estos compuestos de bajo peso
molecular se distribuyen más fácilmente en el tejido, poseen potencialidad de
alcanzar altas concentraciones en dominios intracelulares y evitan el
problema de la antigenicidad de proteínas antioxidantes.
Las tres clases de miméticos de la SOD contienen un metal. Se refiere que

estos miméticos han demostrado su eficacia en una gran variedad de
modelos in vivo e in vitro pero no han sido aun ensayados en humanos. A
mediados de la década del ´80, 6 millones de dosis de SOD (enzima) fueron
administradas, como anti-inflamatorios, a pacientes en Europa.
La clase “salen” de miméticos antioxidantes comparte una estructura

aromática de 3 anillos conteniendo Mn. El prototipo de estos compuestos es
el EUK-8, el cual expresa las actividades enzimáticas de SOD y CAT. Otros
“salen” como EUK-134, 178 y 189 refieren actividad de CAT más elevada que
el EUK-8. Esta familia posee, no solo actividad en desórdenes pulmonares,
sino también en degeneración de neuronas motoras, apoptosis, atenúa las
anormalidades mitocondriales así como el daño al riñón, músculo
esquelético, páncreas y corazón.
La clase de miméticos antioxidantes macrocíclicos enlaza Mn en una

estructura de 5 anillos tal que el metal está disponible por una simple
transferencia de electrones. Se considera que son relativamente
específicos para secuestrar superóxido. Un prototipo de mimético
macrocíclico de la SOD es el M40403, especialmente importante en
inflamación.
80
Los miméticos antioxidantes de la clase metaloporfirinas exhiben fuertes

propiedades antioxidantes incluyendo, además de la captura de superóxido,
el peróxido de hidrógeno, peroxinitrito y radicales lipídicos peroxil. Ellos
exhiben actividad de CAT, pero baja. Una de las metaloporfirinas más
ampliamente investigadas ha sido la Mn(III) meso-Porfirina.
INTERPRETACIONES, EN EL ORDEN DIAGNÓSTICO, DE LA

ACTIVIDAD DE SUPERÓXIDO DISMUTASA (SOD)
La SOD es una enzima que requier requieree estar estrictamente

controlada, considerando que el radical anión superóxido va a jugar
un importante papel en el orden fisiológico, principal
rincipalmente sobre el
siste
sistema vascular, así como en una gran diversidad de
enfermedades.
Un incremento de la SOD-EC, en pacientes con riesgo de

enfermedad vascular coronaria debe orientar el diagnóstico hacia la
identificación de estos desórdenes, complementando los estudios con
la determinación de otros marcadores como la homocisteína. Una
disminución de la SOD-EC es indicativa, para pacientes de riesgo, de
infarto del miocardio y EAC.
Los pacientes con AR tienen hasta un 50% de reducción en las

concentraciones de SOD-EC. En otras afecciones, como en la
Polineuropatía Amioloidótica Familiar Tipo 1 se encuentra un
incremento, en 10 veces con respecto al intervalo de referencia de
la actividad plasmática de la SOD-EC.
81
Las concentraciones de SOD-EC, en el plasma de pacientes con

disfunciones cardiovasculares, poseen un valor diagnóstico
sobre la respuesta al tratamiento, con antagonistas de receptores
de angiotensina II e inhibidores de la enzima convertidora de
angiotensina (IECA), así como con respecto a la mejoría de la función
de las células endoteliales.
Una disminución de la SOD-EC con un incremento en las

concentraciones de Fructolisina, en pacientes diabéticos, es
indicadora de complicaciones vasculares. De igual forma, en
pacientes con riesgo o sospecha de diabetes, deben explorarse
preferentemente la actividad de la SOD-EC y Fructolisina, este
último es un precursor de proteínas glicosiladas. La ateroesclerosis,
hipertensión y otras disfunciones vasculares transitan por una
disminución de la SOD-EC por glicosilación de la enzima (figura 23).
V.2 El Peróxido de Hidrógeno
Funciones fisiológicas
El peróxido de hidrógeno es una molécula pequeña y relativamente estable

que difunde rápidamente y así, como otras moléculas pequeñas tales como el
calcio, diacilgligerol o AMPc, tiene la potencialidad de actuar como un
segundo mensajero y modular la expresión de genes (figura 27).
El endotelio vascular juega un importante papel en el mantenimiento de la

homedodinámica vascular, sintetizando y liberando algunos factores
vasodilatadores tales como prostaciclina (PGI2), óxido nítrico y un, todavía no
identificado Factor Hiperpolarizante derivado del Endotelio (FHDE). Los más
82
probables candidatos de este FHDE incluye a los ácidos

epoxieicosatrienoico, iones potasio derivados del endotelio y el peróxido de
hidrógeno.
RUTAS DE TRANSDUCCIÓN DE
SEÑALES
EXPRESIÓN GENES
ACTIVACIÓN PROTEÍNAS
QUINASAS
ADHESIÓN CELULAR
ENVEJECIMIENTO
H2O2 ORGANIZACIÓN
CITOESQUELETO
PROLIFERACIÓN
CONFORMACIÓN
Í
INFLAMACIÓN
RESPUESTA INMUNE
RESPUESTA AL ESTRÉS
DEGRADACIÓN PROTEOSOMAL
MUTAGÉNESIS Y
CÁNCER
HIPERTENSIÓN Y CICATRIZACIÓN HERIDAS
ATEROSCLEROSIS CONTRACCIÓN HERIDAS
Figura 27. Representación esquemática de las múltiples acciones del peróxido de

hidrógeno. El peróxido de hidrógeno está involucrado en una gran diversidad de
procesos fisiológicos y fisiopatológicos a través de su capacidad para regular la
expresión de algunas proteínas quinasas y fosfatasas. A través de estos
mecanismos así como por la oxidación de residuos aminoacídicos sensibles en
proteínas modula la expresión de genes y el t½ de proteínas.Este último efecto es
el resultados de cambios inducidos en la conformación de proteínas que dispara la
degradación proteosomal. Estos no representan los únicos mecanismos por los
cuales el peróxido de hidrógeno modifica la expresión de genes ni tampoco la
figura es una lista exhaustiva de las condiciones patológicas, mediadas y/o
inducidas por ERO. No obstante ofrece una amplia visión de un interesante e
importante mecanismo de defensa del huésped que puede resultar en daño celular,
muerte celular y/o cicatrices en el tejido.
Debido a los diferentes mecanismos involucrados en la formación del

peróxido de hidrógeno así como también las implicaciones en estados de
83
enfermedad, la formación de ERO puede ser clasificada en dos categorías

generales: aquélla derivada del consumo de oxígeno mitocondrial y aquéllas
que son independientes de la mitocondria. La eficacia del consumo de
oxígeno por la cadena respiratoria mitocondrial es altamente dependiente de
su estado de acoplamiento y, de esta forma, los cambios en el consumo de
ooxígeno pueden alterar la formación de peróxido de hidrógeno.
Sistemas de defensa antioxidante involucrados en la detoxificación del

peróxido de hidrógeno
Son varios los sistemas enzimáticos y no enzimáticos involucrados en la

eliminación del peróxido de hidrógeno y otras ERO que se generan por
incrementos en sus concentraciones. Estos sistemas pueden ser divididos en
tres grupos fundamentales:
Enzimas Antioxidantes, incluyen Catalasa y GSH-Peroxidasa,

Antioxidantes de rompimiento de cadena tales como tocoferoles y
ascorbato,
Proteínas enlazantes de metales de transición, transferina y ferritina.
Las enzimas antioxidantes catalizan la inactivación de ERO en el medio

intracelular. Por otra parte, los antioxidantes de rompimiento de cadena son
poderosos donores de electrones y reaccionan preferencialmente con
radicales libres antes que importantes moléculas diana sean dañadas.
Finalmente, las proteínas enlazantes de metales de transición previenen la
interacción de estos metales, tales como el hierro y el cobre, con el peróxido
de hidrógeno y el radical superóxido inhibiendo así la formación del radical
libre OH., altamente reactivo.
84
El peróxido de hidrógeno en enfermedades
Los resultados experimentales claramente indican que el peróxido de

hidrógeno es un mediador de múltiples eventos fisiológicos. Sin
embargo, se debe enfatizar que un exceso en la formación de peróxido
de hidrógeno ha sido documentado en muchas condiciones
patológicas, discutiéndose si esta ERO es la causa primaria de la
enfermedad o si su producción ocurre de forma secundaria a eventos lesivos
o inflamatorios.
En la fibrosis hepática y hepatocarcinomas se ha demostrado una disfunción

mitocondrial manifestada por un 70% de disminución en el consumo de
oxígeno, dependiente de NADH, y un exceso en la producción de peróxido de
hidrógeno.
Hay algunos mecanismos a través de los cuales el consumo de etanol

crónico induce una respuesta de estrés oxidativo en el hígado. Entre ellos:
cambios en la relación NAD/NADH con alteración del estado redox y
activación de factores de transcripción que disparan la respuesta oxidativa; el
acetaldehído generado por la alcohol deshidrogenasa, la enzima principal
involucrada en su metabolismo, induce la acumulación de peróxido de
hidrógeno por un mecanismo todavía desconocido y otros. El peróxido de
hidrógeno está involucrado en la activación de los genes para colágeno tipo I
por células estelares hepáticas en cultivo (figura 28). Además, el peróxido de
hidrógeno induce la expresión de TGF- β1 creando un lazo autocrino
fibrogénico (figura 29). En la presencia de hierro o cobre, el peróxido de
hidrógeno es convertido a radicales hidroxilo que inducen lipoperoxidación
85
con formación de múltiples aldehídos incluyendo malondialdehído y 4

hidroxinonenal. Estos aldehídos, similares al acetaldehído, estimulan la
formación de peróxido de hidrógeno e inducen la expresión de genes de
colágeno por fibroblastos cultivados y células estelares hepáticas. El
CYP2E1, el sistema microsomal oxidante de etanol, involucrado en el
metabolismo de esta droga, produce acetaldehído y genera radical anión
superóxido, peróxido de hidrógeno y radicales 1-hidroxietil.
DAÑO LIPOPEROXIDACIÓN
ESTRÉS OXIDATIVO
H2O2
MIGRACIÓN
CÉLULAS ACTIVACIÓN PROLIFERACIÓN
CÉLULAS PRODUCCIÓN DE
INFLAMATORIAS Y
ESTELARES COLÁGENO
DE KUPFFER CONTRACCIÓN
LAZO
AUTOCRINO
CITOQUINAS
Y
FACTORES DE
CRECIMIENTO
Figura 28. Posibles mecanismos a través de los cuales el daño del hígado resulta en
la activación de células estelares (CEs) y un exceso en la deposición de colágeno.
El daño del hígado promueve formación de lipoperóxidos. Estos aldehídos reactivos
generan peróxido de hidrógeno y así contribuyen al estrés oxidativo. Por otra
parte, el daño del hígado conduce a la migración quimiotáctica de células
inflamatorias y activación de células de Kupffer. Estas en respuesta producirán
peróxido de hidrógeno y, además, contribuyen al estrés oxidativo de la célula. Las
citoquinas y factores de crecimiento, producidos por las células inflamatorias, así
como también el peróxido de hidrógeno liberado por ellas activará a las CEs y
éstas en respuesta migrarán al sitio dañado, proliferan y producen cicatrices fibrosas
del tejido. Debido a que las CEs también liberan citoquinas y factores de
crecimiento se genera un lazo autocrino con una sostenida activación de las CEs
hepáticas.
86
ACETALDEHÍDO
EVENTO
TEMPRANO
EVENTO TARDÍO
H2O2 LAZO AUTOCRINO TGF-β1
EXPRESIÓN GENES DE
COLÁGENO
Figura 29. Lazo Autocrino involucrado en la sobreregulación, mediada por

acetaldehído, de los genes de colágenos tipo I. Un evento temprano del acetaldehído
es inducir la acumulación del peróxido de hidrógeno. Por otra parte, se conoce
que el peróxido de hidrógeno induce la expresión de TGF-β1 y por lo tanto la
producción de esta citoquina puede sobreregular la expresión del gen de colágeno
tipo I, en puntos finales, después de la exposición al acetaldehído. Debido a que el
TGF-β1 también induce la expresión de genes, por un mecanismo depediente de
peróxido de hidrógeno, se establece un lazo autocrino que puede conducir a un
proceso de perpetuación de la fibrogénesis del hígado.
Otros procesos patológicos mediados por peróxido de hidrógeno
El peróxido de hidrógeno es un importante mediador del daño de la piel por

radiaciones UVB e induce la expresión del Factor de Crecimiento del
Endotelio Vascular (FCEV) en queratinocitos.
87
Como ya se evidenció las ERO están involucradas en la hipertensión,

aterosclerosis y enfermedades cardiovasculares. LOX 1, el receptor de las
células endoteliales que enlaza a LDL-oxidadas, importante mediador de las
lesiones ateroscleróticas es sensible al estado redox. Además, este receptor
es sobreregulado por peróxido de hidrógeno y homocisteína. Existe una
correlación significativa entre el peróxido de hidrógeno y las
concentraciones de renina plasmática, sugiriendo una posible
predisposición genética asociada a incrementados niveles de peróxido
de hidrógeno con riesgos de aterosclerosis e hipertensión.
El peróxido de hidrógeno también juega un papel en la fibrosis cística y

en el desarrollo de cataratas. En el primer caso , los niveles de peróxido
de hidrógeno se encuentran incrementados en el aire expirado y
disminuyen después del tratamiento con antibióticos y, en el segundo,
el peróxido de hidrógeno induce la secreción de metaloproteinasas de
la matriz por las células del cristalino y estas proteasas serán
responsables de la opacidad de la cápsula del cristalino y la formación
de cataratas.
88
INTERPRETACIONES, EN EL ORDEN DIAGNÓSTICO, DE LAS

CONCENTRACIONES PLASMÁTICAS DE PERÓXIDO DE HIDRÓGENO (H 2O2)
El peróxido de hidrógeno, a bajas concentraciones , juega un

importante papel fisiológico. Cuando sus niveles sobrepasan las
capacidades de los sistemas antioxidantes puede promover daño a
biomoléculas esenciales, actuando de forma directa o como precursor
de radicales libres altamente reactivos (radical hidroxilo)
El análisis de este biomarcador redox se debe realizar considerando

las concentraciones de la SOD, enzima que genera peróxido de
hidrógeno, y la actividad de la enzimas GSH-Peroxidasa y Catalasa
(inactivan el peróxido de hidrógeno. Por supuesto un déficit de GSH indica
una alta posibilidad para una baja actividad de la peroxidasa y si a esto se
agrega concentraciones de catalasa, por debajo del intervalo de referencia,
esto explica el incremento que debe observarse en el peróxido de
hidrógeno. Si en este cuadro diagnóstico (alta actividad de SOD y bajas
concentraciones de GSH-Peroxidasa y Catalasa) se asocian
concentraciones bajas de peróxido de hidrógeno, entonces esto sugiere
que el peróxido de hidrógeno se está derivando hacia la formación del
radical hidroxilo.
Un incremento del peróxido de hidrógeno, en disfunciones hepáticas,

es indicativo de un alto riesgo de daño fibrótico.
En el alcoholismo, donde se genera, como uno de los productos del

metabolismo del alcohol, el acetaldehído este metabolito tóxico induce
la producción de peróxido de hidrógeno. De ahí que, en el orden
diagnóstico, es de esperar en individuos que ingieren alcohol de
forma crónica, altas concentraciones de peróxido de hidrógeno y sus
correspondientes daños al tejido.
Altos niveles de peróxido de hidrógeno es indicativo de riesgo de

diabetes y sus complicaciones vasculares como la hipertensión y la
aterosclerosis.
89
V.3 La Catalasa (CAT)
Funciones y su papel en enfermedades
La CAT es una enzima que reacciona muy eficientemente con peróxido de

hidrógeno para formar agua y oxígeno molecular:
CATALASA
H2O2 H2O + ½ O2
Esta localizada fundamentalmente en peroxisomas y su distribución en otros

compartimentos subcelulares no está todavía bien establecido debido a que
los peroxisomas son fácilmente destruidos durante la manipulación celular.
Se han identificado diferentes estados de enfermedad asociados a un

déficit de la actividad de la CAT.
La susceptibilidad al Vitiligo es una particularidad genética que puede

involucrar importantes genes para la biosíntesis de melanina, respuesta al
estrés oxidativo y/o regulación de la autoinmunidad así como factores medio
ambientales. La CAT fue seleccionada como un gen candidato debido a
que se observó que una reducción de la actividad de esta enzima
coincidía con una concomitante acumulación de un exceso de peróxido
de hidrógeno en toda la epidermis de un paciente con vitiligo. Los
estudios de polimorfismo genético indican que mutaciones en/o cercanas al
gen de la CAT pueden contribuir al desencadenamiento de esta enfermedad
que afecta notoriamente la calidad de vida.
90
El decremento de la actividad de CAT debido a anemia, síntesis disminuida y

especialmente una deficiencia, de carácter hereditario, puede ser un factor de
riesgo en diabetes, daño celular debido a isquemia y otros desórdenes
relacionados con la sobreproducción de peróxido de hidrógeno, por ser esta
enzima altamente eficiente en la inactivación de esta ERO.
Debido a que la sobreproducción de peróxido de hidrógeno se asocia a una

gran diversidad de enfermedades humanas así como se han identificado
otras enfermedades relacionadas con el déficit de CAT, los sistemas de
liberación de esta enzima detoxificadora de peróxido de hidrógeno pueden
tener una amplia aplicación terapéutica que dependerá de su distribución en
los sitios donde se genere el peróxido de hidrógeno. Así es que se han
utilizado técnicas de modificaciones químicas para diseñar sistemas de
liberación de esta enzima para desórdenes hepáticos (galactosilación,
manosilación o succinilación), renales (cationización) y circulación sistémica
(PEGilación). La efectividad de estos sistemas se han demostrado en
diferentes modelos experimentales de daño por isquemia/reperfusión
hepática, metastasis tumoral del hígado, pulmón y órganos peritoneales.
INTERPRETACIÓN DIAGNÓSTICA DEL SIGNIFICADO DE LA ACTIVIDAD

DE LA CATALASA (CAT) EN PLASMA
La actividad de CAT es esencial para el mantenimiento de las

concentraciones fisiológicas de peróxido de hidrógeno. Todas
aquellas enfermedades que cursen con un incremento en el peróxido
de hidrógeno están influenciadas por un déficit en los niveles
plasmáticos de CAT.
Un déficit genético de CAT se ha asociado a enfermedades como el

Vitiligo y constituye un factor de riesgo para la adquisición de otros
estados fisiopatológicos.
91
V.1 Algunas aplicaciones clínicas de la tríada SOD/H2O2/CAT

Existen reconocidas evidencias, experimentales y clínicas, de que la relación
metabólica, entre SOD (secuestrando radical superóxido y generando
peróxido de hidrógeno) y GSH-Peroxidasa y Catalasa (inactivando peróxido
de hidrógeno), se expresa en diferentes estados de enfermedad. Cuando
utilizamos esta tríada redox, con fines de diagnóstico, es imprescindible
analizar los valores individuales de cada uno de estos indicadores,
integrándolos después en el orden funcional. A modo de ejemplo, vamos a
mostrar el comportamiento de estos indicadores en algunas enfermedades
como la diabetes con una complicación vascular, la hernia discal y el síndrome
isquémico.
Pacientes Diabéticos con Pie Neuroinfeccioso
2 15 0 b
a 12 5
a
1. 5
SOD (U/mL/min)
10 0
b
HT (u M)
Control (n=60) C ont r ol ( n=6 0 )

1 75
Diabéticos (n=49) D i abé t i cos ( n=49)
50
0 . 5
25
0 0
3000
b
2500
C A T(U /mL/min ))
2000
C ont r ol ( n=6 0)
15 0 0
D i a bé t i c os ( n=4 9 )
10 0 0
500 a
0
Letras diferentes indican diferencias sigificativas p < 0.05
92
La disminución de la SOD sugiere que está ocurriendo una inhibición de la

enzima por exceso del producto de reacción (peróxido de hidrógeno) lo que
se correspondió con un incremento significativo de los hidroperóxidos totales
(TH), indicador de las concentraciones de peróxido de hidrógeno y el aumento
notable de la CAT, lo que indica que la GSH-Px no logró eliminar el peróxido
producido y la CAT, aunque incrementó notablemente, tampoco pudo
reestablecer las concentraciones de peróxido de hidrógeno basales. En estas
condiciones es de esperar daño a biomoléculas como proteínas, lípidos y ADN,
formación de aductos y otros daños celulares. De hecho ha sido reconocido el
incremento del peróxido de hidrógeno en la diabetes y sus complicaciones
vasculares (figura 27).
Pacientes con Hernia Discal
b 600 b
35
30 400
HT (uM)
SOD (U/ml/min)
Interva lo Referencia
25
Pacientes HD
20 Intervalo Referencia
200 a
15 Pacientes HD
10
a
5
0
0
b
80 0
60 0
CAT (U/ml/min)
In terv alo Referencia

40 0
a Pacien tes HD
20 0
93
Los pacientes con Hernia Discal están sometidos a un estrés oxidativo severo.
La SOD se encontró muy incrementada, correspondiéndose también con un
aumento dramático en las concentraciones de hidroperóxidos orgánicos, una
medida de los niveles de peróxido de hidrógeno. En esta disfunción
neurológica el peróxido generado no originó inhibición de la SOD, a diferencia
de lo ocurrido en los pacientes diabéticos. La CAT se incrementó también, pero
no logró eficazmente reestablecer las concentraciones de peróxidos al
intervalo de referencia. Estos pacientes mostraron un severo daño a proteínas,
probablemente colágenos (datos no mostrados).
Isquemia/Reperfusión del hígado, en un modelo experimental (ratas)
10000 45
b
a 40
8000
SOD ((U/ml/min)
35
6000 b
30 Control
HT (uM)
Control I/R 25
4000 20 I/R
2000
15
a
10
0 5
0
10 0 0
b
8 00
CAT (U/ml/min)
6 00
Control I/R
4 00
a
2 00
94
El comportamiento de estos 3 marcadores redox, en el daño por I/R del

hígado, en un modelo experimental, fue muy semejante al observado en los
pacientes diabéticos con pie neuroinfeccioso. Una inhibición de la SOD,
probablemente por exceso del producto de reacción (peróxido de hidrógeno),
un aumento significativo de esta ERO y un incremento en la CAT, que no
logró revertir la sobreproducción del peróxido de hidrógeno y los daños
celulares que éste origina, ya sea de forma directa o a través de la formación
de radicales más reactivos.
95
VI. ALGUNAS MANIPULACIONES DIETÉTICAS QUE INFLUYEN

EN EL REESTABLECIMIENTO DEL ESTADO REDOX
CELULAR
VI.1 Relacionadas con el GSH
En general, con excepción de algunos tumores malignos, la deficiencia de

GSH contribuye a un estrés oxidativo crónico el cual juega un papel esencial
en el Envejecimiento, y en la patogénesis de muchas enfermedades,
incluyendo cáncer, diabetes, enfermedades neurodegenerativas (Alzheimer y
Parkinson), desórdenes hepáticos, fibrosis cística, siclemia, VIH/SIDA,
Infartos (miocardio y cerebral) y otras.
Un análisis de las causas del decrecimiento en los niveles de GSH y cómo

este déficit puede ser solventado a través de estrategias nutricionales
evidencian que aunque la administración de donores/precursores de GSH
representan una vía a utilizar; en muchas enfermedades se produce un
estrés oxidativo severo debido a la ausencia o modificación genética de
enzimas dependientes de GSH y que son esenciales en los procesos
asociados al mantenimiento del estado redox celular, por lo que estas
afectaciones genéticas deben ser tomadas en consideración cuando se
formulen recomendaciones nutricionales asociadas al metabolismo del GSH.
Bajo condiciones fisiológicas normales la velocidad de síntesis de GSH está

profundamente influenciada por 2 factores: la disponibilidad de cisteína y la
actividad de la enzima GCL. La cisteína procede de la dieta, a través de la
degradación de proteínas en el hígado o también de metionina (otro
aminoácido esencial procedente de la dieta).
96
Si se detecta en pacientes déficit de GSH, entre moderado y severo, se

deben administrar dietas ricas en proteínas. Se debe considerar que las
proteínas de origen animal son abundantes en grasas saturadas. Se
aconseja el consumo de pescados (blanco y especialmente los azules,
éstos últimos por su contenido en ácidos grasos poliinsaturados con efectos
beneficiosos contra la aterosclerosis. Las carnes deben ser magras: el
pollo sin piel y la leche descremada para evitar el exceso de grasas
saturadas y el colesterol. Las fuentes de proteína vegetal puede venir dada
por el consumo de leguminosas.
A modo de ejemplo, y como referencia, se muestran los requerimientos

promedio de proteínas establecidos para la población cubana en función de
la edad y la actividad física (tabla 2).
Tabla 2. Requerimientos promedio de proteínas según edad y actividad física
Requerimientos Promedios de Proteínas (g)

Edad
(años) Tipo de Actividad
Ligera Moderada Intensa Muy Intensa
18-30 80 90 101 110
30-60 78 88 98 108
> 60 65 74 82 90
Muchas enfermedades están profundamente influenciadas por la

sobreproducción de ERO, debido a un déficit de enzimas dependientes de
GSH. En este sentido las concentraciones de GSH pueden localizarse en el
intervalo de referencia, o incluso estar elevadas, pero si los niveles de
97
peróxido de hidrógeno (hidroperóxidos) se encuentran incrementados,

conjuntamente con un aumento en la actividad de catalasa, entonces la
detoxificación de ERO y otros xenobióticos puede estar relacionada con una
baja o nula actividad de enzimas como la GSH- Px y la GSH-S-Transferasa o
un déficit en Selenio, cofactor indispensable de la enzima GSH-Px.. Entre las
enfermedades derivadas de una insuficiente actividad de estas enzimas se
encuentran: GST en el cáncer colorectal, entre altos consumidores de carnes
rojas o carnes procesadas; GSH-Px en cáncer de cabeza y cuello, pulmón,
mama y otras. En esta situación es recomendable el empleo de los conocidos
vegetales crucíferos (nabo, rábano, berro, berza, col, brócoli). Estos
vegetales son muy ricos en isotiocianato inductor de la activación del Factor
de Transcripción Nuclear Nrf2 que promueve la expresión de enzimas
asociadas a las funciones protectoras contra el estrés oxidativo del GSH
(figura 30). De igual forma los isotiocianatos, en vegetales crucíferos, son
capaces de incrementar la capacidad de detoxificar cancerígenos
compensando el déficit de la enzima GSH-S-Transferasa (isoforma GSTP1).
Aunque muchas organizaciones internacionales, incluyendo el Instituto
Nacional del Cáncer, ha recomendado el consumo de 5 a 9 porciones
(2½-4½ tazas) de frutas y vegetales diariamente; las recomendaciones
particulares para los vegetales crucíferos no han sido aún establecidas. Sin
embargo algunos estudios de cohorte prospectivos sugieren que los
adultos deben tener como meta consumir, al menos, 5
porciones/semana de vegetales crucíferos.
Un cofactor importante en la detoxificación del exceso de peróxido de

hidrógeno por la GSH-Px es el Selenio, el cual se identifica desde el punto de
vista nutricional como un micronutriente.
98
El selenio asociado a la enzima GPx, metaboliza los hidroperóxidos formados

a partir de los AGPI. El Se también forma parte de las enzimas que
desyodan las hormonas tiroideas. En general, el selenio funciona como un
antioxidante que actúa en conjunción con la vitamina E.
ESTRESORES/INDUCTORES
U
U
ERO Difenoles, Diaminas U
U
.
NO Aceptores Michel Nrf
Otros Isotiocianatos SH SH
Tiocarbamatos
Hidroperóxios Keap1 Cul
Arsenicales trivalentes 3
Metales pesados Nrf R
U
Dimercaptanos vecinos E2
Polienos conjugados
KINASAS IMPORTINA
P
CITOSOL
N
Otras rf CBP/ CRM1
p300
sM 2
TRANSCRIPCIÓN
AR DE GENES
NÚCLEO FUNCIONES DE GENES

O
9Antioxidantes Directos (GSH-Px, GR,
Ferritina).
9Metabolismo de ERO
9Detoxificación Electrofílica.
9Homeostasis del GSH (Síntesis, Regene-
ración).
9Generación de Equivalentes de Reduc-
Figura 30. INDUDCCIÓN DE LA EXPRESIÓN DE GENES A TRAVÉS ción (Glu-6-PO4 DesHasa, 6-Fosfoglu-
DE LA RUTA DE SEÑALIZACIÓN Keap1-Nrf2-ARE conato DesHasa, Enzima Málica).
9Transporte de Solutos (Transportado-
res de Respuesta Multifármacos).
9Inhibición de Inflamación mediada por
Citoquinas.
9Reonocimiento del daño al ADN, y
9Funciones de los Proteosomas
99
Los niveles plasmáticos de selenio varían desde 8 a 25 mg·dL-1 (1,0 a 3,2

μM), en función de la ingesta de selenio. Se ha referido la importancia de la
dieta conteniendo selenio, o su administración por vía de suplementos ya
que puede constituir una estrategia conveniente y segura para incrementar
la producción de antioxidantes en individuos de edad avanzada,
particularmente aquéllos con riesgo de enfermedades cardíacas isquémicas
o que son sometidos a procedimientos clínicos que involucran períodos
temporales de hipoxia del miocardio.
Alimentos ricos en selenio lo constituyen alimentos del mar (atún, salmón,

macarela y otros ricos en ácidos grasos ω-3), carnes magras y cereales.
La deficiencia de selenio es rara entre los seres humanos, incluso en Nueva

Zelanda y Finlandia donde la ingesta de selenio es de 30 a 50 mg·d-1,
comparada con los 100 a 250 mg·d-1 en Estados Unidos y Canadá. Sin
embargo, altas dosis de selenio (>900 mg.d-1) promueven una toxicidad
caracterizada por:
Pérdida del pelo, deformidad y pérdida de las uñas,

Neuropatía periférica e irritabilidad,
Fatiga y cuadros diarreicos.
2. Asociadas la Peroxidación Lipídica (POL)
Como ya mencionamos la POL tiene como una de sus dianas patológicas

principales a la oxidación de la LDL y sus consecuencias.
100
CONSECUENCIAS DE LA OXIDACIÓN DE LA LDL
INCREMENTA LA PROBABILIDAD DE DESARROLLO DE LA PLACA

ATEROSCLERÓTICA.
EL CONSUMO DE LDL-OXIDADA, POR MACRÓFAGOS, CONDUCE A

LA FORMACIÓN DE CÉLULAS ESPUMOSAS.
ES QUIMIOTÁCTICA PARA MONOCITOS E INHIBE EL ÉXODO DE

MACRÓFAGOS DESDE LAS ARTERIAS.
INDUCE DAÑO A CÉLULAS ENDOTELIALES.
ESTIMULA LA LIBERACIÓN DE FACTORES DE CRECIMIENTO Y

CITOQUINAS POR LAS CÉLULAS, EN LAS PAREDES ARTERIALES.
Las recomendaciones a tener en cuenta en la confección de las dietas,

contempla los siguientes criterios:
CRITERIOS GENERALES PARA LA CONFECCIÓN DE DIETAS
GRASAS Y ACEITES MENOR DE 6 CUCHARADAS AL DÍA.
CARNES ROJAS 150-180g AL DÍA, MÁXIMO TRES VECES POR

SEMANA .
CUATRO HUEVOS POR SEMANA.
LEGUMINOSAS Y CEREALES INTEGRALES, DIARIAMENTE.
SAL 2,4 G POR DÍA.
PANES Y GALLETAS 2 A 4 RACIONES AL DÍA, SEGÚN EL PESO

CORPORAL.
VERDURA 3-5 RACIONES AL DÍA.
FRUTAS 2-4 RACIONES AL DÍA.
101
Aunque las células vasculares y cardíacas están protegidas por mecanismos

de defensa antioxidante endógenos, éstos no son suficientes para
defenderlas contra situaciones de un EO excesivo y, por lo tanto, la DIETA y
los SUPLEMENTOS ANTIOXIDANTES pueden ser importantes, en el
tratamiento y la prevención. Las vitaminas E y C han sido ampliamente
estudiadas en la prevención y/o intervención dietética en la aterosclerosis con
independencia de los resultados controvertidos que han sido referidos.
REQUERIMIENTOS DE VITAMINA E
APORTE POR DIETA BALANCEADA: 30 UI/DÍA
REQUERIMIENTO ADICIONAL: 100-400UI/DÍA
+
DIETA RICA EN FRUTAS, VEGETALES Y EJERICICIO REGULAR
El aporte de Vit E, a través de una dieta balanceada parece no exceder las

30 UI/día, reconociéndose la necesidad de una suplementación adicional de
100-400 UI/día, acompañada de una dieta rica en frutas y vegetales así cono
un ejercicio regular.
102
Por otra parte, el antioxidante más prevalente en la LDL es la Vit E. Cada

molécula de LDL contiene de 5 a 9 moléculas de Vit E conjuntamente con
pequeñas cantidades de algunos otros antioxidantes como γ - tocoferol y β
carotenos. La cinética de autooxidación de lípidos sugiere que la Vit E debe
retardar o detener los pasos involucrados en la autooxidación lipídica. Por lo
tanto, la Vit E puede limitar la progresión de la aterosclerosis estabilizando la
placa y previniendo su ruptura y subsiguiente formación del coágulo. La
suplementación con Vit E también conlleva a una disminución en la
agregabilidad plaqueteria. Los efectos de la Vit E, sobre el proceso
aterosclerótico se muestra en la Tabla 3.
Tabla 3. Efectos de la Vitamina E contra el proceso ateroesclerótico
SITIO “BLANCO” FUNCIÓN

LDL Antioxidante
Células Endoteliales y otras Potencia liberación de ácido araquidó-
nico y lavproducción y actividad de
prostanos
Endotelio Inhibe la adhesión celular
Endotelio Protege al ON. y la vasoactividad
dependiente de células endoteliales
Células del Músculo Liso Inhibe la proliferación
Plaquetas Inhibe la adhesión y agregación
Neutrófilos Reduce la síntesis de leucotrienos
Células sanguíneas Reduce la excreción urinaria de
leucotrienos
Monocitos Adhesión reducida, producción
disminuida de oxidantes y expresión
alterada de citoquinas
103
Se ha reconocido la asociación entre la enfermedad CV aterosclerótica y un

determinada tolerancia a la glucosa. La diabetes es un reconocido factor de
riesgo para la aterosclerosis, como ya mencionamos, y el IM causado por la
aterosclerosis de las arterias coronarias es la causa más común de muerte
en pacientes diabéticos. Vamos entonces a examinar los efectos de
hiperglicemia sobre un reconocido antioxidante, la Vit C.
DIABETES ATEROSCLEROSIS ATEROSCLEROSIS

ARTERIAS
CAUSA MÁS COMÚN DE MUERTE

INFARTO
MIOCARDIO
EFECTOS DE LA HIPERGLICEMIA SOBRE LA VITAMINA C
INHIBE EL TRANSPORTE DE VITAMINA C.

LA DIABETES SIMULA LAS CONDICIONES DE DEFICIENCIA DE VIT C.
DETERIORA LA VASODILATACIÓN, DEPENDIENTE DEL ENDOTELIO,
REVERTIDA POR ADMINISTRACIÓ
IÓN AGUDA DE VITAMINA C.
DETERIORA LA INCORPORACIÓN DE SULFATOS EN PROTEOGLICANOS

DE LA MATRIZ QUE LA PREVIENEN LA FORMACIÓN DE TROMBOS.
INDUCE EXPRESIÓN DE MOLÉCULAS DE ADHESIÓN QUE PARTICIPAN EN

LA RESPUESTA INFLAMATORIA AT
ATEROSCLERÓTICA.
104
A pesar de los efectos beneficiosos de la vitamina C, contra la aterosclerosis,

los estudios de intervención no han mostrado un papel terapéutico
significativo de suplementación con ácido ascórbico capaz de inhibir la
formación de la lesión aterosclerótica en humanos. Debe tenerse presente
que la vitamina C no es un micronutriente estable y su contenido puede variar
ampliamente dependiendo de diferentes condiciones. Esto ha conducido a
una reevaluación de la dieta y las dosis recomendadas y permitidas de
Vitamina C se exponen a continuación.
DOSIS Y EFECTOS DE LA VITAMINA C
CONSUMO: 100-200 mg/día
SATURA LOS TEJIDOS.
MANTIENE [VIT C] EN AYUNAS EN EL UMBRAL PROPUESTO DE

0.88 mg/dl (50 μmol/L).
CONTRIBUYE A REDUCIR EL RIESGO DE ENFERMEDADES

CRÓNICAS EN HOMBRE Y MUJERES NO FUMADORES.
ES LA [VIT C] ADECUADA PARA LA REGENERACIÓN DE VIT E,

LOGRÁNDOSE UNA GANANCIA ADICIONAL DE PROTECCIÓN
CONTRA ENFERMEDADES CVs.
Diferentes estudios realizados, en humanos portadores de Artritis

Reumatoidea (AR) de diferentes grado de intensidad, han evidenciado la
existencia de un EO de carácter sistémico, en estos pacientes. Se ha
105
sugerido que los bajos niveles de antioxidantes, en suero/plasma en AR, son

el resultado de un inadecuado consumo de estos compuestos en la dieta. Se
han identificado diferentes estados carenciales en pacientes con AR, donde
la POL se ha correlacionado con el incremento en el Indice de Actividad de
este desorden autoinmune.
Ya que muchos de los compuestos antioxidantes interactúan en el

organismo, la suplementación con antioxidantes individuales puede no ser la
mejor vía para fortalecer las defensas antioxidantes. La combinación de
antioxidantes, además de un tratamiento estándar, arrojó mejores resultados
con respecto a los índices clínicos de la AR, en comparación a cuando se
aplicó solo el tratamiento estándar.
106
ENFERMEDAD (AR)
(depleción de antioxidantes
SUPLEMENTOS CON
ANTIOXIDANTES
INDIVIDUALES +
TTO. ESTÁNDARD
PROGRESA AR
COMBINACIÓN DE
ANTIOXIDANTES +
TTO. ESTANDARD
TRATAMIENTO
↓ ÍNDICES CLÍNICOS DE ESTÁNDARD
ENFERMEDAD
Los efectos beneficiosos de la Dieta Mediterránea (DM) han sido

primariamente atribuidos a su impacto sobre el perfil lipídico. Sin embargo,
más recientemente se ha reconocido, además, su aporte en antioxidantes.
(Tabla 4).
107
Tabla 4. Dieta Mediterránea empleada en pacientes con AR
GRANDES CANTIDADES DE FRUTAS Y VEGETALES (SE RECOMIENDA UN CONSUMO

EXTRA DE 700 g/día); LEGUMBRES (GARBANZOS, LENTEJAS, ETC); CEREALES;
PESCADO (CON ALTO CONTENIDOS DE ÁCIDOS GRASOS ω-3); NUECES; SEMILLAS
(CON ALTO CONTENIDO DE ÁCIDO α-LINOLÉNICO)
EL CONSUMO DE CARNES (CERDO, RES, CORDERO, OVINO); CARNES CURADAS,

EMBUTIDOS Y OTROS FUERON REEMPLAZADOS POR: AVES DE CORRAL;
PESCADO O PLATOS VEGETARIANOS.
ACEITE DE OLIVA Y DE CANOLA SE EMPLEARON PARA PREPARAR LAS COMIDAS
HORNEADAS Y ENSALADAS.
SE LES ACONSEJÓ 2 TIPOS DE MARGARINA: ACEITE DE CANOLA Y MARGARINA
LÍQUIDA (80% GRASA) PARA COCINAR Y MARGARINA MEDIA GRASA (40%) PARA
USAR SOBRE EL PAN.
REEMPLAZAR PRODUCTOS DIETÉTICOS RICOS EN GRASA/BAJOS EN GRASA.
REEMPLAZAR EL VINO TINTO POR TÉ NEGRO O VERDE
Como se había señalado, en el capítulo III, los productos terminales de la

POL, a saber, MDA y 4-HAL podían ser inactivados, en sus acciones
patológicas relacionadas con el cáncer, las disfunciones vasculares y las
enfermedades neurodegenerativas, entre otras, de forma efectiva a través de
los polifenoles los que, básicamente, se encuentran presentes en los
componentes de la dieta (Tablas 5 y 6).
108
Tabla 5. Propiedades biológicas de los Flavonoides, y otros compuestos,

presentes en Vinos y Vegetales.
CAPTURADORES DE RADICALES LIBRES

ANTIOXIDANTES – PREVIENEN LA PEROXIDACION LIPIDICA
PROTECCION CONTRA LA OXIDACION DE LDL
INHIBICION DE ENZIMAS OXIDATIVAS E HIDROLÍTICASa
FOSFOLIPASA A2
CICLO-OXIGENASA
LIPOXIGENASA
ACCIONES ANTI-INFLAMATORIAS
Tabla 6. Contenido de Flavonoles y Flaconas en vegetales comunes, frutas

y bebidas
CONTENIDO EN FLAVONOLES ALIMENTOS Y BEBIDAS

Y FLAVONAS
BAJO (<10 mg/kg o < 10 mg/L) Col, Espinaca, Zanahoria, Chícharos, Melocotón,
Jugo de Naranja, Vino Blanco, Café.
MEDIO (<50 mg/kg o 50 mg/L) Lechuga, Frijoles, Pimienta Roja, Tomate,

Uvas, Cereza, Jugo de Tomate, Vino Rojo, Té.
ALTO (>50 mg/kg o 50 mg/L) Bróculi, Escarola, Col, Frijol Francés, Apio,
Cebollas, Arandano Agrio.
109
Diferentes estudios epidemiológicos han demostrado los efectos beneficiosos

de los flavonoides a enfermedades, asociadas a la POL, entre las que se
encuentran las cardiovasculares (Tabla 7).
Tabla 7. Resumen de estudios epidemiológicos prospectivos, sobre el

consumo de flavonoles y flavonas, en la mortalidad de
enfermedades cardiocoronarias (ECC) y el riesgo en la incidencia
de Infarto del Miocardio.
POBLACION CONSUMO
FLAVONOIDES EDAD
AÑOS DURACION
RESULTADOS
ESTUDIOS DE COHORTE 65-84 5

30-69 20 +
40-75 6 +
ECC. 805 hombres. Zutphen (Holanda) (Hertog y col., 1993) 12-42 mg/día
+
ECC. 5133 hombres-mujeres. Finlandia (Knekt y col., 1996) 2.5-5.0 mg/día
40-59 14
ECC. 34 789 hombres. Profesionales Sanos (USA) (Rimm y
50-69 15 -
col., 1996). 7-40 mg/día
+
ECC. 1900 hombres. Caerphilly (UK). (Hertog y col., 1997) 14-43 mg/día
INFARTO. 552 hombres. Ztuphen (Holanda)(Keli y col., 1996) >30 mg/día
40-59 25
+
3. Los hábitos dietéticos y el Daño a Proteínas
Las enfermedades como el cáncer y las neurodegenerativas se encuentran

entre los desórdenes fisiopatológicos asociados al daño a proteínas y, en
este sentido, la contribución de la dieta reviste especial importancia.
110
En principio, las mutaciones sobre el ADN van a dar por resultado la

expresión alterada de un gen y en consecuencia la producción de una
proteína modificada que se puede acumular y que, por lo general, pierde o su
actividad o su funcionabilidad estructural.
De los factores de riesgo conocidos, muchos actúan incrementando la

probabilidad de mutaciones. Entre éstos se pueden encontrar a los
compuestos N-nitrosos y toxinas fúngicas, un alto consumo de grasas
saturadas y carnes incrementan la frecuencia de obesidad mientras que el
consumo regular de alcohol y el tabaco son todos tendencias dietéticas que
pueden, indirectamente, incrementar la probabilidad de mutación. Los
antimutágenos de la dieta pueden representar un procedimiento para
disminuir la progresión hacia el cáncer. Pequeñas moléculas
antioxidantes incluyen al ácido ascórbico, vitamina E, GSH, varios
polifenoles y carotenoides. Hay una relación estadísticamente significativa
entre el cáncer de colon y el estatus de selenio orgánico. Concentraciones
de selenio inferiores a 100 ng/mL fueron insuficientes para reparar o
prevenir el daño oxidativo al ADN. Se considera que el selenio es un
importante antimutágeno probablemente a través de sus efectos
antioxidantes relacionados con enzimas dependiente de selenio y asociadas
a la reparación del daño al ADN. La modulación de enzimas metabolizantes
de xenobióticos es un bien reconocido efecto anticancerígeno y es una
propiedad de varios flavonoides (tablas 5, 6 y 7) y compuestos conteniendo
azufre. Frutas como el kiwi poseen acciones antioxidantes que actúan sobre
enzimas reparadoras del ADN.
La determinación del daño al ADN, y por consiguiente a proteínas, es a

menudo utilizado como un biomarcador de riesgo de cáncer en estudios
111
epidemiológicos. Se ha empleado también como indicador de la capacidad

protectora de vitaminas, extractos de plantas y/o flavonoides individuales.
El envejecimiento biológico es un proceso fundamental que representa el

mayor factor de riesgo con respecto al desarrollo del cáncer, y las
enfermedades neurodegenerativas, entre otras. En este sentido las proteínas
constituyen importantes dianas del daño oxidativo. La oxidación y nitración de
proteínas intracelulares y la formación de agregados de proteínas han sido
sugeridos como procesos asociados a la pérdida de la función celular y
reducción de la capacidad para soportar el estrés fisiológico. Se considera
que la formación de estos agregados, derivados de proteínas oxidadas, son
intermediarios en la formación de las fibras amiloides. Hay un interés
marcado en aquellos componentes de la dieta que inhiben, retardan o
revierten el estado multifisiopatológico de la enfermedad de Alzheimer.
Curcumin y el ácido ferúlico son dos poderosos antioxidantes, el primero
procedente de la especie curry y el segundo un constituyente mayoritario de
frutas y vegetales. Suplementos alimenticios con curcumin y ácido ferúlico
son considerados como estrategias nutricionales para reducir el daño
oxidativo y la patología amiloide en la enfermedad de Alzheimer. De igual
forma se han utilizado, en enfermedades neurodegenerativa, otros
antioxidantes y fitoquímicos, como se muestra a continuación:
112
ALGUNOS ANTIOXIDANTES, NATURALES O SINTÉTICOS, EN

INTERVENCIONES DIETÉTICAS DIRIGIDAS A ENFERMEDADES
NEURODEGENERATIVAS Y EL ENVEJECIMIENTO
ESTUDIOS EN HUMANOS,
¾300 mg Vit E + 1000 mg Vit C/día, por 1 año: Mejoró Memoria y
Ejecución Motora.
¾30 mg/día, por 6 años o más: Mejoró las destrezas Viso Espa-
ciales.
VIT E ¾Suejtos que recibieron alimentos ricos en Vit E (aceites ve-
(α-TOCOFEROL) getales), en etapas tempranas de la vida, fueron menos
suceptibles a desarrollar EP en etapas tardías.
¾Altas dosis de Vit C y E (3000 mg + 3200 mg/día, respectivamen-
te) por 1-8 años, previo al comienzo con levodopa, retardó el
tratamiento farmacológico por 2-3 años.
GINKGO biloba ESTUDIOS EN HUMANOS,

(FLAVONOIDES)
CAPTURA RLs 120 mg/día (6 meses-1año) en EA:
FITOQUÍMICOS
INHIBE NADPH-Ox Mejoró actividad cognoscitiva.
↑SOD y CAT
↓O2.- , H2O2 e .OH.
Mejoró funcionamiento social.
240 mg, 3 veces/día/3 meses en EA:
Mejoró Atención y Memoria.
En general, los antioxidantes que previenen las consecuencias lesivas de las

ERO son considerados como estrategias promisorias para la
neuroprotección.
Se han obtenido evidencias clínicas y experimentales, sobre la importancia

de los fenoles, presentes en el olivo, en enfermedades neurodegenerativas
113
y otras. Estos comuestos fenólicos y sus metabolitos son inhibidores mucho

más eficientes, de la oxidación de proteínas y lípidos, que las vitaminas C y
E. Altas concentraciones pospandriales de fenoles de oliva pueden ayudar a
preservar la integridad de proteínas funcionales y demorar la aparición de
productos tóxicos de la oxidación lipídica.
114
PRINCIPALES REFERENCIAS UTILIZADAS
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Bosco, Giuseppina Cantarella. The role of antioxidant supplement in
immune system, neoplastic, and neurodegenerative disorders: a point
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Gregorio Martínez-Sánchez, Saied M. Al-Dalain a, Silvia Menéndez,

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116
RELACIÓN DE SIGLAS Y SÍMBOLOS
ADN Ácido desoxirribonyucleico

AGPI Ácido graso poliinsaturado
AIF Factor inductor de la apoptosis
AII Angiotensina II
Akt Proteína quinasa
AMPc Adenosina monofosfato cíclico antioxidante
AR Artritis reumatoidea
ATP Adenosina trifosfato
β Beta
BH4 Tetrahidrobiopterina
CAT Catalasa
CCl4 Tetracloruro de carbono
CMLV Células del músculo liso vascular
COX Ciclooxigenasa
CYP2e1 Citocromo P450 isoforma E1 inducible por etanol
Cyt c Citocromo c
EA Enfermedad de Alzheimer
EAC Enfermedad arterial coronaria
ELA Esclerosis lateral amiotrófica
EM Esclerosis múltiple
EOC Estrés Oxidativo Crónico
EP Enfermedad de Parkinson
ERO Especies Reactivas de Oxígeno
ET Endotelina
FCEV Factor de crecimiento del endotelio vascular
Fe-S] Centros hierro-azufre
FSH Hormona estimulante del folículo
γ Ganma
GC Guanilato ciclasa
GCL Glutamato cisteína ligasa
GCLC Subunidad catalítica de la Glutamato cisteína ligasa
GMPc Guanosina monofosfato cíclico
GS Glutatión sintetasa
GSH Glutatión reducido
GSH-Px Glutatión Peroxidasa
GSSG Glutatión oxidado
GST GSH-S-Transferasa
117
GTP Guanosina trifosfato

H2O2 Peróxido de hidrógeno
HAL Hidroxialquenales
HCLO Ácido hipocloroso
.
OH Radical hidroxilo
IκB Proteína inhibidora de NF-κB
ICC Insuficiencia cardíaca crónica
IFN Interferón
IL-4 Interleuquina 4
IL-6 Interleuquina 6
VIH/SIDA Virus de inmunodeficiencia humana/Síndrome de
Inmunodeficiencia adquirida
JNK Quinasa Jun amino terminal
LDL Lipoproteína de baja densidad
LO. Radical alcoxil
LOO. Radical peroxilo
LOOH Hidroperóxido lipídico
MAPK Quinasa activda por mitógenos p38
(p38)
MDA Malonildialdehído
MMP Metaloproteinasas de la matriz
MSR Metionina sulfóxido reductasa
NAD+ Nicotinamida adenina dinucleótido (forma oxidada)
NADH Nicotinamida adenina dinucleótido (forma reducida)
NADPH Nicotinamida adenina dinucleótido fosfato (forma reducida)
NADPX-Ox NADPH Oxidasa
NE Norepinefrina
NF-κB Factor nuclear kappa B
Nrf2/ARE Factor de transcripción nuclear/Elementos de respuesta
O2.- Radical anión superóxido
ON. Óxido Nítrico
ONOO- Anión peroxinitrito
ONS Óxido nítrico sintetasa
ONSe Óxido nítrico sintetasa endotelial
ONSi Óxido nítrico sintetasa inducible
p50 Proteína que forma parte de NF-κB
PAOP Productos avanzados de la oxidación de proteínas
PAR Poli(ADP-ribosa)
PARG Poli(ADP-ribosa) glicohidrolasa
PARP-1 Poli(ADP-ribosa) polimerasa 1
PKC Proteína quinasa C
118
POL Peroxidación lipídica

PRMH Proteína de resistencia multifármaco humana
PTGA Productos terminales de la glicosilación avanzada
Rel A Proteína que forma parte de NF-κB
RLs Radicales libres
RSH-Px Peroxidasa específica de tioles
SNC Sistema nervioso central
SOD Superóxido dismutasa
SOD-Cu/Zn Superóxido dismutasa dependiente de cobre y zinc
SOD-EC Superóxido dismutasa extracelular
SOD-ECr Superóxido dismutasa extracelular recombinante
SOD-Mn Superóxido dismutasa dependiente de manganeso
TGF-β1 Factor transformante del crecimiento beta 1
TNF Factor de necrosis tumoral
UV Ultravioleta
UVB Radiación ultravioleta cuya longitud de onda abarca desde
VIH/SIDA Virus de inmnodeficiencia humana/Síndrome de
Vit C Vitamina C
Vit E Vitamina E
XO Xantina oxidasa
∆ψm Potencial de membrana mitocondrial 280 nm a 320 nm
119
El libro “Biomarcadores Redox. Valor Diagnóstico y Aplicaciones

Clínicas” aborda el estudio de aquellos mediadores redox endógenos
más reconocidos internacionalmente por su participación en
enfermedades de una elevada morbi-mortalildad a nivel mundial
(disfunciones cardio y cerebrovasculares, cáncer, enfermedades
neurodegenerativas, del sistema inmune, diabetes y otras) . Estos
indicadores, que se determinan en suero/plasma y otros fluidos
biológicos, son abordados en el libro a partir de los hallazgos más
recientes y las propias experiencias de la autora. A través de una
didáctica pragmática se muestra cómo analizar estos parámetros, qué
significan funcionalmente incrementos o disminuciones y cómo
relacionarlos, entre sí, en el momento del diagnóstico clínico del
paciente.
En el libro se incluye un último capítulo denominado “Algunas

manipulaciones dietéticas que influyen o determinan el
reestablecimiento del estado redox celular” y se brindan diferentes
indicaciones de cómo proceder, a través de los alimentos/suplementos,
para resolver las carencias de antioxidantes esenciales, asociados a
enfermedades, contribuyendo a la mejoría del cuadro clínico y/o a su
prevención.
La Dra. Olga Sonia León Fernández (La Habana, 1944) es Profesora

Titular de Farmacología del Instituto de Farmacia y Alimentos de la
Universidad de la Habana, Cuba. Ha desarrollado, durante más de 20
años, una intensa actividad investigativa en el estudio de las Especies
Reactivas de Oxígeno y su impacto en la Salud Humana, contribuyendo
a la formación de más de 15 Maestrías y 8 Doctorados en Ciencias. El
libro que se presenta es el segundo título de una Serie denominada
“BALANCE ANTIOXIDANTE PRO-OXIDANTE: SALUD Y
ENFERMEDAD”. Posee más de 50 trabajos publicados en revistas
científicas, así como ha sido autora de otros libros, y capítulos de
libros, sobre Ozonoterapia. Ha recibido diferentes reconocimientos por
su destacada actividad científico/docente: Ordenes del Consejo de
Estado, Resultado Destacado de la ACC, en varias oportunidades,
Distinción Especial del Ministro de Educación Superior, Premios del
Rector de la Universidad de la Habana, Vanguardia Nacional del
Sindicato de la Ciencia, y otros.
120

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BIOMARCADORES REDOX.

Dra. C. Olga Sonia León Fernández

2do. TÍTULO DE LA SERIE

Primera Edición, Mayo 2010

Primera Edición en el 2010

Esta Obra está protegida en el Centro Nacional de Derecho de Autor

A mi Madre, por ser el punto de partida de

A mis Estudiantes, por reafirmarme cada

CAPÍTULO I. El Glutatión (GSH)

Síntesis, Regulación y formación de Peroxinitrito / 23

CAPÍTULO III. Malondialdehído (MDA) y los Hidroxialquenales (HAL)

CAPÍTULO IV. DAÑO OXIDATIVO A PROTEÍNAS

Factores asociados al daño a proteínas / 59

CAPÍTULO V. LA SUPERÓXIDO DISMUTASA (SOD), CATALASA (CAT) Y

Algunas aplicaciones clínicas de la tríada SOD/Peróxido de Hidrógeno/

CAPÍTULO VI. MANIPULACIONES DIETÉTICAS QUE INFLUYEN EN EL

Relacionadas con GSH / 96

Relación de siglas y símbolos / 117

Las Especies Reactivas de Oxígeno (ERO) participan en funciones

La comunidad científica, a nivel mundial, ha realizado importantes aportes en

El presente libro da continuación al primero, publicado en el 2004, titulado

estudio de aquellos mediadores redox endógenos más reconocidos

El EO crónico, en una enfermedad dada, puede ser controlado, y

En el libro se incluye un último capítulo denominado “Algunas

Dra. Olga Sonia León Fernández

El Estrés Oxidativo es el resultado de una pérdida del Balance

Por lo antes expuesto se viene desarrollando, en los últimos 50 años, una

Como se puede observar, las tres enfermedades más asociadas a un EOC

24% CANCER > ISQUEMIA > DIABETES

Figura 1. Artículos publicados, (en %) , de Enfermedades asociadas

(*) Otras enfermedades incluyen: Artritis y Neurodegenerativas.

GSH > ON. > MDA

Figura 2. Artículos publicados, (en %), de Marcadores de Estrés Oxidativo

(*) Otros marcadores incluyen: Hidroperóxidos Totales (HT), Superóxido

PubMED (1999-2010). Datos tomados en Febrero/2010

El Glutatión Reducido (GSH), el Óxido Nítrico (ON.) y el Malondialdehído

Con estos antecedentes se estructuró el presente libro que persigue, como

CAPÍTULO I. EL GLUTATIÓN (GSH)

Estructura y Funciones del GSH

El GSH es un tripéptido conformado por 3 aminoácidos, a saber: Glutámico,

Figura 3. Estructura química del glutatión

Este tripéptido se encuentra presente en todos los tejidos de mamíferos y, en

El GSH es susceptible de ser hidrolizado por solo una enzima conocida, a

superficies externas de ciertos tipos de células. Como consecuencia el GSH

El GSH participa en funciones esenciales, incluyendo:

Detoxificación de sustancias electrofílicas,

Regula la homeodinámica del ON.

Considerando el alcance y los objetivos de este libro se centrará la atención

Funciones antioxidantes del GSH

Todos los organismos están sometidos a un cierto nivel de estrés oxidativo

GSH en la presencia de la GSH-Peroxidasa (GSH-Px) dependiente de

H2O2 GSH NADP

Glutatión peroxidasa GSSG Reductasa Glucosa-6-Fosfato

Figura 4. Ciclo de utilización y regeneración de GSH

Los peróxidos orgánicos pueden ser reducidos por GSH-Px y GSH-S-

En la mitocondria el GSH es particularmente importante debido a la ausencia

Figura 5. Interacción entre los sistemas antioxidantes endógenos

Un estrés oxidativo severo puede sobrepasar la capacidad de la célula para

El GSH como un regulador del crecimiento y la muerte celular

En células, tales como linfocitos y fibroblastos, un incremento en los niveles

de hígado. También se ha demostrado que concentraciones elevadas de

El GSH también se ha asociado con la regulación de la muerte celular. La

ERO, disfunción mitocondrial y depleción de ATP. Este proceso puede