FACULTAD DE QUÍMICA

DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA

LABORATORIO DE BIOQUÍMICA CLÍNICA

(CLAVE 1807)
Licenciatura de QFB

Laura Carmona Salazar

Rosalinda Velázquez Salgado

2017-II

Este material es exclusivamente para uso educativo y no de lucro

ESTUDIO DEL METABOLISMO DE
CARBOHIDRATOS Y DE LÍPIDOS
DESDE EL ENFOQUE DE LA
BIOQUÍMICA CLÍNICA
 Glucosa Glucógeno

Hexo-
cinasa

Glucosa 6-fosfato

GLUCONEO- GLUCÓ- SÍNTESIS b -OXIDACIÓN

VÍA DE GÉNESIS LISIS DE ÁCIDOS
LAS GRASOS
PENTOSAS
FOSFATO
Fosfoenol-
piruvato

Piruvato

CICLO EL METABOLISMO
Oxalacetato DE
KREBS
SE ENCUENTRA
ALTAMENTE
REGULADO
FOSFORILACIÓN
OXIDATIVA
 INSULINA TRANSPORTE Y
METABOLISMO

2
TRANSDUCCIÓN
DE LA SEÑAL
 TRANSPORTE DE GLUCOSA
modificando la toma de glucosa

INSULINA
METABOLISMO DE
CARBOHIDRATOS
modificando vías metabólicas
ESTADO FISIOLÓGICO: ABUNDANCIA, BUENA NUTRICIÓN

LA INSULINA
DISMINUYE LOS
NIVELES DE
GLUCOSA

Metaboliza
y distribuye
JPEN (2004) 28:364-371
LA DIABETES MELLITUS (Diabetes sacarina)

Es un defecto en la producción o acción de la insulina

TIPO I: DIABETES JUVENIL O DEPENDIENTE DE INSULINA

10%

TIPO II: NO DEPENDIENTE DE INSULINA O RESISTENTE

A INSULINA

INSULINA

SEÑAL TRANSDUCCIÓN RESPUESTA

DE LA SEÑAL DISMINUIR LOS
NIVELES DE GLUCOSA
 CONSECUENCIAS DE ESTA ENFERMEDAD

INSULINA

SEÑAL TRANSDUCCIÓN RESPUESTA

DE LA SEÑAL DISMINUIR LOS
NIVELES DE GLUCOSA

NIVELES ELEVADOS DE GLUCOSA EN SANGRE Y EN ORINA

LA GLUCOSA NO PUEDE SER METABOLIZADA

NI CAPTADA (TRANSPORTE DEPENDIENTE DE INSULINA)

EL ORGANISMO ES ENGAÑADO
Y CREE QUE ESTA
EN UN ESTADO DE INANICIÓN
ESTADO FISIOLÓGICO EN LA DIABETES MELLITUS
DEGRADACIÓN DE
ÁCIDOS GRASOS Y Síntesis de glucosa “de nuevo”
PROTEÍNAS Degradación del glucógeno
ACUMULACIÓN
DE CUERPOS CETÓNICOS
(COMO CONSECUENCIA DE
LA INHIBICIÓN DEL Cerebro
Glucosa 6-fosfato
CICLO DE KREBS)
Glucógeno Glucosa Glucosa
b-OXIDACIÓN Hígado
CONSUME EL NAD+ Cuerpos
Piruvato cetónicos
Cuerpos
Amino- cetónicos
ácidos
Ácidos Glicerol
Degradación de Proteína grasos
áminoácidos Ácidos
grasos TGC Tejido
Formación de adiposo
cuerpos cetónicos
Movilización
Cuerpos de
cetónicos Músculo ácidos
Proteínas grasos
SÍNTOMAS DE LA DIABETES MELLITUS
Los niveles o respuesta baja de insulina modifica el metabolismo de glucosa y el transporte, lo
cual provoca una acumulación de glucosa en sangre “HIPERGLUCEMIA”

De baja a moderada concentración de glucosa en sangre: Puede ser que la persona aún no
presente síntomas todavía.
De moderada a alta concentración de glucosa en sangre:
• El cuerpo intenta eliminar el exceso de glucosa por la orina (GLUCOSURIA),
lo cual provoca que la persona sienta la necesidad de ir al baño
recurrentemente (poliuria), incluso varias veces por las noches. Esto trae
como consecuencia una intensa deshidratación junto con una fuerte
sensación de sed insaciable, boca seca y fatiga excesiva.
•También la deshidratación provoca que la piel se torne seca, generando
comezón, piel agrietada y mala cicatrización en las heridas. (Polidipsia
consumo de grandes cantidades de agua)
•La pérdida de peso es otro síntoma que aparece cuando la glucosa no
puede entrar a la célula, ya que por falta de insulina no se puede
aprovechar la glucosa y como un mecanismo de defensa se utilizan las
proteínas y las grasas para obtener energía. (Polifagia, deseo excesivo de
comer)
•La vista suele hacerse borrosa.
•Las infecciones de cualquier tipo se desarrollan con mucho más facilidad
debido al exceso de glucosa en sangre, la cual alimenta a las bacterias.
•Se puede presentar falta de sensibilidad en las extremidades, así como
hormigueo y dolores.
 DIABETES SIN TRATAMIENTO E INSULINA BAJA

PRODUCCIÓN EXCESIVA DE CUERPOS CETÓNICOS

ACIDOSIS O DISMINUCIÓN DE pH SANGUÍNEO

COMPENSACIÓN A TRAVÉS DE LA UTILIZACIÓN DEL BICARBONATO

LA DISMINUCIÓN DE BICARBONATO CONDUCE A UN AUMENTO DE CO2

(AGOTAMIENTO DE BICARBONATO: ACIDOSIS METABÓLICA)

MODIFICACIÓN DE LA RESPIRACIÓN PARA COMPENSAR A TRAVÉS DE LA

EXCRECIÓN DE CO2 POR LOS PULMONES

ESTADO DE COMA
DIAGNÓSTICO DE LABORATORIO
 GLUCOSA PLASMÁTICA EN AYUNO
Los individuos normales mantienen una concentración de glucosa plasmática tras el ayuno de 10 a
16 hrs de 80-90 mg/dL
 GLUCOSA EN ORINA
La glucosa en orina aparece cuando el nivel de glucosa sanguínea excede el umbral renal de glucosa.
En general este umbral es inferior a 160-180 mg/dL
 GLUCOSA PLASMÁTICA POST-PRANDIAL DE DOS HORAS
Se determina la glucosa plasmática dos horas después de que el paciente realiza una ingesta de
aproximadamente 100 g de carbohidratos.
Niveles arriba de 200 mg/dL indica diabetes
Niveles menores de 140 o usualmente de 120 mg/dL son normales
 PRUEBA DE TOLERANCIA A LA GLUCOSA
Es una prueba definitiva para el diagnóstico de diabetes en pacientes que tienen niveles de glucosa
inferiores a 140 mg/dL.
El protocolo es tomar antes y después de una ingesta oral de glucosa.
 HEMOGLOBINA GLUCOSILADA
Es una modificación que sufre la hemoglobina, una glucación en un aminoácido y guarda una
relación directa con la [glucosa] sanguínea
PRUEBA DE TOLERANCIA A LA GLUCOSA
PROTOCOLO:
1. El paciente tiene actividad física sin limitaciones e ingiere una dieta sin restricciones que
tenga por lo menos 150 g de carbohidratos durante 3 días antes de la prueba.
2. La prueba se realiza tras un ayuno de 10 a 16 hrs, sólo se permite ingerir agua.
3. Se obtiene la muestra para glucosa sanguínea en ayunas
4. Se le proporciona una dosis de glucosa de 75 g en agua con saborizante para administrarse
por vía oral.
5. La glucosa plasmática se determina cada 30 min durante 2 hrs.
LA HEMOGLOBINA GLUCOSILADA COMO UN ANÁLISIS EFICAZ PARA EL CONTROL
DE LA DIABETES
Los eritrocitos no requieren de insulina para el transporte de
glucosa

La hemoglobina se glucosila por medio de una reacción

no enzimática, que se denomina glucación, entre la
glucosa y un residuo de valina de la cadena beta de la Hb,
donde se forma una base de Schiff lábil( aldimina) que
sufre un reordenamiento para formar una cetoamina
estable. La reacción continua durante los 120 días de vida
del eritrocito y es proporcional a la concentración de
glucosa
PROCEDIMIENTOS ANALÍTICOS PARA LA DETERMINACIÓN DE
GLUCOSA

MUESTRAS BIOLÓGICAS
Suero no hemolizado
Plasma
Sangre entera
PROCEDIMIENTOS ANALÍTICOS PARA LA DETERMINACIÓN DE
GLUCOSA

QUÍMICOS

MÉTODOS
ENZIMÁTICOS

MÉTODOS QUÍMICOS

Se basan en reacciones de oxido-reducción, donde la glucosa es un excelente reductor,

típicamente reduce los iones cúpricos (Cu2+) a iones cuprosos (Cu+) y dependiendo de la
naturaleza para la producción de color es que hay varios métodos.
El método de Somogyi-Nelson que utiliza el arsenomolibdato, el cual se reduce con el ion
cuproso y forma un compuesto azul de molibdeno
El método de la o-toluidina, que es una amina aromática que con la glucosa forma una
glucosamina y una base de Schiff que tras reordenamientos forma un cromógeno de color
verde que se mide a 630 nm
PROCEDIMIENTOS ANALÍTICOS PARA LA DETERMINACIÓN DE
GLUCOSA

MÉTODOS ENZIMÁTICOS

REFERENCIA.- HEXOCINASA que involucra un ensayo acoplado de dos reacciones:

GLUCOSA + ATP HEXOCINASA GLUCOSA-6-FOSFATO + ADP

GLUCOSA-6-FOSFATO + NADP+ GLUCOSA-6 6-FOSFOGLUCONATO + NADPH + H+

FOSFATO DESHIDROGENASA

GLUCOOXIDASA que cataliza la oxidación de glucosa a glucolactona y peróxido de hidrógeno

(H2O2):

b-GLUCOSA + O2 D-GLUCONO-d-LACTONA + H2O2

Es específica para la b-glucosa

H2O2 + cromógeno reducido cromógeno oxidado + H2O

Trinder: 4-aminofenazona
DETERMINACIÓN DE HEMOGLOBINA GLUCOSILADA HbA1C

LA HEMOGLOBINA GLUCOSILADA SE FORMA DE MODO NO ENZIMÁTICO DONDE ESTA

IMPLICADA UNA BASE DE SCHIFF (ALDIMINA LÁBIL) QUE SE REORDENA Y SE CONVIERTE EN UNA
CETOAMINA ESTABLE

Se cuantifica en función de su carga, reactividad y estructura

CARGA:
Cromatografía de intercambio iónico (la Hb glucosilada se une menos a la resina)
HPLC
ELECTROFORESIS

REACTIVIDAD
Colorimetría: Ácido tiobarbitúrico

ESTRUCTURA
Cromatografía de afinidad
DETERMINACIÓN DE CUERPOS CETÓNICOS

EN SANGRE: CETONEMIA
20% 2%
ORINA: CETONURIA

78%

PRUEBA DE NITROPRUSIATO: Solo reacciona el acetoacetato y acetona con el nitroprusiato en

condiciones alcalinas dando un color púrpura.

ANÁLISIS ENZIMÁTICO: Para el acetoacetato y el ácido hidroxibutírico utilizando la b-

hidroxibutírica deshidrogenasa (b-HBD):
b-HBD
NADH + H+ + ACETOACETATO b-HIDROXIBUTIRATO + NAD+

Cuya direccionalidad depende del pH, a pH neutro se favorece a la derecha y a pH de 8.5-9.5

hacia la izquierda.
RANGOS DE REFERENCIA: INFERIORES A 3 mg/dL (0.3 mM)
PROCEDIMIENTO ANALÍTICO PARA LA DETERMINACIÓN DE
COLESTEROL

COLESTEROL = COLESTEROL + COLESTEROL

TOTAL LIBRE ESTERIFICADO
FRACCIONAMIENTO DE LIPOPROTEÍNAS POR ELECTROFORESIS

LDL
HDL

VLDL

QUILOMICRONES

HDL Lipoproteína alfa

LDL Lipoproteína beta
VLDL Lipoproteína pre-beta
 DETERMINACIÓN DEL PERFIL DE LIPOPROTEÍNAS
1. Precipitación selectiva a través del uso de cationes bivalentes (Ca2+, Mg2+ y Mn2+) en
soluciones de amortiguadores, heparina o sulfato de dextrán para precipitar
selectivamente VLDL y LDL, dejando el HDL en el sobrenadante.
2. Determinación de los niveles totales de colesterol y triglicéridos en suero
3. Determinación de HDL en el sobrenadante del precipitado
4. Establecimiento de los niveles de LDL y VLDL a través del uso de formulas.
PROCEDIMIENTO ANALÍTICO PARA LA DETERMINACIÓN DE
TRIGLICÉRIDOS
lipoproteinlipasa

Glicerolfosfato deshidrogenasa

4-aminofenazona Peroxidasa
 GUÍA PARA LA VALORACIÓN DE LAS AFECCIONES CORONARIAS

DETERMINACIÓN DESEABLE LIMITANTE INDESEABLE

COLESTEROL TOTAL <200 mg/dL 200-249 mg/dL ≥ 250 mg/dL
COLESTEROL HDL ≥55 mg/dL 35-54 mg/dL < 35 mg/dL
COLESTEROL LDL < 130 mg/dL 130-159 mg/dL ≥ 160 mg/dL

TRIGLICÉRIDOS < 250 mg/dL 250-500 mg/dL > 500 mg/dL