Replicación de ADN

El proceso de replicación de ADN es el mecanismo que permite

al ADN duplicarse (es decir, sintetizar una copia idéntica). De
esta manera de una molécula de ADN única, se obtienen dos o
más "clones" de la primera. Esta duplicación del material
genético se produce de acuerdo con un mecanismo
semiconservativo, lo que indica que las dos cadenas
complementarias del ADN original, al separarse, sirven de
molde cada una para la síntesis de una nueva cadena
complementaria de la cadena molde, de forma que cada nueva
doble hélice contiene una de las cadenas del ADN original.
Gracias a la complementariedad entre las bases que forman la
secuencia de cada una de las cadenas, el ADN tiene la
importante propiedad de reproducirse idénticamente, lo que
permite que la información genética se transmita de una célula
madre a las células hijas y es la base de la herencia del material
genético. La molécula de ADN se abre como una cremallera por
ruptura de los puentes de hidrógeno entre las bases
complementarias liberándose dos hebras y la ADN polimerasa
sintetiza la mitad complementaria añadiendo nucleótidos que se encuentran dispersos en el
núcleo. De esta forma, cada nueva molécula es idéntica a la molécula de ADN inicial. La replicación
empieza en puntos determinados: los orígenes de replicación.
Semiconservadora
Tres posibles modelos de replicación. a) Conservadora, b) Dispersora, c) Semiconservadora
(mecanismo real) En cada una de las moléculas hijas se conserva una de las cadenas originales, y
por eso se dice que la replicación del ADN es semiconservadora. Hasta que finalmente se pudo
demostrar que la replicación es semiconservadora, se consideraron tres posibles modelos para el
mecanismo de la replicación:
• Semiconservadora (modelo
correcto). En cada una de las
moléculas hijas se conserva una de las
cadenas originales.
• Conservadora. Se sintetiza una
molécula totalmente nueva, copia de
la original.
• Dispersora, o dispersante. Las
cadenas hijas constan de fragmentos
de la cadena antigua y fragmentos de la nueva.
El experimento de Meselson y Stahl en 1958 permitió demostrar que el mecanismo real se ajusta a
la hipótesis de replicación semiconservadora. Para ello se hicieron crecer células de Escherichia
coli en presencia de nitrógeno-15, un isótopo del nitrógeno más pesado de lo habitual. En
consecuencia, el isótopo se incorporó a las cadenas de ADN que se iban sintetizando, haciéndolas
más pesadas. Una vez conseguido el primer objetivo, las células fueron transferidas a un medio
que contenía nitrógeno-14, es decir, un medio más ligero, donde continuaron su crecimiento
(división celular, que requiere la replicación del ADN). Se purificó el ADN y se analizó mediante una
centrifugación en gradiente de cloruro de cesio, en donde hay más densidad en el fondo del tubo
que en la parte media del mismo.
Secuencial y bidireccional desde puntos fijos.
Los orígenes de replicación son los puntos fijos a partir de los cuales se lleva cabo la replicación,
que avanza de forma secuencial formando estructuras con forma de horquilla. Por otro lado, la
replicación se lleva a cabo bidireccionalmente, es decir, a partir de cada origen se sintetizan las dos
cadenas en ambos sentidos.
El origen de replicación
La cantidad de ADN que se puede sintetizar a partir de un único origen de replicación se denomina
replicón o unidad funcional de replicación. El genoma bacteriano es un replicón única circular. En
organismos eucarióticos, la replicación del ADN se inicia en múltiples orígenes a la vez (hay uno
cada 20 kb aproximadamente), es decir, hay varios replicones.
Bidireccionalidad
El movimiento de la horquilla es bidireccional en la mayoría de los casos, es decir, a partir de un
punto se sintetizan las dos cadenas en ambos sentidos. Esto ocurre en la mayoría de los
organismos, pero se dan excepciones en algunos procariontes debido a que los mecanismos de
replicación que tienen lugar dependen de la propia estructura de su material hereditario (si el ADN
es circular, lineal, bicatenario o monocatenario).
ADN Polimerasas
Estructura en 3D de un ADN polimerasa. La ADN polimerasa es la enzima que cataliza la síntesis de
la nueva cadena de ADN a partir de desoxirribonucleótidos y de la molécula de ADN plantilla o
molde que es la que será replicada. La enzima copia la cadena de nucleótidos de forma
complementaria (A por T, C por G) para dar a cada célula hija una copia del ADN durante la
replicación.
Proceso general
• La helicasa rompe los puentes de hidrógeno de la doble hélice permitiendo el avance de la
horquilla de replicación.
• La topoisomerasa impide que el ADN se enrede debido al superenrollamiento producido por la
separación de la doble hélice.
• Las proteínas SSB se unen la hebra discontínua de ADN, impidiendo que ésta se una consigo
misma.
• La ADN polimerasa sintetiza la cadena complementaria de forma continua en la hebra
adelantada y de forma discontínua en la hebra rezagada.
• La ARN primasa sintetiza el cebador de ARN necesario para la síntesis de la cadena
complementaria a la cadena rezagada.
• La ADN ligasa une los fragmentos de Okazaki.
El proceso se puede dividir en 3 fases: iniciación, elongación y terminación.
• El cebador: son pequeñas unidades de RNA que se unen a los fragmentos para que la ADN
polimerasa reconozca donde debe unirse. Los cebadores los quita la pol. I y coloca bases a la
cadena en crecimiento por la ligasa.
Iniciación
Mediante consumo de ATP en dirección a la horquilla de replicación, es decir, en dirección 5' → 3'
en la hebra rezagada y 3' → 5' en la hebra adelantada, rompiendo los puentes de hidrógeno que
mantienen unida la doble hélice. El siguiente conjunto de proteínas reclutadas son las
denominadas proteínas SSB (single-stranded DNA binding proteins, proteínas ligantes de ADN
monocatenario) encargadas de la estabilización del ADN monocatenario generado por la acción de
las helicasas, impidiendo así que el ADN se renaturalice o forme de nuevo la doble hélice, de
manera que pueda servir de molde.
Elongación
Enzimas que participan en la replicación de E. coli: helicasa, proteínas SSB, topoisomerasa, ARN
primasa, Holoenzima ADN Pol III. En el siguiente paso, la holoenzima ADN Pol III cataliza la síntesis
de las nuevas cadenas añadiendo nucleótidos sobre el molde. Esta síntesis se da
bidireccionalmente desde cada origen, con dos horquillas de replicación que avanzan en sentido
opuesto. Cuando el avance de dos horquillas adyacentes las lleva a encontrarse, es decir, cuando
dos burbujas se tocan, se fusionan, y cuando todas se han fusionado todo el cromosoma ha
quedado replicado.

Terminación
Terminación de los genomas lineales. El final de la replicación se produce cuando la ADN
polimerasa III se encuentra con una secuencia de terminación. Se produce entonces el desacople
de toda la replisoma y la finalización de la replicación.