Sunteți pe pagina 1din 16

09/08/2017 Extração e purificação de DNA

pesquisa

home > Materiais e Métodos > Extração e purificação de DNA

Extração e purificação de DNA perguntas e comentários

Anandika Dhaliwal Ph.D. anandika dot dhaliwal at gmail dot com Rutgers University, New Jersey, United States
Tradutor Antonielle Vieira Monclaro antonielle at gmail dot com Universidade de Brasília, Brasil
DOI http://dx.doi.org/10.13070/mm.pt.3.191
Date modificada pela última vez : 2013-11-27; versão original : 2013-05-26
Cite as Materiais e Métodos 2013;3:191

comentário
Este artigo apresenta uma revisão sobre os kits de extração e purificação de DNA encontrados na literatura

Introdução

A extração de DNA é necessária para várias aplicações na biologia molecular, como PCR, digestão com enzimas de
restrição, southern blot, etc., assim como análises de amostras forenses, amostras clínicas, amostras de solo e
ambientais. Existem vários kits comerciais disponíveis para extração e purificação de DNA. E para cada um desses
kits já foi demonstrado por PCR que a sensibilidade de detecção é diferente [1]. A escolha do kit correto é crucial
para aperfeiçoar a execução do experimento.

Os fatores que precisam ser considerados ao escolher o melhor kit


para um experimento são:
1. Origem da amostra: os kits variam para as quantidades de amostras de fontes
diversas e estas devem ser tratadas diferentemente, por exemplo, uma
amostra inteira de sangue deve ser tratada de forma diferente em comparação
a apenas uma mancha de sangue. Também é preciso levar em consideração
a fonte da amostra quando se seleciona o kit. Isto inclui amostras humanas,
de sangue, cabelo, de roedores, folhas, bactérias, leveduras, fungos, insetos,
fezes, fluidos corporais, esporos, amostras de solo, amostras clínicas
(biopsias, aspirados), amostras forenses (manchas secas de sangue,
cotonetes bucais), e impressões digitais.

2. Método de preparação das amostras: o kit deve ser compatível com o método
de preparação da amostra. Os métodos para preparação das amostras variam
e podem ser: pellets celulares frescos ou congelados, cortes de tecidos
embebidos em parafina, fixados em formalina ou congelados, células fixadas
em etanol e amostras preservadas em Oragene®.
3. Intenção de uso: a qualidade e pureza do DNA, fornecida pelo kit, deve ser
compatível com a futura aplicação downstream, que pode ser
sequenciamento, fingerprinting, PCR, qPCR, southern blot, RAPD, AFLP e
RFLP, digestão com endonucleases de restrição, sequenciamento de
bibliotecas shotgun.
4. Conteúdo húmico: se as amostras contem substâncias húmicas, como
sedimentos, adubo e estrume, deve ser utilizado um kit/método que remova
essas substancias, já que elas podem afetar algumas aplicações downstream
como a PCR.
5. Quantidade da amostra: os kits são adequados para diferentes tamanhos de
amostras. A escolha do kit a ser utilizado dependerá do numero de células em
culturas de mamíferos (105-107) e células bacterianas (106-1011), miligramas
de tecido, quantidade de sangue (100 µl para 1 ml), mg de solo (250 mg -10
g), mg de tecido foliar de planta, etc.
6. Rendimento obtido
7. Habilidade em automatizar o procedimento de extração
8. Simplicidade: dependendo do desempenho pessoal na extração do DNA, é
necessário considerar a facilidade do protocolo.

Além dos fatores mencionados anteriormente, os critérios básicos para um método de isolamento de DNA de
qualquer amostra devem incluir:
1. Extração eficiente
2. Quantidades suficientes do DNA extraído para processos downstream
3. Remoção de contaminantes
4. Qualidade e pureza de DNA. A absorbância no ultravioleta pode ser utilizada para verificar a pureza da extração do DNA. Para uma
amostra pura, a taxa de absorbância em 260 nm e em 280 nm (A260/A280) é 1,8. Uma taxa <1,8 indica que a amostra está
contaminada com proteínas ou solventes orgânicos como fenol.

Os passos básicos envolvidos na extração do DNA consistem de:


1. Lise celular. O primeiro passo envolve a quebra da célula para acessar o DNA. Isto pode ser feito utilizando métodos físicos ou
químicos.
2. Remoção de lipídios. Remoção ou separação da membrana lipídica e restos celulares. Isto normalmente é feito utilizando
detergentes como SDS, e por centrifugação.
3. Desproteinação do extrato celular. A desnaturação proteica é feita utilizando proteases como pronases e proteinases K. Após a
desnaturação, as proteínas são separadas do extrato celular.

http://www.labome.com.br/method/DNA-Extraction-and-Purification.html 1/16
09/08/2017 Extração e purificação de DNA
4. Remoção do RNA. A remoção do RNA é feita adicionando uma RNAse, que rapidamente degrada RNA em subunidades
ribonucleotídeas. Este passo normalmente é opcional na maioria dos kits.
5. Precipitação/agregação/eluição de DNA

Os métodos de extração de DNA comumente empregados nos kits são:


1. Extração orgânica. É amplamente utilizado e é o método convencional para extração de DNA. Na primeira etapa, as células são
lisadas e os restos são removidos por centrifugação. As proteínas são então desnaturadas utilizando proteases e removidas com
solventes orgânicos como fenol, ou uma mistura de 1:1 de fenol e clorofórmio. Os solventes orgânicos precipitam as proteínas, que
são separadas dos polinucleotídeos (DNA e RNA) por centrifugação. Na ultima etapa, o DNA purificado é normalmente recuperado
por precipitação utilizando etanol ou isopropanol. Na presença de cátions monovalentes como Na+, e numa temperatura < ou igual a
20°C, o etanol absoluto precipita eficientemente o DNA. Outra propriedade da precipitação com etanol é que ele precipita apenas
ácidos nucleicos poliméricos e deixa para trás pequenas cadeias ou componentes monoméricos de ácidos nucleicos, incluindo
ribonucleotídeos de RNase. O DNA precipitado é comumente resuspendido em tampão TE ou água bidestilada. As limitações deste
método são o uso de solventes orgânicos perigosos, e seu tempo consumido. Alem do mais, fenol residual ou clorofórmio podem
estar presente no DNA extraído, que pode inibir seu uso em aplicações downstream como a PCR. Um exemplo de kit baseado neste
método é o Easy-DNA® (Invitrogen).
2. Tecnologia baseada em sílica. Muito empregada nos kits atuais, o DNA adsorve especificamente a membranas/superfícies/partículas
de sílica em presença de certos sais e em um determinado pH. Os contaminantes celulares são removidos por etapas de lavagens e
o DNA pode finalmente ser eluído em um tampão com baixa concentração de sal ou em um tampão de eluição. Sais caotrópicos são
adicionados para ajudar na desnaturação das proteínas e extração do DNA. A vantagem desta tecnologia é que ela pode ser
incorporada em spin columns e micro chips, é rentável, tem um procedimento simples rápido (comparado com a extração orgânica) e
pode ser automatizada. Os kits baseados neste método incluem o Purelink Genomic DNA extraction (Invitrogen), DNeasy Blood e
Tissue Kit (Qiagen), etc.
3. Separação magnética. Este método é baseado na ligação reversível do DNA a uma superfície sólida/grânulo/partícula magnética,
que foi revestida com anticorpo de ligação ao DNA ou a grupo funcional que interage especificamente com o DNA. Após a ligação do
DNA, as partículas são separadas de outros componentes celulares contaminantes, lavadas e então o DNA purificado é eluído por
extração com etanol. A maior vantagem deste método é que é rápido e pode ser automatizado. No entanto pode ser mais caro em
comparação a outras metodologias mencionadas anteriormente. Exemplos de kits baseados neste método são Agencourt DNA
Advance Kit (Beckaman Coulter), Magnetic Beads Genomic DNA Extraction Kit (Geneaid), etc.
4. Tecnologia de troca iônica. Este método é baseado na interação específica entre fosfatos carregados negativamente do acido
nucleico e moléculas carregadas positivamente na superfície do substrato. O DNA se liga especificamente ao substrato na presença
de baixa concentração de sal, os contaminantes são removidos por etapas de lavagem utilizando tampões com baixa a média
concentração de sal, e o DNA purificado é eluído utilizando um tampão com alta concentração de sal. Esta tecnologia é mais
empregada em kits de isolamento de plasmídeos, como PureLink® HiPure Plasmid DNA Purification kit (Invitrogen), Qiagen plasmid
mini/midi kits (Qiagen) e NucleoBond® PC kits (Macherey Nagel).

Outros métodos incluem o salting out, gradiente de densidade por cloreto de césio, e resina Quelex 100. Os
métodos para isolar DNA são normalmente modificados e otimizados para diferentes tipos celulares. Brometo de
cetiltrimetilamônia (CTAB) e tiocianato de guanidina (GITC) são incluídos nos protocolos para materiais de planta, e
serão discutidos com mais detalhes posteriormente em "Kits para extração de DNA de tecidos e células de planta".

Cada kit comercial disponível possui certas características e vantagens. Aqui neste artigo há uma compilação dos
kits mais utilizados para extração e purificação do DNA, mencionando a tecnologia, aplicação, rendimento e
vantagens associadas. Os kits são utilizados em materiais provenientes de mamíferos, microrganismos e plantas.

Kit Fonte
Cultura Tecidos de
Sangue Bactéria Fungo Alga Levedura Planta Inseto
celular mamíferos
Microrganismos
Bacterial Genomic DNA Mini-prep
*
Kit (BayGene)
QIAprep Spin Miniprep Kit (Qiagen) *
Plasmid Maxi Kit (Qiagen) *
BACMAX DNA purification kit
*
(Epicentre Biotechnologies)
PowerMax Soil DNA Isolation Kit
* * *
(MO BIO Laboratories)
PowerSoil DNA isolation kit (MO BIO
* * *
Laboratories)
Tecidos e células de mamíferos
AccuPrep Genomic DNA Extraction
* * *
Kit (Bioneer)
Arcturus DNA Extraction Kit
* *
(Arcturus)
GFX Genomic Blood DNA
* *
Purification Kit (GE Healthcare)
DNA Isolation Kit for mammalian
*
blood (Roche)
InnuPrep DNA minikit (AJ
* *
Innuscreen)
QIAamp DNA mini kit (Qiagen) * * *
AllPrep DNA/RNA Mini Kit (Qiagen) * *
Agencourt DNAdvance Kit (Beckman
* *
Coulter)
Plantas

http://www.labome.com.br/method/DNA-Extraction-and-Purification.html 2/16
09/08/2017 Extração e purificação de DNA
NucleoSpin 8 Plant and NucleoSpin *
96 Plant II, Clontech
DNeasy 96 Plant Kit (Qiagen) * *
Nucleon PhytoPure Genomic DNA
* *
Extraction Kits (GE Healthcare)
Células de mamíferos e microrganismos
DNA Isolation Kit for cells and
* * * *
tissues (Roche)
Purelink Genomic DNA extraction kit
* * * *
(Invitrogen)
DNeasy Blood and Tissue Kit
* * * * * *
(Qiagen)
Genomic DNA from Tissue kit
* * * * *
(Macherey Nagel)
Células de mamíferos, microrganismos e plantas
ArchivePure DNA purification kit
* * * * * *
(5Prime)
DNA Isolation Kits (BioBasic) * * * * * * *
FastDNA Kit (MP Biomedicals LLC) * * * * * * * * *
DNAzol® Reagent (Invitrogen) * * * * * * * *
Easy-DNA® Kit (Invitrogen) * * * * * *

Wizard® Genomic DNA Purification * * * * * * *


Kit (Promega)
Sangue
DNA Isolation Kit for mammalian
*
blood (Roche)
InnuPREP Blood DNA Mini Kit (AJ
*
Innuscreen)
Outros kits
NEBNext DNA Sample Prep
Reagent Set 1 (New England
Biolabs)

Wizard® PCR Preps DNA


Purification System (Promega)
QIAquick PCR Purification Kit
(Qiagen)
MinElute Gel Extraction Kit (Qiagen)
GS FLX Titanium Rapid Library
Preparation Kit (Roche)

ZymocleanTM Gel DNA Recovery Kit


(Zymo Research)

Tabela 1. Kits para Extração e purificação de DNA.

DNA isolado de microrganismos

As células bacterianas são as mais estudadas e utilizadas dentre os microrganismos. A curva de crescimento é
obtida medindo a densidade óptica (OD) a 600 nm em diferentes tempos durante o crescimento da cultura. Para
extração de DNA, o crescimento bacteriano precisa alcançar a densidade máxima de 2-3x109 células/ml em cultura
líquida. O crescimento pode ser monitorado analisando a turbidez da cultura, e quantificado medindo a densidade
óptica (OD) em 600 nm e correlacionando com a curva de crescimento. As células coletadas podem então ser
processadas para extrair o DNA utilizando vários kits. A lise celular é feita utilizado métodos químicos como
lisozima, EDTA, lisozima e EDTA, detergentes, etc. Após a lise, há a remoção de componentes celulares do DNA
utilizando métodos de extração orgânica, ou a tecnologia baseada em sílica, etc. A última etapa envolve a
precipitação do DNA, para obtê-lo puro em altas concentrações. Para leveduras e outros microrganismos, os
procedimentos são semelhantes.

Vários kits de extração de DNA estão disponíveis, para bactérias, leveduras e fungos. O princípio que envolve as
etapas é igual para todos, porém os kits incorporam várias modificações em tampão de lise, métodos para separar
DNA, as membranas utilizadas, os tampões de lavagem e recuperação do DNA. Todos estes fatores visam a
eficiência na extração. Os kits disponíveis comercialmente e as purificações de células microbianas foram descritos
abaixo. Uma visão geral destes kits foi descrita na tabela 2.
1. Kit Bacterial Genomic DNA Mini-prep (BayGene/Sigma-Aldrich): este kit é utilizado para genomas bacterianos e consegue isolar
DNA de alta qualidade de Gram-negativas e Gram-positivas, é compatível para digestão com endonucleases de restrição, PCR e
southern blot. Ele utiliza colunas com formato micro spin, em sistemas de resina baseados em sílica, e pode isolar DNA acima de 50
kb em tamanho. Resumidamente, as células são lisadas enzimaticamente em soluções caotrópicos com sal, o DNA adsorve
especificamente à membrana de sílica, outros componentes do lisado são lavados e os contaminantes removidos. Por último, o DNA
é eluído num tampão compatível em um tubo coletor.

2. Kit BACMAX DNA (Epicentre Biotechnologies/ Cambio): é ideal para isolar cópias únicas em clones de BACs ou clones de BACs
induzidos CopyControl®, para aplicações como sequenciamento, fingerprinting, PCR, e sequenciamento de bibliotecas shotgun. É

http://www.labome.com.br/method/DNA-Extraction-and-Purification.html 3/16
09/08/2017 Extração e purificação de DNA
baseado num procedimento de lise alcalina, e utiliza uma mistura de RNases EPICENTREs® RiboShredder® com várias etapas de
precipitação seletiva para remover os contaminantes.

3. Kit PowerSoil DNA isolation (MO BIO Laboratories Inc.): este kit pode ser utilizado para isolar genomas microbianos de todos os
tipos de solos e amostras de ambientes, assim como amostras fecais, adubo e biósolidos. Ele realiza um procedimento patenteado
de retirada de substância húmicas e pigmentos, eliminando inibidores de PCR mesmo das amostras mais complexas, e o DNA de
alta qualidade purificado pode ser utilizado para aplicações downstream como PCR, qPCR e sequenciamento de nova geração.

4. Kit PowerMax Soil DNA Isolation (MO BIO Laboratories Inc.): este kit isola DNA de grandes quantidades de solo ou amostras
ambientais, com baixa ou alta carga microbiana, incluindo Gram-positivas e Gram-negativas, fungos, algas e actinomicetes; e de
substâncias húmicas contendo adubo, sedimentos e esterco. É baseado no kit descrito acima (PowerSoil® DNA Isolation) e também
utiliza uma tecnologia patenteada de remoção de compostos inibidores de PCR, incluindo as substâncias húmicas. A cor marrom
normalmente está associada com DNA do solo.

5. Kit UltraClean Microbial DNA Isolation (MO BIO Laboratories Inc): este kit consegue isolar DNA de alta qualidade, acima de 50 kb, de
1,8 ml de culturas microbiológicas de vários tipos de microrganismos incluindo leveduras, fungos, Gram-negativas e Gram-positivas,
esporos de bactérias e tipos de fungos. O princípio deste kit é lisar os microrganismos por uma combinação de calor, detergentes e
forças mecânicas contra partículas específicas. O DNA se liga então à sílica de um spin filtre, o sistema é lavado e o DNA é
recuperando num tampão Tris livre de DNA.

6. Kit QIAprep Spin Miniprep (Qiagen): este kit oferece um método rápido, simples e barato, com foco em plasmídeos, para aplicações
rotineiras em laboratórios de biologia molecular. O procedimento é baseado na lise alcalina de células bacterianas seguido de uma
adsorção do DNA em sílica na presença de alta concentração de sal. O plasmídeo do DNA purificado está pronto para ser utilizado.
Não é necessária a extração com fenol e precipitação com etanol, e o plasmídeo é eluído num pequeno volume de tampão Tris ou
água.

7. Kit Plasmid Maxi (Qiagen): este kit pode ser utilizado para preparar plasmídeos super enrolados ultrapuros e em altas taxas. Baseia-
se num procedimento modificado da lise alcalina, seguido da ligação do plasmídeo a uma resina patenteada da QIAGEN em
condições apropriadas de pH e baixa concentração de sal. O RNA, proteínas, corantes e impurezas de baixo peso molecular são
removidos por uma lavagem com um meio contendo sal. Por fim, o plasmídeo é eluído num tampão contendo alta concentração de
sal, depois é concentrando e dessalinizado por precipitação com isopropanol. Produtos relacionados: midi kit QIAGEN Plasmid [2] e
mini kit QIAGEN Plasmid [3].

Kit Fonte Rendimento Usos e vantagens Referências


O DNA pode ser utilizado em digestões
Varia de 15 ug a 20 ug de
Bacterial com endonucleases de restrição, PCR e
DNA, de 0,8 a 1,5 ml em
Genomic DNA southern blot. O DNA purificado tem uma
Cultura cultura overnight, [4]
Mini-prep Kit taxa de DNA de A260/A280 entre 1,6 a 1,9.
dependendo da fonte e do
(BayGene) Inclui diluente para lisozima e solução para
OD600 por ml
RNase A.
O DNA pode ser utilizado em
BACMAX DNA Produz 0,6 a 25 ug de DNA sequenciamento, fingerprinting, PCR e
purification kit BAC, de 1,5 a 100 ml de sequenciamento de bibliotecas shotgun.
Cultura BAC [5]
(Epicentre uma cultura de cópia-única Evitar o uso de colunas e resinas que
Biotechnologies) de BAC. diminuem a taxa de liberação de DNA. Não
necessita de solventes orgânicos tóxicos.

Amostras de
Produz um DNA purificado de alta
PowerMax Soil solo ou do
qualidade, livre de inibidores de PCR, e
DNA Isolation ambiente com DNA purificado de 10 g de
pode ser utilizado para PCR e qPCR. [6] [7]
Kit (MO BIO alta ou baixa solo em 30 minutos.
Possui alta sensibilidade de detecção em
Laboratories) carga de
baixas cargas microbianas.
microrganismo
Amostras de
PowerSoil DNA solo ou do Produz DNA para PCR, qPCR e
isolation kit (MO ambiente; DNA purificado de 250 mg sequenciamento de nova geração. Elimina
[8] [9] [10]
BIO amostras fecais, de solo em 30 minutos. os inibidores de PCR. Produz DNA de alta
Laboratories) biossólidos e qualidade.
adubo

Levedura, fungo,
UltraClean
Gram-negativa Libera mais de 50 kb de DNA
Microbial DNA Produz DNA para PCR e digestões com
and Gram- de alta qualidade. Purifica
Isolation Kit (MO enzimas de restrição. Não necessita de [6]
positiva, esporos DNA de culturas microbianas
BIO solventes orgânicos ou enzimas.
de bactérias e em 20 minutos.
Laboratories)
de fungos
Uma cultura de 1,5 ml Produz plasmídeo de DNA de alta
overnight pode liberar de 5 a qualidade. Preparação de baixo número de
QIAprep Spin
15 ug de plasmídeo de DNA. cópias de plasmídeo de 1 a 10 ml de
Miniprep Kit Cultura [11] [12]
Processa 1 a 24 amostras cultura de E. coli overnight crescida em
(Qiagen)
simultaneamente em menos meio LB. Purifica plasmídeos grandes (>50
de 30 minutos. kb).
Produz plasmídeos super enrolados com
Libera mais de 500 ug de
aplicação em várias áreas. Produz DNA
Plasmid Maxi Kit plasmídeos de alta
Cultura transfectado para transfecção, transcrição [3] [13]
(Qiagen) qualidade, com
e tradução in vitro e modificações
aproximadamente 150 kb.
enzimáticas.

Tabela 2. Visão geral da extração e purificação de kits para microrganismos.

Extração de DNA a partir de células e tecidos animais

Os passos básicos envolvendo a extração de DNA a partir de células e tecidos animais é o mesmo discutido na
introdução e para microrganismos. Só que os kits precisaram fazer algumas modificações para incorporar algumas
características especificas das células animais. A cultura e o preparo das células é bastante diferentes em relação à
s células microbianas. A maioria das células animais não tem parede celular como as células microbianas,
consequentemente é mais fácil lisar usando apenas detergente. Mas primeiro o tecido precisa ser mecanicamente
homogeneizado ou tratado com enzimas. A lise celular é seguida da separação do DNA de outros componentes
celulares, e então sua purificação. Vários kits não utilizam a extração orgânica convencional, e sim a extração com
fenol/clorofórmio seguido de precipitação com etanol. Isto é útil pois minimiza o dano que os solventes orgânicos
poderiam causar ao DNA. Por exemplo, os kits AccuPrep Genomic DNA Extraction (Bioneer) e GFX Genomic Blood

http://www.labome.com.br/method/DNA-Extraction-and-Purification.html 4/16
09/08/2017 Extração e purificação de DNA
DNA Purification (GE Healthcare) usam colunas empacotadas com fibras de vidro para extrair o DNA. O mini kit
QIAamp DNA (Qiagen) usa colunas contendo membranas de sílica, que são capazes de reter especificamente o
DNA, ajustando condições de pH e concentração de sal específicas. O kit Agencourt DNAdvance (Beckman Coulter)
emprega a separação magnética.

Os kits disponíveis para extração e purificação de DNA para células de mamíferos e tecidos já foram mencionados
anteriormente. Uma visão geral destes kits foi descrita na tabela 3.
1. Kit AccuPrep Genomic DNA Extraction (Bioneer): este kit pode ser utilizado para extrair uma media de 6 ug de DNA a partir de 200 ul
do sangue humano e mais de 20 ug de 5x106linfócitos, 25-50 mg de tecidos de mamíferos, ou 104-108 de cultura de células. Este kit
é compatível com sangue tratado com citrato ou EDTA. Ele não usa o método convencional para isolamento de DNA, e não requer
extração com fenol ou clorofórmio, precipitação com etanol, etc. O tecido é primeiramente homogeneizado utilizando um moedor ou
pilão. Este kit utiliza fibra de vidro na matriz da coluna, que é capaz de se ligar especificamente ao DNA na presença de sais
caotrópicos. Após lavar os contaminantes, o DNA é eluído em uma solução com baixa concentração de sal.
2. Kit Arcturus® PicoPure® DNA Extraction (Arcturus® PicoPure® DNA Extraction Kit, LifeTechnologies-Invitrogen): este kit pode ser
utilizado em pouquíssimas quantidades de células e tecidos. Ele emprega a técnica de microdissecção e captura a laser (MCL), que
é ideal para microdissecção de células únicas ou em poucas quantidades. O DNA pode ser extraído e amplificado no mesmo tubo, o
que previne a perda do DNA e maximiza sua quantidade isolada. E também não requer solventes orgânicos e spin columns. A
amostra pode ser preparada utilizando uma variedade de métodos, e os melhores resultados são obtidos a partir de cortes de
tecidos fixados em formalina e embebidos em parafina (FFPE), cortes de tecidos congelados, células fixadas em etanol, exames
citológicos e pellets celulares frescos ou previamente congelados.
3. Kit GFX Genomic Blood DNA Purification, Amersham Bioscience (GE Healthcare): este kit pode ser utilizado para purificação de
DNA de sangue, buffy coat (camada leuco-plaquetária do sangue), medula óssea, células vermelhas nucleadas (RBCs), células em
culturas, linfócitos e células bucais. É apropriado para aplicações que requerem mais de 15 ug de DNA, e utiliza colunas
empacotadas com matriz de fibra de vidro.O kit fornece três maneiras de purificar: 1) método direto para processar mais de 100 ul de
sangue; 2) método escalonável no processamento de mais de 1 ml de sangue ou da medula óssea e mais de 50 ul de buffy coat; 3)
procedimentos em cultura de células e linfócitos, que processam mais de 5x106 células ou 1x107 linfócitos.

4. Mini kit InnuPrep DNA (AJ I33nnuscreen): este kit isola DNA de amostras de tecidos (mais de 50 mg), caudas de roedores (0,5-1
cm), tecidos embebidos em parafina e células eucarióticas (5x106 células). O kit se baseia na tecnologia patenteada Dual Chemistry
(DC), que combina um tampão de lise com um tampão de ligação, que ajuda a minimizar o tempo requerido para purificar o DNA,
com colunas do tipo spin filtre. Após a etapa inicial de lise, utilizado o tampão, a extração dura menos de 8 minutos. Produtos
relacionados: micro kit InnuPREP DNA e mini kit InnuPREP DNA/RNA.

5. Mini kit QIAamp DNA (Qiagen): este kit extrai DNA de genoma, mitocondrial, bacteriano, de parasitas ou vírus, a partir de tecido
humano, cotonetes (bucal, ocular, nasal, faríngea e outros), CSF, sangue, fluídos corporais, e células da urina. O tecido é lisado
enzimaticamente. Produtos relacionados: micro kit QIAamp DNA [5], mini kit QIAamp DNA blood [14] [15] [16], mini kit QIAamp DNA
stool [12] [17] [18] [19] [20] [21], midi kit QIAmp DNA Blood [22] [23], kit QIAamp 96 DNA Blood [24] [25] e maxi kit Blood [26] [27].
6. Kit Gentra Puregene Blood (Qiagen): este kit pode isolar DNA de genomas de sangue, medula óssea, buffy coat e fluidos corporais.
As células são lisadas com detergentes aniônicos na presença de um estabilizador de DNA. Este estabilizador inibe a atividade das
DNases intracelulares e ambientais. O RNA é degradado por uma enzima de digestão de RNA. Outros contaminantes, como
proteínas, são removidos por precipitação com sal. Por fim, o DNA genômico é recuperado por precipitação com etanol e dissolvido
em tampão TE (1 mM EDTA, 10 mM Tris-HCI pH 7.5). Produtos relacionados: kit Gentra Puregene Tissuet [28] [29] [30] [31] e kit
Gentra Puregene Cell [32] [33] [34].

7. Mini kit AllPrep DNA/RNA (Qiagen): pode ser utilizado para quantidades maiores que 107 de células ou 30 mg de tecido. Este kit
permite uma purificação simultânea tanto do DNA genômico quanto do RNA total de apenas uma célula ou de amostra de tecido,
utilizando uma spin column AllPrep DNA e uma mini spim column RNeasy, respectivamente. Produtos relacionados: micro kit AllPrep
DNA/RNA.
8. Kit Agencourt DNAdvance (Beckman Coulter): é um kit que isola DNA genômico (gDNA) de amostras frescas ou tecidos congelados
de mamíferos com alto rendimento. O kit usa a tecnologia patenteada da Agencourt's SPRI® de partícula paramagnética para isolar
o gDNA. Este procedimento é realizado em uma placa de 96 poços e pode ser automatizado.

Kit Fonte Rendimento Usos e vantagens Referências

AccuPrep Sangue, 6 ug do DNA genômico de 200 ul


Genomic linfócitos, de sangue e mais de 20 ug de
DNA tecidos de Extração total do DNA genômico. Alta pureza
5x106 de linfócitos, 25-50 mg de [35]
Extraction mamíferos e do ácido nucleico e alto rendimento.
Kit cultura de tecido de mamíferos ou 104-108
(Bioneer) células. células de cultura.

Arcturus® Fornece uma recuperação de


PicoPure® Tecidos de DNA reprodutível de mais de 10 Fornece DNA para ensaios "de término"
DNA mamíferos e células preparadas por MCL e (endpoint) ou PCR quantitativa em tempo
[36]
Extraction cultura de pode ser utilizada amostras real. Trabalha com a maioria dos tecidos e
Kit células. grandes com vários miligramas preparos celulares. Extração eficiente.
(Invitrogen) de tecidos ou pellets celulares.

Sangue, buffy
coat, medula Fornece de 2 a 4 ug de DNA de
GFX óssea, células 100 ul de sangue humano e 10 a
15 ug de 5 ul de sangue Fornece DNA para digestões de restrição,
Genomic vermelhas
nucleado utilizando o método PCR e hibridização southern. O procedimento
Blood DNA nucleadas,
direto, 4,5 a 7,5 ug de DNA de dura de 15 a 20 minutos. Não utiliza fenol ou [37] [38]
Purification cultura de
300 ul de sangue usando o clorofórmio, banhos e precipitação com
Kit (GE células,
método escalonável e 8 a 14 ug etanol. Escalonável.
Healthcare) linfócitos e
células da de 2 x 106 células de cultura.
boca.
Amostras de
Rendimento e tempo de
tecidos, cauda
processamento depende dos
InnuPrep de roedores,
instrumentos FastPrep, Fornece DNA para PCR. Produz amostras
DNA minikit amostras
adaptadores e matrizes de lise. rápidas e reprodutíveis. Certificado para [39]
(AJ embebidas em
A capacidade de ligação à diagnóstico de uso in vitro (CE-IVD).
Innuscreen) parafina e
coluna é de >100 ug gDNA e
células
pode produzir mais de 65 ug.
eucarióticas.

QIAamp Tecidos Pode produzir DNA maior que 50 Fornece DNA para PCR, RT-PCR, southern [40] [41] [42]
DNA mini humanos, kb. A produção de ácidos blot, genotipagem SNP e STR e pesquisas [43] [44] [45]
kit (Qiagen) cotonetes nucleicos ou DNA depende do em farmacogenômica. Rendimento alto e [46] [47]
(bucais, material de início. Por exemplo, consistente. O DNA pode ser purificado de

http://www.labome.com.br/method/DNA-Extraction-and-Purification.html 5/16
09/08/2017 Extração e purificação de DNA
ocular, nasal, é produzido 4 a 12 ug de DNA a mais de 25 mg de tecido ou de mais de 200 ul
faríngeo e partir de 200 ul de sangue, 25 a de fluidos em 20 minutos, O mini kit QIAmp
outros), CSF, 50 ug de DNA de 200 ul de buffy DNA pode ser automatizado no QIAcube.
sangue, coat e 15-20 ug de DNA 106
fluidos células.
corporais e
células de
urina.

O DNA purificado possui um Purificação simultânea de DNA e RNA. O


tamanho médio de 15 a 30 kb, DNA purificado é utilizado em análises de
AllPrep
Amostras de dependendo das condições de Southern-, dot- e slot-blot; PCR e multiplex
DNA/RNA
tecidos ou homogeneização. O RNA total é PCR. O RNA purificado pode ser utilizado em [48] [49]
Mini Kit
células de alta qualidade e possui um RT-PCR e RT-PCR em tempo real; expressão
(Qiagen)
valor RIN de 10, indicando que o diferencial; síntese de cDNA; análises de
RNA está intacto. northern-, dot- e slot-blots; microarranjos.
O rendimento obtido depende do
tipo da amostra, tamanho do Libera grandes quantidades de DNA (a razão
Sangue,
Gentra genoma e número de células da A260/A280 é maior que 1,7) para uso imediato
medula óssea,
Puregene amostra. Também depende da ou posterior em processos downstream.
buffy coat e [50] [51]
Blood Kit qualidade do material de início. Fornece um DNA purificado maior que 50 kb
fluidos
(Qiagen) Por exemplo, é produzido 16 a em tamanho, tipicamente na faixa de 100 a
corporais.
50 ug de 1ml de sangue e 2 a 50 200 kb.
ug de 1 ml de fluidos corporais.
PCR, qPCR, AFLP, RFLP, RAPD,
O rendimento depende do tipo
microssatélite, análise SNP (para
da amostra. Pode produzir 18,
Agencourt genotipagem, fingerprinting, etc.),
25, and 35 ug de ácido nucleico
DNAdvance sequenciamento e resequenciamento clínico,
Tecidos de a partir de 25 mg de fígado ou
Kit e análise por gel de agarose Fornece DNA de [52]
mamíferos. cérebro de rato, e de cauda de
(Beckman alta qualidade. Não precisa fazer extração
camundongo (para uma visão
Coulter) orgânica, nem centrifugação/filtração. Três
melhor do produto,
placas de 96 poços podem ser processadas
beckmancoulter.com)
em 75 minutos no equipamento adequado.

Tabela 3. Visão geral dos kits de extração e purificação para tecidos de animais e células.

Kits para extração de DNA de tecidos e células de planta

Os passos básicos para isolar o DNA, como já foram mencionados anteriormente, precisam ser modificados pelas
diferentes características dos tecidos e das células provenientes das plantas. Reagentes químicos ou enzimas
usadas para lisar as células microbianas podem não ser tão efetivas nas células de plantas, por exemplo a lisozima,
que normalmente está inclusa nos kits que lisam a parede de bactérias, não possui efeito nas células de plantas. O
conteúdo biquímico das células de plantas também é bem diferente das células de microrganismos e de animais.
Muitas espécies de plantas possuem alto teor de polissacarídeos e polifenóis, que não são removidos por extração
com fenol (diferentemente de microrganismos). Por isso os métodos precisam ser modificados para estas
características especiais das plantas.

Um método é utilizar um detergente chamado brometo de cetiltrimetilamônia (CTAB), que forma um complexo
insolúvel com o ácido nucleico e precipita seletivamente o DNA, deixando carboidratos, proteínas e outros
contaminantes. O DNA do precipitado pode se descomplexar utilizando 1M de NaCl. O CTAB pode ser incluso em
qualquer passo no processo de extração. Para remover os teores de polifenóis, pode-se utilizar CTAB com
polivinilpirrolidona (PVP) ou polivinilpolipirrolidona (PVPP).

Outro método é utilizar o tiocinato de guanidina (GITC), que auxilia na purificação do DNA de duas formas. Primeiro,
ele desnatura e dissolve as proteínas, desintegrando estruturas celulares e dissociando nucleoproteínas do acido
nucleico. Devido a esta propriedade, GITC pode ser utilizado para liberar o DNA de praticamente qualquer tipo de
tecido. Segundo, o DNA se liga fortemente as partículas de sílica na presença de GITC. Isto pode ser utilizado para
separar o DNA de proteínas desnaturadas e outros componentes celulares. Partículas de sílica são empacotadas
em colunas de cromatografia e o DNA extraído e tratado com GITC é aplicado. O DNA se liga seletivamente à
resina e pode ser eluído na última etapa após lavar e retirar os contaminantes celulares.

Em alguns procedimentos de extração de DNA, o ácido ascórbico, dietilditiocarbamato e 2-mercaptoetanol podem


ser inclusos para proteger o DNA de oxidação e degradação. O RNA pode ser removido utilizando RNase. A
qualidade do DNA isolado dependerá mais das condições fisiológicas do material da planta do que do protocolo do
kit.

Os kits disponíveis para extração de DNA estão mencionados abaixo. Uma visão geral destes kits foi descrita na
tabela 4. Também há referência dos kits que podem ser empregados para células de plantas, de mamíferos e
microrganismos.
1. NucleoSpin 8 Plant e NucleoSpin 96 Plant II (Clontech): estes kits podem ser utilizados para isolar o DNA genômico de tecidos e
células de plantas, é adequado para PCR, southern blot ou qualquer tipo de reação enzimática. Também poupa tempo, pode ser
utilizado em uma tira de 8 poços removíveis ou no formato de 96 poços para maior rendimento. Após homogeneização do material, o
protocolo utiliza tampão de lise com CTAB. Como alternativa, um tampão de lise contendo SDS pode ser utilizado. Após remover os
polissacarídeos, contaminantes e restos celulares, o lisado contendo o DNA é aplicado numa matriz de sílica para purificação. O
DNA então é eluído em um tampão de eluição ou em água destilada. As RNases podem ser adicionadas no kit para remover o RNA
da amostra.

2. Kit DNeasy 96 Plant (Qiagen): este kit pode ser utilizado para isolar mais de 15 ug de DNA por poço, podendo ser células e tecidos
de plantas, e de fungo. O mini kit DNeasy Plant pode processar mais de 100 mg e o maxi kit pode isolar mais de 1 g.
Resumidamente, o material é homogeneizado e então incubado com tampão de lise contendo RNase. Após a lise, as proteínas e os
polissacarídeos são precipitados com sal. Os restos celulares e precipitados são removidos utilizando colunas QIAshredder. A
amostra é aplicada numa spin column empacotada com membrana de sílica e após algumas etapas de lavagem, o DNA é eluído

http://www.labome.com.br/method/DNA-Extraction-and-Purification.html 6/16
09/08/2017 Extração e purificação de DNA
com tampão com baixa concentração de sal ou em água. Está disponível em formatos de placas de 96 poços e consegue oferecer
alto rendimento e ser reprodutível. Produtos relacionados: mini kit DNeasy Plant [53][ref 18263775 [55].

3. Kit Nucleon PhytoPure Genomic DNA Extraction (GE Healthcare): este kit pode ser utilizado para isolar o DNA de amostras de
plantas frescas, congeladas ou liofilizadas, e também para amostra de fungos. Se utiliza de um protocolo único contendo a resina
Nucleon PhytoPureproprietary, que se liga especificamente aos polissacarídeos. A extração com a Nucleon Phytopure tem um
protocolo relativamente simples que não requer fenol nem CTAB. Resumidamente, a parede celular é rompida e a célula é lisada
com um reagente que contem SDS e potássio. O SDS é utilizado para formar complexos com proteínas e polissacarídeos. O
clorofórmio é então adicionado à resina Nucleon PhytoPureproprietary, que se liga covalentemente aos polissacarídeos. Como
resultado é obtido um DNA de alta qualidade na ultima etapa. Além do clorofórmio, este protocolo utiliza isopropanol gelado e etanol
70%.

Kit Fonte Rendimento Usos e vantagens Referências

NucleoSpin O DNA extraído pode ser utilizado para PCR,


Células e
8 Plant and southern blot ou qualquer tipo de reação
tecidos Pode isolar fragmentos de 50 bp a
NucleoSpin enzimática. O processamento é possível em [56] [57]
de 30 kb em volumes de 100 a 200 ul.
96 Plant II vácuo ou centrifugação. Pode ser realizado de
plantas
(Clontech) forma manual ou automatizada.
O rendimento típico é de 1 a 15 ug O DNA é utilizado em PCR, análises RAPD,
Células e por 50 mg de tecido foliar de AFLP e RFLP, southern blot, análise de
DNeasy 96 tecidos planta, com volume de eluição de microssatélite, genotipagem SNP, e PCR
Plant Kit de 100 a 200 ul. A liberação de DNA quantitativa em tempo real. Não precisa de [58]
(Qiagen) plantas e depende da espécie, tamanho do extração orgânica e precipitação com etanol.
fungos genoma, ploidia, número de células Fornece um rendimento reprodutível e está
e idade da amostra. disponível no formato de placa com 96 poços.
Nucleon
PhytoPure Amostras O DNA pode ser utilizado em digestões com
Genomic de enzimas de restrição, RAPD e AFLP. Protocolos
DNA fungos e Fornece alto rendimento simples e rápidos. Não usa fenol nem CTAB. O [59]
Extraction de procedimento pode ser feito em cerca de uma
Kits (GE plantas hora.
Healthcare)

Tabela 4. Visão geral dos kits de extração e purificação de DNA para tecidos e células de plantas.

Kits para tecidos e células de animais e microrganismos

Os kits que podem ser aplicados a extração de DNA tanto de mamíferos quanto microrganismos foram revisados
abaixo e também estão listados na tabela 5.
1. Kit DNA Isolation for cells and tissues (Roche): este kit pode ser utilizado para extração de DNA genômico de tecidos (mais de 1g),
cultura de células (mais de 107), células bacterianas (mais de 10) e células de leveduras. Não utiliza a extração orgânica, coluna de
troca aniônica e reagentes caotrópicos. O DNA proveniente deste kit varia de 50 a 150 kb, e o protocolo pode ser realizado em 2
horas e meia.

2. Kit Purelink Genomic DNA extraction (Invitrogen): este kit isola DNA de uma faixa ampla de volume sanguíneo (por exemplo, 100 ul
a 1 ml), de tecidos, células, bactérias, cotonetes bucais, manchas de sangue, tecidos FFPE e amostras preservadas em Oragene®.
É baseado na tecnologia de membrana de sílica. Ele oferece uma grande flexibilidade, incluindo uma versão de 96 poços que não
necessita de nenhum equipamento em especial e pode ser realizado manualmente ou em plataformas automatizadas.
3. Kit DNeasy Blood and Tissue (Qiagen): este kit pode ser utilizado para isolar DNA total (genômico, mitocondrial e patogênico) de
várias fontes, como tecidos e células animais embebidas em parafina ou fixadas em formalina, cauda de roedores, sangue, bactéria,
levedura, cabelo, inseto, etc. O DNA purificado tem um tamanho maior que 50 kb, com predomínio de fragmentos de 30 kb. O
procedimento consegue recuperar pequenos fragmentos de DNA eficientemente, com tamanhos de 100 bp. Este kit utiliza sílica,
onde as membranas conseguem se ligar especificamente ao DNA e são empacotadas em spin columns. Após a lise celular,
utilizando um tampão de lise, a extração de DNA pode ser realizada em 20 minutos.

4. Kit Genomic DNA from Tissue (NucleoSpin® Tissue XS kit), Macherey Nagel: este kit pode ser utilizado para isolar DNA genômico
de tecidos (por exemplo, rim de camundongo, MCL), células (bacterianas, de levedura e de cultura), amostras clínicas (de biopsias,
aspirados) e de amostras forenses (manchas de sangue secas, cotonetes bucais, impressão digital). A maior vantagem é que este
kit oferece uma recuperação de DNA confiável e reprodutível, de cerca de 10 células preparadas por MCL e também podem ser
utilizadas amostras com miligramas de tecidos ou pellets celulares. Este kit também utiliza membranas de sílica. Produtos
relacionados: NucleoSpin® Tissue, NucleoBond® AXG, NucleoSpin® 8 Tissue Core kit, NucleoSpin® 96 Tissue Core kit.

Kit Fonte Rendimento Usos e vantagens Referências


Tecidos e O rendimento e a O DNA pode ser utilizado
células em qualidade do DNA para PCR, sequenciamento Provides DNA for PCR, sequencing
cultura, depende muito do e southern blot. Não é and southern blots. No organic
células material de início, o necessário fazer extração extractions, anion exchange [60]
bacterianas número de células por orgânica e não precisa de columns and chaotropic reagents
e de amostra e o tamanho colunas de troca iônica e are required.
levedura. do genoma. reagentes caotrópicos.
Pureza obtida (A260/A280= 1.86-
Sangue, tecidos, 1.88, A260/A230= 2.18-2.31), que
Purelink
células, bactérias, pode ser utilizada em PCR, qPCR,
Genomic 5-25 ug de DNA a partir de
cotonetes bucais, eletroforese, southern blot,
DNA
manchas de sangue, 5x105 - 5x106 células HEK genotipagem e outros. Fornece [61] [62]
extraction
tecidos FPPE e 293. gDNA altamente puro, com muita
kit
amostras preservadas flexibilidade e pode ser utilizado em
(Invitrogen)
em Oragene®. várias amostras de diversos
tamanhos.
Células e tecidos [63] [3] [64] [65]
frescos ou congelados, [66] [67] [28] [37]
O DNA obtido pode ser utilizado em
cauda de roedores, O DNA purificado possui a [68] [69] [70] [71]
DNeasy PCR, southern blot, RAFP, AFLP e
sangue, bactérias, razão 260/A280 entre 1,7-1,9 [72] [73] [74] [35]
Blood and AFLP. Recupera eficientemente o
leveduras, cabelo e e tem tamanho maior que [75] [76] [77] [15]
Tissue Kit DNA, de fragmentos pequenos com
insetos. Trabalha com 50 kb, com fragmentos de [78] [79] [80] [81]
(Qiagen) 100 bp. Permite processamento
amostras fixadas em 30 kb predominantes. [82] [83] [84] [85]
simultâneo de várias amostras.
formalina e embebidas [86] [87] [88] [89]
em parafina. [90]

http://www.labome.com.br/method/DNA-Extraction-and-Purification.html 7/16
09/08/2017 Extração e purificação de DNA
Genomic Células e tecidos O tamanho dos fragmentos O DNA obtido pode ser utilizado em [46]
DNA from frescos ou congelados, do DNA purificado depende PCR de tempo real e multiplex.
Tissue kit manchas de sangue da qualidade da amostra e Recuperação alta de pequenas
(Macherey em pode variar entre 500 bp quantidades de DNA. Volume de
Nagel) Guthrie/NucleoCard® por microdissecção, ou eluição pequeno (5-30 ul), dando
/FTA cards, cotonetes amostras forenses, e mais um DNA muito concentrado.
bucais e amostras de 30 kb de tecidos frescos
forenses. e culturas de células.

Tabela 5. Visão geral da extração e purificação do DNA de células e tecidos animais e de microrganismos.

Kits para células de mamíferos, microrganismos e plantas

Estes kits podem ser utilizados para extração de DNA da maioria das fontes, como mamíferos, microrganismos e
plantas. Uma visão geral destes kits foi descrita na tabela 6.
1. Kit ArchivePure DNA purification (5Prime): este kit é usado para purificar DNA genômico, mitocondrial ou viral, de sangue, medula
óssea, cultura de células, tecidos de animais e de plantas, bactérias Gram-negativas e Gram-positivas e leveduras. O sistema é de
fase líquida e utiliza detergentes não tóxicos e sal. Cerca de 95% do DNA purificado é maior que 50 kb em comprimento e tem de
100-200 kb.

2. Kit FastDNA (MP Biomedicals LLC): ele extrai DNA genômico de tecidos de animais e plantas, cultura de células, bactérias,
leveduras, fungos, algas, vírus e insetos. São utilizados tubos otimizados com matriz de lise e é feito um procedimento GeneClean®
baseado em sílica para purificar o DNA.

3. Reagente DNAzol® (Invitrogen): este reagente pode ser utilizado para isolar DNA genômico de amostras sólidas ou líquidas de
origem animal, planta, leveduras e bacterianas. É designado para uso em tecidos, células ou sangue. É um reagente pronto para ser
utilizado.

4. Kit Easy-DNA® (Invitrogen): este kit pode ser utilizado para isolar genomas de alto peso molecular de vários tipos de células e
tecidos, incluindo mamíferos, de sangue, folículos capilares, cauda de camundongos, folhas de plantas, leveduras e células de E.
coli. Seu método é modificado da extração orgânica. Utiliza clorofórmio para remover os contaminantes e etanol para precipitar e
recuperar o DNA isolado.
5. Kit Wizard® Genomic DNA Purification (Promega): pode ser utilizado para isolar DNA de sangue, glóbulos broncos, cultura de
células, tecidos animais e de plantas, leveduras, bactérias Gram-positivas e Gram-negativas. Resumindo, primeiro as células são
lisadas, então as proteínas celulares são removidas por salting out, o RNA é removido com RNase e finalmente o DNA é precipitado
com isopropanol.

6. Kit DNA Isolation (BioBasic) (Animal tissue & fungi genomic DNA extraction prep kit , Bacteria genomic DNA prep kit, Blood genomic
DNA prep kit, Plant genomic DNA prep kit, Yeast genomic DNA extraction prep Kit): os kits da BioBasic podem ser utilizados para
isolar DNA de sangue, tecido de plantas, celulas de mamíferos, bactérias e fungos [91].

Kit Fonte Rendimento Usos e vantagens Referência

Sangue, medula
óssea, cultura
de células,
Consegue isolar moléculas de
ArchivePure tecidos de A produção e qualidade do DNA depende
alta massa com alta pureza.
DNA plantas e principalmente da qualidade do material de
Procedimento rápido. A razão [92]
purification animais, início, o número de células por amostras e o A260/A280 do DNA isolado
kit (5Prime) bactérias Gram- tamanho do genoma da amostra.
varia de 1,7 a 2,0.
positivas e
Gram-negativas,
leveduras.

Tecidos de
plantas e
animais, cultura
FastDNA Kit
de células, Isola o DNA pronto para a
(MP A produção e o processamento dependem do
bactérias, PCR. O resultado sai rápido e [93]
Biomedicals uso do FastPrep, adaptadores e matriz de lise.
fungos, é reprodutível.
LLC)
leveduras,
algas, vírus e
insetos.
Isola o DNA para digestão
Material de
com endonuclease de
origem animal,
Pode isolar DNA genômico de 50 mg de restrição, southern blot,
DNAzol® planta, levedura
clonagem molecular e PCR. O [94] [95]
Reagent e bacteriana, tecidos ou de 1 x 107 a 3 x 107 células com um
reagente é completo e pronto [96]
(Invitrogen) incluindo mililitro do reagente DNAzol®.
para usar. O procedimento é
células, tecidos
confiável, eficiente e pode ser
e sangue.
realizado de 30 a 60 minutos.
Easy-DNA® Células e Libera DNA de alta qualidade com um tamanho O DNA pode ser utilizado em [97] [98]
Kit tecidos de médio entre 100 a 200 kb. PCR, hibridização de DNA,
(Invitrogen) mamíferos, construção de livrarias de
sangue, DNA, e outras aplicações.
folículos Oferece um DNA de alta
capilares, cauda qualidade, de amostras
de grandes ou pequenas,
camundongos, provenientes de células,
folhas de tecidos, plantas, leveduras, E.
plantas, coli, sangue e folículos
leveduras e capilares. Um procedimento
células de E. pode ser realizado em <90
coli. minutos.

Sangue,
glóbulos
brancos,
cultura de
células de
tecidos,
tecidos
http://www.labome.com.br/method/DNA-Extraction-and-Purification.html 8/16
09/08/2017 Extração e purificação de DNA
animais,
tecidos de
plantas,
leveduras,
bactérias
Gram-
positiva e
Gram-
negativas.

Sangue, O rendimento depende da espécie e da


glóbulos quantidade do material inicial. A liberação típica
brancos, cultura de DNA se da entre 5-15 ug de DNA de 300 ul
Wizard®
de células de de sangue, 9.5 - 12.5 ug de 2.25 x 106 células O DNA é adequado para
Genomic [99] [25]
DNA
tecidos, tecidos NIH/3T3 (camundongo), 15-30 ug de 3x 106 amplificação, digestão com
[100] [15]
animais, tecidos células K562 (humana), 10-30 ug de 0.5-1.0 cm endonuclease de restrição,
Purification [101] [102]
de plantas, da cauda de camundongo, 16 ug de 5 x 106 de hibridização de membrana e
Kit [103]
leveduras, células Sf9 (insetos), 7-12 ug de 40 mg de folha southern-, dot- e slot-blot.
(Promega)
bactérias Gram- de tomate (tecido de planta), 20 ug de 1 ml de
positiva e Gram- E.coli (bactéria) e 4.5-6.5 ug de DNA de 1 ml
negativas. de S.cerevisiae (levedura) em cultura overnight.

Tabela 6. Visão geral da extração e purificação do DNA de amostras de animais, microrganismos e origem vegetal.

Kits específicos para sangue

Existem kits disponíveis para isolar gDNA especificamente do sangue. Estes kits incluem:
1. Kit DNA Isolation para sangue de mamíferos (Roche): este kit pode ser utilizado para extração de DNA de 1-10 ml de sangue (de
humanos, camundongos, ratos). Pode ser utilizado também para isolar DNA de tampões plaquetários e linfócitos. O rendimento
médio obtido usando esse kit é de aproximadamente 350 ug/10 ml, variando de 200-700 ug para sangue humano saudável (média
de 5x106 leucócitos/ml). O DNA é adequado para PCR, PCR longo, sequenciamento e southern blot. A vantagem deste kit é o tempo
total para realizar o procedimento, que não dura mais que 1 hora e meia. Além disso, a taxa de absorbância entre A260/A280
normalmente é de 1,7 a 1,9 [104] [60].

2. Mini kit InnuPREP Blood DNA (AJ Innuscreen): este kit consegue isolar diretamente o gDNA de amostras de sangue com mais de
300 ul. O rendimento pode ser maior que 12 ug dependendo da amostra e da quantidade usada. As vantagens desse kit são que ele
fornece um gDNA de altíssima qualidade, é fácil de usar, e ainda possui certificado para diagnóstico in vitro (CE-IVD). Produtos
relacionados: master kit InnuPREP Blood DNA, midi kit InnuPREP Blood DNA, midi direct kit InnuPREP Blood DNA.

Outros kits

Existem kits disponíveis para: 1) preparar amostras de DNA para aplicações em sequenciamento de nova geração
ou livrarias de expressão; 2) purificar DNA de fita dupla amplificado por PCR; 3) criar livrarias de fragmentos de
DNA. São os seguintes:
1. NEBNext DNA Sample Prep Reagent Set 1 (New England Biolabs): consiste de enzimas e tampões que são utilizados para preparar
amostras para o sequenciamento de nova geração, e para livrarias. O lote dos componentes deste kit é controlado, individualmente
e em conjuntos. Estes reagentes passam por controles de qualidades adicionais e são validados para oferecer o máximo rendimento
possível. As principais vantagens deste kit são: está disponível em conjunto, em misturas (Master Mixes) e em módulos; todos os
reagentes passam por um rigoroso controle de qualidade para garantir a qualidade e pureza máxima; cada reagente do conjunto ou
do módulo é funcionalmente validado. Além disso, o kit prepara amostras para o sequenciamento de nova geração, construção de
livrarias de sequenciamento, arranjos de hibridização de alta densidade (SPRS2 e SPMMS2) e métodos de hibridização subtrativa
[105] [93] [106].

2. Wizard® PCR Preps DNA Purification System (Promega): este kit é utilizado para DNA fita dupla amplificada por PCR e purificado.
Os produtos de PCR são relativamente livres de contaminantes, incluindo dímeros de primer e amplificação de primers. Ele
consegue fornecer uma recuperação maior que 95% aplicando entre 50 ng a 16 ug e 500 bp para 1 ml de resina. O rendimento típico
da purificação é de 70-90% para fragmentos de 500 pb de agarose com baixo ponto de fusão (low melting). A vantagem deste kit é
que é rápido, fácil, simples, e relativamente barato [51] [107].
3. Kit QIAquick PCR Purification (Qiagen): este kit consegue purificar diretamente produtos de PCR de fita simples ou fita dupla (100pb
a 10 kb) de reações de amplificação, e o rendimento do DNA é de mais de 10 ug com recuperação de 90 a 95%. O sistema QIAquick
combina a tecnologia das spin columns com as propriedades de ligação seletiva a uma membrana específica de sílica. O DNA
adsorve na membrana de sílica na presença de altas concentrações de sal, e os contaminantes são eluídos da coluna. As impurezas
são lavadas, e o DNA puro é eluído da coluna com tampão Tris ou água. O DNA purificado poderá então ser utilizado em
marcações, hibridizações, PCR, ligações e transformações, sequenciamento radioativo ou fluorescente, transcrição in vitro ou
microinjeção. A maior vantagem deste kit é a limpeza rápida do DNA [108] [109] [110] [111] [41] [112] [99] [11] [113] [114] [82] [115]
[116] [117] [92] [118] [119] [120] [121] [122]. Related products: QIAquick Nucleotide Removal Kit and QIAquick Gel Extraction Kit [123]
[124] [40] [125] [70] [117] [126] [6] [127] [49].

4. Kit MinElute Gel Extraction (Qiagen): pode ser utilizado para extração de fragmentos de DNA (70 pb a 4 kb) de gel de agarose
padrões ou de agarose de baixo ponto de fusão, com 80% de recuperação. Todas as enzimas são removidas, independentemente
do tamanho ou estrutura secundária. Este kit combina as spin columns com uma membrana de sílica com propriedades seletivas de
ligação. O DNA adsorve na membrana na presença de altas concentrações de sal enquanto os contaminantes eluem pela coluna. As
impureza são então lavadas e o DNA puro é eluído com tampão Tris ou água. O DNA purificado pode ser utilizado para realizar
ligação e transformação, sequenciamento de DNA radiativo ou fluorescente, digestão com enzimas de restrição, marcação,
hibridização, PCR, transcrição in vivo ou microinjeção. A maior vantagem deste kit é a habilidade em fornecer fragmentos de DNA
purificados e concentrados (10 ul volume de eluição) [6] [128] [129]. Produtos relacionados: Kit MinElute Reaction Cleanup Kit e
MinElute PCR Purification [130] [131] [92] [132] [133] [6].

5. Kit GS FLX Titanium Rapid Library Preparation (Roche): este kit consiste de reagentes que irão ajudar a criar livrarias de fragmento
de DNA de um organismo de interesse. O procedimento requer 500 ng de DNA, que pode ser dupla-fita, tem que ter uma razão
A260/A280 de 1,8 e uma concentração de pelo menos 5 ng/ul. A livraria consistirá de fragmentos de fitas únicas de DNA
representando toda a amostra. Cada fragmento de DNA é flanqueado e sequenciado, então é purificado e quantificado. A maior
vantagem é que esta tecnologia é adequada para sequenciar genomas de qualquer tamanho, e pode ser realizada por apenas uma
pessoa com um equipamento de laboratório adequado [134].

6. Kit ZymocleanTM Gel DNA Recovery (Zymo Research): este kit realize uma purificação rápida e com um DNA de alta qualidade,
proveniente de um gel de agarose com os tampões TAE/TBE. O kit se baseia na tecnologia Fast-Spin. A recuperação de DNA que
possui 50 pb a 10 kb é de 70 a 90%; para DNA de 11 kb a 23 kb, a recuperação é de 50 a 70%. O DNA purificado pode ser utilizado
para reações de ligações, sequenciamento, reações de marcação de DNA, PCR, etc. A maior vantagem deste kit é sua capacidade
de render ≥6 ul de DNA purificado em 15 minutos [3] [107].

http://www.labome.com.br/method/DNA-Extraction-and-Purification.html 9/16
09/08/2017 Extração e purificação de DNA

Kits para extração e purificação de DNA na literatura


A Labome pesquisou em 216 publicações quais kits de quais fornecedores foram utilizados para extrair e purificar
DNA.

DNA isolado de microrganismos


Kit Num Fornecedor Num
O kit MO BIO Laboratories PowerMax Soil
Microrganismos 25 DNA Isolation foi utilizado para investigar o
Life Technologies 3 vírus Emiliania huxleyi em sedimentos do mar
MO BIO negro [7] e troca de genes de resistência entre
6
Laboratories
bactérias de solo e patógenos humanos [8] O
Qiagen 16 kit PowerSoil DNA isolation foi utilizado para
Tecidos e células de mamíferos 17 estudar a proteção de plantas por bactérias de
Qiagen 17 solo contra fungo patogênicos em raízes e
Plantas 8
efeito de uma dieta de longo prazo na
composição da microbiota do trato
Clontech 3
gastrointestinal (TGI) [10].
Qiagen 5
Células de mamíferos e O mini kit Qiagen QIAamp DNA stool foi
32
microrganismos
utilizado para investigar o efeito de infecção
Life Technologies 2
viral entérica na microbiota intestinal [12], o
Qiagen 30
efeito regulatório de PD-1 na seleção de IgA e
Células de mamíferos, plantas e composição da flora do TGI [17], a imunidade
13
microrganismos
adquirida, conferida pela microbiota da pele
Epicentre
Biotechnologies
2 [18], a influência da interação entre fungos
comensais e Decti-1 em colites [19], respostas
Life Technologies 5
imunes de comensais induzidos por infecções
Promega 6
agudas no TGI [20] e proteção contra o
Sangue 22 sistema imune no mutualismo em bactérias
Illumina 3 hospedeiras do intestino pela lectina
GE Healthcare 5 antibacteriana RegIIIgamma [21]. O mini kit
Life Technologies 3 QIAprep Spin foi utilizado para investigar
Qiagen 11
interações entre o p37 do vírus Vaccinia e as
proteínas LE associadas [11] e o efeito da
Outros kits 60
infecção viral entérica na microbiota intestinal
Beckman Coulter 7
[12]. O Maxi kit Plasmid foi utilizado para
Life Technologies 5 investigar a regulação de estados patogênicos
New England e mutualísticos em Photorhabdus luminescens
3
Biolabs
[3] e a estrutura da subunidade ribossomal
Promega 2
eucariótica 60S associada a eIF6 [13].
Qiagen 39

Zymo Research 4 Extração de DNA de células e tecidos de mamíferos

O mini kit Qiagen AllPrep DNA/RNA foi


Tabela 7. O número de publicações (Num) cita quais foram os
fornecedores de cada kit de extração e purificação de DNA. utilizado para investigar as diferenças entre o
RNA e o DNA correspondente no
transcriptoma humano [48] e a origem e evolução de reticuloendoteliose viral [49]. O mini kit QiAamp DNA foi
utilizado para investigar a origem de transposons de DNA [45], proteção contra endossimbiontes de insetos por um
peptídeo antimicrobiano ColA [46], a ação recíproca de APOBEC3G e o vírus da leucemia murina [40], locis
metilados associados ao câncer de próstata [41], mutação de EGFR e KRAS em pacientes com adenocarcinoma no
pulmão [42], a relação entre o ciclo circadiano e risco de câncer [43], influencia de fatores genéticos e bacterianos
no câncer gástrico em Costa Rica [44] e a relação global entre hipometilação e instabilidade cromossomal [47]. O kit
Gentra Purgene Tissue foi utilizado para investigar a deleção do cluster HoxC em peixes elasmobrânquios [29],
dano ao DNA e tumorigênese induzida pelo metabolismo de PAH em células Langerghans [28], fusão telômero-
telômero de cromossomo com deficiência em telomerase [30] e a história da invasão de Solenopsis invicta [31]. O
kit Gentra Puregene Cell foi utilizado para investigar a associação de GHC1 SNPs com as taxas de capsaicina
associadas a dor [32], a introdução de doenças linfoproliferativas pela ativação constitutiva de JAK3 em ratos [33] e
o papel de DGJ nas formas atípicas da doença de Fabry [34].

Extração de DNA em plantas

As colunas Clontech NucleoSpin foram utilizadas para investigar as mutações associadas a NOTCH1 e a
carcinomas de células escamosas de cabeça e pescoço [92] e oligodendrogliomas induzidos por mutações em CIC
e FUBP1 [132].

O mini Kit Qiagen DNeasy Plant foi utilizado para investigar associações mutualísticas em orquídeas e abelhas
polinizadoras [53], epigenomas de arroz [54] e mutualismo entre plantas e micorrizas de [55].

http://www.labome.com.br/method/DNA-Extraction-and-Purification.html 10/16
09/08/2017 Extração e purificação de DNA
Extração de DNA de células de mamíferos e microrganismos

O kit da Life Technologies Invitrogen Purelink Genomic DNA extraction foi utilizado para investigar a transformação
linfocítica na doença de Marek induzida por vírus em aves [61] e resistência bacteriana a antibióticos [62].

O kit da Qiagen DNeasy Blood and Tissue foi utilizado para investigar a associação entre aneuploidia em tumores e
a inativação de STAG2 [64], a relação entre instabilidade genômica mitocondrial e câncer de mama humano [65],
mutação em KRAS em carcinomas de ovário [66], retrovírus recombinante XMRV em amostras humanas [67], dano
ao DNA e tumorigênese induzida pelo metabolismo de PAH em células Langerghans [28], a perda do sono em
maçaricos de colete (Calidris melanotos) machos [37], a associação entre a sensibilidade ao everolimus e mutação
de TSC1 em pacientes com câncer [68], a relação entre a polimerase II estagnada, regulação da expressão gênica
e estrutura da cromatina [69], o efeito do Anaplasma phagocytophilum na ativação da catepsina L [70], a função e
ativação de CDKN1C [71], a regulação da estabilidade de DNMT1 [72], mecanismo molecular da gênese do
meduloblastoma [73], o espectro mutacional do carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço [74],
diversificação mamífera [35], genomas de metagenomas [75], aquisição de resistência a avermectina em C. elegans
[76], evolução de cromossomo sexual em cobras [77], o papel da decorina em câncer de mama [78], os genes da
via de sinalização de EGFR em células de câncer de pulmão [79], a regulação da secreção da proteína-1
quimioatrativa de monócito [80], expressão de PIK3CA na superfície epitelial do ovário [81], modificações do
promotor ER-beta metilado em células de câncer de ovário [82], hepatotoxicidade induzida por acetaminofeno [83],
o envolvimento das atividades Parp/Parg na manutenção do estado metilado do DNA [84], mecanismo que envolve
a resistência à dissecação de Sinorhizobium meliloti Rm1021 [85], a associação entre PRDM9 e a ativação de
hotsposts recombinantes em mamíferos [86], o papel de Eos durante o silenciamento de genes dependente de
Foxp3 [87], variação genética em Myodes glareolus [88], o papel de FGF21 no prolongamento da vida em
camundongo [135], a possível relação entre síndrome de fadiga crônica e vírus de leucemia em murinos [15], a
influência do ambiente na expressão de Agouti [63], o papel de LTA4H em limitar a inflamação pulmonar neutrofílica
crônica [90] e regulação dos estados mutualísticos e patogênicos de Photorhabdus luminescens [3].

Extração de DNA de células de mamíferos, microrganismos e plantas

O DNAzol da Life Technologies Invitrogen DNAzol foi utilizado para estudar a formação do heterodímero gE/gI na
disseminação de célula a célula [95], na repressão de uma rede epigenética pleiotrópica induzida por mutações
CRABP2 [96] e em microDNAs de células de mamíferos [94]. O Kit da Invitrogen Easy-DNATM foi utilizado para
estudar a proteína ClpB de Mycoplasma pneumonia [97] e regenerações das planárias [98].

O kit Promega Wizard® Genomic DNA Purification foi utilizado para investigar a regulação da expressão de fosfacan
por Egr-1 em astrócitos após um AVC experimental [100], mutação no éxon 3 CTNNB1 e na acumulação de beta-
catenina em pacientes com adenomas paratireoideanos [101], relação entre o polimorfismo de RMI1, TOP3A e BLM
no risco de câncer [25], características clínicas e mutações de ENG, ACVRL1 e SMAD4 em pacientes coreanos
com telangiectasia hemorrágica hereditária [102], o papel do polimorfismo de A1818T no íntron 2 nos receptores do
tipo 2 de angiotensina II no desenvolvimento de nefropatia por imunoglobulina A [103] e a associação entre a
susceptibilidade a TP e severidade do polimorfismo de genes de citocinas em pacientes paquistaneses [99].

Extração de DNA de sangue

O kit da GE Healthcare GFX Genomic Blood DNA Purification foi utilizado para investigar a perda do sono em
maçaricos de colete (Calidris melanotos) machos [37] e o tratamento de distrofia muscular em cães Golden
Retriever [38].

O kit Qiagen QIAamp 96 DNA Blood foi utilizado para investigar a relação entre o polimorfismo de RMI1, TOP3A e
BLM no risco de câncer [25] e a associação de susceptibilidade do loci de câncer de mama com a densidade
mamográfica [24]. O midi kit foi utilizado para investigar o papel do snRNA U4atac no desenvolvimento inicial
humano e sobrevivência pós-natal [22] e formação de tumor na próstata humana [23]. O maxi kit foi utilizado para
investigar as mutações em RAS em pacientes com leucemia mieloide [26] e o papel da viperina na infecção humana
por citomegalovírus [27]. E o mini kit foi utilizado para investigar a possível relação entre síndrome de fadiga crônica
e vírus de leucemia em murinos [15], a função de ADAR1 em células-tronco hematopoiéticas [14] e a associação de
câncer de próstata com polimorfismos em MnSOD e NAT e também com o tabagismo [16]. O kit da Gentra
Puregene Blood Kit foi utilizado para investigar a influência da variação da CYP2C19 em pacientes com doença
arterial coronariana e a resposta ao prasugrel e clopidogrel [50] e a expressão do gene arilsulfatase I em células
ARPE-19 [51].

Outros kits

Beads Beckman Coulter AMPure XP foram utilizadas em estudos de armazenamento de informação digital baseado
no DNA [136], perda somática de doenças que causam mutações em pacientes com ictiose [137], a influência de
perturbações na dieta na microbiota do TGI humano [128],modulação da função da microbiota do TGI com dietas
[124], o mecanismo de controle de crescimento baseado em etileno, em Arabidopsis [129] e o ritmo circadiano
controlado por um ativador cíclico em Arabidopsis [138].

Os dynabeads da Life Technologies Invitrogen Streptavidin M-280 foram utilizados para investigar a transcrição da
polimerase I [139] e o splicing de íntrons na desordem de desenvolvimento MOPD I (nanismo primordial

http://www.labome.com.br/method/DNA-Extraction-and-Purification.html 11/16
09/08/2017 Extração e purificação de DNA
osteodisplásico microcefálico tipo I) [140].

O reagente da New England Biolabs NEBNext DNA Sample Prep Set 1 foi utilizado para investigar as variações na
metilação do DNA em diferentes gerações de Arabidopsis thaliana [105], mutações em MED12 em pacientes com
miomas [93] e distribuição de 5-hidroximeticitosina em células ES de camundongos [106].

O sistema da Promega Wizard® PCR Preps DNA Purification foi utilizado para investigar a expressão da
arilsulfatase I em células ARPE-19 [51] e convergência adaptativa em E. coli [107].

O kit Qiagen MinElute Gel Extraction foi utilizado para investigar a troca de genes de resistência a antibióticos entre
bactérias do solo e patogênicas humanas [6], a influência de perturbações na dieta na microbiota do TGI humano
[128] e o mecanismo de controle de crescimento baseado em etileno, em Arabidopsis [129]. O kit MinElute PCR
Purification foi utilizado na investigação do papel da carotenogênese em milho [130], método de mutação gênica em
peixe-zebra [131], mutações em NOTCH1 associadas a carcinomas de células escamosas de pescoço e cabeça
[132], oligodendrogliomas induzidos por mutações em CIC e FUBP1 [92], linhagens de bactérias provenientes do
fundo do oceano [133], troca de genes de resistência a antibióticos entre bactérias do solo e patogênicas humanas
[6]. O kit QIAquick Gel Extraction foi utilizado para investigar a diminuição da diferenciação de células B induzidas
por TCDD [123], a ação recíproca entre APOBEC3G e vírus de leucemia murina [40], o papel do cluster dos genes
ORF9 a ORF12 na replicação do vírus Varicella-zoster e infecção da pele [125], o efeito de Anaplasma
phagocytophilum na ativação da catepsina L [70], a função de HlyU em Vibrio vulnificus CMCP6 [117], o valor do
prognóstico dos padrões metilados das ilhas de CpG dos genes CXCL12 e ESR1 em câncer de mama [126], troca
de genes de resistência a antibióticos entre bactérias do solo e patogênicas humanas [6], modulação da função da
microbiota do TGI por dietas [124], a evolução de uma ribozima capaz de sintetizar RNA [127] e a origem e
evolução do vírus da reticuloendoteliose [49]. O kit QIAquick PCR Purification foi utilizado para investigar a mudança
do mecanismo sensível à temperatura em Histoplasma capsulatum [109], interação entre ENT4 e EWS/WT1 [108], a
relação entre expressão genética e marcadores epigenéticos [110], o valor preditivo de deficiência de C4A ou C4B
na sobrevida de carcinomas renais metastáticos [111], a associação entre a susceptibilidade a TP e severidade do
polimorfismo de genes de citocinas em pacientes paquistaneses [41], interações entre o p37 do vírus Vaccinia e as
proteínas LE associadas [112], adaptação do polimorfismo de TLR por pressão seletiva pela malaria [99], mutações
no gene carboidrato sulfotransferase 6 em pacientes com distrofia macular da córnea [11], modificações do promotor
ER-beta metilado em células de câncer de ovário [113], regulação da sinalização de Bmp por Bmper [114], a função
de SIRT1 em adipócitos [82], a função de HlyU em Vibrio vulnificus CMCP6 [115], mutações associadas a NOTCH1
e a carcinomas de células escamosas de cabeça e pescoço [116], a capacidade dos polímeros sintéticos em
armazenar informação [117], síntese de alcaloides noscapinos em Papaver somniferum [119], efeito regulatório de
Myrf na mielinização do sistema nervoso central [120], o papel de Lsd1 durante a maturação das células sanguíneas
[121] e a origem dos aborígenes australianos [122].

O kit Zymo Research DNA Clean and Concentrator foi utilizado para investigar a relação entre a estrutura da
cromatina e a expressão genética [141] e a convergência adaptativa em E. coli [107]. O kit ZymocleanTM Gel DNA
Recovery foi utilizado para investigar a convergência adaptativa de E. coli [107] e a regulação dos estados
patogênicos e mutualísticos de Photorhabdus luminescens [3].

referências
1. Yoshikawa H, Dogruman-Al F, Dogruman-Ai F, Turk S, Kustimur S, Balaban N, et al. Evaluation of DNA extraction kits for molecular
diagnosis of human Blastocystis subtypes from fecal samples. Parasitol Res. 2011;109:1045-50 PMID 21499752 CrossRef

2. Szabó A, Papin C, Zorn D, Ponien P, Weber F, Raabe T, et al. The CK2 Kinase Stabilizes CLOCK and Represses Its Activity in the
Drosophila Circadian Oscillator. PLoS Biol. 2013;11:e1001645 PMID 24013921 CrossRef

3. Somvanshi V, Sloup R, Crawford J, Martin A, Heidt A, Kim K, et al. A single promoter inversion switches Photorhabdus between
pathogenic and mutualistic states. Science. 2012;337:88-93 PMID 22767929 CrossRef

4. Alegado R, Brown L, Cao S, Dermenjian R, Zuzow R, Fairclough S, et al. A bacterial sulfonolipid triggers multicellular development in
the closest living relatives of animals. elife. 2012;1:e00013 PMID 23066504

5. Van't Hof A, Edmonds N, Dalíková M, Marec F, Saccheri I. Industrial melanism in British peppered moths has a singular and recent
mutational origin. Science. 2011;332:958-60 PMID 21493823 CrossRef

6. Forsberg K, Reyes A, Wang B, Selleck E, Sommer M, Dantas G. The shared antibiotic resistome of soil bacteria and human
pathogens. Science. 2012;337:1107-11 PMID 22936781 CrossRef

7. Coolen M. 7000 years of Emiliania huxleyi viruses in the Black Sea. Science. 2011;333:451-2 PMID 21778399 CrossRef

8. Mendes R, Kruijt M, de Bruijn I, Dekkers E, van der Voort M, Schneider J, et al. Deciphering the rhizosphere microbiome for disease-
suppressive bacteria. Science. 2011;332:1097-100 PMID 21551032 CrossRef

9. Wu G, Lewis J, Hoffmann C, Chen Y, Knight R, Bittinger K, et al. Sampling and pyrosequencing methods for characterizing bacterial
communities in the human gut using 16S sequence tags. BMC Microbiol. 2010;10:206 PMID 20673359 CrossRef

10. Wu G, Chen J, Hoffmann C, Bittinger K, Chen Y, Keilbaugh S, et al. Linking long-term dietary patterns with gut microbial enterotypes.
Science. 2011;334:105-8 PMID 21885731 CrossRef

11. Chen Y, Honeychurch K, Yang G, Byrd C, Harver C, Hruby D, et al. Vaccinia virus p37 interacts with host proteins associated with LE-
derived transport vesicle biogenesis. Virol J. 2009;6:44 PMID 19400954 CrossRef

12. Kuss S, Best G, Etheredge C, Pruijssers A, Frierson J, Hooper L, et al. Intestinal microbiota promote enteric virus replication and
systemic pathogenesis. Science. 2011;334:249-52 PMID 21998395 CrossRef

13. Klinge S, Voigts-Hoffmann F, Leibundgut M, Arpagaus S, Ban N. Crystal structure of the eukaryotic 60S ribosomal subunit in complex
with initiation factor 6. Science. 2011;334:941-8 PMID 22052974 CrossRef

http://www.labome.com.br/method/DNA-Extraction-and-Purification.html 12/16
09/08/2017 Extração e purificação de DNA
14. Hartner J, Walkley C, Lu J, Orkin S. ADAR1 is essential for the maintenance of hematopoiesis and suppression of interferon
signaling. Nat Immunol. 2009;10:109-15 PMID 19060901 CrossRef

15. Simmons G, Glynn S, Komaroff A, Mikovits J, Tobler L, Hackett J, et al. Failure to confirm XMRV/MLVs in the blood of patients with
chronic fatigue syndrome: a multi-laboratory study. Science. 2011;334:814-7 PMID 21940862 CrossRef

16. Iguchi T, Sugita S, Wang C, Newman N, Nakatani T, Haas G. MnSOD genotype and prostate cancer risk as a function of NAT
genotype and smoking status. In Vivo. 2009;23:7-12 PMID 19368118

17. Kawamoto S, Tran T, Maruya M, Suzuki K, Doi Y, Tsutsui Y, et al. The inhibitory receptor PD-1 regulates IgA selection and bacterial
composition in the gut. Science. 2012;336:485-9 PMID 22539724 CrossRef

18. Naik S, Bouladoux N, Wilhelm C, Molloy M, Salcedo R, Kastenmuller W, et al. Compartmentalized control of skin immunity by
resident commensals. Science. 2012;337:1115-9 PMID 22837383 CrossRef

19. Iliev I, Funari V, Taylor K, Nguyen Q, Reyes C, Strom S, et al. Interactions between commensal fungi and the C-type lectin receptor
Dectin-1 influence colitis. Science. 2012;336:1314-7 PMID 22674328 CrossRef

20. Hand T, Dos Santos L, Bouladoux N, Molloy M, Pagán A, Pepper M, et al. Acute gastrointestinal infection induces long-lived
microbiota-specific T cell responses. Science. 2012;337:1553-6 PMID 22923434

21. Vaishnava S, Yamamoto M, Severson K, Ruhn K, Yu X, Koren O, et al. The antibacterial lectin RegIIIgamma promotes the spatial
segregation of microbiota and host in the intestine. Science. 2011;334:255-8 PMID 21998396 CrossRef

22. Edery P, Marcaillou C, Sahbatou M, Labalme A, Chastang J, Touraine R, et al. Association of TALS developmental disorder with
defect in minor splicing component U4atac snRNA. Science. 2011;332:240-3 PMID 21474761 CrossRef

23. John K, Ragavan N, Pratt M, Singh P, Al-Buheissi S, Matanhelia S, et al. Quantification of phase I/II metabolizing enzyme gene
expression and polycyclic aromatic hydrocarbon-DNA adduct levels in human prostate. Prostate. 2009;69:505-19 PMID 19143007
CrossRef

24. Woolcott C, Maskarinec G, Haiman C, Verheus M, Pagano I, Le Marchand L, et al. Association between breast cancer susceptibility
loci and mammographic density: the Multiethnic Cohort. Breast Cancer Res. 2009;11:R10 PMID 19232126 CrossRef

25. Broberg K, Huynh E, Schläwicke Engström K, Bjork J, Albin M, Ingvar C, et al. Association between polymorphisms in RMI1, TOP3A,
and BLM and risk of cancer, a case-control study. BMC Cancer. 2009;9:140 PMID 19432957 CrossRef

26. Tyner J, Erickson H, Deininger M, Willis S, Eide C, Levine R, et al. High-throughput sequencing screen reveals novel, transforming
RAS mutations in myeloid leukemia patients. Blood. 2009;113:1749-55 PMID 19075190 CrossRef

27. Seo J, Yaneva R, Hinson E, Cresswell P. Human cytomegalovirus directly induces the antiviral protein viperin to enhance infectivity.
Science. 2011;332:1093-7 PMID 21527675 CrossRef

28. Modi B, Neustadter J, Binda E, Lewis J, Filler R, Roberts S, et al. Langerhans cells facilitate epithelial DNA damage and squamous
cell carcinoma. Science. 2012;335:104-8 PMID 22223807 CrossRef

29. King B, Gillis J, Carlisle H, Dahn R. A natural deletion of the HoxC cluster in elasmobranch fishes. Science. 2011;334:1517 PMID
22174244 CrossRef

30. Lowden M, Flibotte S, Moerman D, Ahmed S. DNA synthesis generates terminal duplications that seal end-to-end chromosome
fusions. Science. 2011;332:468-71 PMID 21512032 CrossRef

31. Ascunce M, Yang C, Oakey J, Calcaterra L, Wu W, Shih C, et al. Global invasion history of the fire ant Solenopsis invicta. Science.
2011;331:1066-8 PMID 21350177 CrossRef

32. Campbell C, Edwards R, Carmona C, Uhart M, Wand G, Carteret A, et al. Polymorphisms in the GTP cyclohydrolase gene (GCH1)
are associated with ratings of capsaicin pain. Pain. 2009;141:114-8 PMID 19081190 CrossRef

33. Cornejo M, Kharas M, Werneck M, Le Bras S, Moore S, Ball B, et al. Constitutive JAK3 activation induces lymphoproliferative
syndromes in murine bone marrow transplantation models. Blood. 2009;113:2746-54 PMID 19139084 CrossRef

34. Park J, Kim G, Kim S, Ko J, Lee J, Yoo H. Effects of a chemical chaperone on genetic mutations in alpha-galactosidase A in Korean
patients with Fabry disease. Exp Mol Med. 2009;41:1-7 PMID 19287194
35. Meredith R, Janecka J, Gatesy J, Ryder O, Fisher C, Teeling E, et al. Impacts of the Cretaceous Terrestrial Revolution and KPg
extinction on mammal diversification. Science. 2011;334:521-4 PMID 21940861 CrossRef

36. Kim Y, McBride J, Kimlin L, Pae E, Deshpande A, Wong D. Targeted inactivation of p12, CDK2 associating protein 1, leads to early
embryonic lethality. PLoS ONE. 2009;4:e4518 PMID 19229340 CrossRef

37. Lesku J, Rattenborg N, Valcu M, Vyssotski A, Kuhn S, Kuemmeth F, et al. Adaptive sleep loss in polygynous pectoral sandpipers.
Science. 2012;337:1654-8 PMID 22878501

38. Kerkis I, Ambrosio C, Kerkis A, Martins D, Zucconi E, Fonseca S, et al. Early transplantation of human immature dental pulp stem
cells from baby teeth to golden retriever muscular dystrophy (GRMD) dogs: Local or systemic?. J Transl Med. 2008;6:35 PMID
18598348 CrossRef

39. Schröder J, Lüllmann-Rauch R, Himmerkus N, Pleines I, Nieswandt B, Orinska Z, et al. Deficiency of the tetraspanin CD63
associated with kidney pathology but normal lysosomal function. Mol Cell Biol. 2009;29:1083-94 PMID 19075008 CrossRef

40. Rulli S, Mirro J, Hill S, Lloyd P, Gorelick R, Coffin J, et al. Interactions of murine APOBEC3 and human APOBEC3G with murine
leukemia viruses. J Virol. 2008;82:6566-75 PMID 18448535 CrossRef

41. Kron K, Pethe V, Briollais L, Sadikovic B, Ozcelik H, Sunderji A, et al. Discovery of novel hypermethylated genes in prostate cancer
using genomic CpG island microarrays. PLoS ONE. 2009;4:e4830 PMID 19283074 CrossRef

42. Jang T, Oak C, Chang H, Suo S, Jung M. EGFR and KRAS mutations in patients with adenocarcinoma of the lung. Korean J Intern
Med. 2009;24:48-54 PMID 19270482 CrossRef

43. Ozturk N, Lee J, Gaddameedhi S, Sancar A. Loss of cryptochrome reduces cancer risk in p53 mutant mice. Proc Natl Acad Sci U S
A. 2009;106:2841-6 PMID 19188586 CrossRef

44. Con S, Takeuchi H, Con-Chin G, Con-Chin V, Yasuda N, Con-Wong R. Role of bacterial and genetic factors in gastric cancer in Costa
Rica. World J Gastroenterol. 2009;15:211-8 PMID 19132772

45. Fischer M, Suttle C. A virophage at the origin of large DNA transposons. Science. 2011;332:231-4 PMID 21385722 CrossRef

46. Login F, Balmand S, Vallier A, Vincent-Monegat C, Vigneron A, Weiss-Gayet M, et al. Antimicrobial peptides keep insect
endosymbionts under control. Science. 2011;334:362-5 PMID 22021855 CrossRef

47. Ogino S, Kawasaki T, Nosho K, Ohnishi M, Suemoto Y, Kirkner G, et al. LINE-1 hypomethylation is inversely associated with
microsatellite instability and CpG island methylator phenotype in colorectal cancer. Int J Cancer. 2008;122:2767-73 PMID 18366060
CrossRef

48. Li M, Wang I, Li Y, Bruzel A, Richards A, Toung J, et al. Widespread RNA and DNA sequence differences in the human transcriptome.
Science. 2011;333:53-8 PMID 21596952 CrossRef

49. Niewiadomska A, Gifford R. The extraordinary evolutionary history of the reticuloendotheliosis viruses. PLoS Biol. 2013;11:e1001642
PMID 24013706 CrossRef

http://www.labome.com.br/method/DNA-Extraction-and-Purification.html 13/16
09/08/2017 Extração e purificação de DNA
50. Varenhorst C, James S, Erlinge D, Brandt J, Braun O, Man M, et al. Genetic variation of CYP2C19 affects both pharmacokinetic and
pharmacodynamic responses to clopidogrel but not prasugrel in aspirin-treated patients with coronary artery disease. Eur Heart J.
2009;30:1744-52 PMID 19429918 CrossRef

51. Oshikawa M, Usami R, Kato S. Characterization of the arylsulfatase I (ARSI) gene preferentially expressed in the human retinal
pigment epithelium cell line ARPE-19. Mol Vis. 2009;15:482-94 PMID 19262745
52. Le Clorennec C, Ouk T, Youlyouz-Marfak I, Panteix S, Martin C, Rastelli J, et al. Molecular basis of cytotoxicity of Epstein-Barr virus
(EBV) latent membrane protein 1 (LMP1) in EBV latency III B cells: LMP1 induces type II ligand-independent autoactivation of
CD95/Fas with caspase 8-mediated apoptosis. J Virol. 2008;82:6721-33 PMID 18448526 CrossRef

53. Ramírez S, Eltz T, Fujiwara M, Gerlach G, Goldman-Huertas B, Tsutsui N, et al. Asynchronous diversification in a specialized plant-
pollinator mutualism. Science. 2011;333:1742-6 PMID 21940893 CrossRef

54. Li X, Wang X, He K, Ma Y, Su N, He H, et al. High-resolution mapping of epigenetic modifications of the rice genome uncovers
interplay between DNA methylation, histone methylation, and gene expression. Plant Cell. 2008;20:259-76 PMID 18263775 CrossRef

55. Kiers E, Duhamel M, Beesetty Y, Mensah J, Franken O, Verbruggen E, et al. Reciprocal rewards stabilize cooperation in the
mycorrhizal symbiosis. Science. 2011;333:880-2 PMID 21836016 CrossRef

56. Zhao X, Harashima H, Dissmeyer N, Pusch S, Weimer A, Bramsiepe J, et al. A general G1/S-phase cell-cycle control module in the
flowering plant Arabidopsis thaliana. PLoS Genet. 2012;8:e1002847 PMID 22879821 CrossRef

57. Waters M, Brewer P, Bussell J, Smith S, Beveridge C. The Arabidopsis ortholog of rice DWARF27 acts upstream of MAX1 in the
control of plant development by strigolactones. Plant Physiol. 2012;159:1073-85 PMID 22623516 CrossRef

58. Prasad K, Song B, Olson-Manning C, Anderson J, Lee C, Schranz M, et al. A gain-of-function polymorphism controlling complex traits
and fitness in nature. Science. 2012;337:1081-4 PMID 22936775 CrossRef

59. Hashimoto S, Boissel S, Zarhrate M, Rio M, Munnich A, Egly J, et al. MED23 mutation links intellectual disability to dysregulation of
immediate early gene expression. Science. 2011;333:1161-3 PMID 21868677 CrossRef

60. Chakraborty S, Mohiyuddin S, Gopinath K, Kumar A. Involvement of TSC genes and differential expression of other members of the
mTOR signaling pathway in oral squamous cell carcinoma. BMC Cancer. 2008;8:163 PMID 18538015 CrossRef

61. Suchodolski P, Izumiya Y, Lupiani B, Ajithdoss D, Gilad O, Lee L, et al. Homodimerization of Marek's disease virus-encoded Meq
protein is not sufficient for transformation of lymphocytes in chickens. J Virol. 2009;83:859-69 PMID 18971275 CrossRef

62. Zhang Q, Lambert G, Liao D, Kim H, Robin K, Tung C, et al. Acceleration of emergence of bacterial antibiotic resistance in connected
microenvironments. Science. 2011;333:1764-7 PMID 21940899 CrossRef

63. Manceau M, Domingues V, Mallarino R, Hoekstra H. The developmental role of Agouti in color pattern evolution. Science.
2011;331:1062-5 PMID 21350176 CrossRef

64. Solomon D, Kim T, Diaz-Martinez L, Fair J, Elkahloun A, Harris B, et al. Mutational inactivation of STAG2 causes aneuploidy in human
cancer. Science. 2011;333:1039-43 PMID 21852505 CrossRef

65. Pavicic W, Laguens M, Richard S. Analysis association between mitochondrial genome instability and xenobiotic metabolizing genes
in human breast cancer. Mol Med. 2009;15:160-5 PMID 19287511 CrossRef

66. Auner V, Kriegshäuser G, Tong D, Horvat R, Reinthaller A, Mustea A, et al. KRAS mutation analysis in ovarian samples using a high
sensitivity biochip assay. BMC Cancer. 2009;9:111 PMID 19358724 CrossRef

67. Paprotka T, Delviks-Frankenberry K, Cingoz O, Martinez A, Kung H, Tepper C, et al. Recombinant origin of the retrovirus XMRV.
Science. 2011;333:97-101 PMID 21628392 CrossRef

68. Iyer G, Hanrahan A, Milowsky M, Al-Ahmadie H, Scott S, Janakiraman M, et al. Genome sequencing identifies a basis for everolimus
sensitivity. Science. 2012;338:221 PMID 22923433 CrossRef

69. Gilchrist D, Nechaev S, Lee C, Ghosh S, Collins J, Li L, et al. NELF-mediated stalling of Pol II can enhance gene expression by
blocking promoter-proximal nucleosome assembly. Genes Dev. 2008;22:1921-33 PMID 18628398 CrossRef

70. Thomas V, Samanta S, Fikrig E. Anaplasma phagocytophilum increases cathepsin L activity, thereby globally influencing neutrophil
function. Infect Immun. 2008;76:4905-12 PMID 18765732 CrossRef

71. Algar E, Muscat A, Dagar V, Rickert C, Chow C, Biegel J, et al. Imprinted CDKN1C is a tumor suppressor in rhabdoid tumor and
activated by restoration of SMARCB1 and histone deacetylase inhibitors. PLoS ONE. 2009;4:e4482 PMID 19221586 CrossRef

72. Esteve P, Chin H, Benner J, Feehery G, Samaranayake M, Horwitz G, et al. Regulation of DNMT1 stability through SET7-mediated
lysine methylation in mammalian cells. Proc Natl Acad Sci U S A. 2009;106:5076-81 PMID 19282482 CrossRef

73. Frappart P, Lee Y, Russell H, Chalhoub N, Wang Y, Orii K, et al. Recurrent genomic alterations characterize medulloblastoma arising
from DNA double-strand break repair deficiency. Proc Natl Acad Sci U S A. 2009;106:1880-5 PMID 19164512 CrossRef

74. Stransky N, Egloff A, Tward A, Kostic A, Cibulskis K, Sivachenko A, et al. The mutational landscape of head and neck squamous cell
carcinoma. Science. 2011;333:1157-60 PMID 21798893 CrossRef

75. Iverson V, Morris R, Frazar C, Berthiaume C, Morales R, Armbrust E. Untangling genomes from metagenomes: revealing an
uncultured class of marine Euryarchaeota. Science. 2012;335:587-90 PMID 22301318 CrossRef

76. Ghosh R, Andersen E, Shapiro J, Gerke J, Kruglyak L. Natural variation in a chloride channel subunit confers avermectin resistance
in C. elegans. Science. 2012;335:574-8 PMID 22301316 CrossRef

77. Vicoso B, Emerson J, Zektser Y, Mahajan S, Bachtrog D. Comparative sex chromosome genomics in snakes: differentiation,
evolutionary strata, and lack of global dosage compensation. PLoS Biol. 2013;11:e1001643 PMID 24015111 CrossRef

78. Goldoni S, Seidler D, Heath J, Fassan M, Baffa R, Thakur M, et al. An antimetastatic role for decorin in breast cancer. Am J Pathol.
2008;173:844-55 PMID 18688028 CrossRef

79. Gandhi J, Zhang J, Xie Y, Soh J, Shigematsu H, Zhang W, et al. Alterations in genes of the EGFR signaling pathway and their
relationship to EGFR tyrosine kinase inhibitor sensitivity in lung cancer cell lines. PLoS ONE. 2009;4:e4576 PMID 19238210 CrossRef

80. Mitchell R, Lee S, Randazzo W, Simmons Z, Connor J. Influence of HFE variants and cellular iron on monocyte chemoattractant
protein-1. J Neuroinflammation. 2009;6:6 PMID 19228389 CrossRef

81. Liang S, Yang N, Pan Y, Deng S, Lin X, Yang X, et al. Expression of activated PIK3CA in ovarian surface epithelium results in
hyperplasia but not tumor formation. PLoS ONE. 2009;4:e4295 PMID 19172191 CrossRef

82. Yap O, Bhat G, Liu L, Tollefsbol T. Epigenetic modifications of the Estrogen receptor beta gene in epithelial ovarian cancer cells.
Anticancer Res. 2009;29:139-44 PMID 19331143

83. Imaeda A, Watanabe A, Sohail M, Mahmood S, Mohamadnejad M, Sutterwala F, et al. Acetaminophen-induced hepatotoxicity in mice
is dependent on Tlr9 and the Nalp3 inflammasome. J Clin Invest. 2009;119:305-14 PMID 19164858 CrossRef

84. Zampieri M, Passananti C, Calabrese R, Perilli M, Corbi N, De Cave F, et al. Parp1 localizes within the Dnmt1 promoter and protects
its unmethylated state by its enzymatic activity. PLoS ONE. 2009;4:e4717 PMID 19262751 CrossRef

85. Humann J, Ziemkiewicz H, Yurgel S, Kahn M. Regulatory and DNA repair genes contribute to the desiccation resistance of
Sinorhizobium meliloti Rm1021. Appl Environ Microbiol. 2009;75:446-53 PMID 19028909 CrossRef

http://www.labome.com.br/method/DNA-Extraction-and-Purification.html 14/16
09/08/2017 Extração e purificação de DNA
86. Parvanov E, Petkov P, Paigen K. Prdm9 controls activation of mammalian recombination hotspots. Science. 2010;327:835 PMID
20044538 CrossRef

87. Pan F, Yu H, Dang E, Barbi J, Pan X, Grosso J, et al. Eos mediates Foxp3-dependent gene silencing in CD4+ regulatory T cells.
Science. 2009;325:1142-6 PMID 19696312 CrossRef

88. Mokkonen M, Kokko H, Koskela E, Lehtonen J, Mappes T, Martiskainen H, et al. Negative frequency-dependent selection of sexually
antagonistic alleles in Myodes glareolus. Science. 2011;334:972-4 PMID 22096197 CrossRef

89. Pastore E, Perrone F, Orsenigo M, Mariani L, Millefanti C, Riccio S, et al. Polymorphisms of Metabolizing Enzymes and Susceptibility
to Ethmoid Intestinal-type Adenocarcinoma in Professionally Exposed Patients. Transl Oncol. 2009;2:84-8 PMID 19412423

90. Snelgrove R, Jackson P, Hardison M, Noerager B, Kinloch A, Gaggar A, et al. A critical role for LTA4H in limiting chronic pulmonary
neutrophilic inflammation. Science. 2010;330:90-4 PMID 20813919 CrossRef

91. Ramachandran V, Ismail P, Stanslas J, Shamsudin N. Analysis of renin-angiotensin aldosterone system gene polymorphisms in
Malaysian essential hypertensive and type 2 diabetic subjects. Cardiovasc Diabetol. 2009;8:11 PMID 19243623 CrossRef

92. Agrawal N, Frederick M, Pickering C, Bettegowda C, Chang K, Li R, et al. Exome sequencing of head and neck squamous cell
carcinoma reveals inactivating mutations in NOTCH1. Science. 2011;333:1154-7 PMID 21798897 CrossRef

93. Mäkinen N, Mehine M, Tolvanen J, Kaasinen E, Li Y, Lehtonen H, et al. MED12, the mediator complex subunit 12 gene, is mutated at
high frequency in uterine leiomyomas. Science. 2011;334:252-5 PMID 21868628 CrossRef

94. Shibata Y, Kumar P, Layer R, Willcox S, Gagan J, Griffith J, et al. Extrachromosomal microDNAs and chromosomal microdeletions in
normal tissues. Science. 2012;336:82-6 PMID 22403181 CrossRef

95. Berarducci B, Rajamani J, Reichelt M, Sommer M, Zerboni L, Arvin A. Deletion of the first cysteine-rich region of the varicella-zoster
virus glycoprotein E ectodomain abolishes the gE and gI interaction and differentially affects cell-cell spread and viral entry. J Virol.
2009;83:228-40 PMID 18945783 CrossRef

96. Corlazzoli F, Rossetti S, Bistulfi G, Ren M, Sacchi N. Derangement of a factor upstream of RARalpha triggers the repression of a
pleiotropic epigenetic network. PLoS ONE. 2009;4:e4305 PMID 19173001 CrossRef

97. Kannan T, Musatovova O, Gowda P, Baseman J. Characterization of a unique ClpB protein of Mycoplasma pneumoniae and its
impact on growth. Infect Immun. 2008;76:5082-92 PMID 18779336 CrossRef

98. Wagner D, Wang I, Reddien P. Clonogenic neoblasts are pluripotent adult stem cells that underlie planarian regeneration. Science.
2011;332:811-6 PMID 21566185 CrossRef

99. Ansari A, Talat N, Jamil B, Hasan Z, Razzaki T, Dawood G, et al. Cytokine gene polymorphisms across tuberculosis clinical spectrum
in Pakistani patients. PLoS ONE. 2009;4:e4778 PMID 19274101 CrossRef

100. Beck H, Semisch M, Culmsee C, Plesnila N, Hatzopoulos A. Egr-1 regulates expression of the glial scar component phosphacan in
astrocytes after experimental stroke. Am J Pathol. 2008;173:77-92 PMID 18556777 CrossRef

101. Björklund P, Lindberg D, Akerstrom G, Westin G. Stabilizing mutation of CTNNB1/beta-catenin and protein accumulation analyzed in
a large series of parathyroid tumors of Swedish patients. Mol Cancer. 2008;7:53 PMID 18541010 CrossRef

102. Lee S, Kim J, Jang S, Kim D, Do Y, Suh G, et al. Clinical features and mutations in the ENG, ACVRL1, and SMAD4 genes in Korean
patients with hereditary hemorrhagic telangiectasia. J Korean Med Sci. 2009;24:69-76 PMID 19270816 CrossRef

103. Yoon H, Chin H, Na K, Chae D, Kim S, Jeon U, et al. Association of angiotensin II type 2 receptor gene A1818T polymorphism with
progression of immunoglobulin A nephropathy in Korean patients. J Korean Med Sci. 2009;24:S38-43 PMID 19194560 CrossRef

104. Miller S, Dykes D, Polesky H. A simple salting out procedure for extracting DNA from human nucleated cells. Nucleic Acids Res.
1988;16:1215 PMID 3344216

105. Schmitz R, Schultz M, Lewsey M, O'Malley R, Urich M, Libiger O, et al. Transgenerational epigenetic instability is a source of novel
methylation variants. Science. 2011;334:369-73 PMID 21921155 CrossRef

106. Booth M, Branco M, Ficz G, Oxley D, Krueger F, Reik W, et al. Quantitative sequencing of 5-methylcytosine and 5-
hydroxymethylcytosine at single-base resolution. Science. 2012;336:934-7 PMID 22539555 CrossRef

107. Tenaillon O, Rodríguez-Verdugo A, Gaut R, McDonald P, Bennett A, Long A, et al. The molecular diversity of adaptive convergence.
Science. 2012;335:457-61 PMID 22282810 CrossRef

108. Li H, Smolen G, Beers L, Xia L, Gerald W, Wang J, et al. Adenosine transporter ENT4 is a direct target of EWS/WT1 translocation
product and is highly expressed in desmoplastic small round cell tumor. PLoS ONE. 2008;3:e2353 PMID 18523561 CrossRef

109. Beyhan S, Gutiérrez M, Voorhies M, Sil A. A temperature-responsive network links cell shape and virulence traits in a primary fungal
pathogen. PLoS Biol. 2013;11:e1001614 PMID 23935449 CrossRef

110. Figueroa M, Reimers M, Thompson R, Ye K, Li Y, Selzer R, et al. An integrative genomic and epigenomic approach for the study of
transcriptional regulation. PLoS ONE. 2008;3:e1882 PMID 18365023 CrossRef

111. Zafar G, Grimm E, Wei W, Johnson M, Ellerhorst J. Genetic deficiency of complement isoforms C4A or C4B predicts improved
survival of metastatic renal cell carcinoma. J Urol. 2009;181:1028-34; discussion 1034 PMID 19150565 CrossRef

112. Maher C, Kumar-Sinha C, Cao X, Kalyana-Sundaram S, Han B, Jing X, et al. Transcriptome sequencing to detect gene fusions in
cancer. Nature. 2009;458:97-101 PMID 19136943 CrossRef

113. Greene J, Moormann A, Vulule J, Bockarie M, Zimmerman P, Kazura J. Toll-like receptor polymorphisms in malaria-endemic
populations. Malar J. 2009;8:50 PMID 19317913 CrossRef

114. Birgani S, Salehi Z, Houshmand M, Mohamadi M, Promehr L, Mozafarzadeh Z. Novel mutations of CHST6 in Iranian patients with
macular corneal dystrophy. Mol Vis. 2009;15:373-7 PMID 19223992

115. Kelley R, Ren R, Pi X, Wu Y, Moreno I, Willis M, et al. A concentration-dependent endocytic trap and sink mechanism converts Bmper
from an activator to an inhibitor of Bmp signaling. J Cell Biol. 2009;184:597-609 PMID 19221194 CrossRef

116. Yoshizaki T, Milne J, Imamura T, Schenk S, Sonoda N, Babendure J, et al. SIRT1 exerts anti-inflammatory effects and improves
insulin sensitivity in adipocytes. Mol Cell Biol. 2009;29:1363-74 PMID 19103747 CrossRef

117. Liu M, Naka H, Crosa J. HlyU acts as an H-NS antirepressor in the regulation of the RTX toxin gene essential for the virulence of the
human pathogen Vibrio vulnificus CMCP6. Mol Microbiol. 2009;72:491-505 PMID 19320834 CrossRef

118. Pinheiro V, Taylor A, Cozens C, Abramov M, Renders M, Zhang S, et al. Synthetic genetic polymers capable of heredity and
evolution. Science. 2012;336:341-4 PMID 22517858 CrossRef

119. Winzer T, Gazda V, He Z, Kaminski F, Kern M, Larson T, et al. A Papaver somniferum 10-gene cluster for synthesis of the anticancer
alkaloid noscapine. Science. 2012;336:1704-8 PMID 22653730 CrossRef

120. Bujalka H, Koenning M, Jackson S, Perreau V, Pope B, Hay C, et al. MYRF Is a Membrane-Associated Transcription Factor That
Autoproteolytically Cleaves to Directly Activate Myelin Genes. PLoS Biol. 2013;11:e1001625 PMID 23966833 CrossRef

121. Kerenyi M, Shao Z, Hsu Y, Guo G, Luc S, O'Brien K, et al. Histone demethylase Lsd1 represses hematopoietic stem and progenitor
cell signatures during blood cell maturation. elife. 2013;2:e00633 PMID 23795291 CrossRef

http://www.labome.com.br/method/DNA-Extraction-and-Purification.html 15/16
09/08/2017 Extração e purificação de DNA
122. Rasmussen M, Guo X, Wang Y, Lohmueller K, Rasmussen S, Albrechtsen A, et al. An Aboriginal Australian genome reveals separate
human dispersals into Asia. Science. 2011;334:94-8 PMID 21940856 CrossRef

123. Schneider D, Manzan M, Crawford R, Chen W, Kaminski N. 2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-p-dioxin-mediated impairment of B cell


differentiation involves dysregulation of paired box 5 (Pax5) isoform, Pax5a. J Pharmacol Exp Ther. 2008;326:463-74 PMID 18483191
CrossRef

124. Muegge B, Kuczynski J, Knights D, Clemente J, Gonzalez A, Fontana L, et al. Diet drives convergence in gut microbiome functions
across mammalian phylogeny and within humans. Science. 2011;332:970-4 PMID 21596990 CrossRef

125. Che X, Reichelt M, Sommer M, Rajamani J, Zerboni L, Arvin A. Functions of the ORF9-to-ORF12 gene cluster in varicella-zoster virus
replication and in the pathogenesis of skin infection. J Virol. 2008;82:5825-34 PMID 18400847 CrossRef

126. Ramos E, Camargo A, Braun K, Slowik R, Cavalli I, Ribeiro E, et al. Simultaneous CXCL12 and ESR1 CpG island hypermethylation
correlates with poor prognosis in sporadic breast cancer. BMC Cancer. 2010;10:23 PMID 20109227 CrossRef

127. Wochner A, Attwater J, Coulson A, Holliger P. Ribozyme-catalyzed transcription of an active ribozyme. Science. 2011;332:209-12
PMID 21474753 CrossRef

128. McNulty N, Wu M, Erickson A, Pan C, Erickson B, Martens E, et al. Effects of Diet on Resource Utilization by a Model Human Gut
Microbiota Containing Bacteroides cellulosilyticus WH2, a Symbiont with an Extensive Glycobiome. PLoS Biol. 2013;11:e1001637
PMID 23976882 CrossRef

129. Chang K, Zhong S, Weirauch M, Hon G, Pelizzola M, Li H, et al. Temporal transcriptional response to ethylene gas drives growth
hormone cross-regulation in Arabidopsis. elife. 2013;2:e00675 PMID 23795294 CrossRef

130. Li F, Vallabhaneni R, Yu J, Rocheford T, Wurtzel E. The maize phytoene synthase gene family: overlapping roles for carotenogenesis
in endosperm, photomorphogenesis, and thermal stress tolerance. Plant Physiol. 2008;147:1334-46 PMID 18508954 CrossRef

131. Foley J, Yeh J, Maeder M, Reyon D, Sander J, Peterson R, et al. Rapid mutation of endogenous zebrafish genes using zinc finger
nucleases made by Oligomerized Pool ENgineering (OPEN). PLoS ONE. 2009;4:e4348 PMID 19198653 CrossRef

132. Bettegowda C, Agrawal N, Jiao Y, Sausen M, Wood L, Hruban R, et al. Mutations in CIC and FUBP1 contribute to human
oligodendroglioma. Science. 2011;333:1453-5 PMID 21817013 CrossRef

133. Swan B, Martinez-Garcia M, Preston C, Sczyrba A, Woyke T, Lamy D, et al. Potential for chemolithoautotrophy among ubiquitous
bacteria lineages in the dark ocean. Science. 2011;333:1296-300 PMID 21885783 CrossRef

134. Floudas D, Binder M, Riley R, Barry K, Blanchette R, Henrissat B, et al. The Paleozoic origin of enzymatic lignin decomposition
reconstructed from 31 fungal genomes. Science. 2012;336:1715-9 PMID 22745431 CrossRef

135. Zhang Y, Xie Y, Berglund E, Coate K, He T, Katafuchi T, et al. The starvation hormone, fibroblast growth factor-21, extends lifespan in
mice. elife. 2012;1:e00065 PMID 23066506

136. Church G, Gao Y, Kosuri S. Next-generation digital information storage in DNA. Science. 2012;337:1628 PMID 22903519

137. Choate K, Lu Y, Zhou J, Choi M, Elias P, Farhi A, et al. Mitotic recombination in patients with ichthyosis causes reversion of dominant
mutations in KRT10. Science. 2010;330:94-7 PMID 20798280 CrossRef

138. Hsu P, Devisetty U, Harmer S. Accurate timekeeping is controlled by a cycling activator in Arabidopsis. elife. 2013;2:e00473 PMID
23638299 CrossRef

139. Naidu S, Friedrich J, Russell J, Zomerdijk J. TAF1B is a TFIIB-like component of the basal transcription machinery for RNA
polymerase I. Science. 2011;333:1640-2 PMID 21921199 CrossRef

140. He H, Liyanarachchi S, Akagi K, Nagy R, Li J, Dietrich R, et al. Mutations in U4atac snRNA, a component of the minor spliceosome,
in the developmental disorder MOPD I. Science. 2011;332:238-40 PMID 21474760 CrossRef

141. Brown C, Mao C, Falkovskaia E, Jurica M, Boeger H. Linking stochastic fluctuations in chromatin structure and gene expression.
PLoS Biol. 2013;11:e1001621 PMID 23940458 CrossRef

ISSN : 2329-5139

last updated:2013-11-27

http://www.labome.com.br/method/DNA-Extraction-and-Purification.html 16/16

S-ar putea să vă placă și