PRÁCTICA N° 4 SEMANA N° 4

METABOLISMO DE CARBOHIDRATOS
I.- Introducción:

Las células se encuentran en un estado de actividad incesante. Para mantenerse "vivas", las
células dependen de reacciones bioquímicas complejas y muy coordinadas. Los carbohidratos
son una fuente importante de la energía que impulsa estas reacciones. En la clase N°03 del
silabo de bioquímica se explicó las vías de generación de energía en el metabolismo de los
carbohidratos. Durante la glucólisis, una vía antigua que se encuentra en casi todos los
organismos, se captura una cantidad pequeña de energía al convertir una molécula de glucosa
en dos moléculas de piruvato. El glucógeno, una forma de almacenamiento de glucosa en los
vertebrados, se sintetiza por glucogénesis cuando la concentración de glucosa es alta y se
degrada por glucogenólisis cuando el aporte de glucosa es insuficiente. La glucosa también
puede sintetizarse a partir de precursores distintos de los carbohidratos por medio de reacciones
denominadas gluconeogénesis. La vía de las pentosas fosfato permite a las células convertir la
glucosa-6-fosfato, un derivado de la glucosa, en ribosa-S-fosfato (el azúcar que se utiliza para
sintetizar los nucleótidos y los ácidos nucleicos) y en otras clases de monosacáridos. En esta vía
también se produce NADPH (fosfato de dinucleótido de nicotinamida y adenina), un agente
reductor celular importante. La síntesis y la utilización de la glucosa, el combustible principal de
la mayoría de los organismos, son el centro de cualquier exposición sobre el metabolismo de los
carbohidratos. En los vertebrados, la glucosa se transporta en la sangre por todo el cuerpo.
Cuando las reservas de energía celular son bajas, la glucosa se degrada por la vía glucolítica.
Las moléculas de glucosa que no se requieren para producir energía inmediata se almacenan en
forma de glucógeno en el hígado y en los músculos. La satisfacción de los requerimientos de
energía de muchos tejidos (ej. El encéfalo, los eritrocitos y las células de los músculos
esqueléticos en actividad) depende de un flujo ininterrumpido de glucosa. Según sean las
necesidades metabólicas de la célula, la glucosa también puede utilizarse para sintetizar, por
ejemplo, otros monosacáridos, ácidos grasos y determinados aminoácidos. En la Figura 8.1 se
resumen las principales vías del metabolismo de los carbohidratos en los animales
II.- Objetivos:
1.- Determinar la concentración de la glucosa basal.
2.- Enumerar alteraciones frecuentes de los carbohidratos

III.- Material y procedimientos

3.1.- Materiales y equipo
A. Material Biológico:
Sangre o suero de un paciente sano
Sangre o suero de un paciente con alteración de los carbohidratos
B. Material de vidrio
06 tubos de ensayo 13 x 100
02 tubos con EDTA
C. Reactivos
Kit de determinación de glucosa

D. Equipos e instrumentos
Baño maría a 37°C
Espectofotómetro
Centrífuga
Micropipetas
Gradillas
E. Otros
Guantes
Marcador indeleble
Torundas de algodón
Cubetas para espectofotómetro
Calculadora
3.2.- Procedimientos

Glicemia en ayuno (Wiener lab)

a) Obtener la muestra de sangre de una persona en ayuno de 8 horas
b) Obtener el suero, y centrifugar la muestra
c) Realizar la determinación de la glucosa de acuerdo al siguiente cuadro:

Tubo Blanco (B) Estándar (S) Muestra (D)

Muestra (suero) (uL) 10
Estándar (uL) 10
Reactivo de trabajo (uL) 1000 1000 1000
Mezclar e incubar 5 minutos a 37°C o 25 minutos a 15 – 25 °C y leer a 505 nm. llevando el
instrumento a cero con el blanco de reactivo. El color de la reacción es estable durante 30
minutos

Cálculos:
Glucosa (mg/dl) = Factor x Absorbancia de la muestra

Factor = 100/ Absorbancia del estandar

Valores de referencia: 70 – 110 mg/dl
 Glicemia postprandial (Wiener lab)
a) Después de analizar la muestra de sangre de una persona en ayuno, indicar a la
persona que ingiera desayuno consistente (pan con mantequilla y taza de avena)
b) Obtener el suero, y centrifugar la muestra
c) Realizar la determinación de la glucosa de acuerdo al siguiente cuadro:

Tubo Blanco (B) Estándar (S) Muestra (D)

Muestra (suero) (uL) 10
Estándar (uL) 10
Reactivo de trabajo (uL) 1000 1000 1000
Mezclar e incubar 5 minutos a 37°C o 25 minutos a 15 – 25 °C y leer a 505 nm. llevando el
instrumento a cero con el blanco de reactivo. El color de la reacción es estable durante 30
minutos

Cálculos:
Glucosa (mg/dl) = Factor x Absorbancia de la muestra

Factor = 100/ Absorbancia del estandar

Valores de referencia 2 horas postprandial: 70-140 mg/dl

IV.- Resultados

V.- Fundamento de la prueba

5.1.- Metodología
La glucosa, presente en el suero sanguíneo es oxidada por la glucosa oxidasa (GOD) a ácido
glucónico y agua oxigenada. El peróxido de hidrógeno, en presencia de peroxidasa (POD)
produce la unión oxidativa del fenol con la 4-aminofenazona, presentes en el reactivo de trabajo,
dando lugar a la formación de un cromógeno rojo-cereza con absorbancia máxima a 505 nm.
La reacción es la siguiente:

Glucosa + O2 + H2O --------- GOD--- ácido glucónico + H2O2

2H2O2 + 4 AF + fenol --------- POD-- quinona coloreada + 4 H2O
La quinona coloraeda es la 4 (p-benzoquinona-monoimino fenazona)

5.2 Aplicación clínica.-

GLICEMIA: Al ingerir alimentos, el nivel de glucosa en la sangre aumenta, y por señales
químicas se secreta insulina (hormona reguladora) desde el páncreas y hace que la glucosa
entre a los tejidos y sea usada en forma de glucógeno, ácidos grasos y aminoácidos.
Gracias a la actividad hormonal, los adipocitos, las células musculares y los hepatocitos captan la glucosa
sanguínea. La insulina controla el consumo y la movilización de compuestos energéticos en el estado
postprandial, gracias a sus diversos efectos sobre las células sensibles a la hormona. Su efecto central es
permitir la entrada de glucosa a las células, en particular del hígado, tejido graso y músculo, para su
utilización ya sea en la vía oxidativa, en la cual da lugar a energía, agua y dióxido de carbono, o no
oxidativa, en la que la glucosa es almacenada como glucógeno hepático o muscular. Se considera que
hay una intolerancia a la glucosa cuando se sobrepasa esta concentración en condiciones postprandiales,
e hiperglucemia basal si la concentración de glucosa en ayunas está por encima de los valores normales.
Si la alteración es grave, se excretan cantidades elevadas de glucosa por la orina ya que se sobrepasa la
capacidad de los túbulos renales para reabsorberla. Esto lleva unido una sintomatología característica de
polidipsia, polifagia y poliuria. En una fase más avanzada, si el control no es adecuado pueden aparecer
micro o macroangiopatias. Este síndrome es definido como DIABETES y es el más común de los
desórdenes metabólicos, afectando al 5-10% de la población en los países occidentales. La diabetes
mellitus es un desorden metabólico crónico, caracterizado por niveles persistentemente elevados de
glucosa en sangre, como consecuencia de una alteración en la secreción y /o acción de la insulina, que
afecta además al metabolismo del resto de los hidratos de carbono, lípidos y proteínas. Hasta el momento
se han postulado varias clasificaciones de la diabetes, la última de las cuales fue emitida por un comité de
expertos internaciones, reunidos por la Asociación Americana de Diabetes (ADA), cuyos miembros
clasificaron la enfermedad con base en la etiología de la misma. Las normas de la ADA y de la
organización mundial de la Salud (OMS) recomendaron las siguientes categoría de diabetes: - Diabetes
tipo 1 - Diabetes tipo 2 - Diabetes mellitus gestacional (DMG) - Otros tipos de diabetes Si bien existen
varios tipos de diabetes, la gran mayoría de casos corresponde a dos clases principales; la diabetes
mellitus tipo 1 y la tipo 2 . En la primera, el evento patogénico más relevante es la destrucción masiva de
las células β del páncreas, de manera que la secreción de insulina es nula o insignificante. En la diabetes
tipo 2, la deficiencia hormonal no es tan marcada y el trastorno principal es la resistencia de los tejidos
periféricos a la acción de la hormona. La prueba bioquímica característica para el diagnóstico de la
diabetes es la determinación de glucosa en sangre. Se determina en condiciones basales o tras la
sobrecarga oral. La determinación de los niveles de glucosa en ayunas se considera de valor diagnóstico,
y como ya se ha indicado, niveles por encima de 126mg/dl son indicativos de diabetes. La determinación
de glucosa tras sobrecarga oral sirve para evaluar la tolerancia a la glucosa en aquellas personas que
tienen niveles basales intermedios entre los fisiológicos y diabéticos. Para ello se administra al paciente
75 gr de glucosa por vía oral y se determinan los niveles de glucosa en sangre a diferentes tiempos. En
un individuo normal se debe alcanzar el máximo entre 30 y 60 minutos; a partir de este momento se
produce un descenso gradual de forma que a los 120 minutos se regresa a valores basales. En los casos
de disminución de tolerancia a la glucosa estos valores están elevados aunque no existe una frontera
bien definida entre la respuesta fisiológica y la alterada. En general se considera que la concentración de
glucosa a los 120 minutos es el valor con mayor capacidad discriminante, lo que permite clasificar como
diabéticos a aquellos sujetos con valores mayores de 140 mg/dl.
La diabetes se relaciona con daños de la microcirculación, los cuales se pueden manifestar como
nefropatía, neuropatía y retinopatía. La hiperglucemia crónica se asocia con aumento en la actividad de la
proteína-cinasa-C, la acumulación de sorbitol y la formación y depósito de productos de glucosilación no
enzimática de las proteínas, estas alteraciones originan una insuficiencia renal crónica en el 40% de los
casos; también se estima que hasta 70% de los diabéticos sufren de alguna forma de neuropatía, y se
sabe que los sujetos con antecedentes familiares de hipertensión arterial desarrollan de manera temprana
complicaciones microvasculares. Las complicaciones que se han mencionado son similares para la
diabetes tipo 1 y tipo 2. Las anomalías macrovasculares se asocian con un trastorno metabólico originado
por la resistencia a la insulina más que por la hiperglucemia, en este sentido, se ha determinado que la
resistencia a la insulina induce un 40% de pacientes con enfermedades coronarias. En general, la
enfermedad cardiovascular está vinculada a un estado de ateroesclerosis acelerada y un mayor riesgo de
trombosis, lo que explica que el enfermo diabético tenga una frecuencia de infarto al miocardio 2 a 4
veces mayor que la población normal.

GLICEMIA EN AYUNO: La patología más común relacionada con el metabolismo de

los hidratos de carbono es la diabetes mellitus. El diagnóstico precoz y el control de los pacientes
diabéticos, tienen por objeto evitar la cetoacidosis y las complicaciones resultantes de la
hiperglicemia, mediante el tratamiento adecuado. Dado que existen múltiples factores causales
de hiper o hipoglicemia, debe considerarse en cada caso la condición fisiológica y/o la patología
presente en el paciente.

VI.- BIBLIOGRAFIA
María Isabel Múnera Jaramillo, M.D. Especialista en Microbiología y Parasitología
Médicas y Gerencia de la Salud Pública. Sandra Lucía Escobar Gómez, Bacterióloga del
Laboratorio Clínico de la Clínica Cardio VID
Publicación del Laboratorio Clínico VID y del Laboratorio Clínico de la Clínica Cardio VID ISSN
1794 – 7669 .Reimpresión marzo de 2007 . Medellín – Colombia
http://www.wienerlab.com.ar/VademecumDocumentos/Vademecum
%20espanol/glicemia_enzimatica_aa_liquida_sp.pdf