Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
METABOLISMUL MINERAL
1. Capacitatea de tamponare a serului
pH = -log [H+]
Soluțiile neutre: [H+] = 10-7, pH = 7
Soluțiile acide: [H+] > [OH-] > 10-7, 0 < pH < 7
Soluțiile alcaline/bazice: [H+] < [OH-] < 10-7, 7 < pH <14
pH sânge = 7,35 – 7,45 – scădere < 7,35 = acidoză (ex: DZ decompensat) ; creștere > 7,45 = alcaloză (ex:
hiperventilație pulmonară, vărsături prelungite) – pH < 6,9 sau pH > 7,9 => moarte
pH-ul se determină fie cu indicatori colorați și hârtie indicatoare de pH, fie electrometric cu pH-metrul
Soluția tampon = amestec chimic ce permite menținerea constantă a concentrației ionilor de hidrogen și
implicit a pH-ului, la adăugarea unei cantități limitate de acid sau bază
soluție tampon = acid slab + sarea unui acid slab cu o bază tare
= bază slabă + sarea unei baze slabe cu un acid tare
Capacitatea de tamponare = numărul de echivalenți de hidrogen (respectiv OH-) necesari pentru a schimba
pH-ul unui volum dat de tampon cu o unitate de pH
Cele mai folosite sisteme tampon conțin cantități egale de acid și baza sa conjugată
Cele mai multe sisteme tampon folosite în biochimie au pH = 6 – 8
În timpul funcționării sale, componentele sistemului tampon trec una în alta
Sistemele tampon ale organismului contribuie la menținerea constantă a pH-ului mediului intern:
bicarbonat – acid carbonic, hemoglobinei (deprotonată/protonată), proteinelor, fosfaților (HPO42-/H2PO4-)
Sistemul tampon bicarbonat – acid carbonic:
- raport [HCO3-]/[H2CO3] = 20:1
- raport [HCO3-]/pCO2 – scăzut => acidoză, crescut => alcaloză
Perturbări ale echilibrului acido-bazic cauzate de o modificare inițială a HCO3- => acidoză/alcaloză
metabolică
Acidoză respiratorie = acumulare de H2CO3 în sânge ca urmare a perturbării eliminărilor de CO2 de la
nivelul alveolelor pulmonare
Alcaloza respiratorie = viteză excesivă de eliminare a CO2
pH nemodificat => acidoză/alcaloză compensată
pH modificat => acidoză/alcaloză decompensată
Rezervă alcalină = totalitatea bazelor pe care sângele le utilizează ca sisteme tampon pentru neutralizarea
acizilor ajunși în circulație, în vederea menținerii pH-ului sanguin în limite fiziologice (bicarbonații
plasmatici)
Micrometoda ASTRUP: se bazează pe relația de invers proporționalitate dintre pCO2 și valorile pHsânge.
Ține cont de rolul tamponului realizat de hemoglobină și de intervenția anhidrazei carbonice eritrocitare.
Determinarea glicemiei se poate face fie prin metode nespecifice (cu o-toluidină), fie prin metode
enzimatice (cu hexokinaza și glucozo-6-fosfat-dehidrogenaza, cu glucozo-dehidrogenaza sau cu
glucozoxidaza)
Hemoglobina glicozilată rezultă din reacția de glicozilare lentă, neenzimatică dintre glucoză (care
pătrunde ușor în eritrocit) și aminoacidul valină de la capătul N-terminal al lanțurilor β ale Hb
Creșterea HbA1c este proporțională cu nivelul mediu al glicemiei în cursul ultimelor 2-3 luni anterioare
testării (corespunde duratei medii de viață a eritrocitelor) => se stabilește gradul de compensare al
hipergicemiei în perioada urmărită – evaluare și monitorizare pe termen lung a controlului glicemic la
pacienții cu DZ
Avantaje: nu necesită condițiile a jeun, stabilitate preanalitică mai mare, variație biologică individuală
scăzută, variații scăzute în condiții de stres și afecțiuni intercurente
Dezavantaje: costuri mai ridicate, lipsa de disponibilitate, lipsa de corelație cu glicemia medie la unele
persoane, irelevantă la pacienții cu turn-over eritrocitar anormal (se măsoară exclusiv glicemia)
Interpretare: - creșterea indică prezența unei hiperglicemii în ultimele 2-3 luni
- valorile crescute denotă DZ controlat deficitar sau nou diagnostificat
- nivelul poate crește până la 20% în cazul unui control glicemic deficitar
- scăderea are loc treptat, pe durata mai multor luni, pe măsură ce hematiile sunt înlocuite
Se poate determina prin: cromatografie, electroforeză, fotometrie și metode imunologice
Lipoproteinele plasmatice sunt forme de transport ale lipidelor din sânge. Transportă lipidele insolubile în
apă între diferite organe pe cale sanguină. Sunt formate dintr-o componentă lipidică (triacilgliceroli,
colesterol, fosfolipide) și o componentă proteică (apoproteine). Prezintă caracter hidrofil.
Lipoproteinele se separă prin:
Metode fizico-chimice:
- ultracentrifugare – bazată pe diferențele de densitate ale fracțiunilor lipoproteice în raport cu conținutul
lor în lipide și proteine => 4 fracțiuni: chilomicroni, VLDL, LDL și HDL
- electroforeză – migrarea în câmp electric => pre-β-lipoproteine (VLDL), β-lipoproteine (LDL) și α-
lipoproteine (HDL); chilomicronii nu migrează și nu apar în serul normal recoltat după 8-10 ore de post
- gel-filtrare
- precipitare cu anticorpi (apoproteinele complexelor)
Metode chimice:
- separarea HDL prin precipitare cu polianioni sau cationi bivalenți
- separarea LDL prin precipitare cu heparină la pH izoelectric de 5,12
Determinarea colesterolului total este recomandată pentru:
- monitorizarea factorilor de risc pentru boala coronariană
- screening-ul dislipidemiilor primare și secundare
- monitorizarea tratamentului dislipidemiilor
Cetogeneza = proces de transformare metabolică a acetil-CoA în corpi cetonici. Are loc exclusiv în ficat,
în mitocondriile hepatocitului => acid acetoacetic
Acetil-CoA poate proveni din acizi grași (beta oxidare), glucoză (catabolism aerob) și aminoacizi. Este
utilizată în sinteza de acizi grași și triacilgliceroli, în sinteza de colesterol și în cetogeneză.
Corpii cetonici sunt compuși ce se formează cu precădere în cursul catabolismului lipidic aflat în strânsă
legătură cu metabolismul glucidic. Corpii cetonici sunt: acidul acetoacetic, acidul β-hidroxibutiric și
acetona.
Acetoacetatul nu poate fi catabolizat în ficat, dar este utilizat energogen alături de β-hidroxibutirat de către
țesuturile extrahepatice (muscular scheletic, miocard, renal și nervos). Corpii cetonici sunt utilizați în
eforturi prelungite, foame sau în locul glucozei (necesară pentru alte țesuturi).
Acetona este caracteristică cetogenezei patologice. Este o substanță volatilă care se elimină prin plămâni
=> expirație specific mirositoare la diabetici.
Producția de corpi cetonici crește când există un deficit de insulină sau aportul de glucoză este scăzut
(inaniție). Mecanismul hiperproducției de corpi cetonici presupune o intensă lipoliză în țesutul adipos, cu
eliberare crescută de acizi grași utilizați apoi de țesuturi ca material energetic.
Diabetul zaharat = stare patologică caracterizată prin deficit relativ sau absolut de insulină cu prevalența
lipolizei în țesutul adipos și creșterea acizilor grași liberi în sânge => hipertriacilglicerolemie + cetonemie-
cetoză și infiltrație grasă.
Cetoza = stare patologică caracterizată prin sinteza hepatică crescută de acetoacetat ce depășește
capacitatea țesuturilor extrahepatice de a utiliza corpii cetonici => creșterea cetonemiei și apariția
cetonuriei. Corpii cetonici se elimină sub formă de săruri, consumând rezerva alcalină => acidoză.
Proteinele sunt catabolizate în prima etapă până la aminoacizi folosiți pe căi anabolice și catabolice. În
cazul catabolismului, în scopul utilizării scheletului lor hidrocarbonat, este necesar procesul de
dezaminare (oxidativă sau transaminare).
Transaminazele/aminotrasferazele = grup de enzime tisulare care au ca și grupare prostetică piridoxal-5-
fosfatul și catalizează interconversia unui aminoacid într-un α-cetoacid prin transferul grupării aminice
unui alt α-cetoacid. Transaminazele din sânge sunt de proveniență exclusiv intracelulară. Concentrația lor
serică crește în cazul producerii unei alterări a membranei celulare. Amplitudinea creșterii concentrației
depinde de: localizarea intracelulară și permeabilitatea membranelor celulare și mitocondriale, gradul de
vascularizare a organului lezat, solubilitatea enzimei și lichidul extracelular, viteza de catabolizae a
enzimei ajunsă în plasmă și numărul de celule lezate. Enzimele (transaminazele) sunt supuse permanent
unor procese de tranformare ce implică sinteza, activarea, inactivarea și catabolizarea lor. După ce ajung
în plasmă, activitatea lor scade rapid. Scăderea activității enzimate se poate datora inactivării enzimelor,
eliminării pe cale urinară și captării și degradării lor de către macrofage.
Prezintă importanță clinică deosebită: glutamat-oxalacetat transaminaza GOT/ASAT și glutamat-piruvat
transaminaza GPT/ALAT. Ele se pot determina prin metoda bazată pe reacții de culoare și prin testul
optic.
Testul optic este o metodă de determinare a activității enzimelor NAD sau NADP dependente. Se bazează
pe proprietatea NADH+H+ (NADPH+H+) de a absorbi intens radiația în UV, iar NADH nu aboarbe. Dacă
în reacția enzimatică se consumă NADH, extincția va scădea în timp. Dacă se formează NADH+H+,
extincția va crește. Creșterea sau scăderea absorbției de radiație este direct proporțională cu activitatea
enzimatică. Testul optic simplu este utilizat pentru enzimele NAD sau NADP dependente (ex:
dehidrogenarea lactatdehidrogenazei). Testul optic cuplat cu o reacție indicatoare se utilizează pentru
enzimele care nu sunt NAD sau NADP dependente. Unul din produșii de reacție este introdus într-o
reacție indicatoare catalizată de o enzimă NAD sau NADP dependentă. Testul optic mai poate fi cuplat cu
o reacție auxiliară și o reacție indicatoare.
Pentru evaluarea funcției renale se folosesc: ureea serică urinară, creatinina serică urinară, clearance-ul
creatininei endogene, acidul uric seric și cistadina C serică (uzual: ureea, creatinina serică, creatinina
urinară, clearance-ul creatininei endogene).
Ureea reprezintă modul de eliminare a NH4 din organism prin procesul de urogeneză din ficat. Ureea
rezultată ajunge în sânge. Eliminarea se face pe cale renală (calea principală), prin glandele sudoripare și
pe cale intestinală. Concentrația ureei serice este influențată de alimentație, medicamente, postură.
Creatinina rezultă din deshidratarea creatinei. Este produsă exclusiv în mușchi, prin urmare nu depinde
decât de masa musculară. Se elimină urinar. Este un indicator mai fidel pentru funcția renală decât ureea.
Valorile ureei serice se interpretează numai împreună cu valorile creatininei serice.
Hemoglobina se poate determina prin metode spectrometrice de absorbție, metode gazometrice sau
metode bazate pe determinarea fierului hemoglobinic. Cea mai avantajoasă, stabilă și recomandată metodă
este procesul de determinare după transformarea hemoglobinei în cianmethemoglobină.
Bilirubina provine din catabolismul hemului din hemoproteine. Bilirubina din sânge este prezentă sub 3
forme: neconjugată, conjugată și legată covalent de albumină. Bilirubina neconjugată este mai puțin
solubilă în apă decât celelalte. Bilirubina serică dă reacții lente și rapide.
Bilirubina directă = fracția de bilirubină care reacționează direct și rapid, în absența unui accelerator
- bilirubina conjugată ușor solubilă, fracția delta
Bilirubina indirectă = fracția de bilirubină care necesită un accelerator pentru ca reacția să devină rapidă
- bilirubina neconjugată
Acceleratorul solubilizează bilirubina neconjugată și crește disponibilitatea ei de a reacționa
Bilirubina totală = când bilirubina reacționează în prezența unui accelerator
Bilirubina totală – bilirubina conjugată = bilirubina neconjugată
Aplicație practică: Determinarea bilirubinei prin Metoda Jendrassik-Grof modificată (cu cafeină, acetat și
benzoat de sodiu)
Principiu: bilirubină + acid sulfanilic diazotat -----> colorant azoic
Bilirubina directă reacționează direct, iar cea totală se determină după adaosul unui accelerator și a unei
soluții alcaline de sare de Seignette. Bilirubina indirectă se determină prin diferență.
Interferențe: hemoliza => valori fals scăzute; serurile lipemice (turbiditate) => valori fals crescute;
bilirubina este distrusă de lumină și căldură.
Valori normale: Adulți: 0,3 – 1,3 mg/dl bilirubină totală
< 0,3 mg/dl bilirubină directă
Copii: < 8, <12, <20, < 1,5 mg/dl
Semnificație clinică:
Bilirubina directă crește în: cauze hepatocelulare (hepatită, ciroză, infecții), cauze colestatice (ficat gras,
abces, tumori, sarcină, icter), cauze medicamentoase (citostatice, estrogeni, steroizi).
Bilirubina indirectă crește în: cauze hemolitice (anemie, infarct pulmonar, hemoragie intestinală), cauze
hepatocelulare (hepatită, ciroză, infecții), cauze colestatice (ficat gras, abces, tumori, sarcină, icter).
ACIZI NUCLEICI
Determinarea acidului uric în ser
Acidul uric rezultă din degradarea acizilor nucleici, fiind produsul final al metabolismului purinelor. Este
produs predominant în ficat și se elimină renal prin secreție tubulară. Stă la baza diagnosticului
hiperuricemiilor, putând produce apariția gutei (depunere în țesuturile moi).
Concentrația sa se determină prin metode chimice sau enzimatice.
Aplicație practică: Determinarea acidului uric în ser prin metoda chimică
Principiu: Acidul uric reduce acidul fosfowolframic, în mediu alcalin, formând un compus colorat în
albastru (cu intensitatea culorii direct proporțională cu concentrația acidului uric). pH-ul alcalin elimină
acidul ascorbic care interferă reacția.
Valori normale: 1 – 7 mg/dl ser
Semnificație clinică:
Hiperuricemii: IRA, IRC, gută, leucemii, mielon multiplu, limfom Hodgkin, cură de slăbire,
mononucleoză infecțioasă, psoriazis, intoxicații cu Pb și Hg, boli febrile, arsuri întinse.
Hipouricemii: medicamente, defecte enzimatice sau afecțiuni parenchimatoase hepatice grave.
1. Definiți parametrii și valorile normale ale acestora care caracterizează metabolismul mineral.
pH, rezerva alcalină (bicarbonatul actual), ioni (Na, K, Ca, Mg, Fe, fosfat, Cl)
2. Definiți parametrii și valorile normale ale acestora care caracterizează metabolismul glucidic.
glicemia, acidul lactic, testul Brewer, TTGO, Hb glicozilată, corpii cetonici în urină (DZ)
3. Definiți parametrii și valorile normale ale acestora care caracterizează metabolismul lipidic.
triacilglicerolii serici, colesterolul total și din fracțiuni (LDL, HDL), corpii cetonici în urină
4. Definiți parametrii și valorile normale ale acestora care caracterizează metabolismul proteic și al
acizilor nucleici.
transaminazele serice, ureea, creatinina, hemoglobina, bilirubina, acidul uric, testul optic
17. Boli metabolice congenitale care afectează metabolismul proteic și al acizilor nucleici.
disproteinemii
aminoacidurii primare și secundare
Hiperfenilalaninemii
Boala urinii cu miros de sirop de arțar
Fenilcetonuria – electroforeză