¿QUE ES UN BUFFER?

Las soluciones amortiguadoras o buffers son aquellas que pueden disminuir los cambios de pH
debido a los iones H3O+ y OH–.

En esencia están compuestas de un ácido (HA) o una base débil (B), y sales de su base o ácido
conjugados.

El buffer es una o varias sustancias químicas que afectan a la concentración de los iones
de hidrógeno (o hidronios) en el agua. Siendo que pH no significa otra cosa que potencial de
hidrogeniones (o peso de hidrógeno), un buffer (o "amortiguador") lo que hace es regular el pH.

Cuando un buffer es añadido al agua, el primer cambio que se produce es que el pH del agua se
vuelve constante. De esta manera, ácidos o bases (álcalis = bases) adicionales no podrán tener
efecto alguno sobre el agua, ya que esta siempre se estabilizará de inmediato.

CARACTERISTICAS DE LOS BUFFERS

– Conocer el pH requerido y, por tanto, el que se desea mantener lo más constante posible
durante la reacción o proceso.

– Conociendo el pH, se busca entre todos los ácidos débiles, aquellos cuyo pKa se aproxime más a
este valor.

– Escogida la especie HA y calculada la concentración del buffer (dependiendo de cuánta base o

ácido se requiera neutralizar), se pesa la cantidad necesaria de su sal sódica.

En el gel de poliacrilamida, el soporte está constituido por una red tridimensional formada por la
polimerización de la acrilamida con N,N´-metileno-bis-acrilamida, controlada por un sistema de
catálisis con el persulfato de amonio y N-N´-tetrametilendiamina (TEMED). La concentración de
poliacrilamida puede varias de acuerdo al tamaño de la molécula que se desea separar, por
ejemplo, 7.5% de poliacrilamida para separar proteínas de peso molecular mediano, en cambio, si
se utiliza una baja concentración de poliacrilamida -5% se separan proteínas de alto peso
molecular.

Para proteínas se pueden utilizar geles en condiciones nativas, en los que las proteínas mantienen
su conformación, y geles desnaturalizantes en los que se agrega un detergente: dodecil sulfato de
sodio (SDS) y un agente reductor 2-mercaptoetanol (que rompe enlaces disulfuro), lo que provoca
que las proteínas pierdan su estructura secundaria, terciaria y cuaternaria produciendo un poli
péptido de cadena lineal, el SDS le confiere además una carga negativa.
TIPOS DE BUFFERS

Existen dos tipos de buffers: buffers ácidos y buffers alcalinos.

Los buffers ácidos corresponden al par HA/A–, donde A– es la base conjugada del ácido débil HA e
interacciona con iones —como los Na+— para formar sales sódicas. Siendo de este modo, el par
queda como HA/NaA, aunque también pueden ser sales de potasio o calcio.

Al derivar del ácido débil HA, amortigua rangos de pH ácidos (menores a 7) según la siguiente
ecuación:

HA + OH– => A– + H2O

Sin embargo, al ser un ácido débil, su base conjugada se hidroliza parcialmente para regenerar
parte del HA consumido:

A– + H2O <=> HA + OH–

Por otro lado, los buffers alcalinos consisten del par B/HB+, donde HB+ es el ácido conjugado de la
base débil. Generalmente, HB+ forma sales con iones cloruros, quedando el par como
B/HBCl. Estos buffers amortiguan rangos de pH básicos (mayores a 7):

B + H3O+ => HB+ + H2O

Y, nuevamente, HB+ puede hidrolizarse parcialmente para regenerar parte de B consumido:

HB+ + H2O <=> B + H3O+

ELECTROFORESIS

Es una técnica de separación de moléculas en una mezcla por aplicación de un campo eléctrico.
Las moléculas disueltas se desplazan o migran en un campo eléctrico a una velocidad determinada
por su relación carga-masa. Por ejemplo, si dos moléculas tienen masa y formas iguales, la de
mayor carga neta se desplazara más rápido hacia un electrodo.

La electroforesis es una técnica que se utiliza para analizar y determinar el peso molecular de
diferentes tipos de biomoleculas, pero es mas común utilizarla para proteínas y acidos nucleicos.

TIPOS DE ELECTROFORESIS

Geles de celulosa: son usados para moléculas de bajo peso molecular como los aminoácidos y los
carbohidratos
Geles de poliacrilamida y Agarosa: Se utilizan para moléculas de mayor peso molecular (DNA, RNA
y proteínas).

CARACTERISTICAS PARA UTILIZARSE ELECTROFORESIS

En forma horizontal. En papel, para aminoácidos u otras moléculas pequeñas; en soportes

similares (especialmente, acetato de celulosa), para proteínas.

En gel de almidón o de agarosa, para proteínas y especialmente para ácidos nucleicos. Casi
siempre el tampón cubre el gel (para evitar que se seque debido al calentamiento sufrido al pasar
la corriente), denominándose por ello “electroforesis submarina”.

El soporte se impregna por capilaridad de disolución tampón, que disuelve la muestra y mantiene
el contacto eléctrico.

Se aplica la muestra depositándola (con pipeta o un aplicador específico) como una gota sobre el
soporte (papel, acetato de celulosa) o dentro de un “pocillo” creado en el gel.

Vertical
Se usa casi exclusivamente con gel de poliacrilamida (más resistente físicamente, no se desliza),
para proteínas o para ácidos nucleicos de pequeño tamaño.

El gel puede rellenar tubos de vidrio (este formato ya apenas se usa) o estar contenido entre 2
placas rectangulares.

Contacto eléctrico y disolvente gracias al tampón que embebe el gel y llena las cubetas o
compartimentos del ánodo y cátodo.

La muestra se deposita con micropipeta llenando un “pocillo” creado al polimerizar el gel.

En cuanto a la composición del gel hay dos variantes: electroforesis continua (un solo tipo de gel)
y electroforesis discontinua (2 tramos de gel de composición ligeramente diferente).
Harvey Lodish. (2004). biologia celular y molecular . estados unidos : medica
paramericana .
https://accessmedicina.mhmedical.com/content.aspx?bookid=1473&sectionid=102743771

claudia andrea Segal. (2005). Molecular de la Celula . mexico : facultad de

ciencias UNAM .
https://www.lifeder.com/soluciones-amortiguadoras-buffers/

http://biomodel.uah.es/tecnicas/elfo/inicio.htm