FACULTAD CIENCIAS DE LA SALUD

PROGRAMA BACTERIOLOGIA

INTRODUCCION A LA MICROBIOLOGIA

MIÈRCOLES (1:00 PM - 3:59 PM)

PROFESOR (ES)

LISY GRACIA HERRERA

ANDREA DE JESUS DORIA PEDRAZA

ESTUDIANTES

BARRIOS MENDOZA BEATRIZ ELENA

LOPEZ CALDERON GABRIELA

MONTOYA PINEDA JHAEL SHALON

METABOLISMO BACTERIANO, DETERMINACIÓN DE VIABILIDAD Y PUREZA DE

CEPAS DE REFERENCIA

MONTERIA- CORDOBA

2019
 INTRODUCCIÓN

Las baterías, al igual que todos los organismos vivientes tienen la capacidad de
desarrollar un metabolismo propio, en el cual intervienen una infinidad de reacciones.
Cada metabolismo hace única a la especie bacteriana e inclusive afines entre otras, por
tanto es necesario realizar procedimientos in vitro para la identificación de las mismas.

Al ser procedimientos in vitro, se deben tener cultivos a los cuales se les practicarán
dichas pruebas, y he aquí la importancia de las cepas. A partir de éstas podemos
desarrollar una infinidad de cultivos, entre los cuales se destacan: cultivos de
referencia y cultivos de trabajo. Como se ha mencionado cada uno de estos cultivos
provienen de cepas con características idénticas a ellos; por tal razón entran en juego
las cepas de referencia, que no son cualquiera, sino aquellas que tienen un
reconocimiento internacional, y que al igual que estos cultivos pueden surgir las
llamadas cepas de reserva.

Para poner en evidencia la viabilidad y pureza de estas cepas, se desarrollan una serie
de pruebas o procedimientos en el laboratorio, los cuales tuvimos la oportunidad de
realizar y se explicarán en el siguiente informe.
 OBJETIVOS

 Comprender que la actividad bioquímica de las bacterias es la base

indispensable para una correcta diferenciación de género y especie.

 Realizar pruebas bioquímicas adecuadas para la identificación de bacterias, a

través de pruebas de viabilidad y pureza en cepas de referencia.
 MARCO TEÓRICO
METABOLISMO: Reacciones químicas que se llevan a cabo dentro de una
célula, que conlleva la desintegración de una sustancia y a la formación de una
nueva.

METABOLISMO CATABÓLICO: Reacción en donde se desintegra o descompone

una sustancia, en donde ocurre una liberación de energía.

METABOLISMO ANABOLICO: Conjunto de reacciones en donde se sintetizan o

se forman algunas sustancias a partir de otras simples. Este tipo de
metabolismo se realiza con absorción de energía.

ENZIMA: Proteína capaz de acelerar o disminuir la velocidad de una reacción al

modificar la energía de activación.

CEPA: Población de células genéticamente iguales derivadas de una sola célula.

CEPA DE REFERENCIA: Son cepas con características fenotípicas y genotípicas

definidas que son empleadas como control para las determinaciones
microbiológicas.

CEPA DE RESERVA: Cultivos obtenidos a partir de la siembra de las cepas de

referencia, y que se mantendrán para preparar medios de cultivo de trabajo.

CEPA DE TRABAJO: Subcultivos obtenidos de un cultivo de trabajo que serán

utilizados para hacer controles de rutina.

PRUEBAS DE VIALBILIDAD Y PUREZA: Ensayos que permiten evaluar la

actividad bioquímica y metabólica de las cepas de referencia sobre sustratos
específicos.
 PROCEDIMIENTOS Y MATERIALES

A) GENERACIÓN DE CULTIVOS DE TRABAJO

 Cepas de E. coli y S. aureus
 Agar: EMB, Nutritivo, TSI, SIM, Simons Citrato
 Asas bacteriológicas: Redondas y en punta
 Azul de metileno
 Safranina
 Alcohol acetona
 Lugol
 Mechero
 Papel kraft
 Gradilla
 Laminas
 Microscopio
 Agua destilada
 Incubadora
 Reactivo de Kovacs
 Peróxido de hidrógeno al 3%
 Plasma cidratado de conejo
B) VALORACIÓN DE LA CALIDAD DE REACTIVOS
 Cepas de S. aureus, P. aeruginosa y E.coli
 Agar SIM
 Peróxido de hidrógeno al 3%
 Plasma cidratado de conejo
 Reactivo de Kovacs
 Cinta reactivo de oxidasa
 Asas bacteriológicas redondas y de punta
 DESARROLLO DE PROCEDIMIENTO

A) GENERACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO DE TRABAJO

Viabilidad y pureza a partir de E. coli:
1.

Con un asa Realizamos un Realizamos la Observamos al

tomamos una extendido en tinción de Gram microscopio.
porción de E. placa, dejamos
coli. secar y fijamos.

RESULTADO:
Observamos bacilos
gramnegativos teñidos
de color rosado.

2.
Tomamos otra Realizamos una siembra Llevamos a incubar por 24
asada de E. coli. por agotamiento tanto horas a 37°C.
en agar Nutritivo como
EMB.

RESULTADO: Hubo crecimiento

tanto en EMB como en el agar
para gérmenes comunes. De
hecho hubo un exuberante
crecimiento. En el agar EMB la E.
coli creció de un color verde
3.
metálico, mientras que en el
nutritivo fue de color
NUTRITIVO EMB
blanquecino.
 Con un asa en Inoculamos en un Incubamos por
punta estéril medio TSI hasta 24 horas a 37°C.
tomamos el fondo y luego
muestra de E. hacer una colita
coli en la parte
inclinada del tubo

RESULTADO: Hubo un mínimo

crecimiento porque a lo mejor no se
tomó la suficiente muestra. Cambió un
poco de color en la parte de arriba ya
que se presentaron ligeros vestigios de
color rojo y amarillo. El color rojo se
presentó arriba lo cual quiere decir que
alcalinizó y el color amarillo en la mitad
indica que hubo fermentación de
glucosa. De hecho también hubo
formación de burbujas lo que indica que
hubo fermentación con gases.

4.

Con una asa en Inoculamos la Llevamos a

punta estéril muestra en el incubar por 24
tomamos una tubo con SIM horas a 37°C
muestra de E.
coli

RESULTADO DE INCUBACION: En el
medio hubo crecimiento de E. coli pero
de modo inmóvil ya que crecieron por
toda la línea por la cual se inoculó la
muestra.
Luego nuestro medio le Esperamos unos
agregamos 5 gotitas del segundos…
reactivo de Kovacs.

RESULTADO:

Se obtuvo como resultado sobre la

superficie del medio, la formación de
un anillo rosado, lo cual quiere decir
que la prueba de Indol fue positiva.
Esto significa que hay la triptofanasa,
lo que trae consigo afirmar que la E.
coli degradó u oxidó el triptófano.

5.

Tomar una Inocular en el Incubar por 24

muestra de E. medio Simons horas entre unos
coli con un asa citrato 35-37°C
de punta
esterilizada.

RESULTADO: No hubo alteración

del medio, ya que no hubo
crecimiento ni mucho menos
cambio de color; esto quiere decir
que la bacteria E. coli no tiene la
habilidad o la capacidad de usar el
citrato como fuente de carbono.
Viabilidad y pureza a partir de cultivo S. aureus

1.

Con un asa Hacemos un Realizamos la Observamos al

estéril extendido, coloración de microscopio en
tomamos una dejamos secar y Gram 100x
porción de S. fijamos con el
aureus. mechero

RESULTADO: Observamos
cientos de cocos
grampositivos en cúmulos,
súper agrupados de color
obviamente violeta por el
colorante cristal violeta.

2.

Tomamos otra Realizamos una siembra Llevamos a

asada de S. por agotamiento tanto incubar por 24
aureus en agar Nutritivo como horas a 37°C
en Salado Manitol

RESULTADO: Hubo un exuberante

crecimiento de S. aureus en ambos
medios. En el caso del agar para
gérmenes comunes creció de un color
blanquito y el agar se mantuvo igual;
pero por otro lado en el Manitol Sal
creció y transformó el agar de color
rojo a amarillo, lo cual quiere decir
NUTRITIVO SALADO
que la bacteria fermentó el manitol,
MANITOL
por lo que produjo ácidos y cambiaron
el pH del medio a ácido. Es posible su
cambio de color gracias al indicador
rojo fenol.
3. Prueba de Catalasa:

Sobre una lámina Tomamos una Depositamos la

depositamos una porción de S. muestra sobre
gota de H2O2 aureus la gota de H2O2

RESULTADO: La reacción que se

produjo fue inmediata, se produjo
una cantidad de burbujas, hubo
efervescencia por lo que la prueba de
catalasa dio positivo; es decir que el
S. aureus es capaz de descomponer
el peróxido de hidrógeno (H2O2) en
Agua (H2O ) y en Oxígeno (O2).

4. Prueba de Oxidasa

Tomamos una porción Introducimos la Incubamos a 37°C por

de S. aureus con un muestra en un tubo 24 horas.
asa estéril. con 0,5 ml de plasma
cidratado de conejo y
mezclamos bien.

RESULTADO: Luego de incubarse,

obtuvimos la formación de un precipitado
granular de coágulos blancos, por lo que es
cierto decir que la prueba de coagulasa dio
positiva; es decir que a pesar de que de que
el plasma presentaba anticoagulante, el S.
aureus fue capaz de coagularlo debido a la
presencia de su enzima coagulasa.
B) Validación dela calidad de los reactivos

1. Peróxido de Hidrógeno: Este reactivo lo usamos en la prueba de catalasa, en la

viabilidad y pureza a partir de S. aureus. El resultado fue:

Formación de burbujas o
efervescencia, debido a la
reacción de la catalasa; es
decir descomposición del
peróxido en agua y oxígeno.
Es decir el reactivo estaba en
buen estado

2. Plasma cidratado de conejo: Fue el mismo reactivo que empleamos en la

prueba coagulasa y el resultado fue:

Formación de precipitado
blanquecino de coágulos
pequeños. Esto quiere decir
que el plasma contaba con
buena calidad.

3. Reactivo de Kovacs: Este reactivo lo utilizamos en la prueba de Indol para

determinar la formación del anillo de Indol y por ende la presencia de la
triptofanasa en el medio TSI, en el que había crecido la bacteria E. coli. El
resultado fue:

Formación del anillo rosado

(de Indol), por lo que es
correcto decir que el reactivo
de Kovacs estaba en óptimas
condiciones para ser usado.
4. Reactivo de Oxidasa:

Tomamos una Depositamos la Observamos lo

asada de P. porción bacteriana en que pasa con la
aeruginosa una cinta de reactivo cinta.
oxidasa

RESUTADO: La cinta se tornó azúl

turquís o más o menos púrpura, lo
cual indica que la prueba fue positiva.
Todo a razón de que la P. aeruginosa,
una bacteria gramnegativa aeróbica
presenta la enzima oxidasa, la cual en
presencia de oxigeno atmosférico lo
oxida y forma un compuesto llamado
Indol Fenol responsable del cambio de
color de la cinta.

Realizamos el mismo
procedimiento con
E. coli

RESULTADO: Hubo una coloración

beige en la cinta, ya que esta
bacteria al ser anaerobia, no
presenta la enzima oxidasa.
 PRELABORATORIO

1. Describa el fundamento de las pruebas catalasa, coagulasa y oxidasa

Rta:
CATALASA: Determinar la presencia de la enzima catalasa, responsable de la
transformación del Peróxido de Hidrógeno (H2O2) en Agua (H2O) y Oxígeno (O2).

COAGULASA: Determinar la presencia de la enzima coagulasa, responsable de

la coagulación del plasma a pesar de poseer anticoagulante. Ayuda a la
diferenciación del Staphylococcus Aureus de otros Staphylococcus.

OXIDASA: Determinar la presencia de la enzima oxidasa, que activa la oxidación

del citocromo que es reducido por el oxígeno molecular que produce agua o peróxido
de hidrógeno según la especie bacteriana.

2. Mencione 2 bacterias catalasa negativo

Rta:
Streptococcus spp.
Streptococcus pneumoniae

3. Mencione 2 sistemas comerciales de identificación de enterobacterias

Rta:
IMViC
Quintet 3H de Diagnostics Pasteur
BBL, ENTEROTUBE II (Becton Dickinson): Es un sistema para usar en la
identificación de Enterobacterias, definida como bastones Gram -, aerobios o
anaerobios facultativos, oxidasa (-). Consiste en un tubo de plástico con 12
medios de cultivo contenidos en compartimentos individuales que se inoculan
simultáneamente en una etapa y permiten la detección de 15 características
bioquímicas.

4. En que consiste el cepario bacteriano

Rta:
Colección de microorganismos («cepario») para uso en investigación biomédica
 POSTLABORATORIO

Registre en los siguientes formatos los resultados obtenidos en la práctica:

Formato para registro de generación de cultivos de reserva y trabajo

Fecha Colección Número de Lote Género y Tipo de Fecha de Responsable

Colección Especie Cultivo Baja
Generado
20-Feb- ATCC 25922 E. coli De 22-Feb- Beatriz
19 trabajo 19 Gabriela
Jhael
20-Feb- ATCC 6538 S. aureus De 22-Feb- Beatriz
19 trabajo 19 Gabriela
Jhael

Formato para registro de pruebas de viabilidad y pureza para E. coli

Fech Colecc Núme Lote Género Tipo de Viabilidad Medio Caracterís Gra Características bioquímicas Respons
a ión ro de y cultivo en agar de ticas en m able
Colecc Especie nutritivo cultivo medio
ión selectiv selectivo
TSI SIM Sim Indo
o
ons l
Citra
to
20- ATCC 2592 E. coli De si EMB Verde - + - - + Beatriz
Feb 2 trabajo metálico Gabriela
-19 Jhael

Formato de registro de pruebas de viabilidad y pureza para S. aureus

Fech Colecc Núme Lo Género y Tipo de Viabilidad Medio de Característica Gra Características Respons
a ión ro de te Especie cultivo en agar cultivo s en medio m bioquímicas able
Colecc nutritivo selectivo selectivo
ión
Catalasa Coagulasa

20- ATCC 6538 S. aureus De Si Manitol Amarillita. + + + Beatriz

Feb trabajo Sal Transforma Gabriela
-19 el agar Jhael
selectivo de
rosa
a amarillo
 CONCLUSIÓN

Gracias a esta práctica nos fue posible la identificación del metabolismo bacteriano en
cada una de las pruebas, poniendo en marcha cada una de las técnicas para
determinar la viabilidad y pureza de las cepas de referencia.

Todo fue satisfactorio, ya que se lograron los objetivos expuestos en primera instancia
en este informe.
 BIBLIOGRAFÍA

KONEMAN, et-al. Diagnostico Microbiológico, Texto y Atlas Color. Editorial Médica

Panamericana. 3°. Edición. 1997

BROCK, Thomas-MADIGAN, Michael. Microbiología. Prentice Hall Hispanoamericana.

S.A. México. 6°edición

WENG ALEMÁN, Zulia; ESTHER DIAZ ROSA, Olvido y ALVAREZ MOLINA, Inalvis.
Conservación de microorganismos: ¿qué debemos conocer? En: REVISTA CUBANA DE
HIGIENE Y EPIDEMIOLOGIA. Vol. 43, no. 3, 2005.

URGUET-LAGO, Nancy; SIERRA-PRADO, Nelson y BRITO-GODOY, Lázaro C.

Conservación de cepas microbianas por el método de liofilización para el control
microbiológico en Laboratorios Liorad. En: REVISTA CENIC CIENCIAS BIOLOGICAS. Vol.
43, no.3, p. 1-4, 2012.

Nireesha, GR., Divya, L., Sowmya, C., Venkateshan, N., Niranjan Babu, M., &
Lavakumar, V. (2013). Lyophilization/Freeze Drying-An Review. International journal of
novel trends in pharmaceutical sciences, 3(4), 87-98. Recuperado de
http://www.ijntps.org/File_Folder/0047.pdf

https://www.franrzmn.com/prueba-de-la-coagulasa/