Universidad Autónoma de Yucatán

Campus de Ciencias de la Salud

Facultad de Química

Laboratorio de Análisis Instrumental

6° Semestre
Imparte: M en C Durcy Verenice Ruiz Ciau

Reporte de práctica 1
Determinación de fósforo en bebidas de cola por
espectrofotometría UV-Vis

Presentado por:
Br. Aguilar Vázquez Stefany
Br. Alpuche Cauich Mario Eli
Br. Cauich Ravell Lesly Arian
Br. Márquez Echeverría Laura Nidelvia
Br. Moo Vázquez Martha Dayani

Químico Farmacéutico Biólogo

Mérida, Yucatán, México
31 de enero de 2019
OBJETIVO
● Conocer las partes y el manejo de un espectrofotómetro de Uv-Vis.
 ● Realizar una curva de calibración para cuantificar por Uv-Vis, el contenido de
fósforo en una muestra de refresco de cola.

ANTECEDENTES
El refresco es una bebida normalmente dulce y con gas. En México, el
consumo de bebidas calóricas es de los más elevados, y particularmente se asocia a
la presencia de enfermedades crónicas. Diariamente, una alta proporción de la
población mexicana toma estas bebidas sin saber que además de azúcar, un refresco
de cola puede contener ácido fosfórico, cafeína y nuez de cola, estos elementos
pueden llegar a causar diferentes trastornos al organismo. 1,2
El fósforo es parte estructural de los ácidos nucleicos y fosfolípidos, e
interviene en el aporte de oxígeno a los tejidos. El exceso en el consumo de fósforo
ocurre con mayor frecuencia por el aumento en el consumo de bebidas carbonatadas;
un aporte alto de fósforo impide la absorción de calcio y aumenta la cantidad de
hormona paratiroidea, la cual puede disminuir la formación de huesos. 2,3
Las cifras normales de fósforo sérico inorgánico en los adultos son entre 2.8 y
4 mg/100 mL. Es posible realizar la determinación y cuantificación de fósforo en
refrescos de cola, con ayuda del método de espectrofotometría UV-Vis.
La espectroscopia visible es una de las técnicas más empleadas en el análisis
químico; su fundamento consiste en medir la intensidad del color (o de la radiación
absorbida en UV) a una longitud de onda específica comparándola con otras
soluciones de concentración conocida (soluciones estándar) que contengan la misma
especie absorbente. Para tener esta relación se emplea la Ley de Beer. 4

Figura 1. Esquema de una medida de la absorción de radiación UV-Vis empleando un

espectrofotómetro.
La ley de Beer, o Lambert-Beer; se basa en que, si un haz de radiación
monocromática atraviesa un recipiente con una especie absorbente, la intensidad del
haz de luz disminuirá debido a la interacción entre los fotones y la especie absorbente.
Esta atenuación se puede describir cuantitativamente mediante términos de
transmitancia (T) y absorbancia (A). La ley de Beer solo se cumple bajo ciertas
condiciones, algunas de estas son: la concentración de la especie absorbente debe
ser baja; la radiación utilizada debe ser monocromática; el único mecanismo de
interacción entre la radiación electromagnética y la especie absorbente es el de
absorción; las especies absorbente no deben sufrir transformaciones fotoquímicas. 5

Figura 2. Ley de Lambert-Beer

La espectrofotometría uv-vis es una de las metodologías analíticas
cuantitativas más utilizadas para la determinación de especies químicas a nivel de
trazas. Esto se debe a que muchas especies orgánicas e inorgánicas, poseen
características espectrales de absorción en esta región del espectro
electromagnético.5
Los ácidos molíbdicos se forman cuando un exceso de molibdato reacciona en
solución ácida con fosfato, silicato, arsenato, germanato y otros oxo-aniones. El
complejo de fosfomolibdato tiene una mezcla de Mo+5 y Mo+6. Este complejo es
reducido a un compuesto azul soluble cuya absorbancia es medida
espectrofotométricamente y resulta proporcional a la cantidad de fósforo presente en
la muestra.2
La reacción de esta determinación es la siguiente:
7H3PO4 + 12(NH4)6Mo7O24⋅ 4H2O → 7(NH4)3(PO4(MoO3 )12) + 51NH4+ + 51OH− + 33H2O

EQUIPO
Espectrofotómetro Thermo Scientific™ Genesys 10S UV-VIS; con portaceldas de seis
posiciones, óptica de doble haz y lámpara flash de xenón.

PROCEDIMIENTO
Preparación de soluciones
1. Solución stock de 100 ppm de P2O5 a partir de KH2PO4Se pesaron 0.0195g
de KH2PO4, se disolvieron en un vaso de precipitado con agua destilada, se
trasvasó a un matraz aforado de 100 mL y se aforó con agua destilada.
2. Solución de trabajo a 4 ppm
Se tomó una alícuota de 1 mL de la solución stock, se trasvasó a un matraz
aforado de 25 mL y se aforó con agua destilada
3. Solución reductora
Se pesaron 0.1587g de molibdato de amonio, se disolvieron en agua destilada,
posteriormente se pesaron 0.2123g de ácido ascórbico y se disolvieron en
agua destilada, por último se tomaron 2.2 mL de H2SO4 y se disolvieron en
agua destilada, posteriormente se mezclaron las soluciones anteriores en un
matraz aforado de 50 mL y se aforaron con agua destilada.
4. Curva de calibración
Se extrajeron alícuotas de 1,2,3,4 y 5 mL de la solución de trabajo y se le
agregó a cada alícuota 4 mL de la solución reductora, posteriormente se aforó
a 10 mL con agua destilada. Se llevaron a incubación en baño María a 50°C
durante 30 minutos.
5. Preparación de la muestra
Se tomó una alícuota de 10 mL de la muestra problema y se colocó en un vaso
de precipitado el cual fue introducido en el desgasificador para eliminar el gas
presente en la muestra, posteriormente se tomó 1 mL de la muestra
desgasificada y se diluyó a 50 mL junto con un blanco y un duplicado. Se tomó
1 mL de la solución trasvasó a un matraz aforado de 10 mL en donde se le
fueron agregados 4 mL de la solución reductora y fueron llevados al aforo.
Finalmente fueron llevados a incubación en baño María a 50°C durante 30
minutos.
Análisis espectrofotométrico
 1. Test de barrido
Se ajustó la línea base midiendo el blanco, se midió el punto de 2 ppm con la
longitud de onda de 700-850nm, se seleccionó la longitud de onda más alta,
por último se configuró el espectrofotómetro con los parámetros.
2. Análisis
Se ajustó la absorbancia a cero con el blanco, se midieron los puntos de curva
y se midieron las muestras.
Empleo del equipo
1. Barrido de exploración
Se seleccionó la opción de BARRIDO en la pantalla principal y se presionó el
botón [ENTER], posteriormente fueron introducidos los parámetros para el
análisis (longitud de onda inicial=700, longitud de onda final=850, posición de
la celda=1 celda, velocidad= rápida, intervalo= 1, unidades= ppm,
autoalmacenamiento= apagado) para cada punto fue presionado el botón
[ENTER] para guardar el cambio, posteriormente se seleccionó en la pantalla
la opción CORRER ANÁLISIS y se oprimió [ENTER]. Se colocó en una celda
el blanco y se seleccionó la opción MEDIR LÍNEA BASE y se oprimió [ENTER],
posteriormente fue recuperado el blanco. Fue colocado en una celda el
estándar máximo (2ppm), se seleccionó la opción MEDIR MUESTRA y se
oprimió [ENTER]. Obtuvimos el gráfico, se seleccionó la opción EDITAR
GRÁFICO se oprimió [ENTER], se seleccionó la opción PICOS Y VALLES se
oprimió [ENTER], se seleccionó la opción PICOS, posteriormente PICO
MÁXIMO se oprimió [ENTER] y por último se presionó [ESC] para guardar.
Obtuvimos la absorbancia y nuestra longitud de onda máxima (abs=0.655 ,
longitud máx= 828). Se oprimió el botón [TEST] para regresar al menú principal
2. Curva estándar
Se seleccionó la opción de CURVA ESTÁNDAR en la pantalla principal y se
presionó el botón [ENTER].Fueron introducidos los parámetros para el análisis
(longitud de onda=828, corrección le longitud de onda=apagado, ajuste de
curva= lineal, número de estándares=5, unidades ppm, celda= 1 celda).
Posteriormente se seleccionó la opción PONER ESTÁNDARES y se presionó
el botón [ENTER], se introdujo la concentración de cada estándar
(.4,.8,1.2,1.6,2) cada una presionando el botón [ENTER] para guardar, se
colocó el blanco y se seleccionó la opción MEDIR BLANCO, se colocó el
primer punto de la curva de calibración y se seleccionó la opción MEDIR
ESTÁNDAR, en ambos casos se presionó el botón [ENTER], de este modo se
introdujeron los cinco estándares. Posteriormente se seleccionó la opción VER
GRÁFICO. Por último se seleccionó la opción de CORRER ANÁLISIS, se
introdujo el blanco en la celda y se seleccionó la opción MEDIR BLANCO.
3. Lectura de la muestra
La muestra fue colocada en una celda y se seleccionó la opción MEDIR
MUESTRA, se realizó el mismo proceso de lectura para un duplicado. Se
obtuvieron las concentraciones (muestra 1=0.605 y duplicado=0.599).
RESULTADOS

Se llevó a cabo un barrido de exploración usando la solución con mayor concentración

de P2O5 con la finalidad de poder obtener una variación de la longitud de onda y poder
encontrar la absorbancia máxima.

Se efectuó el análisis de 5 estándares para realizar la curva de calibración mediante

las concentraciones y la absorbancia obtenida de los diferentes estándares de P 2O5.

Los valores se reflejan en la Tabla 2. La figura 1 corresponde a la curva de calibración.

(Ver anexos).

Se realizó el análisis a muestras de Pepsi Kick ®️ para conocer la concentración de

fósforo . Los resultados se encuentran en la Tabla 3. (Ver anexos).

Para calcular la concentración de fósforo (P) se utilizó la fórmula 1.

Fórmula 1:

ppm de P= (ppm P2O5)(Factor de dilución)(Factor gravimétrico)

ppm de P= (ppm P2O5)(50)(10)(62 g de P/ 142 g de P2O5)0

Los resultados de fósforo obtenidos se expresan en la Tabla 4. (Ver anexos).

DISCUSIONES
El fósforo es un mineral necesario para la mayoría de las reacciones químicas que
ocurren en el organismo y la cantidad diaria de fósforo recomendada es de 1.000 mg
[Colbert 2012], sin embargo un exceso del fósforo puede hacer que el calcio de los
huesos se libere en el torrente sanguíneo y la pérdida de calcio por un periodo largo
de tiempo puede ocasionar osteoporosis. El fósforo se puede obtener de fuentes
naturales pero la mayoría de los refrescos de cola contienen ácido fosfórico o una
variedad de fosfatos, es decir son bebidas ricas en fósforo,motivo por el cual se
efectuó la determinación de la cantidad de fósforo en Pepsi kick.
Según la NORMA Oficial Mexicana NOM-218-SSA1-2011 ‘Productos y servicios.
Bebidas saborizadas no alcohólicas, sus congelados, productos concentrados para
prepararlas y bebidas adicionadas con cafeína. Especificaciones y disposiciones
sanitarias. Métodos de prueba”, la cantidad máxima de ácido fosfórico en bebidas es
de 700 mg/L (o ppm) por lo que efectuando un análisis de los resultados obtenidos de
130.767 ppm de fósforo, se puede decir que la bebida Pepsi kick cumple con el
parámetro establecido.

CONCLUSIÓN
 - Al finalizar la práctica, se logró el objetivo de conocer y aprender el
funcionamiento y manejo de cada componente del espectrofotómetro de UV-
Vis, además del uso del equipo de incubación por ultrasonido.
- De igual manera, se logró realizar una curva de calibración para cuantificar la
concentración del contenido de fósforo presente en una muestra de refresco
de cola de la marca Pepsi KickⓇpor medio de ultravioleta-visible.
- Finalmente, se comprendió que se debe realizar el barrido de exploración de
la solución estándar más concentrada, esto para que las absorbancias
obtenidas de las demás soluciones estándar estén dentro de la longitud de
onda establecida.

REFERENCIAS
1. Rodríguez, M.; Avalos, M.; López, C.; Consumo de bebidas de alto
contenido calórico en México: un reto para la salud pública. SALUD EN
TABASCO Vol. 20, No. 1, Enero-Abril: 2014, pp 28-33.
2. Cavazos, N.; Rocha, Zárate, L.; Torres, E.; Determinación de fósforo y
cafeína en bebidas de cola; Departamento de Química Analítica.
Facultad de Medicina. UANL. Monterrey, N.L. México: 1999; pp 1-5.
3. Coromoto, T.; Palacios, C.; Mariño, M.; Carías, D.; Noguera, D.; Chávez,
J.; Valores de referencia de calcio, vitamina D, fósforo, magnesio y flúor
para la población venezolana; Volumen 63, No. 4, Año 2013 [En línea].
Disponible en: https://www.alanrevista.org/ediciones/2013/4/art-11/
(Consultado 30 de Enero de 2019).
4. SKOOG, D.; Leary, J.; Holler J.; Principios de análisis instrumental, 5a
ed.; Ed. McGraw-Hill: 1998, pp. 353-367.
5. Gallego, A.; Garcinuño, R.; Morcillo,R.; Experimentación en química
analítica,1a Ed.; UNED:España; 2012; pp.55-62.
6. Colbert, D.; La Nueva Cura Biblica Para la Osteoporosis: Verdades Antiguas,
Remedios naturales y los últimos hallazgos, 2a Ed; Charisma House: U.S.A,
2012; pp. 41-42.
7. NORMA Oficial Mexicana NOM-218-SSA1-2011, Productos y servicios.
Bebidas saborizadas no alcohólicas, sus congelados, productos
concentrados para prepararlas y bebidas adicionadas con cafeína.
Especificaciones y disposiciones sanitarias. Métodos de prueba.

ANEXOS

Tabla 1.- Barrido de exploración de solución de 2 ppm

Solución λmax en nm Absorbancia

Concentración de 2 ppm 828.0 0.665

Tabla 2.- Valores obtenidos de los estándares

 Solución Concentración de P2O5 Absorbancia a
λ= 828 nm

1 0.400 ppm 0.171

2 0.800 ppm 0.273

3 1.200 ppm 0.408

4 1.600 ppm 0.562

5 2.000 ppm 0.665

Figura 1.- Curva de calibración

Tabla 3.- Resultados de las muestras de Pepsi Kick ®️

Muestras Absorbancia Concentración de P2O5

λ= 828 nm en ppm

1 0.226 0.605

2 0.224 0.599

Promedio 0.225 0.602

Tabla 4.- Valores de fósforo obtenidos en muestras de Pepsi Kick ®️

Muestra ppm de Fósforo

1 132.077 ppm de fósforo

2 130.767 ppm de fósforo

 Promedio 131.422 ppm de fósforo

Para la muestra 1:

ppm de P= (0.605)(50)(10)(62 g de P/142 g de P2O5)

ppm de P= 132.077 ppm de fósforo

Para la muestra 2:

ppm de P= (0.599)(50)(10)(62 g de P/142 g de P2O5)

ppm de P= 130.767 ppm de fósforo