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Informe de Extracción e Identificación del ADN Commented [1]: nota lab: 4,1
2.1.2. Reactivos: A continuación, se mencionan los gran tamaño en el fondo del tubo de centrifuga. (ver
reactivos principales figura 1, 2)
proteínas integrales, para así degradar dicha capa, al alto peso molecular, para ello se usa etanol, ya que lo
ajustar el valor del pH en la solución se asegura que que se desea obtener en forma de precipitado es la
las fuerzas intermoleculares, que permiten el cromatina libre, la cual corresponde a un nivel de
movimiento estabilizador (flip flop), quede enrollamiento del DNA, para su obtención, se debe
restringido evitando que esta pueda auto repararse. usar un medio mecánico al ser enrollado en un
Así dejando expuesto a la solución el citoplasma y el agitador de vidrio, donde la calidad, cantidad y
núcleo celular, en un caldo de solución con proteínas pureza de este se vera reflejada en el aspecto como
(presentes en el citosol), ARN entre otros su transparencia, visibilidad y color.
contaminantes además contenido de los organelos de Pero como se mencionó anteriormente, los
membrana que también fueron degradados en el parámetros para la identificación de propiedades y
anterior paso. características anteriormente usados son poco
Por lo anterior, realizar un estudio en este estado de precisos, por ende, para una determinación mas
a la solución, no seria viable, por el gran número de precisa, se requiere el uso de un equipo analítico,
interferencias, por ende, se debe primero eliminar los además de un algoritmo matemático, el cual permita
contaminantes anteriormente mencionados, para mediante el uso de una ecuación matemática
ellos deben ser identificados y eliminarlos en correlacionar los resultados obtenidos y poder
distintos procesos. obtener información necesaria para la culminación
Para empezar, se identifican dos principales fuentes: del experimento.
proteínas y ARN, las proteínas podrán ser Aunque existen múltiples equipos, capaces de
eliminadas, esto se permite gracias a la desarrollar dicha función de manera óptima, se usara
centrifugación, al ser un proceso una espectrofotometría, ya que, al proporcionar
termodinámicamente no favorable, afectara la energía a las moléculas por medio de una longitud de
interacciones intermoleculares, además de permitir onda específica, es capaz de medir la absorbancia de
la transferencia de masa, entre fases por la adición de la molécula con la que el haz de luz choca, es decir
un solvente orgánico, el cual va a anular el momento puede proporcionar información necesaria.
dipolar entre las cargas parciales de los aminoácidos, En el caso del DNA, para proceder con el anterior
por ende la formación de puentes de hidrogeno no se método analítico, primero la muestra debe ser
verá favorecida, aumentando la afinidad de la preparada al ser disuelta y luego medida.
estructura proteica a la fase orgánica. En este caso se Para el caso del thymus se obtuvo un valor del
uso el buffer el contenía un fenol, ya que este grupo coeficiente de las absorbancias de 7.9423, pero para
funcional, al contener un anillo aromático que la comparación del valor anterior, es necesario
estabiliza el compuesto, y un momento dipolar fuerte definir un fenómeno el cual es llamado
gracias al oxigeno es capaz de formar los complejos hipercromicidad o efecto hipercrómico, el cual
con el resto de proteínas y oligopéptidos presentes. ocurre cuando se aumenta el valor de la absorbancia
Para la eliminación del ARN y la extracción de las al desnaturalizar la muestra, es decir al provocar la
proteínas que corresponden al tercer y cuarto paso lisis de los puentes de hidrogeno, se da la separación
para una extracción de DNA, se da gracias al uso de de las cadenas aumentando la absorción del fotón de
compuestos orgánicos, los cuales son escogidos luz, por consiguiente, el valor suministrado por el
mediante datos teóricos y pruebas de solubilidad, ya equipo será mucho mayor que el de muestra no
que lo que se desea es que solo quede en solución, la desnaturalizada, esto se puede ver al comparar los
sustancia que se desea aislar. El resto de sustancias valores de la muestra 2 y 3 (Tabla 2).
mediante la formación de enlaces iónicos, se Para concluir si existe una contaminación, se debe
aumenta su peso molecular y en el caso de las analizar el valor obtenido del cociente, y se evaluado
proteínas igual que se menciono anteriormente, mediante datos teóricos, se sabe que si este es mayor
formara complejos con un área superficial mayor y de 2.1 existe una abundancia de proteínas de
por ende una densidad e impedimento estérico lo que interferencia. O bien, como se explico anteriormente,
permite ser retirado de manera mecánica. si se provoco el rompimiento de la cadena principal,
Una vez se concluyó la eliminación y la extracción, o una desnaturalización por aplicar medios Commented [9]: muy buena la discusión pero faltan las
es posible proceder con la precipitación del DNA de energéticos demasiado abundantes, se pudo dar el citas de las fuentes consuoltadas
Universidad Nacional de Colombia, López Velandia Paulina, Torres G Edward Alejandro. Extracción DNA. 4
5. CONCLUSIONES
6. ANEXOS
6.1.Unidades y Abreviaciones
Tabla 3. Abreviaciones
Símbolo Significado
nm Nanómetro
rpm Revoluciones por minuto Figura 3. Cromatina libre
DNA Acido desoxirribonucleico
UV-VIS Espectrofotometría a Ultra
violeta
ARN Ácido ribonucleico
EDTA Ethylenediaminetetraacetic
acid
mg Miligramos
ml Mililitros
NaCl Cloruro de Sodio
6.2.Imágenes
Figura 4. Eliminación Proteinas
6.2.1. Extracción del DNA
7. Blibliografía