INTRODUCCIÓN

MICROSCOPIA
El Microscopio es un instrumento óptico, que nos permite visualizar imágenes
difícilmente perceptibles con nuestros órganos visuales. Es así como podemos
llegar a reconocer una célula y los componentes texturales de los diferentes
órganos de nuestra anatomía, con la microscopía de luz. Pero si queremos
conocer la ultraestructura celular o histológica de estos mismos órganos,
tendríamos que recurrir al Microscopio Electrónico.
MICROSCOPIA DE LUZ.
El microscopio de luz puede ser simple, si está constituida por un solo lente y es
compuesto, cuando posee dos o más lentes; pueden utilizar luz natural o
incorporada (eléctrica).
Existen varios tipos de microscopio de luz, entre los que mencionamos: de
campo claro, campo oscuro; el de contraste de fase, de fluorescencia, luz
polarizada y el estereoscópico.
Posee 03 sistemas:
1. MECANICO:
 Base o estativo

 Brazo o columna

 Platina (con pinzas o carro)

 Revólver

 Macro y Micrométricos

 Cremallera  Cabezal 2.

2. OPTICO:
 Condensador

 Objetivos

 Prisma

 Oculares

3. LUZ:
 Fuente de luz

 Diafragma

 Filtros
MICROSCOPIA ELECTRONICA.
El microscopio electrónico, denominado así por emplear electrones en su poder
de resolución para la observación ultraestructural celular o histológica. Gracias
a este invento, conocemos cómo son las diferentes organelas
intracitoplasmáticas, los diferentes tipos de uniones celulares, la bicapa lipídica
que conforma la membrana celular; las superficies epiteliales y sus
modificaciones de acuerdo a la función que realizan y, si se trata de
microorganismos que invaden células o tejidos, su ubicación y mecanismo
lesional. Existen 02 tipos de Microscopio Electrónico:
 El de Transmisión (MET) y el de Barrido (MEB).
El MET, permite observar la ultraestructura interna tridimensional de un
espécimen, su poder de resolución para especímenes biológicos es de 0.5 a 1.0
nm.
El MEB, permite el estudio de las superficies de cualquier espécimen, su poder
de resolución es de 10 a 20 nm., con un aumento efectivo hasta de 50,000
diámetros.
El resultado de estas visualizaciones con el ME, se obtienen tomando
fotografías, denominadas MICROELECTROFOTOGRAFIAS.

TECNICAS HISTOLOGICAS
Es el conjunto de procedimientos que se utilizan para el estudio microscópico de
células, tejidos u órganos. Puede ser: “IN-VIVO” ó “POST-MORTEM”
ESTUDIO “IN-VIVO”:
Como su nombre lo indica, consiste en la observación microscópica de
elementos vivos empleando o no colorantes vitales.
1. ESTUDIO IN-VIVO SIN COLORANTES VITALES:
Cuando se observa directamente una muestra, sin emplear colorante
alguno, se le denomina también EXAMEN DIRECTO y puede emplearse
el microscopio de contraste de fase.
Ejemplo: Observación directa de una gota de sangre para identificar los
elementos formes.
2. ESTUDIO IN-VIVO CON COLORANTES VITALES:
Colorante vital, es aquél que no destruye la estructura celular, no son
tóxicos. Entre éstos podemos mencionar: Rojo Neutro, Azul de Tripán,
Verde Jano.
El estudio puede ser INTRAVITAL (cuando se inocula el colorante en un
ser vivo) y SUPRAVITAL (cuando se colorean células libres o exfoliadas
de secreciones orgánicas, o fragmentos de tejidos de diferentes órganos
obtenidos por Biopsias o procedimientos quirúrgicos).
ESTUDIO “POST – MORTEM”:
Este examen requiere necesariamente, de la muerte de un ser vivo, para poder
obtener muestras de diferentes tejidos orgánicos, para su estudio microscópico.
En el caso de seres humanos fallecidos (cadáveres) al procedimiento se le
denomina NECROPSIA.
Las muestras de tejidos obtenidos in-vivo o post-mortem, tienen un adecuado
procedimiento histológico, que se denomina PROCEDIMIENTO
HISTOTECNOLOGICO.

PROCEDIMIENTO HISTOTECNOLOGICO:
El procesar tejidos orgánicos, requiere de los siguientes pasos:

1. FIJACION: Empleando sustancias fijadoras, que tienen como finalidad detener

el proceso de descomposición biológica de los tejidos orgánicos. La sustancia
universalmente empleada es el FORMOL o FORMALINA, por su menor costo y
fácil dilución al 10% o 20 %.
También existen los fijadores de ZENKER, KELLY, CARNOY y de BOUIN.
2. DESHIDRATACION: Consiste en someter al tejido a la acción de alcoholes de
menor a mayor grado, es decir, de 75º al alcohol absoluto.
3. ACLARAMIENTO con Xilol o desparafinizante.
4. BAÑO DE PARAFINA: Se somete el tejido a la acción de parafina líquida a
57° C para darle mayor consistencia.
TODO ESTE PROCEDIMIENTO S REALIZA EN UN EQUIPO DENOMINADO
PROCESADOR AUTOMATICO DE TEJIDOS O SE PUEDE REALIZAR
MANUALMENTE.
5. FORMACION DEL BLOQUE DE PARAFINA: Se forma un bloque de parafina,
que contenga en uno de sus lados el tejido procesado, este paso es también
llamado INCLUSION DE TEJIDOS.
6. MICROTOMIA: Después de tener sumamente sólido el bloque de parafina, se
somete a acción del Micrótomo, para obtención de cortes en micras (3 a 5 micras)
que se extienden adecuadamente sobre una lámina portaobjeto, previamente
cubierta con albúmina para que se adhiera bien la muestra incluida en parafina.
7. COLORACION: Extendida la muestra en la lámina porta-objeto, se
desparafina a 57|grados centígrados y se continua con la acción del Xilol y luego
se procede a hidratar con alcoholes del absoluto al de 75° colorear, con
HEMATOXILINA-EOSINA, que es la coloración fundamental para todo tejido y
que tiene sus respectivos pasos o tiempos.
Es pertinente mencionar un estudio rápido de tejidos en un equipo denominado
criostato a dicho procedimiento se denomina interconsulta intra operatoria o
congelación.
 CITOLOGIA
ESTRUCTURA CELULAR:
1. MEMBRANA CITOPLASMATICA o PLASMALEMA: Considerada como
una membrana limitante entre el interior y el exterior celular, es asimétrica
y dinámica. Constituida por una capa bimolecular de fosfolípidos, en la
que se intercalan unidades globulares de proteína a intervalos variables
para formar un mosaico con la capa de lípidos (“modelo de mosaico
fluido”) y que tiene zonas hidrófobas e hidrófilas.
Funciones:
 Conserva la integridad celular, sirviendo de barrera, entre el medio intra y
extracelular.
 Regula el paso de sustancias del interior y del exterior (difusión pasiva,
difusión facilitada, transporte activo, transporte pasivo).
 Posee receptores que, dependiendo de la función celular, permite reconocer
antígenos, células extrañas y células alteradas.
 Regula las interacciones celulares, a través de las zonas de unión entre
células.
 Establece un sistema de transporte molecular específico.

 Realiza la transducción de señales físicas y/o químicas en diversos

procesos intercelulares.
2. CITOPLASMA:
El citoplasma en la mayoría de las células eucarióticas presenta un aspecto
amorfo, homogéneo y uniforme, que contiene organelas u organitos
citoplasmáticos que están en suspensión en una Matriz Citoplasmática o
Citosol.
Las organelas son:
 Centrosoma y Aparato de Golgi, que se encuentran cerca al núcleo.
 Lisosomas, cerca al Aparato de Golgi.
 Retículo Endoplásmico Rugoso (RER).
 Mitocondrias, que por lo general están en el citoplasma basal.
 Ribosomas, libres o unidos al RER.
 Retículo Endoplásmico Liso (REL), semejante al RER, pero sin ribosomas.
 Peroxisomas o Microcuerpos.

También hay en el citoplasma, el Citoesqueleto, el cual está compuesto por

filamentos proteicos, microtúbulos, microfilamentos y filamentos intermedios.
Otros componentes citoplasmáticos, son: Inclusiones de lípidos y glucógeno;
gránulos secretorios y Pigmentos.

3. NUCLEO:
Está presente en todas las células, con excepción de los eritrocitos maduros
y las plaquetas. Es siempre basófilo, por el contenido de ácidos nucleicos
(ADN y ARN). Está formado por una envoltura o membrana nuclear y el
carioplasma o nucleoplasma que contiene la cromatina nuclear nucléolo.

PRÁCTICA N°01
FORMAS CELULARES – CICLO CELULAR

DESARROLLO DE LA PRÁCTICA:
LAMINA 1
Muestra: FROTIS CERVICO-VAGINAL.
Coloración: PAPANICOLAOU.
Objetivo: RECONOCIMIENTO DE CELULAS PLANAS O DESCAMADAS.
DESCRIPCIÓN:
Observar la lámina a menor aumento (10 X) donde distinguirá un gran número
de células en dos matices, unas de citoplasma rosado y otras de citoplasma
azulado. Luego, observar a mayor aumento (40 X) y podrá determinar con
mayor precisión las formas celulares predominantemente planas; unas con
núcleo pequeño (puntiforme y picnótico) de citoplasma amplio que
corresponden a CELULAS PLANAS SUPERFICIALES; otras de la misma
forma (aplanadas o poligonales) pero con núcleo de mayor tamaño oval o
redondeado y de cromatina granular fina, que vienen a ser las CELULAS
PLANAS INTERMEDIAS. También es posible diferenciar un tercer tipo de
células planas de menor tamaño que las anteriores, de forma ovoide, con
núcleo también ovoide o redondeado con cromatina granular y fina que
corresponden a las CELULAS BASALES (en algunas láminas se encuentran
en escasa cantidad).También podrá corroborar que aparte de la forma celular
imperante, el citoplasma de estas células puede estar coloreado de rosado
por lo que se les denomina CELULAS ACIDOFILAS; o de color azulado-
verdoso y se les denomina CELULAS BASOFILAS.
LAMINA 2
Muestra: PULPEJO DE DEDO
Coloración: HEMATOXILINA-EOSINA (H-E)
Objetivo: RECONOCIMIENTO DE CELULAS FUSIFORMES
(FIBROBLASTOS).
DESCRIPCIÓN: Enfocar a menor aumento, la zona correspondiente a la
Dermis donde observará unas fibras gruesas, de color rosado ligeramente
denso que corresponde al tejido conectivo que constituye la dermis. A mayor
aumento podrá apreciar que estas fibras son alargadas a manera de huso
(fusiformes) porque sus extremos son agudos, de color rosado (eosinófilo) y
con presencia de núcleo basófilo (morado) también fusiforme o alargado.
Estas células FUSIFORMES corresponden a los FIBROBLASTOS, que son
los encargados de formar el colágeno, que a su vez integra el Tejido
Conectivo.
LAMINA 3
Muestra: PLEXOS COROIDEOS
Coloración: HEMATOXILINA-EOSINA (H-E)
Objetivo: RECONOCIMIENTO DE CELULAS CUBICAS.
DESCRIPCIÓN:
Al observar a menor aumento (10 X) apreciará Ud. unas estructuras
dispuestas a manera de cuentas de un collar, y en otras a manera de hileras,
las que a mayor aumento (40 X) están constituidas por células de forma
cúbica, dispuestas en una sola capa, cuyo citoplasma es acidófilo y su núcleo
redondo, central, grande y basófilo.

LAMINA 4
Muestra: SECCION DE TRAQUEA.
Coloración: HEMATOXILINA-EOSINA (H-E)
Objetivo: RECONOCIMIENTO DE CELULAS CILÍNDRICAS CILIADAS
(FORMANDO EPITELIO).
DESCRIPCIÓN:
En esta lámina, a menor aumento apreciará una estructura sumamente
morada con áreas claras, bien celular, que constituye el CARTÍLAGO
TRAQUEAL; inmediatamente, adyacente a él hay un tejido rosado laxo que
es tejido conectivo, luego, una capa de células cilíndricas, que parecen
numerosas por la disposición de sus núcleos basófilos en diferentes niveles
formando pseudoestratos (que forman un epitelio) y presentan unas
proyecciones muy finas en su superficie, a manera de penacho que
constituyen los cilios. Estas células así dispuestas, son las denominadas
CELULAS CILÍNDRICAS CILIADAS, que anteriormente se observaron
aisladas, en el frotis de cepillado bronquial.
LAMINA 5
Muestra: SECCION DE MEDULA ESPINAL
Coloración: HEMATOXILINA-EOSINA (H-E)
Objetivo: RECONOCIMIENTO DE CELULAS MULTIPOLARES O
ESTRELLADAS.
DESCRIPCIÓN:
Proceda a observar la lámina a simple vista o a trasluz, donde podrá
diferenciar 02 áreas bien definidas: una clara periférica que corresponde a la
sustancia blanca de la médula espinal y, otra más oscura, violácea, en forma
de letra “H” que viene a constituir la sustancia gris de este órgano. Esta
sustancia gris, presenta un área más amplia que corresponde a las astas
anteriores o motoras y otras más delgadas al extremo opuesto que son las
astas posteriores o sensitivas de la médula espinal. Después de hacer esta
identificación, ahora sí al microscopio enfoque Ud. a menor aumento (10 X)
directamente sobre el asta anterior de la sustancia gris, donde podrá observar
abundantes células, entre las que destacan unas de mayor tamaño y que
adoptan forma estrellada o triangular, con vértices o polos de donde emergen
unas prolongaciones citoplasmáticas (las dendritas y cilindroejes o axones);
verifíquelas a mayor aumento (40 X). Estas células de forma estrellada, son
las CELULAS MULTIPOLARES.