ENZIMA QUE CATALIZA LA REACCIÓN ATP + D-glucosa ͢ ADP + D-glucosa 6-fosfato : ATP glucosa fosfotransferasa (hexoquinasa)

FIJACIÓN DE UN SUSTRATO AL SITIO ACTIVO DE UN ENZIMA

ENZIMAS ALTERAN LAS
VELOCIDADES DE REACCIÓN
(DISMINUYENDO LAS
ENERGÍAS DE ACTIVACIÓN)
PERO NO LOS EQUILIBRIOS
DE REACCIÓN.
REACCIÓN CATALIZADA POR ENZIMA Y SIN CATALIZAR
VALOR NEGATIVO DE ENERGÍA LIBRE
ESTÁNDAR REFLEJA UN EQUILIBRIO DE
REACCIÓN FAVORABLE, NO UNA VELOCIDAD
DE REACCIÓN ELEVADA.
VELOCIDAD DE REACCIÓN DETERMINADA POR
CONCENTRACIÓN DE REACTIVOS Y UNA
CONSTANTE DE VELOCIDAD:

V= k[S] REACCIÓN DE PRIMER ORDEN

V= k[S1] [S2] REACCIÓN DE SEGUNDO ORDEN
GRAN PARTE DE LA ENERGÍA
REQUERIDA PARA DISMINUIR LA
ENERGÍA DE ACTIVACIÓN
PROVIENE DE REORDENACIONES
DE ENLACES COVALENTES Y DE
INTERACCIONES DÉBILES NO
COVALENTES ENZIMA-SUSTRATO:
ENERGÍA DE FIJACIÓN, PRINCIPAL
FUENTE DE ENERGÍA LIBRE
ΔGB
ENZIMA PERFECTAMENTE
COMPLEMENTARIA AL
SUSTRATO: SE FORMARÍA
COMPLEJO MUY ESTABLE Y
CONDUCE A POZO
ENERGÉTICO.
ENZIMA HA DE SER
COMPLEMENTARIA AL ESTADO
DE TRANSICIÓN DE LA
REACCIÓN.
 AMINOÁCIDOS IMPLICADOS EN CATÁLISIS ÁCIDO-BASE GENERAL

MECANISMOS QUE COLABORAN

EN LA ROTURA O FORMACIÓN DE
ENLACES:
CATÁLISIS ÁCIDO-BASE GENERAL
CATÁLISIS COVALENTE
CATÁLISIS POR IONES METÁLICOS

(DIFERENTES A LOS BASADOS EN

ENERGÍA DE FIJACIÓN ΔGB )
CINÉTICA ENZIMÁTICA

EFECTO DE LA CONCENTRACIÓN DE
SUSTRATO SOBRE LA VELOCIDAD
INICIAL DE UNA REACCIÓN
CATALIZADA POR ENZIMAS.
CONCENTRACIÓN DE SUSTRATO A LA
QUE V0 ES LA MITAD DE LA MÁXIMA:
Km CONSTANTE DE MICHAELIS

LA ENZIMA SE COMBINA EN PRIMER

LUGAR DE FORMA REVERSIBLE CON
SU SUSTRATO FORMANDO UN
COMPLEJO ES (RÁPIDO)
COMPLEJO ES SE DESCOMPONE
DEJANDO ENZIMA LIBRE Y EL
PRODUCTO DE LA REACCIÓN (LENTO)
ECUACIÓN DE MICHAELIS-MENTEN
TOMANDO LOS
INVERSOS EN AMBOS
MIEMBROS DE LA
ECUACIÓN DE
MICHAELIS-MENTEN,
SE OBTIENE LA
GRÁFICA DE LOS
DOBLES RECÍPROCOS
DE LAS VELOCIDADES
DE REACCIÓN.
GRÁFICA DE LOS DOBLES
RECÍPROCOS DE LAS
VELOCIDADES DE REACCIÓN
PERMITE DISTINGUIR ENTRE
CIERTOS TIPOS DE REACCIÓN
ENZIMÁTICA Y ANALIZAR LA
INHIBICIÓN ENZIMÁTICA.

CONSTANTE DE VELOCIDAD PARA

DESCRIBIR LA VEL LIMITANTE DE
CUALQUIER REACCIÓN ENZIMÁTICA
EN CONDICIONES DE SATURACIÓN
(NÚMERO DE RECAMBIO),
EQUIVALENTE AL NÚMERO DE
MOLÉCULAS DE SUSTRATO
CONVERTIDAS EN PRODUCTO POR
UNIDAD DE TIEMPO .
Kcat
EFICIENCIA CATALÍTICA PROPORCIONADA POR LA RELACIÓN
kcat/Km
ANÁLISIS CINÉTICO EN
ESTADO ESTACIONARIO
DE REACCIONES
BISUSTRATO:
FORMACIÓN DE
COMPLEJO TERNARIO EN
LA REACCIÓN.
ANÁLISIS CINÉTICO EN
ESTADO ESTACIONARIO
DE REACCIONES
BISUSTRATO:
LA REACCIÓN
TRANSCURRE A TRAVÉS
DE UNA RUTA DE DOBLE
DESPLAZAMIENTO
(PING-PONG).
INHIBICIÓN COMPETITIVA
INHIBICIÓN ACOMPETITIVA
INHIBICIÓN MIXTA
PERFILES DE ACTIVIDAD FRENTE A pH DE DOS ENZIMAS:
pH ÓPTIMO REFLEJA EL AMBIENTE CELULAR EN EL QUE NORMALMENTE SE ENCUENTRA.
ESTRUCTURA DE LA QUIMOTRIPSINA

REPRESENTACIÓN DE LA ESTRUCTURA
PRIMARIA.
SU MECANISMO DE REACCIÓN
COMPRENDE CATÁLISIS ÁCIDO-BASE
GENERAL, CATÁLISIS COVALENTE Y
ESTABILIZACIÓN DE ESTADO
ESTACIONARIO.
ESTRUCTURA DE LA QUIMOTRIPSINA

REPRESENTACIÓN DE LA SUPERFICIE DE
LA ENZIMA.
ESTRUCTURA DE LA QUIMOTRIPSINA

REPRESENTACIÓN DE CINTAS PARA

ESQUELETO POLIPEPTÍDICO.
ESTRUCTURA DE LA QUIMOTRIPSINA

AMPLIACIÓN DEL SITIO ACTIVO CON

EL SUSTRATO UNIDO. HIDROXILO DE
LA Ser195 ATACA AL GRUPO
CARBONILO DEL SUSTRATO.
 RELACIÓN ENTRE pH Y LA ACTIVIDAD
ENZIMÁTICA

TODOS LOS ENZIMAS TIENEN UN pH ÓPTIMO

EN EL QUE PRESENTAN LA MÁXIMA ACTIVIDAD.
VELOCIDAD DE REACCIÓN CATALIZADA POR
QUIMOTRIPSINA VS. Ph.
VELOCIDAD SE HA OBTENIDO A BAJAS
CONCENTRACIONES DE SUSTRATO.
TRANSICIONES ILUSTRADAS EN b) Y c) ESTAN
DADOS POR DIFERENTES ESTADOS DE
IONIZACIÓN DE LA CADENA LATERAL DE His57
(CUANDO NO HAY SUSTRATO UNIDO) Y DEL
GRUPO α-AMINO DE LA Ile16
ROTURA HIDROLÍTICA DE UN
ENLACE PEPTÍDICO POR LA
QUIMOTRIPSINA

SE DA EN DOS FASES (Y SIETE

PASOS): FORMACIÓN DE
INTERMEDIARIO COVALENTE
Y POSTERIOR REGENERACIÓN
DE LA ENZIMA.
 ENCAJE INDUCIDO EN LA HEXOQUINASA
CAMBIO CONFORMACIONAL INDUCIDO POR LA UNIÓN DE LA D-GLUCOSA.
INTERACCIONES ENTRE SUBUNIDADES
EN ENZIMA ALOSTÉRICO.
INTERACCIONES CON INHIBIDORES Y
ACTIVADORES.
DIFERENTES SITIOS DE FIJACIÓN PARA
SUSTRATO Y MODULADOR:
SUBUNIDADES CATALÍTICA Y
REGULADORA. FIJACIÓN DE M EN
SUBUNIDAD R GENERA CAMBIO
CONFORMACIONAL EN SUBUNIDAD C.
CAMBIOS EN LA CONFORMACIÓN DE ENZIMA REGULADOR ALOSTÉRICO
ASPARTATO TRANSCARBAMILASA
 RETROINHIBICIÓN

ENZIMA REGULADOR ES
INHIBIDO DE FORMA ESPECÍFICA
POR EL PRODUCTO FINAL,
CUANDO ESTE SE ACUMULA EN
EXCESO FRENTE A NECESIDADES
DE LA CÉLULA.
CONVERSIÓN DE L-TREONINA EN
L-ISOLEUCINA CATALIZADA POR
SECUENCIA DE 5 ENZIMAS.
 CURVAS DE ACTIVIDAD EN
FUNCIÓN DE LA
CONCENTRACIÓN DE SUSTRATO
DE
ENZIMAS ALOSTÉRICOS:

SUSTRATO COMO MODULADOR

POSITIVO.
 CURVAS DE ACTIVIDAD EN
FUNCIÓN DE LA
CONCENTRACIÓN DE
SUSTRATO DE
ENZIMAS ALOSTÉRICOS:

MODULADORES POSITIVOS Y
NEGATIVOS, SIN CAMBIO EN
Vmax.
CURVAS DE ACTIVIDAD EN
FUNCIÓN DE LA
CONCENTRACIÓN DE
SUSTRATO DE
ENZIMAS ALOSTÉRICOS:

MODULACIÓN CON
ALTERACIÓN DE Vmax.
REACCIONES DE
MODIFICACIÓN
DE ENZIMAS
 REGULACIÓN DE LA ACTIVIDAD
ENZIMÁTICA POR MODIFICACIÓN
COVALENTE

REGULACIÓN DE LA ACTIVIDAD DE LA
GLUCÓGENO FOSFORILASA DE MÚSCULO E
HÍGADO, QUE CATALIZA LA REACCIÓN DE
PRODUCCIÓN DE GLUCOSA 1-FOSFATO:
FORMA a MÁS ACTIVA, RESIDUOS ESPECÍFICOS
DE Ser FOSFORILADOS.
DESACTIVACIÓN Y REACTIVACIÓN SON
PROMOVIDOS POR ACCIÓN DE OTRAS ENZIMAS.
EJERCICIO
El sustrato fructosa 6-fosfato es
transformado a fructosa1-6-bifosfato en
una reacción irreversible catalizada por la
enzima Fosfofructoquinasa-1 (PFK-1), la
enzima es regulada por la molécula
fructosa 2,6-bifosfato (F2,6BP). La gráfica
muestra el comportamiento cinético de la
enzima en presencia (+) y ausencia (-) del
F2,6BP; el análisis indica que el F2,6BP
actúa como un:

• Modulador alostérico negativo

• Inhibidor irreversible
• Modulador alostérico positivo
• Inhibidor no competitivo
EJERCICIO:
La enzima muscular lactato deshidrogenasa cataliza la
reacción
Piruvato + NADH + H+ → Lactato + NAD+
NADH y NAD+ son las formas reducida y oxidada,
respectivamente, del coenzima NAD. Las disoluciones de
NADH, pero no las de NAD+, absorben luz a 340 nm. Esta
propiedad se utiliza para determinar la concentración de
NADH en disolución midiendo
espectrofotométricamente la cantidad de luz absorbida a
340 nm. Explique cómo se puede utilizar estas
propiedades del NADH para diseñar una determinación
cuantitativa de la actividad de la lactato deshidrogenasa.
EJERCICIO:
El análisis de enzimas en el plasma sanguíneo ha desempeñado una
función fundamental en el diagnóstico. Muchas enzimas son
constituyentes funcionales de la sangre; entre algunos ejemplos están
seudocolinesterasa, lipoproteína lipasa, así como componentes de la
cascada de eventos en la coagulación de la sangre y la disolución de
coágulo. Otras enzimas se liberan hacia el plasma después de muerte
o lesión celular; si bien estas últimas no desempeñan una función
fisiológica en el plasma, su aparición o sus concentraciones son de
utilidad en el diagnóstico y el pronóstico de enfermedades y lesiones
que afectan tejidos específicos. ¿Cuáles son las principales enzimas
séricas usadas en el diagnóstico clínico?