Nicolás Contreras Murcia

Daniela Ardila Greiff

Taller
1. Datos
[S] V

0,1 0,4

0,13 0,49

0,17 0,65

0,25 0,88

0,5 1,8

1 3,32

2 4,9

4 6,19

8 7,13

15 7,79

25 7,83
Tabla 1. ​Datos punto 1.
Michaelis - Menten

​ ichaelis - Menten.
Gráfica 1. M
Respuesta:
Vmax 7,83

Vmax/2 3,915
 Km 1,3765
Tabla 2. ​Resultados Michaelis - Menten.
Se encuentra el intercepto de la gráfica, interpolando los datos de la tabla para hallar el
valor de Km.
[S] Velocidad

1 3,32

1,3765 3,915

2 4,9
Tabla 3. ​Interpolación para hallar Km.
Lineweaver - Burk
1/[S] 1/V0

10 2,5

7,692307692 2,040816327

5,882352941 1,538461538

4 1,136363636

2 0,555555556

1 0,301204819

0,5 0,204081633
Tabla 4. ​Linealización Lineweaver - Burk.

Gráfica 2. ​Lineweaver - Burk

Respuesta:
Vmax 11,87648456

Km 2,93824228
Tabla 5. ​Respuestas obtenidas por Lineweaver - Burk.
Para hallar la velocidad máxima se hace 1/b, en donde b es dada por la gráfica y para hallar
Km se multiplica la pendiente por la velocidad máxima, m es proporcionado por la ecuación
de la gráfica 2.

Eadie - Hofstee
V0/[S] V0

4 0,4

3,076923077 0,49

2,352941176 0,65

1,6 0,88

0,8 1,8

0,4 3,32

0,2 4,9

0,1 6,19

0,05 7,13

0,026666667 7,79

0,016 7,83
Tabla 6. ​Linealización Hofstee.

​ adie - Hofstee.
Gráfica 3. E
Respuesta:
Vmáx 7,79
Km 1,82
Tabla 7. ​Respuestas linealización Hofstee.
Conclusión​, los tres métodos no dan la misma respuesta, pero el más afín es el de
Lineweaver, debido que es el más lineal, con un R2 mayor, y con un método más exacto
para hallar la velocidad máxima y el Km, tiene una desviación menor.

2. Actividad específica de 74U/mg de proteína y contiene 21 mg de proteína/ml,

velocidad de reacción?
a) 5μl * (1x10 −3 /1μl) * (21mg/ml) * (74U /mg) = 7, 77μmol
Respuesta: ​0,77 μ moles/min
b)25 μl *(1x10 −3 ml/1μl) * (21mg/ml) * (74U /mg) = 38, 85μmol
Respuesta:​ 38,85 μ moles/min
c) 50μl * ( 1x10 −3 /1μl) * (21mg/ml) * (74U /mg) = 7, 77μmol /min
Respuesta: ​77,7 μ moles/min
Conclusión, ​la preparación enzimática es directamente proporcional con la velocidad
máxima.

3. Datos

Tabla 8. ​Datos punto 3.

​ elocidad vs [S].
Gráfica 3. V
 a) Para determinar los parámetros se realizó la gráfica usando la linealización de
1
Lineweaver-Burk, para esta linealización sabemos que para esta linealización V max
esta en x=0. De este modo y usando las ecuaciones hallamos el valor de Vmax
Para 1/V:
1 1
y = 0, 0997(0) + 0, 1003 −> y = 0, 1003 −> V max = 0, 1003 −>− 1 = 0, 1003V max −>− 1,003 = V max = 0, 997
Para 1/VA
1 1
y = 0, 1989 −> V max = 0, 1989 −> 0,1989 = V max = 5, 027
Para 1/VB
1 1
y = 0, 0997 −> V max = 0, 0997 −> 0,0997 = V max = 10, 031

Una vez obtenidos los valores de Vmax procedemos a calcular cada uno de los Km para
esto usaremos m = VKmmax al cual al despejar obtenemos que m * V max = K m , con esto
obtenemos que:

Respuesta:
Para V: K m = 0, 0997 * 0, 997 = 0, 0994
Para VA: K m = 0, 3001 * 5, 027 = 1, 508
Para VB: K m = 0, 201 * 10, 031 = 2, 0062

b) Usando la información anterior sabemos que ambos inhibidores son mixtos ya que
los inhibidores competitivos no tienen una variación en la velocidad máxima y los
acompetitivos no tienen variación en el Km, sin embargo con los resultados
anteriores vemos que ninguno de estos valores son Ktes al compararse con el de la
reacción sin inhibición, por lo que son inhibidores mixtos
Conclusión, ​A pesar de que usando las diferencias vistas en las gráficas es posible deducir
el tipo de inhibidor es necesario hacer los cálculo de Vmax y Km ya que a primera vista es
posible pensar que el inhibidor B posee la misma pendiente y es acompetitivo, pero en los
cálculos vemos que esto no es así.

4. Para calcular el número de recambio de la amilasa tendremos que usar la siguiente

ecuación:
K cat = V[Emax] ; Sabemos que Vmax=8,5mg/min, pasando esto a ​ µ​mol/min
T
1000 1
8, 5 * 1 * 342 = 24, 85

Además sabemos que pH = 6, 7 = − log[E T ] −> [E T ] = 10−6,7 = 1, 996e − 7

Usando estos valores obtenemos que
24,85
K cat = 0,1996 = 124, 5 Para este calculo se paso el 1,996e-7 a ​µmoles por esto el valor no es
el mismo en la ecuación
−1
Respuesta: ​124,5​ S

5. [​S]​i ​= 1.5 x 10​-3 ​M, [S]​0 ​= 7.69 x 10​-5 , ​[I] = 3.7 x 10​-4 ​M, ​Ki=?
Inhibidor competitivo, se hace uso de la siguiente fórmula:

[I]
[S]i = [S]0 (1 + Ki )
Respuesta:​ Al despejar Ki, para obtener la constante de inhibición es de 2x10−5 M.