UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA

FACULTAD DE INGENIERÍAS
DEPARTAMENTO DE INGENIERÍA DE ALIMENTOS
PROGRAMA DE INGENIERÍA DE ALIMENTOS

Practica de Laboratorio de Microbiología de Alimentos

Recolección de Muestras de Agua para Análisis Bacteriológico y
Cuantificación de Microorganismos por el Método de Filtración por
Membrana
Marlon Julio Vergara Monterroza – Georgette María Celis Quiñonez – María Angélica
Suárez Orozco – Eliazith José Lozano Álvarez – María Camila Durante Cordero.
Colaboración:
Ph. D. Alba Manuela Durango Villadiego

Resumen
Esta práctica se llevó a cabo en el Laboratorio de Microbiología de Alimentos de la
Universidad de Córdoba, Campus Berástegui, donde se pudo analizar una muestra
considerada de agua del grifo de la sala de profesores de la Facultad de Ingeniería de
Alimentos, con el fin de evaluar la eficiencia en los procesos de tratado de tal fuente de agua.

Palabras Claves: Filtración por membrana, Agua, Análisis Bacteriológico,

Microorganismos.

1. INTRODUCCIÓN (principalmente intestinales) como son los

causantes de la tifoidea (Salmonella typhi),
La determinación de la calidad
la disentería (Shigella dysenterieae) o el
bacteriológica reviste gran importancia en
cólera (Vibrio cholerae) entre otros.
el ámbito de la salud pública ya que
permite garantizar la inocuidad del agua Sin embargo, la detección de
destinada al consumo evitando así microorganismos patógenos es poco
epidemias gastrointestinales. práctica por las siguientes razones:
El agua destinada al consumo humano a. No siempre están presentes en la
puede ser contaminada por las agua fuente de contaminación (material
residuales o por desechos humanos y fecal), pueden aparecer
animales que pueden contener repentinamente.
microorganismos patógenos
 b. Al diluirse en el agua, pueden
quedar en concentraciones no
detectables por los métodos de
laboratorio.
c. Sobreviven relativamente poco
tiempo en el agua, por lo que
pueden desaparecer antes de ser
detectados.
d. Los resultados del análisis
bacteriológico del agua se obtienen
después que ésta ha sido
consumida por lo cual si hay
patógenos, la población habrá
estado expuesta a la infección.
Todo esto hace indispensable una medida
de control más efectiva como es la
detección del peligro potencial; es decir, la
advertencia del riesgo de contaminación
con microorganismos patógenos antes de
que aparezcan.
Para detectar ese peligro potencial, se
utilizan indicadores de contaminación que
reúnen las siguientes características:
a. Se encuentran como flora normal
en la fuente de contaminación, es
decir, en la materia fecal,
independientemente de que haya o
no microorganismos patógenos.
b. Son más resistentes y sobreviven
en el agua más tiempo que los
patógenos.
c. Su detección en el laboratorio es
relativamente rápida, fácil y
confiable.
Las bacterias coliformes reúnen las
características anteriores, ya que se
encuentran en grandes cantidades en el
tracto intestinal del hombre y de los
mamíferos y por lo tanto en sus heces y es
fácil diferenciar las especies coliformes de
origen fecal de las que no lo son.
La sobrevivencia de los coliformes en el
agua es mayor que la de cualquier bacteria
es enteropatógena y su identificación es
fácil y confiable.
Por todo ello, el aspecto más importante
del análisis bacteriológico del agua es la
determinación de coliformes que puede
hacerse por el método del número más
probable (NMP) o por el método de
filtración de membrana (FM).1
Existen otros métodos microbianos que
son indicadores de otros tipos de
contaminación:
Bacterias mesófilas aerobias que reflejan
la exposición de la muestra a la
contaminación en general, la existencia de
condiciones favorables para la
multiplicación de microorganismos y la
presencia de materia orgánica. La
determinación de bacterias mesófilas
aerobias también es rutinaria en el análisis
bacteriológico del agua.
Streptococcus de origen fecal, que son más
abundantes que los coliformes en el tracto
intestinal y heces de los animales, pero
sobreviven menos que los coliformes
porque prácticamente no se multiplican en
el agua, por ello su predominio en el agua
indica contaminación fecal proveniente de
animales o contaminación relativamente
reciente.
La relación entre el número de coliformes
y el número de Streptococcus de origen
fecal son: S. faecalis, S. faccium, S.
durans, S. equinus y S. bovis.
Clostridium perfringens que también se
encuentra en la flora normal intestinal y,
por ser esporulado, resiste la presencia de
sustancias tóxicas que se encuentran en
aguas residuales de industrias; por eso es
indicador de contaminación fecal en este
tipo de aguas, en las que otros
microorganismos no sobreviven.
 2. MATERIALES, REACTIVOS
Y MEDIOS DE CULTIVO
Determinación de Coliformes Totales y
Materiales: E. Coli por el Método de Filtración por
Membrana
 Filtro de membrana estéril
 Pinza 1. Para la filtración por membrana se
 Probetas utilizó un equipo que se encontraba
 Tubos de ensayo en laboratorio de la universidad y
 Agua destilada fue manejado por la auxiliar de
 Algodón laboratorio para evitar accidentes.
 Mechero de Bunsen Este constaba de una capa porosa
 Muestra de agua (del grifo del donde se ubicó la membrana con la
filtro de la Sala de Profesores). trama para arriba.
2. Previamente se ajustó el embudo a
Reactivos: la base del receptáculo y se aseguró
que la llave se encontrara cerrada.
 Alcohol al 70%
3. Con una probeta esterilizada de 50
Medios de Cultivo: ml se añadió la muestra en el
receptáculo completando los 100
 Caldo Casoy a doble
ml establecidos y se encendió el
concentración.
aparato hasta que el agua en el
 Agar Chromocult receptáculo desapareciera.
 Agar Cetrimide 4. Se adicionaron 30 ml de agua
destilada y se filtró para enjuagarla
3. METODOLOGÍA y en el instante se retiró el embudo
Captación de Muestras de Grifo o teniendo en cuenta que la llave se
Llaves encontraba cerrada y se retiró la
membrana con mucho cuidado y se
1. Para la obtención de agua del grifo adhirió a una placa de agar
de la sala de profesores de la Chromocult evitando que quedara
universidad de Córdoba sede aire atrapado entre la membrana y
Berastegui, se utilizó un recipiente el medio.
que fue previamente esterilizado y 5. Se llevaron a cabo tres filtraciones
rotulado. Se tuvo en cuenta que por membrana para la
esta no presentara ningún tipo de determinación de coliformes
escape. totales y E. coli.
2. Se abrió la llave y se dejó correr 6. Las placas se chromocult se
agua por tres minutos para eliminar incubaron a una temperatura de
impurezas. 35°C por 24 horas.
3. Se inició la recolección de agua 7. A las 24 horas se observaron la
evitando ciertas salpicaduras, hasta presencia de colonias provenientes
la tercera parte del recipiente, al de Coliformes totales y E. coli, que
terminar refrigeramos la muestra e fueron reconocidas por lo
inmediatamente la llevamos al establecido en la literatura.
laboratorio. 8. Para la confirmación o
comprobación de coliformes
fecales le añadimos a las colonias
 pertenecientes a E. coli se adiciono 4. RESULTADOS
una gota de reactivo de Koach por
un minuto que por el cambio de
color a rojo se confirma que hay
presencia de coliformes fecales en
el agua tomada del grifo de la sala
de profesores de la Universidad de
Córdoba.
Determinación de Pseudomonas
Aeruginosa por el Método del Número
Más Probable.
1. Antes del análisis de la muestra se
limpió el recipiente con alcohol al Imagen 1. Determinación de E. coli por
70% y se mezcló la muestra. filtración por membrana.
2. Se adicionaron 10 ml de agua en 5
tubos que contenían caldo Casoy a
doble concentración.
3. Se adiciono 1 ml de agua en 5
tubos que contenían caldo Casoy a
una concentración simple.
4. Se adiciono 1ml de agua en 5 tubos
que contenían caldo Casoy a una
concentración simple a partir de
una dilución de buffer.
5. Los 15 tubos fueron rotulados con
su respectiva información e
incubados a una temperatura de
37°C por 24 horas. Imagen 2. Determinación de E. coli por
6. A las 24 horas se observó una filtración por membrana.
turbidez en uno de los tubos de
concentración simple
7. Para confirmar la presencia de
Pseudomonas Aeruginosa se toma
una muestra del tubo que presento
turbidez y se sembró en un medio
de agar Cetrimide y se incubo a
37°C por 24.
8. A las 24 horas se observó que no
hubo crecimiento de las colonias a
determinar.

Imagen 3. Determinación de E. coli por

filtración por membrana.
 Imagen 8. Prueba de Pseudomona
Imagen 4. Comprobación de colonias de
aeruginosa. Concentración doble.
E. coli.

Imagen 5. Comprobación de colonias de Imagen 9. Prueba de Pseudomona

E. coli. aeruginosa. Concentración con buffer.

Imagen 7. Prueba de Pseudomona

aeruginosa. Concentración simple. Imagen 10. Repique de tubo de
concentración simple que presentó
turbidez.
 5. ANÁLISIS DE RESULTADOS
Y DISCUSIONES
1. Determinación de coliformes totales
y E. coli por el método de filtración
por membrana
Reporte:
Dado a que el agua que se recogió como
muestra es potable, el recuento de
microorganismos fue mínimo, inferior a
20 UFC.
Al contar la UFC en las tres cajas, se
obtuvieron 7 UFC (4 UFC presuntivas y 3
UFC de E. coli), por lo tanto se tiene que:
𝑈𝐹𝐶 𝑑𝑒 𝐶𝑜𝑙𝑖𝑓𝑜𝑟𝑚𝑒𝑠/100𝑚𝐿
𝑈𝐹𝐶 𝑑𝑒 𝐶𝑜𝑙𝑖𝑓𝑜𝑟𝑚𝑒𝑠 𝑐𝑜𝑛𝑡𝑎𝑑𝑜𝑠
= × 100
𝑚𝐿 𝑑𝑒 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎
𝑈𝐹𝐶 𝑑𝑒 𝐶𝑜𝑙𝑖𝑓𝑜𝑟𝑚𝑒𝑠/100𝑚𝐿
7 𝑈𝐹𝐶
= × 100
300𝑚𝐿
𝑈𝐹𝐶 𝑑𝑒 𝐶𝑜𝑙𝑖𝑓𝑜𝑟𝑚𝑒𝑠/100𝑚𝑙
= 2.3 𝑈𝐹𝐶/𝑚𝐿
Este resultado se expresa como Recuento
de Coliformes comprobados, por lo tanto:
% 𝑑𝑒 𝑐𝑜𝑙𝑖𝑓𝑜𝑟𝑚𝑒𝑠 𝑣𝑒𝑟𝑖𝑓𝑖𝑐𝑎𝑑𝑜𝑠
𝑁ú𝑚𝑒𝑟𝑜 𝑑𝑒 𝑈𝐹𝐶 𝑐𝑜𝑚𝑝𝑟𝑜𝑏𝑎𝑑𝑜𝑠
= × 100
𝑁ú𝑚𝑒𝑟𝑜 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙 𝑑𝑒 𝑈𝐹𝐶 𝑝𝑟𝑒𝑠𝑢𝑛𝑡𝑖𝑣𝑎𝑠
% 𝑑𝑒 𝐶𝑜𝑙𝑖𝑓𝑜𝑟𝑚𝑒𝑠 𝑣𝑒𝑟𝑖𝑓𝑖𝑐𝑎𝑑𝑜𝑠
2.3 𝑈𝐹𝐶
= × 100
4 𝑈𝐹𝐶
% 𝑑𝑒 𝐶𝑜𝑙𝑖𝑓𝑜𝑟𝑚𝑒𝑠 𝑣𝑒𝑟𝑖𝑓𝑖𝑐𝑎𝑑𝑜𝑠 = 57.5
Con este resultado, se tiene que de las 7
UFC el 57.5% de éstas son coliformes
verificadas.
Si tomamos en cuenta estos valores y los
indicados por la resolución 2115 de 2007,
en donde dice que la aceptación del agua
para consumo humano debe cumplir con
un parámetro de 0 UFC por 100 cm3, el
agua tomada como muestra, no cumple
con éste parámetro.
Muchos factores pudieron afectar dicha
agua, ya sea el mismo dispensador o en
otro caso, el propio recipiente utilizado
para la recolección de la muestra. Aunque
la contaminación no fue muy notoria, se
debe tener en cuenta, sobre todo por el
parámetro de aceptación que debe tener el
agua para consumo humano.
2. Determinación de Pseudomona
aeruginosa por el método del
número más probable
Para la determinación de Pseudomona
aeruginosa, se observaron los respectivos
15 tubos con concentraciones simple,
doble y buffer, en los cuales no se observó
turbidez, sólo en un tubo de concentración
simple, al cual se le realizó el respectivo
repique en agar Cetrimide. A las 24 horas
de incubación, no se consiguió observar
crecimiento alguno en el medio, lo que
indica que no hubo presencia de dicho
microorganismo. La ausencia de este
microorganismo, indica un adecuado
manejo del agua, y la poca contaminación
del agua.
6. CONCLUSIONES
 Los programas de control se
establecen tomando en cuenta la
calidad bacteriológica de la fuente
de abastecimiento, los riesgos de
contaminación, la longitud de la
red de distribución, los cambios
estacionales y eventualidades tales
como brotes epidémicos,
reparaciones, interrupciones y
operación anormal, entre otras.
 Desde el punto de la salud Pública,
los resultados individuales de
muestras tomadas de la red de
distribución tienen solo un valor
 relativo; el control de la calidad
bacteriológico del agua debe ser
sistemático.
 La determinación de Coliformes
totales y E. coli por filtración por
membrana, resultó muy efectivo a
la hora de determinar la pequeña
cantidad de coliformes presentes
en el agua potable.
 La presencia de Coliformes totales
en la muestra de agua tomada,
indica un mal manejo del
tratamiento del agua potable,
además de un posible inadecuado
mantenimiento del dispensador de
la sala de profesores.
7. RECOMENDACIONES
 Hacer un buen proceso o programa
de limpieza y desinfección en los
dispensadores de agua.
 El recipiente que se va a utilizar
para tomar la muestra de agua,
debe estar completamente libre de
cualquier tipo contaminación que
pueda afectar la muestra, y por
tanto, el resultado del estudio.
 Tener sumo cuidado al momento
de realizar la filtración por
membrana, ya que, un excesivo
filtrado por vacío puede provocar
que la membrana se rasgue.
 Recuento para Coliformes totales:
Se debe contar todas las colonias,
las de color rojo salmón más las
azules oscura. El resultado se
obtiene por la multiplicación del
número total de colonias de la caja
más representativa por el inverso
de la dilución utilizada. El
resultado debe ser presentado con
dos cifras significativas.
 Cuéntense como colonias
individuales aquellas que poseen
aspecto de colonias y crecen muy
cerca unas de otras, sin tocarse,
siempre que la distancia entre ellas
sea al menos igual al diámetro de
la colonia más pequeña. Cuéntese
como una unidad, las cadenas de
colonias que parezcan ser
consecuencia de la desintegración
de un grupo de bacterias. Las
colonias que se forman como una
película entre el agua y el borde de
la superficie del agar cuando no se
filtra bien,se deben contar como
una sola.
8. INVESTIGACIÓN
Las personas consideran que el agua
envasada está libre de microorganismos y
es apta en cualquier condición para su
consumo que esta agua es totalmente libre
de impurezas y absolutamente inocua.
Generalmente se evalúa el contenido de
bacterias en el agua envasada en botellas y
bolsas únicamente en base al contenido de
coliformes. Después del embotellado, la
cuenta bacteriana en el contenedor
aumenta rápidamente gracias al contenido
de materia orgánica en el agua. Este
aumento tiende a ser mayor en aguas no
carbonatadas y en contenedores plásticos.
Entre las bacterias predominantes se
encuentra el género Pseudomonas,
algunas de las cuales son conocidas como
oportunistas. Su presencia en estas aguas
indica una contaminación en el proceso.
Es importante determinar la presencia de
Pseudomnas aeuruginosa en aguas
envasadas ya que es un patógeno
oportunista que rara vez causa
enfermedad en individuos sanos Es
responsable de numerosos casos de
infección nosocomial, afectando
principalmente a individuos
inmunocomprometidos, con quemaduras
graves, heridas quirúrgicas, neutropenia o
con infecciones pulmonares subyacentes.
Puede ocasionar, entre otros: neumonía,
meningitis, sobreinfección de heridas,
ectima gangrenoso, infecciones urinarias,
infecciones osteoarticulares, endocarditis,
infecciones oculares o septicemia. La
resistencia posiblemente se da debido a la
acumulación de biopelículas en los
equipos de procesamiento, donde estas
bacterias pueden permanecer por un largo
periodo.2
9. REFERENCIAS
BIBLIOGRÁFICAS
 AMERICAN PUBLIC HEALTH
ASSOCIATION, AMERICAN
WATER WORKS
ASSOCIATION, WATER
POLLUTION CONTROL
FEDERATION. Standard
Methodsfor the Examination of
Water and Wastewater. 21 ed. New
York, 2005.1
 INSTITUTO COLOMBIANO DE
NORMAS TÉCNICAS Y
CERTIFICACIÓN. GTC 82:2002
Guía de Buenas Prácticas para
Laboratorios que realizan
muestreo y análisis de aguas.
Bogotá. 2002.2