Guía 3 Calcio Total

Facultad de Medicina Carrera de Bioquímica Clinica Nivel: 7to.
Manual de prácticas de
Versión: 1.0
Laboratorio de Bioquímica Clínica III
Plan: B011 Cód. asignatura: 15676 Página 32 de 52
PRÁCTICA 3 – DETERMINACIÓN DE CALCIO TOTAL
1. Objetivo
• Determinar las consecuencias de usar material volumétrico no apropi

apropiado
ado en la determinación
de electrolitos o magnitudes iónica a nivel de laboratorios clínicos.
• Correlacionar marcadores bioquímicos en patologías óseas para aportar con el diagnóstico por
el laboratorio como valores con implicancia clínica.
2. Resultados de aprendizaje
prendizaje esperados
• Describir los procesos fisiológicos y fisiopatológicos de la función ósea, del equilibrio

hidroelectrolítico, a sistema endócrino, aparato genital masculino, femenino y drogas de
abuso en base a referentes teóricos
teóricos.
• Correlacionar los resultados de laboratorio con el estado de salud del paciente de acuerdo a lo
descrito en la literatura médica.
• Ejecutar los procesos pre--analíticos, analíticos y pos-analítico
analítico para la determinación de
marcadores óseos, electrolitos, gases sanguíneos, horm
hormonas,
onas, marcadores tumorales y drogas
de abuso, teniendo en cuenta las normas de bioseguridad y el control de calidad respectivos.
respectivos
3. Fundamento teórico
El calcio es el mineral más abundante en el cuerpo humano y se halla presente en diversos tejidos
del organismo,
nismo, incluyendo células del tejido nervioso, dientes, huesos, sangre y otros fluidos
corporales. Su presencia está relacionada con la formación de hueso, la coagulación de la sangre,
la recepción y transmisión de impulsos nerviosos, la contracción y rela
relajación
jación muscular, el control
hormonal y la preservación del ritmo cardíaco. (Antoni Castells, 2017)
3.1 Necesidades diarias o ingesta
En relación con los requerimientos de ingesta diaria, se recomienda una ingesta de 1.000 mg en
población
blación entre 19 y 50 años, y con forme se avanza en la edad
edad,, estos requerimientos aumentan,
hasta los 1.200 mg/día.
A diferencia de lo que ocurre con otros iones como sodio, potasio o cloro, que se absorben
completamente, la absorción del calcio y fosfato
o es incompleta debido a dos factores:
Elaboró: Máster Oscar Puente Revisó: Dr. Santiago Escalante Aprobó: Dr. Santiago Escalante
Cargo: Docente Cargo: Coordinador Carrera Cargo: Coordinador Carrera

Fecha 21/08/2019 Fecha: 27/08/2018 Fecha: 27/08/2018
Versión: 1.0
• Se requiere de la intervención de la Vitaminia D activa (calcitriol: (calcitriol 1,25-

dihidroxicolecalciferol, 1,25
1,25-DHCC)
• El calcio se combina con ciertos aniones en el lumen del intestino para formar sales
insolubles (como fosfato
ato de calcio y oxalato de calcio) que no son absorbidas.
En este mismo sentido, un adulto que ingiera una cantidad de 1.000 mg/día, debido a estos dos
factores solo podrá absorber entre 400 a 500 mg/día; de esta cantidad, 300 mg se perderán en las
heces quedando
uedando una absorción neta entre 100 a 200 mg/día.
3.2 Regulación y control de las concentraciones de calcio
La homeostasis de calcio está

tá sometida a control por múltiples vías hormonales como: Vitamina D,
factor de crecimiento de fibroblastos 23 (FGF
(FGF-23), calcitonina,
citonina, estrógenos y la Paratohormona
(PTH). La PTH es un polipéptido de 84 a.a. secretado por las glándulas paratiroides como respuesta
a una baja concentración sérica de calcio iónico. La PTH induce la resorción ósea y promueve la
reabsorción del calcio
o en los túbulos renales, evitando que se excrete en orina.
La Vitamina D es una vitamina liposoluble que se presenta en las siguientes formas:
• Forma natural o Colecalcifero o Vit

Vitamina D3 (forma inactiva): su principal fuente natural es
la síntesis dérmica
ca por acción de la radiación ultravioleta sobre el 77-deshidrocolesterol.
deshidrocolesterol.
• Ergocalciferol o Vitamina
amina D2 (forma inactiva)
• 25-hidroxivitamina
hidroxivitamina D o 25(OH)D o Calcidiol: producida por acción enzimática a nivel
hepático y constituye la principal forma de circulac
circulación de la Vitamina D en plasma por lo
que es el mejor indicador para estimar la suficiencia de Vit
Vitamina D.
• 1,25-dihidroxivitamina
dihidroxivitamina D o Calcitriol: única forma activa de la Vit
Vitamina D originada por el
metabolismo del Calcidiol en los riñones.
En su forma activa, la Vitamina D estimula la absorción de calcio en la luz intestinal, promover la

resorción ósea y disminuir la excreción renal del calcio iónico y del fosfato.
En el caso de la calcitonina, hormona hipocalcemiante secretada por las células de la glándula

glán
tiroidea, inhibe la resorción ósea influyendo de manera relativamente escasa en la regulación del
calcio.
Los mecanismos que intervienen en la regulación del calcio se pueden apreciar en la Ilustración 5.

Versión: 1.0
Ilustración 5 Regulación del Calcio Plasmático
3.3 Calcio plasmático
Una vez en el plasma, el calcio circula en diferentes formas:
• 40% del calcio se une con albúmina para su transporte

transporte,, y el grado de unión depende del
pH sanguíneo. En condiciones de pH ácido, esta unió
unión
n es menor y viceversa.
• 15% del calcio forma complejos con citratos, fosfatos o sulfatos
• 45% del calcio restante circula como calcio libre o ionizado, siendo esta la fracción
biológicamente activa, por lo tanto esta forma es reconocida por las glándulas paratiroides
pa
afectando la concentración de la PTH. (Gaw, 2015)
3.4 Determinación de calcio plasmático
A nivel de laboratorio, normalmente se hace una cuantificación de Calcio Total (ionizado

+enlazado a proteínas). Esto podría gene
generar
rar problemas a la hora de interpretar los resultados, ya
que variaciones en la concentración de albúmina provocan cambios en la concentración total de
calcio; si la concentración de albúmina disminuye, la concentración de calcio total también.
En pacientess con diagnóstico de Hipoalbuminemia, trastornos del equilibrio ácido-básico

ácido y
pacientes con enfermedad renal crónica, se debe tener cuidado en la interpretación del calcio
plasmático. Para estos casos, se siguiere calcular el “calcio corregido”. Existen varias
v fórmulas,

Versión: 1.0
pero su interpretación está en que si la concentración de albúmina no es normal en el paciente, se

calcula el valor del calcio total en caso de que la albúmina hubiese sido normal.
4 ó ú % ! 0,8
Realicemos un ejemplo para aplicar esta ffórmula:
Tenemos un paciente con aparentemente hipocalcemia,, su resultado determinado por el métodom

de o-cresoftaleína
ína fue de 7,51 mg/dl y su determinación de albúmina fue 3,1 gr/dl. Con forme dice
la teoría, en pacientes con hipoalbuminuria y se requiere conocer la concentración
ón de calcio total,
se debe corregir el valor de calcio total, por lo tanto:
7,51 / 4 3,1 / ! 0,8
8,23 /
Como se puede apreciar en este caso, la condici

condición
ón de hipoalbuminuria genera una pseudohipocalemia, ya
que al corregir el valor, el valor de calcio total es normal.
Por el otro lado, con el mismo paciente, pero con un valor de alb
albúmina normal, tendríamos:
íamos: Calcio total de
7,51 mg/dl y albúmina humana de 4,1 gr/dl
gr/dl, aplicando la fórmula:
7,51 / 4 4,1 / ! 0,8
7,43 /
Como se puede apreciar, en este caso realmente hay un estado de hipocalcemia, ya que la albúmina
alb está
normal y la deficiencia es directamente relacionada con la falta de calcio total.
4. Actividades prácticas
La actividad programada para esta práctica finalizará con la determinación cuantitativa de Calcio
total en muestras biológicas proporcionadas por el profesor.
En relación con las metodologías analíticas para determinar Calcio total, existen varias, desde la
espectrofotometría de absorción de atómi
atómica, formación de complejo de o-cresoftaleína
cresoftaleína o el
método de Arsenazo III.

Versión: 1.0
4.1 Método de Arsenazo III
El uso del reactivo Arsenazo III (ácido 1,8 1,8-dihidroxi-3,6-disulfo-2,7-naftalenen

naftalenen-bis(azo)-
dibenzenarsónico) provoca la formación de un complejo con moléculas orgánicas,
orgánicas en medios
ligeramente ácidos.. Para el caso del calcio, forman un complejo de color azul que puede ser
medido foto colorimétricamente entre 600 nm y 650 nm, siendo directamente proporcional a la
concentración de calcio total en la muestra (Wiener, 2019)
4.2 Método de 0-Cresoftaleína
Este método provoca la formación de un complejo de o o-cresoftaleína

cresoftaleína de color púrpura en
presencia de un medio alcalino. Esta solución es medida en una longitud de onda entre 540 nm a
570 nm. El desarrollo
sarrollo del color es directamente proporcional a la concentración de calcio total en
la muestra.
Este será el método que vamos a usar en nuestra práctica de laboratorio.
4.2.1 Reactivos, materiales y equipos
Tabla 12 Insumos requeridos para la determinación de Calcio total
Reactivos Materiales Equipos

Puntas amarillas sin filtro
Puntas azules sin filtro
Pipetas monocanal volumen variable: 10 a 100 µL
Calcio Liquicolor Pipetas m
monocanal volumen variable: 100 a 1000µL Espectrofotómetro
CPC método
Guantes descartables Cronómetros
REF 10011
Tubos plásticos 12 x 75 mm
Tapones pl
plásticos para tubos de 12 x 75 mm
Agua Destilada tipo II
4.2.2 Procedimiento
El procedimiento para la determinación de C Calcio total está basado en el inserto versión INF
101101 D del 02-2018-26 referencia
ferencia de reactivo 10011. Sin embargo los pasos principales son:
4.2.2.1 Preparación de la muestra
Como se mencionó antes, el Calcio es un ión importante, por lo tanto las únicas muestras
validadas para su determinación son:

Versión: 1.0
• Suero
• Plasma con heparina de liti
litio
Las muestras obtenidas con citrato de calcio o con EDTA no son recomendables porque cumplen
con su función de quelar el calcio.
4.2.2.2 Preparación del reactivo del trabajo (RT)
El kit viene provisto de Buffer (BUF) y reactivo (RGT). Para preparar el reactivo d
de
e trabajo (RT) se
deben mezclar partes iguales de los dos reactivos descritos anteriormente en función del número
de pruebas a realizar. Para este caso, cada alumnos preparará 3 ml de RT, lo que significa que
tomarán 1.5 de BUF + 1.5 de RGT. Esta preparaci
preparación
ón se realizará en los tubos cónicos color verde
proporcionados por el profesor.
Esta solución debe ser conservada tapada, en posición vertical y protegida de la luz por un lapso
de 30 minutos.
A continuación se describen las condiciones generales del ensa

ensayo:
- La temperatura establecida para esta actividad será a >30o C.

- Lectura frente a un blanco de reactivo.
- Usar 570 nm como filtro.
- Llevar todos los reactivos y muestras a temperatura ambiente.
- Preparar un cronómetro con cinco minutos.
- Concentración del estándar:
ándar: 8 mg/dl
Tabla 13 Esquema de reacción para Calcio Total
Reactivos y reactantes CANTIDAD

RT (µL) 1.000
Muestra (µL) 20
Estándar (µL) 20
Una vez realizada la mezcla, se deben realizar las lecturas del estándar y la muestra entre 5 y 30
minutos.
4.2.3 Fuentes de error
La principal fuente de errores analíticos es el uso de material de vidrio, por lo tanto la preparación
y las reacciones deben realizarse en tubos de plástico.
Las muestras obtenidas de vías de hidratación no deben ser usadas para la determinación de
electrolitos.

Versión: 1.0
En pacientes con hipoalbuminuria se debe realizar el cálculo del calcio corregido.
4.2.4 Valores de alerta (críticos, pánico)
Las concentraciones de calcio bajas (hipocalcemia) confirmadas deben ser informadas de manera
urgente al médico, ya que puede
pueden presentarse con signos de tetania.
Las concentraciones de hipercalcemia pueden interferir otros sistemas, afectando al corazón y

cerebro, promover la formación de cálculos renales y debilitar los huesos.
4.2.5 Valores de referencia
La concentración de calcio
lcio total, para pacientes aparentemente sanos adultos es:
Tabla 14 Intervalo de referencia de Calcio Total
Magnitud Intervalo de referencia

Calcio Total 8.10 a 10.4 mg/dl
5. Cálculos y/o resultados
Una vez obtenidas las absorbancia

absorbancias,
s, se debe aplicar la fórmula para aplicar la Ley de Beer:
& ' ( '

ó !*
& ' 'á
∆& ( '
ó !8
∆& ' á
Desarrollemos un ejemplo para aplicar la ffórmula.
Absorbancia de la muestra: 0.356

56
Absorbancia del estándar: 0.450
Concentración del estándar:
ándar: 8 mg/dl
0.356
ó !8
0.450
ó 6,32 /

Versión: 1.0
6. Presentación de Informe de resultados de laboratorio
El informe de resultados se debe presenta en a través del moodle, en formato pdf y con forme los
requisitos descritos en el Anexo 4.
7. Guía para discusión de resultados

resultados-cuestionario
En esta sección, se solicita a los alumnos completar con el Cuestionario correspondiente a esta
práctica. El archivo consta de 6 preguntas y deberá ser completado en el mismo formato
proporcionado por el docente.
Este archivo se adjunta aquí:
Cuestionario práctica
3.docx
8. Conclusiones y recomendaciones
Al final de esta
sta práctica, el alumno podrá:
• Identificar el efecto que usar material no adecuado para la determinación de electrolitos o

magnitudes iónicas a nivel de laboratorios clínicos al igual que el efecto que provoca el tipo de
matriz en la determinación de calci
calcio total.
• Proponer marcadores bioquímicos relacionados con patologías óseas y aportar con el
diagnóstico por el laboratorio para estas patologías.
9. Anexos relacionados
Inserto calcio
o-cresoftaleina.pdf
10. Bibliografía
Antoni Castells, H. C. (2017). Test de Laboratorio en Gastroenterología y Hepatología (Vol. 10). (J.
Laboratorio
C.-P.
P. Santos Santolaria, Ed.) Barcelona, España: ELSEVIER.

Versión: 1.0
Gaw, A. (2015). Bioquímica clínica : texto y atlas en color ([tr. 5a. ed. ing. ed.). Madrid: Elsevier.
John W. Baynes, Marek H. Dominiczak. (2015). Bioquímica médica (4a. Ed. ed.). Barcelona:
Elsevier.
Shauna Anderson, S. C. (1995). Bioquímica Clínica. Philadelphia: Interanericana McGraw-Hill.

McGraw
Wiener. (6 de Septiembre de 2019). Wiener Lab Argentina. Obtenido de https://www.wiener-

https://www.wiener
lab.com.ar/VademecumDocumentos/Vademecum%20espanol/ca_color_arsenazo_3_aa_s
ademecumDocumentos/Vademecum%20espanol/ca_color_arsenazo_3_aa_s
p.pdf


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• Determinar las consecuencias de usar material volumétrico no apropi

• Describir los procesos fisiológicos y fisiopatológicos de la función ósea, del equilibrio

3.1 Necesidades diarias o ingesta

Cargo: Docente Cargo: Coordinador Carrera Cargo: Coordinador Carrera

• Se requiere de la intervención de la Vitaminia D activa (calcitriol: (calcitriol 1,25-

3.2 Regulación y control de las concentraciones de calcio

La homeostasis de calcio está

La Vitamina D es una vitamina liposoluble que se presenta en las siguientes formas:

• Forma natural o Colecalcifero o Vit

En su forma activa, la Vitamina D estimula la absorción de calcio en la luz intestinal, promover la

En el caso de la calcitonina, hormona hipocalcemiante secretada por las células de la glándula

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Ilustración 5 Regulación del Calcio Plasmático

3.3 Calcio plasmático

Una vez en el plasma, el calcio circula en diferentes formas:

• 40% del calcio se une con albúmina para su transporte

3.4 Determinación de calcio plasmático

A nivel de laboratorio, normalmente se hace una cuantificación de Calcio Total (ionizado

En pacientess con diagnóstico de Hipoalbuminemia, trastornos del equilibrio ácido-básico

Cargo: Docente Cargo: Coordinador Carrera Cargo: Coordinador Carrera

pero su interpretación está en que si la concentración de albúmina no es normal en el paciente, se

Realicemos un ejemplo para aplicar esta ffórmula:

Tenemos un paciente con aparentemente hipocalcemia,, su resultado determinado por el métodom

7,51 / 4 3,1 / ! 0,8

Como se puede apreciar en este caso, la condici

7,51 / 4 4,1 / ! 0,8

Cargo: Docente Cargo: Coordinador Carrera Cargo: Coordinador Carrera

4.1 Método de Arsenazo III

El uso del reactivo Arsenazo III (ácido 1,8 1,8-dihidroxi-3,6-disulfo-2,7-naftalenen

4.2 Método de 0-Cresoftaleína

Este método provoca la formación de un complejo de o o-cresoftaleína

Este será el método que vamos a usar en nuestra práctica de laboratorio.

4.2.1 Reactivos, materiales y equipos

Tabla 12 Insumos requeridos para la determinación de Calcio total

Reactivos Materiales Equipos

4.2.2.1 Preparación de la muestra

Cargo: Docente Cargo: Coordinador Carrera Cargo: Coordinador Carrera

4.2.2.2 Preparación del reactivo del trabajo (RT)

A continuación se describen las condiciones generales del ensa

- La temperatura establecida para esta actividad será a >30o C.

Tabla 13 Esquema de reacción para Calcio Total

Reactivos y reactantes CANTIDAD

4.2.3 Fuentes de error

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En pacientes con hipoalbuminuria se debe realizar el cálculo del calcio corregido.

4.2.4 Valores de alerta (críticos, pánico)

Las concentraciones de hipercalcemia pueden interferir otros sistemas, afectando al corazón y

4.2.5 Valores de referencia

Magnitud Intervalo de referencia

5. Cálculos y/o resultados

Una vez obtenidas las absorbancia

& ' ( '

Desarrollemos un ejemplo para aplicar la ffórmula.

Absorbancia de la muestra: 0.356

Cargo: Docente Cargo: Coordinador Carrera Cargo: Coordinador Carrera

6. Presentación de Informe de resultados de laboratorio

7. Guía para discusión de resultados

Este archivo se adjunta aquí:

• Identificar el efecto que usar material no adecuado para la determinación de electrolitos o

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Shauna Anderson, S. C. (1995). Bioquímica Clínica. Philadelphia: Interanericana McGraw-Hill.