UNIVERSIDAD COOPERATIVA DE COLOMBIA

GUIAS PRÁCTICA DE LABORATORIO

PROCESOS INMUNOLÓGICOS
FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
LEUCOCITOS

Competencia a desarrollar: El estudiante al realizar el montaje de los leucocitos, podrá Identificar las
variaciones morfológicas que se puedan presentar en condiciones normales y condiciones patológicas, así
como, al interpretar los resultados generados en un recuento diferencial a partir de las observaciones medirá la
participación de los diferentes linajes celulares de acuerdo a la patología presentada, o establecer valores de
normalidad dentro del resultado encontrado.

Justificación:
El sistema inmune está conformado por elementos solubles o moléculas y elementos celulares. La respuesta
coordinada de estos elementos frente a una sustancia extraña, incluidos microorganismos, constituye la
denominada respuesta inmunitaria. Las células hematopoyéticas, procedentes de la médula ósea, se
diferencian en dos grandes linajes: la línea mieloide y la línea linfoide. Cada una de las células resultantes
tendrá una o varias funciones específicas en la respuesta inmunitaria.

Los leucocitos son los elementos centrales del sistema inmune, debido a esto es necesario que los estudiantes
aprendan la técnica para la realización del extendido de sangre, lo cual les será útil a la hora de reconocer las
características morfológicas de las células inmunitarias de acuerdo a los elementos formes encontrados en un
extendido, teniendo en cuenta que estos juegan un papel fundamental en los mecanismos de defensa.

Materiales:

 2 láminas portaobjetos  Servilleta

 1 pipeta pasteur  Aceite de inmersión
 1 tubo eppendorf  1 ml de Colorante de Wright
 190 ul Reactivo de Turk  1 cámara de Neubauer
 1 sangre con EDTA  1 Microscopio
 Aplicación contador manual  Aplicación WBC counter

Método:

1. Se formarán grupos de 4-5 estudiantes.

2. Se recordarán los principios básicos de
bioseguridad a seguir dentro de un laboratorio.
3. Se explicará el protocolo de la técnica, al igual que
los objetivos y la aplicación de la práctica.
4. Ubíquese frente al microscopio e identifique sus
partes mecánicas y ópticas, reconozca su uso en la
visualización de estructuras. En este momento se
establecen los parámetros para el uso de la luz en
cada caso.

5. Recuento leucocitario

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 - Se trabaja con una dilución de 1:20; en un tubo Eppendorf
adicionar 190 ul Turk + 10 ul de sangre.
- Agitar vigorosamente el tubo, dejar reposar durante al
menos 2 minutos.
- Se coloca el cubre sobre las 2 superficies laterales de la
Cámara de Neubauer, procurando que quede adherido a
la cámara.
- Se procede al llenado, colocando la punta de la Pipeta en un ángulo de 45º grados y depositando 10μl
aproximadamente, dejando que el líquido llene el espacio entre el cubre y la cámara, por capilaridad
del líquido.
- Se llevará la cámara al microscopio y se esperará de 2 minutos para que se produzca la sedimentación
de las células y llevar a cabo el conteo.

LECTURA
- Montar en el microscopio, ubicar el objetivo 4X para enfocar
la cámara
- Ubicar el objetivo 10x en los primeros 16 cuadros grandes
del cuadrante superior izquierdo de la cámara.
- Se examinan en un orden fijo, comenzando por el extremo
superior izquierdo y siguiendo una trayectoria en zig/zag
hasta haber contado todas las células contenidas en las 16
cuadriculas, repitiendo la misma operación en los otros 3
cuadrantes a contar del Retículo.
- Contar las células que se encuentren dentro de cada
cuadrado y sobre los bordes superior y derecho, no se
cuentan las células que estén sobre los bordes inferior e
izquierdo.

- FORMULA GB = Ʃ (A+B+C+D) * 50

6. FROTIS SANGUÍNEO
- Una vez homogenizada la muestra, se toma sangre con un
capilar.
- Se deposita una gota pequeña sobre un extremo del
portaobjetos para frotis, el cual debe descansar en una
superficie plana.

Tinción de Wright
- Cubrir el frotis sanguíneo, con 25 gotas aproximadamente
de Wright sin diluir y dejar con el colorante 3 minutos.
- Lavar la extensión teñida con agua
No escurrir la tinción antes de lavar, pues esto producirá precipitado.
- Dejar secar al aire apoyado sobre un costado.
- La observación del extendido debe empezar usando los objetivos del microscopio de menor aumento con
la finalidad de determinar la distribución regular celular y los patrones de coloración e ir aumentando
progresivamente hasta llegar al objetivo de inmersión de 100X.

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- Con la ayuda de la aplicación WBC COUNTER (descargada
de app store o play store) marcaremos las células que vemos
por campo.
- Inicie observando el extendido de la cola hacia la cabeza,
adicionando una gota de aceite de inmersión sobre la lámina
portaobjetos.
- Identifique las células que observa en cada campo y
clasifíquelas de acuerdo a la morfología vista en clase.
- Registre las células observadas empleando el piano o
contador celular
- realizar este procedimiento con cada campo que observe
hasta llegar a contar 100 células
- Identifique el valor de los porcentajes de cada línea celular
que obtuvo y regístrelos en la tabla de resultados.

Método evaluativo: El grupo de estudiantes, deberán entregar un informe de laboratorio bajo el modelo de un
artículo científico (Titulo, autores, Introducción, Materias y método, resultados, discusión) con normas APA.

 Para el componente de resultados, deberán ir reportados los datos obtenidos en la siguiente tabla:
Identificación del paciente
Especie
Recuento Globulos Blancos x/mm3 Valor referencia de la especie
CELULAS INMUNOLOGICAS RESULTADO % Valor de Referencia IMAGEN
NEUTROFILOS % *Tomar una fotografía a
LINFOCITOS % cada una de las células
MONOCITOS % que se registró en el
EOSINOFILOS % resultado del diferencial
BASOFILOS %

 Para el componente discusión, deberá incluir:

- Compare los resultados con los valores de referencia de la especie estudiada y determine las
líneas celulares que se encuentran fuera de su rango de referencia, así como el recuento total.
- Investigue y relacione las funciones que cumplen las líneas celulares que se encuentran por fuera
de su rango de referencia.
- Analice las variaciones que está presentando su paciente en sus líneas celulares y determine el proceso
patológico que se estaría llevando a cabo, teniendo en cuenta la línea celular con un marcado aumento en
sus valores de referencia.

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