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Introducción.

El glucógeno es la forma de almacenamiento de la glucosa en los tejidos animales.


Se encuentra principalmente en el hígado y en el musculo representando hasta un
10% y un ½ de su peso húmedo, respectivamente.
Está formado por unidades de glucosa unidas por enlaces α (1-4) y ramificaciones
α (1-6). Las propiedades físicas y químicas de muchos polisacáridos neutros difieren
lo bastante de las otras biomoléculas para permitir su fácil aislamiento. El glucógeno
se puede liberar del hígado por calentamiento con una base fuerte, hasta la
destrucción total del tejido.
El glucógeno actúa como regulador de la glucosa sanguínea, almacenándola como
glucógeno durante una buena alimentación (glugenogenesis) y liberándola por
fosforolisis (glucogenolisis). En el hígado, el glucógeno se encuentra almacenado
en granulos grandes que contienen además las enzimas responsables de su
síntesis y degradación (5).
En la práctica de laboratorio se usaron reactivos para el aislamiento, hidrolisis e
identificación del glucógeno para corroborar la presencia de esta molécula.

Metodología.
Para dar inicio a la práctica de laboratorio, se realizó la extracción del glucógeno de
una muestra hepática fresca de hígado de res, se pesaron 4 g aproximadamente de
este y se cortaron en pequeños pedazos, los cuales se depositaron en 2 tubos de
ensayos de 10 mL, seguidamente se añadieron a cada tubo 3 mL de KOH al 30%.
Posteriormente se incubaron en agua hirviendo durante 15 minutos agitando
ocasionalmente.
Después de dejar enfriar los tubos, se sometieron a centrifugación durante 5
minutos, obteniéndose un sobrenadante. Seguidamente, se pasaron
cuidadosamente los sobrenadantes con una pipeta a los 2 tubos previamente
pesados a los que se les añadió 0,2 mL de Na2SO4 al 15% los cuales se agitaron
constantemente. Se dejó reposar durante 5 minutos, posteriormente se precipita el
glucógeno que estaba en la solución por adición de 7 mL de etanol al 95%, se agitó
y se dejó en baño de hielo durante 10 minutos.
Los tubos se sometieron a centrifugación durante 5 minutos, luego se procedió a
desechar el sobrenadante, se tomó el precipitado se secó con el papel filtro y se
pesó el precipitado de glucógeno de cada tubo pesado.
Al glucógeno extraído se le añadió 1 mL de H2SO4 5N para proceder a su hidrolisis
acida y para ello se calentó a 100°c durante 20 minutos.
Se ajustó a 2 mL con agua destilada para luego añadir 3 gotas de fenolftaleína.
Luego se añadió gota a gota NAOH 5N, se agito fuertemente y como producto final
se obtuvo un PH de 8. A continuación se anotó el volumen de la disolución,
hidrolizado de glucogeno, puesto que es la disolución problema donde se va a
comprobar la presencia de glucosa proveniente del glucogeno extraído.
Finalmente, se dispuso de un tubo de ensayo en el que se introdujo 0,5 ml
hidrolizado de glucogeno y 2.5 mL de reactivo de Fehling. Luego se colocó el tubo
en un baño de María por 5 minutos. Se colocó el tubo de ensayo en una gradilla y
después de un corto tiempo se observó un precipitado, de color rojo. Se observo y
se anotaron los resultados.

Resultados y discusión.

A partir de los procedimientos realizados en la práctica de laboratorio se obtuvieron


los siguientes resultados:

Como resultado de la mezcla entre el hígado macerado y el KOH a altas


temperaturas se observó que el hígado se tornó de un color más oscuro y un poco
degradado (ver imagen 1). Luego de añadir el etanol a la solución junto al Na2SO4
y exposición al frio se llegó a observa un poco el precipitado (ver imagen2). Posterior
a los procesos de utilización del Na2SO4, etanol, exposición a bajas temperaturas
y centrifugado, se identificó el precipitado de un color marrón terroso como
resultante de estos procedimientos (ver imagen 3). Cuando se agregó el Na2SO4
la solución se tornó de un color más claro (ver imagen 4). Luego de agregar las
gotas de fenolftaleína en la mezcla esta se pigmentó en algún momento de rosa y
luego su coloración cambio a ser un poco más oscura y en algunas partes aún se
observaba la coloración rosa (ver imagen 5). Al agregar Fehling hubo un nuevo
cambio de color a azul (ver imagen 6) y en el fondo del tubo de ensayo se visualiza
en un poco precipitado un color rojo (ver imagen7).
Cálculos para la determinación de cantidad de glucógeno hidrolizado.
Tubo con precipitado= 18,24 g
Tubo sin precipitado= 18,01 g

g de glucógeno = g de t con precipitado - g de t sin precipitado


g de glucógeno= 18,24 g - 18,01 g
g de glucógeno= 0,23 g
Teniendo en cuenta las observaciones en cuanto a los resultados obtenidos
pudimos establecer que:
1) El KOH fue empleado para hidrolizar moléculas complejas como lípidos y
proteínas no siendo así con el glucógeno (2), esta reacción se hizo en
presencia de calor utilizando baño de María para que fuera más eficaz, con
todo esto se logró que la digestión del tejido hepático pudiera ocurrir
permitiendo el aislamiento del glucógeno (3). El posterior centrifugado se
realizó con el fin de eliminar los restos de tejido no digerido (2).

2) La utilización del Na2SO4, etanol y exposición a bajas temperaturas


utilizando hielo tuvo la finalidad de provocar la precipitación del glucógeno
extraído. El segundo proceso de centrifugado concedió el aseguramiento de
la sedimentación del glucógeno. Al glucógeno ya sedimentado se le añadió
el H2SO4 5N por que este cumplió la función de hidrolizar dicha molécula
cortando los enlaces glucosidicos de la misma (3).

3) La seguida adición de NaOH fue provista para el aumento del pH hasta 8 y


compensar la acidez que con anterioridad se había generado al utilizar el
H2SO4, la fenolftaleína añadida previamente al NaOH permitió que se
observara un color característico (rosado) que nos sirvió para identificar el
momento en el cual la solución se tornara a un PH alcalino, específicamente
el cual buscamos que fuera de 8, este cambio en la tonalidad de la solución
ocurre debido a que La fenolftaleína es un ácido débil que pierde cationes
H+ en solución. La molécula de fenolftaleína es incolora, en cambio el anión
derivado de la fenolftaleína es de color rosa. Cuando se agrega una base la
fenolftaleína (siendo esta inicialmente incolora) pierde H+ formándose el
anión y haciendo que tome coloración rosa (1).

4) Finalmente se utilizó el reactivo de Fehling para corroborar que el glucógeno


se había hidrolizado a moléculas más pequeñas como la maltosa, glucosa o
lactosa, dado que estas son azucares reductores y al entran en contacto con
este reactivo se reduce a óxido de cobre rojo, en nuestro caso pudimos
observar este tipo de coloración en el precipitado por lo que aseguramos que
la prueba tuvo un resultado positivo (4).
Conclusiones.
De acuerdo con los procedimientos realizados y resultados obtenidos podemos
determinar que:
1) El glucógeno es un polisacárido constituido por la unión de varias moléculas
de glucosa mediante enlaces o-glucosidicos, que puede hidrolizarse
mediante métodos de laboratorio además de procesos que se dan en el
organismo.
2) Existen reactivos que permiten identificar la presencia de ciertas moléculas
a través de manifestaciones como la presencia del color.
3) La fenolftaleína es un indicador de acidez.

Cuestionario.
1.
2.
Reacción de Benedict.
Esta prueba sirve para el reconocimiento de azúcares reductores. Se
basa en la reducción de Cu2+ a Cu+ en medio básico débil. Aunque es
similar a la reacción de Fehling, el medio básico débil (HNaCO3) y el
estabilizante (citrato sódico) usados hacen que esta prueba sea más
sensible y estable (6).
Reacción de Braun.
Esta reacción sirve para el reconocimiento de azúcares reductores. Los azúcares
reductores en medio alcalino pueden reducir el picrato, de color amarillo, a
picramato, de color rojo en medio alcalino (Na2CO3) (6).
3.
La función principal del glucógeno hepático es la de mantener
la concentración de glucosa en sangre. Por lo tanto, ante una demanda de
glucosa para órganos o tejidos el hígado descompondrá el glucógeno en
glucosa para cubrir los requerimientos metabólicos (7).
4.
La glucosa-6-fosfato deshidrogenasa (G6PD) es la primera enzima de la vía
pentosa fosfato y la principal fuente intracelular de nicotidamina adenina
dinucleótido fosfato reducido (NADPH), compuesto comprometido en diversos
procesos fisiológicos, por ejemplo, defensa antioxidante (sobre todo células como
los eritrocitos), modulación del crecimiento endotelial, eritropoyesis,
vascularización y fagocitosis (8).
5.

Bibliografía.
1) Wikipedia [Internet]. N.d. Fenolftaleína. [Consultado el 29 de septiembre de
2018]. Disponible en: https://es.wikipedia.org/wiki/Fenolftale%C3%ADna
2) Fcv luz [Internet]. N.d. Glucogeno tisular. [Consultado el 29 de septiembre
de 2018]. Disponible en:
http://www.fcv.luz.edu.ve/images/stories/catedras/bioquimica_ii/glucogeno_t
isular.pdf
3) Uah [Internet]. N.d. Glucogeno. [Consultado el 29 de septiembre de 2018].
Disponible en:
http://www3.uah.es/bioquimica/Sancho/farmacia/practicas/glucogeno.pdf
4) Wikipedia [Internet]. N.d. Reactivo de Fehling. [Consultado el 29 de
septiembre de 2018]. Disponible en:
https://es.wikipedia.org/wiki/Reactivo_de_Fehling
5) Uco [Internet]. N.d. Aislamiento y cuantificación de glucógeno. [Consultado
el 29 de septiembre de 2018]. Disponible en:
https://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-
mol/pdfs/22%20AISLAMIENTO%20GLUCOGENO.pdf
6) Almez [Internet]. N.d. Identificación de azúcares. [Consultado el 29 de
septiembre de 2018]. Disponible en:
http://almez.pntic.mec.es/~mbam0000/paginas/LABORATORIOs/azucares.
htm
7) Renequinton [Internet]. N.d. El glucógeno hepático como fuente de reservas
energéticas. [Consultado el 29 de septiembre de 2018]. Disponible en:
https://www.fundacionrenequinton.org/blog/glucogeno-hepatico-fuente-
reservas-energeticas/
8) Scielo [Internet]. N.d. Glucosa-6-fosfato deshidrogenasa (G6PD).
Respuesta de los hematíes y otras células humanas a la disminución en su
actividad. [Consultado el 29 de septiembre de 2018]. Disponible en:
http://www.scielo.org.co/pdf/cm/v38n1/v38n1a08.pdf