UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS

QUÍMICA DE ALIMENTOS

NOMBRE: KAREN GRIJALVA

ASIGNATURA: QUIMICA ANLITICA CUANTITATIVA II
FECHA DE ENTREGA: 20/09/2019

TITULO: Método de dos pasos para la encapsulación de aceite esencial de

orégano en nanopartículas de quitosano: preparación, caracterización e in vitro
estudio de lanzamiento

INTRODUCCION:
Los aceites esenciales (EO) son líquidos oleosos aromáticos y volátiles obtenidos de plantas.
Normalmente se forman en celdas especiales o grupos de células, que se encuentran en hojas y
tallos, y comúnmente se concentran en una región particular, como hojas, corteza o fruto
(Oussalah, Caillet, Saucier y Lacroix, 2006). Los EO extraídos de las plantas o las especias son
fuentes ricas en compuestos biológicamente activos tales como terpenoides y ácidos fenólicos.
Las actividades antibacterianas y antifúngicas de las EO han sido reconocidas por mucho tiempo
(Burt, 2004; Nychas, 1995), pero la industria alimentaria ha estado prestando recientemente
más atención a su aplicación como antimicrobianos naturales (Plooy, Regnier y Combrinck,
2009). Dentro de una gran variedad de EO, el aceite esencial de orégano (OEO) es extraído de
Origanum vulgare L. está bien conocido por su actividad antioxidante y antimicrobiana
(Botsoglou, Grigoropoulou, Botsoglou, Govaris y Papageorgiou, 2003). Estas Las actividades se
deben principalmente a los dos fenoles, carvacrol y timol. (componentes principales del aceite
esencial de orégano) y el monoterpeno hidrocarburos p-cimeno y -terpino (Baydar, Sagdic,
Ozkan, & Karadogan, 2004) que se presentan en concentraciones más bajas (Juliano, Mattana y
Usai, 2000).

Sin embargo, al igual que otros EO, los OEO son compuestos volátiles que se evaporan y / o
descomponen fácilmente durante el procesamiento de alimentos, drogas formulación y
preparación de película antimicrobiana, etc., debido a exposición directa al calor, presión, luz u
oxígeno. A fin de que superar la susceptibilidad y mejorar la estabilidad de los bioactivos
compuestos durante el procesamiento y almacenamiento, la tecnología emergente de
nanoencapsulación se ha aplicado recientemente en alimentos e industrias nutracéuticas. La
nanoencapsulación de compuestos bioactivos representa un enfoque viable y eficiente para
aumentar la estabilidad física de las sustancias activas, protéjalas de la interacción con los
ingredientes alimentarios y mejorar su bioactividad, debido al tamaño subcelular (Donsì,
Annunziata, Sessa, Y Ferrari, 2011). En otras palabras, la encapsulación puede reducir la pérdida
de actividad de los compuestos activos. En el caso de los antimicrobianos, la encapsulación de
nano-nivel puede aumentar la concentración. de los compuestos bioactivos en áreas de
alimentos donde los microorganismos se ubican preferiblemente, por ejemplo, fases ricas en
agua o interfaces líquido-sólidas (Weiss, Gaysinksy, Davidson y McClements, 2009). En los
últimos años, ha habido un considerable interés en desarrollando nanopartículas
biodegradables como lipofílicas que son efectivos sistemas de entrega de componentes
bioactivos para alimentos. El quitosano está recibiendo mucho interés en la encapsulación de
compuestos bioactivos debido a su biocompatibilidad, baja toxicidad y biodegradabilidad (Donsì
et al., 2011; Harris, Lecumberri, Mateos-Aparicio, Mengíbar y Heras, 2011; Hu et al., 2008; Luo,
Zhang, Whent, Yu y Wang, 2011; Muzzarelli, 2010). Entre la variedad de métodos desarrollados
para preparar nanopartículas de quitosano, la técnica de gelificación iónica ha atraído una
atención considerable debido a este proceso es no tóxico, libre de solventes orgánicos,
conveniente y controlable (Agnihotri, Mallikarjuna, & Aminabhavi, 2004). La técnica de
gelificación iónica se basa en la interacción electrostática entre el amino primario cargado
positivamente grupos de quitosano y los grupos de polianión cargados negativamente, tales
como tripolifosfato de sodio (TPP) (Calvo, Remunán-López, & Vila-Jato Alonso, 1997; Dyer et al.,
2002; Yang et al., 2011). Las nanopartículas de quitosano-TPP, compuestas de ingredientes
inocuos para los alimentos, han demostrado su capacidad para la encapsulación y el suministro.
de proteínas (Avadi et al., 2009; Xu y Du, 2003), genes (Csaba, Köping-Höggård y Alonso, 2009;
Gan, Wang y McCarron, 2005), drogas hidrofílicas e hidrofóbicas (Ajun, Yan, Li y Huili, 2009;
Trapani et al., 2011; Wang et al., 2006), vitaminas (Luo et al., 2011; Yoksan, Jirawutthiwongchai
y Arpo, 2010), y compuestos polifenólicos (Bao, Xu y Wang, 2009; Dudhani y Kosaraju, 2010;
Keawchaoon y Yoksan, 2011). Keawchaoon y Yoksan (2011) reveló que la encapsulación de
bioactivos derivados de aceites esenciales compuestos como el carvacrol en partículas de
quitosano-tripolifosfato podrían extender su vida útil y retener sus propiedades funcionales.
Generalmente, las OE que poseen las propiedades antibacterianas más fuertes son aquellos que
contienen compuestos fenólicos como el carvacrol, eugenol y timol (Hirasa y Takemasa, 1998;
Rota, Carraminana, Burillo y Herrera, 2004). A nuestro entender, la carga de OEO en partículas
de quitosano a un tamaño de nano nivel no se ha dilucidado. La presente investigación se centró
así en la fabricación y caracterización de nanopartículas de quitosano-TPP cargadas con OEO por
un proceso de dos pasos: emulsión de aceite en agua (o / w) e iónica solidificación. También
aclaramos la exitosa encapsulación por UV-vis espectrofotometría, espectroscopía FT-IR,
técnicas TGA y XRD, y determinó la forma, la morfología y el tamaño medio de partícula por
SEM, AFM y dispersión de luz láser (LLS). Los efectos de la OEO inicial contenido sobre capacidad
de carga (LC), eficiencia de encapsulación (EE) y También se investigó el tamaño medio de
partículas. Además, el lanzamiento Se investigaron los perfiles de OEO de nanopartículas de
quitosano.

DISCUSION:
2.1. Forma y tamaño de las nanopartículas de quitosano cargadas con OEO

La morfología de las partículas de quitosano fueron observadas por SEM (Microscopia

electrónica de barrido). Las imágenes SEM de las nanopartículas de quitosano y las
nanopartículas de quitosano cargadas con OEO demuestran una distribución regular y esférica,
forma que parece estar bien separada y estable sobre los escalones del proceso de preparación.
La AFM (Fuerza atómica microscópica) es un método eficaz para proporcionar la morfología de
la superficie, tamaño exacto, distribución del tamaño y más. Las imágenes de AFM también
permiten observar la forma esférica y la estructura nano de las nanopartículas de quitosano y
las nanopartículas de quitosano cargadas con OEO. La distribución de tamaño obtenida por AFM
indicó que la mayoría de las nanopartículas de quitosano y las nanopartículas de quitosano
cargadas con OEO eran distribuidas entre los rangos de 40 y 80 nm. Sin embargo, el tamaño de
las nanopartículas de quitosano es menor en comparación con las nanopartículas cargadas con
OEO. El aumento del tamaño de las nanopartículas se debe a carga de OEO en nanopartículas
de quitosano. Dispersión de luz láser (LLS) también se aplicó la técnica para investigar el tamaño
promedio de las partículas. Se muestra que las nanopartículas de quitosano poseían un diámetro
promedio de 281.5 nm. Partículas de quitosano cargadas con OEO mostró un diámetro
promedio en el rango de 309.8–402.2 nm. Los resultados indicaron que el tamaño medio de
partícula aumentó en función del contenido inicial de OEO (Tabla 1), que es concurrente con los
hallazgos de Keawchaoon y Yoksan (2011). En comparación con los resultados de AFM, El mayor
diámetro de las nanopartículas de quitosano (cargadas o descargadas) con OEO) podría ser el
resultado de la hinchazón de la capa de quitosano que rodea las partículas individuales y/o la
agregación de una sola partícula dispersas en agua (Yoksan et al., 2010).

2.2. Caracterización FTIR

Los espectros FTIR de quitosano en polvo, nanopartículas de quitosano, OEO y nanopartículas

de quitosano cargadas con OEO. En general, el polvo de quitosano muestra picos característicos
en 3433 (OH y estiramiento de NH2), 2920 (estiramiento de CH), 1647 (amida I), 1088
(Estiramiento COC) y 591 𝑐𝑚−1 (estiramiento del anillo de piranosido vibración). Para las
nanopartículas de quitosano, el pico de la amida I (flexión de NH2) cambió de 1647 a 1651 𝑐𝑚−1,
y aparecieron nuevos picos en 1238 (estiramiento C O C) y 1555 𝑐𝑚−1 (amida II), lo que implica
la formación de complejos a través de la interacción electrostática entre grupos NH3 + de
quitosano y grupos fosfóricos de TPP dentro de las nanopartículas (Yoksan et al., 2010; Jingou
et al., 2011). Los espectros OEO puros muestran picos característicos agudos en 2959
(Estiramiento CH), 1589 (curvatura N H), 1458 (curvatura CH2), 1253 (C O C estiramiento), 1117
(C O C estiramiento) y 937 𝑐𝑚−1 (CH flexión). Todos los picos característicos anteriores aparecen
en el espectro de nanopartículas de quitosano cargadas con OEO en la misma onda número que
indica que no hay modificación o interacción entre el OEO y nanopartículas de quitosano.
Además, en comparación con el espectro FTIR de nanopartículas de quitosano, la adición de OEO
resultó en un aumento notable en la intensidad de la CH estiramiento pico a 2867–2955 𝑐𝑚−1,
lo que indica un aumento en el contenido de grupos éster, que pueden provenir de moléculas
OEO.

2.3. Propiedades termales

TGA es una técnica útil para estudiar el cambio de peso de una muestra en función de la
temperatura y para evaluar la estabilidad térmica de una muestra. Como se muestra en los
termogramas TGA, OEO solo poseía un paso de pérdida de peso, mientras que las nanopartículas
de quitosano y las nanopartículas de quitosano cargadas con OEO mostraron dos y tres pasos
de pérdida de peso, respectivamente. El primero paso de pérdida de peso de 50 a 110 ° C se
atribuyó a la pérdida de agua adsorbida y unida. El segundo paso de 190 a 330 ◦C se asignó a la
deshidratación de los anillos de sacárido, la despolimerización y la descomposición de las
unidades acetiladas y desacetiladas del polímero (Peniche, Zaldivar, Bulay y Roman, 1993). Las
temperaturas correspondientes a las pendientes máximas de cada peso paso por un cambio
donde se observa claramente la primera derivada de la curva TGA con respecto a la temperatura.
El termograma de termogravimetría (DTG) se representa gráficamente. Las temperaturas que
dan la mayor tasa de pérdida de peso en cada paso (es decir, los picos en el termograma DTG)
generalmente se consideran temperaturas de degradación (Td) de los componentes del material
(Yoksan et al., 2010). El OEO mostró pérdida de masa en un paso a partir de 171 ° C (pico a 195
◦C). De los termogramas DTG, las nanopartículas de quitosano exhibieron degradación en dos
pasos, a 246.3 y 330 ° C, que podría ser el Td de quitosano libre y quitosano reticulado con TPP,
respectivamente. Al cargar OEO, las partículas mostraron nueva Td que varía de 338 a 358 ◦C,
que podría ser atribuido a la Td de OEO encapsulado. El porcentaje de pérdida de peso a este
rango de temperatura se usó para calcular la cantidad de OEO cargado (Sección 3.5). Este
hallazgo está de acuerdo con resultados informados por Keawchaoon y Yoksan (2011). Estos
autores representaba que el carvacrol encapsulado en partículas de quitosano descompuesto a
una temperatura más alta (340.6 ° C) que el carvacrol libre (186.4 ◦C), que refleja la estabilidad
térmica mejorada de carvacrol por encapsulación

2.4. Ensayo cristalográfico

Estructura cristalográfica de quitosano en polvo, quitosano las nanopartículas y las

nanopartículas de quitosano cargadas con OEO fueron determinado por DRX y se presenta en la
Fig. 5. El quitosano exhibe un pico característico a 2 de 25 °, que indica el alto grado de
cristalinidad (Ali, Rajendran y Joshi, 2011; Jingou et al., 2011). Después de la reticulación iónica
con TPP, no se encuentra ningún pico en los difractogramas de nanopartículas de quitosano,
reflejando la destrucción de la estructura de embalaje de quitosano nativo (Yoksan et al., 2010).
Es bien sabido que en el ancho de los rayos X el pico de difracción está relacionado con el tamaño
del cristalito, el ensanchado el pico usualmente resulta del cristal imperfecto (Jingou et al.,
2011). Entonces, el amplio pico de las nanopartículas de quitosano puede ser causado por La
reacción de reticulación entre quitosano y TPP, que puede destruir la estructura cristalina del
quitosano (Rokhade et al., 2006). Las nanopartículas de quitosano se componen de una
estructura de red densa de cadenas poliméricas interpenetrantes reticuladas entre sí por
contraiones de TPP (Tang, Huang y Lim, 2003). La XRD implicada mayor desorden en la alineación
de la cadena en las nanopartículas después enlaces cruzados (Qi, Xu, Jiang, Hu y Zou, 2004).
Comparado con nanopartículas de quitosano, en el espectro de difracción de nanopartículas de
quitosano cargadas con OEO, el pico característico a 2 de 24 ° confirmando la presencia de OEO
dentro de las nanopartículas de quitosano. Esta implicaba que la incorporación de OEO resultó
en un cambio en la estructura de empaque de quitosano-TPP.

2.5. Eficiencia de encapsulación y capacidad de carga.

El porcentaje de EE y LC de diferentes formulaciones fueron demostrados en la Tabla 1. La

cantidad de OEO cargada se determinó usando espectrofotometría UV-vis a partir de la
absorbancia a 275 nm. La técnica TGA también se aplicó para el análisis cuantitativo de la
pérdida de masa a la temperatura de 338–358 ◦C. La capacidad de carga (LC) y la eficiencia de
encapsulación (EE) fueron luego calculado usando las ecuaciones. (1) y (2), respectivamente, y
tabulados en la Tabla 1. De los resultados de espectrofotometría UV-vis, EE% de OEO varió de
5,45% a 24,72% (Tabla 1). Con creciente OEO inicial contenido, EE tendió a disminuir. Sin
embargo, el valor máximo de EE fue obtenido para la muestra preparada utilizando la relación
en peso de quitosano a OEO de 1: 0.1 (24.72%). La disminución de EE para las muestras
preparadas usando una relación de peso inicial más alta de quitosano a OEO podría ser explicado
debido a la saturación de carga de OEO en quitosano nanopartículas Este hallazgo estuvo de
acuerdo con informes anteriores (Ajun et al., 2009; Yoksan et al., 2010). El LC% de OEO estaba
en el rango de 1.32–2.12%, según se determinado por los experimentos de espectrofotometría
UV-vis, cuando el contenido inicial de OEO varió de 0.1 a 0,8 g / g de quitosano (Tabla 1). El% de
LC aumentó en función del contenido inicial de OEO. Este resultado estuvo de acuerdo con los
hallazgos con respecto a la carga de carvacrol en nanopartículas de quitosano-TPP, que han sido
reportadas por Keawchaoon y Yoksan (2011). La información obtenida de los termogramas TGA
también se utilizó para determinar el contenido de OEO cargado en nanopartículas de
quitosano. En base a este resultado, el% de EE y el% de LC de OEO estaban en un rango de 21.09–
47.69% y 3.08–8.21%, respectivamente (Tabla 1). Esta observación apoyó los resultados de la
espectrofotometría UV-vis, que LC aumentó al aumentar el contenido de OEO, mientras que EE
disminuyó. El aumento de LC y la reducción de EE en función del contenido inicial del fármaco
correspondió a la literatura previa relacionada con La carga de palmitato de ascorbilo en
nanopartículas de quitosano-TPP (Yoksan et al., 2010).
3.6. Estudio de liberación in vitro.

Los perfiles de liberación in vitro de OEO de las nanopartículas, preparados usando una relación
en peso diferente de quitosano a OEO. La cantidad de OEO liberada en diferentes momentos
fue medido a 275 nm. Liberación de drogas o aceite de nanopartículas y Las micropartículas
tienen lugar mediante varios mecanismos, incluida la superficie erosión, desintegración, difusión
y desorción (Hariharan et al., 2006). El perfil de liberación in vitro de OEO de nanopartículas de
quitosano se puede describir como un proceso bifásico de dos pasos, es decir, un proceso inicial
lanzamiento de ráfaga seguido de lanzamiento posterior más lento. La inicial la liberación de
ráfaga se atribuyó a las moléculas OEO adsorbidas en la superficie de las partículas y el aceite
atrapado cerca de la superficie, como la velocidad de disolución del polímero cerca de la
superficie es alta, la cantidad de droga liberada también será alta (Anitha et al., 2011). La figura
6 muestra el perfil de liberación en función de la concentración de OEO que se descubrió que
dependía de la concentración. Una baja concentración de OEO (0.1 g / g de quitosano), el efecto
de explosión ocurrió dentro de las 3 hay aproximadamente el 82% de OEO encapsulado se liberó
de las nanopartículas. Esto podría atribuirse principalmente al tamaño de partícula de esta
formulación las nanopartículas de quitosano con un tamaño de partícula más pequeño tendrían
mayor relación superficie/volumen, por lo que puede resultar en una liberación rápida de OEO
adsorbido en la superficie. Resultados similares con una versión inicial de 85% de tocoferol
encapsulado se informó con quitosano nanopartículas recubiertas con zeína y luego seguidas de
liberación lenta a una tasa constante pero diferente (Luo et al., 2011). A medida que aumentaba
la concentración de OEO, el efecto de explosión se aliviaba dramáticamente y la liberación
acumulativa después de 3 h se redujo del 82% al 12%, ya que La concentración de OEO alcanzó
0,8 g / g de quitosano. En la segunda etapa la tasa de liberación fue relativamente lenta, o
podríamos decir que la liberación de OEO alcanzó la meseta en esta etapa (Figs. 6). Esto puede
deberse a la difusión del OEO disperso en la matriz polimérica a medida que mecanismo
dominante. Esta etapa tiene una tasa más lenta y, por lo tanto, casi no se libera OEO en esta
etapa. Promover, adicional La liberación de OEO requirió la hinchazón y la degradación de las
nanopartículas compactas de quitosano-TPP. Por lo tanto, los resultados indican que el
nanosistema quitosano-TPP es adecuado para controlar la liberación de OEO.

CONCLUSIONES:
Las nanopartículas de quitosano cargadas con OEO se prepararon con éxito mediante el método
de dos pasos, es decir, la formación de una emulsión de aceite en agua y la gelificación iónica de
gotitas de emulsión, según lo confirmado por técnicas analíticas instrumentales (FTIR, TGA / DTG
y XRD). Las partículas tenían forma esférica con un rango de tamaño de 40–80 nm. Por
aumentando la relación en peso de OEO a quitosano, se incrementa el porcentaje de capacidad
de carga, mientras que el porcentaje de eficiencia de encapsulación disminuye. Los estudios de
liberación in vitro indicaron que el contenido de OEO en las nanopartículas lo cual influyó en la
liberación de las nanopartículas de quitosano. En futuros estudios, sería útil para examinar el
rendimiento de las nanopartículas de quitosano para la encapsulación de otros aceites
esenciales por este método de dos pasos.