SEDE SANTO DOMINGO

INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA

Asignatura: Bioquímica

Integrantes:

Hadassa Lara

Diana Macías

Nathaly Mora

Diana Rosero

Nivel: Tercero

Tema: Determinación de proteínas por el método de Kjeldahl

Docente: PhD. Sungey Sánchez

MARZO 2019 – JULIO 2019

1. TEMA

Determinación de proteínas por el método de Kjeldahl

2. INTRODUCCIÓN

3. OBJETIVOS

3.1 OBJETIVO GENERAL

3.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS

4. MARCO TEÓRICO

5. METODOLOGÍA

5.1 MATERIALES

5.2 MÉTODOS

6. RESULTADOS

Se realizó el proceso de Kjeldahl para la cuantificación de proteínas de la muestra de leche

recién ordeñada, a su vez se realizó el cálculo de contenido de proteínas bruta mediante la
fórmula mostrada en la ecuación (1)

(VHCl −Vb )×1.401×NHCl ×F

(1) %PB = g muestra
Con valor de muestra utilizada de 0.3 gramos de leche, y el volumen de titulación de 1.8 mL
para la muestra junto a 0.3 mL de volumen del blanco, el resultado obtenido fue de 4.377%
de contenido de proteínas bruto de la leche de vaca recién ordeñada.

7. DISCUSIÓN

El método para determinación de proteína de Kjeldahl, se basa en la cuantificación de

nitrógeno presente en la molécula proteica. El procedimiento llevado a cabo en cada una de
sus etapas las siguientes reacciones [1].

En la etapa de digestión se rompen todos los enlaces de nitrógeno de la muestra y lo convierte

en iones amonio. El carbono orgánico y el hidrógeno forman dióxido de carbono y agua. La
materia orgánica se carboniza formándose una espuma negra. Durante esta etapa, la espuma
se descompone y se convierte en un líquido claro que indica que la reacción ha finalizado.
Para ello, la muestra se mezcla con ácido sulfúrico a temperaturas entre 350 y 380 º C [1],
esta reacción puede realizarse con mayor rapidez si se le añaden catalizadores. La reacción
llevada a cabo se visualiza en la ecuación (2)

catalizador, calor
(2) R − C − NH2 + H2 SO4 → CO2 + (NH4 )2 SO4 + SO2

Durante la etapa de destilación los iones amonio se convierten en amoniaco con la adición
de un álcali (NaOH). El amoniaco es arrastrado al vaso receptor por medio de una corriente
de vapor de agua. La ecuación (3) permite observar la reacción llevada a cabo [1].

(3) (NH2 )SO4 + 2NaOH → 2NH3 + Na2 SO4 + 2H2 O

El vaso receptor para el destilado se llena con una solución absorbente para capturar el
amoniaco disuelto. Esta solución absorbente, más comúnmente utilizado es el ácido bórico
en solución acuosa entre el 2 al 4%. El amoniaco es capturado cuantitativamente por la
solución de ácido bórico formando iones amonio solvatados. Esta reacción se visualiza en la
ecuación (4)

(4) NH3 + H3 BO3 (ácido bórico) + H2 O ⇄ NH4 + + H2 BO3 − (ión borato)

En la etapa de titulación el anión borato, el cual es proporcional a la cantidad de nitrógeno,
es titulado con ácido clorhídrico, como se observa en la ecuación (5):

(5) H2 BO3 − + H + → H3 BO3 + H2 O

Según la literatura revisada el contenido proteico de la leche entera es va desde 3.2 al 4%,
por lo que el resultado obtenido experimentalmente se excede pero se halla dentro de un valor
razonable, esto considerando el hecho del origen de la muestra, una leche recién ordeñada,
su contenido proteico es más elevado puesto que no hubo demasiadas pérdidas por
degradación de las proteínas con el paso del tiempo y procesos de pasteurización en
comparación con la leche entera comercial, la cual pasa a través de procesos de tratamiento
para el consumo.

8. CONCLUSIONES

La determinación de proteínas por medio de este método representa una técnica un poco
demorada pero efectiva, que consta de tres fases de desarrollo las cuales se basan en la
digestión de la materia orgánica, destilación del amoniaco y titulación, esta última es la que
testifica la cantidad final de proteína, en este caso la proteína de la leche.

La prueba de Kjeldahl se basa en la combustión húmeda de la muestra para efectuar la

reducción orgánica del nitrógeno a amoniaco, empleando ácido bórico como medio para
atraparlo y ácido clorhídrico para su valoración, testificando la presencia de proteínas. De
esta manera se pudo obtener el porcentaje de nitrógeno de la muestra de leche el cual fue
4,37%, valor que no difiere significativamente con el valor real que muestra la literatura.

El método es necesario para la identificación de la cantidad proteica de los alimentos, es por

ello que cumple un papel importante en las industrias alimenticias, ya que estas deben ofrecer
al consumidor productos que cumplan con los requerimientos nutricionales. Un producto con
bajo contenido proteico no cumple con los requerimientos del consumo humano.

9. RECOMENDACIONES

Para comprender los métodos de extracción de proteínas se recomienda utilizar muestras con
alto contenido de las mismas, ya que así se podrá observar mas detalladamente los resultados
deseados.
El proceso para llevar a cabo la extracción por medio de Kjeldahl debe ser cuidadoso, ya que
se necesita de precisión de reactivos para obtener una efectividad en la obtención de proteína.

El porcentaje obtenido de proteínas debe coincidir con los datos que muestra la literatura para
saber que se realizó correctamente la extracción.

10. BIBLIOGRAFÍA

[1] PanReac Química , «Determinación de Nitrógeno por el Método Kjeldahl,» PanReac

AppliChem, Barcelona.

11. ANEXOS