El descubrimiento de los canales de agua (Aquaporins)

Resumen
El movimiento del agua hacia y desde las células es un proceso biológico fundamental que es
esencial para la vida. Tal movimiento del agua no solo regula la actividad de las células individuales,
sino que también es responsable del funcionamiento de muchos sistemas de órganos y de mantener
el equilibrio hídrico de todo el cuerpo. Durante mucho tiempo se había sospechado que el
movimiento del agua a través de las membranas celulares biológicas de alguna manera se
potenciaba o facilitaba por poros o canales, pero la búsqueda para identificar estos canales era
larga y tediosa. Como suele ser el caso en la ciencia, el secreto del canal de agua finalmente fue
descubierto por casualidad en 1992 por Peter Agre y sus colegas de la Universidad Johns Hopkins
en Baltimore, que trabajaban en proteínas de la membrana de glóbulos rojos. Este "primer" canal
de agua fue originalmente llamado CHIP28 y ahora se lo conoce como aquaporin 1. Agre recibió el
Premio Nobel de Química en 2003 por este descubrimiento. Actualmente hay 13 acuaporinas
conocidas en mamíferos, distribuidas en la mayoría de los tejidos, pero se han identificado muchas
más en organismos inferiores y en el reino vegetal. La participación de aquaporinas en procesos
como la concentración urinaria y la homeostasis del fluido corporal, la función cerebral, la secreción
glandular, la hidratación de la piel, la fertilidad masculina, la audición, la visión y las funciones
corporales más importantes que se pueden imaginar ahora están bajo un intenso escrutinio
científico. Además, los defectos en la función de aquaporina se han relacionado con diversas
enfermedades y estados patológicos. Esta breve revisión analizará sus antecedentes,
descubrimientos y funciones en los procesos corporales elegidos, centrándose especialmente en la
hidratación.

¿Por qué estamos interesados en los canales de agua?

Las células que constituyen nuestros cuerpos están compuestas principalmente de agua. Alrededor
del 65% de una célula es agua. En términos de masa corporal total, los bebés son los más "jugosos",
se componen de 75% de agua; los adultos delgados contienen 60% de agua, mientras que los
adultos mayores contienen solo 50% de agua. La mayor parte del peso seco no acuoso en el cuerpo
es el hueso. A modo de comparación, quizás el organismo más repleto de agua sea la lechuga (95%
de agua), mientras que los humanos somos comparables a un plátano (65% de agua). Durante la
evolución, las células en todos los organismos han evolucionado para funcionar de manera óptima
en dicho entorno acuoso, y las variaciones significativas en el contenido celular de agua
concentrarán o diluirán sus componentes moleculares y evitarán la función normal. Por lo tanto, las
células necesitan regular la cantidad de agua que ingresa y sale a través de su membrana
plasmática para regular la concentración citosólica de solutos, electrolitos, proteínas y ácidos
nucleicos. Además, la cantidad de agua en los espacios extracelulares dentro de un organismo
también está estrechamente controlada. En humanos y otros mamíferos, esto incluye, entre otros, el
volumen de sangre, el espacio intersticial fuera de los vasos sanguíneos, el líquido cerebroespinal,
el humor acuoso en el ojo y las secreciones glandulares.

¿Por qué necesitamos canales de agua?

Para lidiar con las demandas metabólicas constantemente cambiantes y las condiciones
circundantes, las células necesitan intercambiar agua rápidamente entre su citoplasma (dentro) y el
ambiente externo (afuera) para mantener un volumen constante. Esto es importante para muchos
organismos inferiores que han desarrollado mecanismos elaborados para la regulación del
volumen celular, y generalmente involucra no solo el transporte de agua sino también flujos de
iones (principalmente Na +, K + y Cl -) a través de las membranas para recuperarse de una
hinchazón o contracción excesiva cuando están expuestos a fluidos externos de diferente
osmolalidad (por ejemplo, del agua de mar salada para diluir el agua de lluvia) [1]. Si bien estos
mecanismos de transporte iónico también existen en mamíferos, gran parte de la función
"homeostática" reguladora en organismos superiores se logra manteniendo un ambiente interno
constante en el que residen nuestras células: el famoso "milieu intérieur" o "el mar interior"
definido por Claude Bernardo
[2] Esto se logra en gran parte por la acción de los riñones, en coordinación con la percepción
cerebral del volumen y la concentración plasmática (osmolalidad), y luego reacciona aumentando o
reduciendo la cantidad de agua que liberan en la orina. Esto se discutirá con más detalle a
continuación. Además de mantener el volumen celular, el intercambio rápido de agua a través de
las células permite a los tejidos y órganos secretar y / o absorber agua como parte de su función
fisiológica. Las células epiteliales que recubren algunos túbulos renales están especialmente bien
adaptadas a esta función, pero las células en otros sistemas de órganos también pueden regular el
movimiento del agua transepitelial para permitir que se produzcan procesos funcionalmente
importantes. Por ejemplo, los fluidos secretados por el páncreas, el conducto biliar, lagrimal, salival
y las glándulas mamarias, así como el plexo coroideo y el epitelio pigmentario de la retina, implican
un movimiento rápido del agua transepitelial.

¿Cómo entra y sale agua de las células?

Todos estos procesos fisiológicos involucran el movimiento del agua a través de las membranas
celulares. Durante mucho tiempo se ha entendido que cuando la mayoría de las células se colocan
en agua destilada, se hinchan considerablemente y pueden explotar. Por el contrario, cuando las
células se colocan en una solución salina que está más concentrada que las sales y otros
componentes dentro de su citoplasma, se encogerán. Este proceso se debe en gran parte a
Flujo de agua osmótica, hacia arriba o hacia abajo un gradiente de concentración, en un intento por
parte del sistema para equilibrar la concentración osmótica en ambos lados de la membrana
plasmática de la célula. ¿Pero cómo se mueve exactamente el agua a través de la membrana celular?
Utilizando un dispositivo especial que puede medir la hinchazón y la reducción de los glóbulos
rojos, un modelo experimental que es fácil de obtener y manipular, los investigadores concluyeron
que el agua tiene 2 vías a través de las membranas. Cuando la hinchazón y la contracción osmótica
se monitorizaron a diferentes temperaturas, Solomon [3] descubrió un proceso lento y sensible a la
temperatura sobre el cual se superpuso un proceso mucho más rápido independiente de la
temperatura (F ig. 1). El proceso lento reflejó la permeabilidad difusional del agua a través de la
bicapa lipídica grasa de la membrana plasmática. La difusión es sensible a la temperatura. Pero el
proceso rápido fue consistente con la presencia de poros acuosos en la membrana, lo que permitió
el paso de agua más rápido, conducido por osmótica, que no involucraba la difusión (F ig. 1). Macey
y Farmer [4] y otros demostraron que el cloruro mercúrico compuesto podía inhibir
significativamente el componente rápido de este proceso, lo que sugería la presencia de un poro
proteico o canal de agua dentro de la membrana. El cloruro mercúrico se une a los grupos
sulfhidrilo (residuos de cisteína) en las proteínas e inhibe su función: en este caso, la permeabilidad
al agua. Por lo tanto, esta investigación que se centró en los glóbulos rojos verificó claramente el
concepto de que los poros de agua son responsables del paso de agua rápido, insensible a la
temperatura y conducido osmóticamente a través de las membranas biológicas. Como veremos,
estos poros fueron identificados posteriormente como aquaporinas.

Fig. 1. Vías mediante las cuales el agua puede atravesar una membrana bicapa lipídica. El
agua puede difundirse lentamente a través de la bicapa entre las moléculas de lípidos (se
muestra en azul). Este proceso lento es altamente dependiente de la temperatura, similar a la
mayoría de los procesos difusionales. Por el contrario, el agua atraviesa la membrana mucho
más rápidamente a través de canales acuosos (aquaporinas, que se muestran en marrón), y
este proceso es mucho menos sensible a la temperatura. Las Aquapoprins permiten el
movimiento rápido del agua dentro y fuera de las células, lo que es importante para muchos
procesos fisiológicos vitales, incluida la concentración urinaria.

El riñón regula nuestro cuerpo Contenido de agua

El riñón es un órgano notable que es mejor conocido por "filtrar" la sangre para eliminar productos
de desecho como la urea y otras toxinas y para producir orina. Aproximadamente 180 L de sangre
se filtran cada día, sin embargo, la mayoría de las personas producen solo alrededor de 1,5 L de
orina. La cantidad precisa depende de cuánto bebe, qué tan caliente está y cuánto hace ejercicio (lo
que provoca la pérdida de agua al sudar). Alrededor del 90% del líquido filtrado se elimina en las
regiones proximales del riñón y este valor es bastante constante en la mayoría de las personas. Sin
embargo, el 10% restante (18 L) se reabsorbe en el conducto colector de riñón bajo la influencia de
la hormona antidiurética, vasopresina (VP). La glándula pituitaria posterior libera VP en respuesta
a la deshidratación (que produce un aumento en la concentración osmótica del suero) o la pérdida
de volumen. Actúa sobre las células epiteliales del conducto colector de riñón a través de un
receptor específico llamado receptor de vasopresina (V2R) [5] para estimular la reabsorción de
agua, lo que corrige el problema y restablece la concentración y / o el volumen sanguíneo a niveles
normales. El mecanismo por el cual VP causa esta absorción de líquido a través del epitelio del
conducto colector ahora se comprende bastante bien e involucra canales de agua de acuaporina.

La vejiga urinaria sapo como modelo para el riñón

Vale la pena dar un paso atrás y observar cómo el mecanismo de acción de VP fue examinado
experimentalmente. Si bien los efectos de la VP sobre la función renal se conocían desde hacía
tiempo, una disección detallada de su acción celular requería un sistema modelo que fuera más
accesible que el riñón. Es muy difícil (pero no imposible) trabajar con túbulos renales individuales,
ya que son muy pequeños, de solo 40 μm de diámetro. Un gran avance en la investigación se
produjo cuando Bentley (y otros) descubrieron que la vejiga urinaria de sapo también transportaba
agua en respuesta a la hormona antidiurética [6]. Esta es una parte natural de su proceso de
supervivencia en la naturaleza. Cuando se sumerge en el agua, el sapo absorbe agua a través de su
piel y produce mucha orina muy diluida, que almacena en una gran vejiga en forma de globo.
Cuando el sapo tiene acceso limitado al agua del estanque y comienza a deshidratarse, su propio
antidiurético la hormona (llamada vasotocina, un análogo de VP) se libera y hace que el epitelio de
la vejiga se vuelva permeable al agua. Por lo tanto, el agua almacenada en la vejiga se devuelve a la
sangre para rehidratar a la criatura. En esencia, el sapo lleva consigo su propia agua embotellada en
su vejiga. La vejiga urinaria de sapo se convirtió así en un sustituto ampliamente utilizado para
examinar y comprender el flujo de agua inducido por VP en el epitelio del conducto colector de
riñón [7]. Durante muchos años, la vejiga del sapo se usó para examinar el inicio y la compensación
de la acción de VP sobre el flujo de agua a través de las células epiteliales. Se identificaron muchas
rutas de señalización celular que regulan este proceso aguas abajo de la interacción VP-receptor.
Uno de los hallazgos más intrigantes que surgieron de los muchos estudios de vejiga sapo fue el
concepto de canales de agua que se insertan en la membrana plasmática de estas células epiteliales
con el fin de aumentar la permeabilidad de la membrana y, por lo tanto, del agua epitelial. Tras la
abstinencia de la hormona, estos "canales de agua" se eliminarían de la membrana plasmática por
internalización en la célula (un proceso conocido como endocitosis), que restableció la membrana a
su estado impermeable de línea de base y evitó el flujo de agua. Esta idea fue publicada por Wade
[8] quien acuñó el término "hipótesis de lanzadera" para describir el movimiento de ida y vuelta de
los canales de agua hacia y desde la superficie de la célula por analogía con el transbordador
espacial de la NASA. Pero la naturaleza de estos canales de agua sigue siendo desconocida.

El descubrimiento de los canales de agua de Aquaporin

A pesar de muchos intentos de identificar la proteína que formaba los canales de agua, el campo se
congeló esencialmente en el tiempo durante muchos años. Todos los intentos dirigidos a aislar la
proteína de membranas purificadas de eritrocitos de la vejiga sapo y del riñón habían tenido un
éxito limitado, aunque algunas publicaciones estuvieron cerca [9] y otras proporcionaron
información importante, como información sobre el tamaño molecular (aproximadamente 30 kD)
[10]. Y así sucedió que el grupo Agre, mientras observaba las proteínas del factor Rhesus en las
membranas de los glóbulos rojos, notó una banda "contaminante" consistente en sus geles a
alrededor de 28 kD [11]. En lugar de descartar esta información, cavaron un poco más profundo y
concluyeron que este podría ser el canal de agua muy buscado en los glóbulos rojos. Se aisló y se
purificó, y los anticuerpos mostraron que también se expresaba en las células de los túbulos
proximales de los riñones y en la delgada rama descendente de Henle, ambas son constitutivamente
altamente permeables al agua. ¿Podría ser este el canal de agua? El momento decisivo llegó cuando
el grupo Agre inyectó ARNm que codifica esta proteína en un sistema de expresión in vitro,
Xenopus oocytes. La membrana de los ovocitos es normalmente muy impermeable al agua: los
huevos se depositan en agua dulce y se abrirían si la membrana fuera permeable. Pero después de
la inyección de ARNm que codifica el canal de agua putativo, los ovocitos que cayeron en el agua
destilada hicieron exactamente eso: estallaron, mientras que los oocitos de control permanecieron
intactos [12]. El grupo Agre se dio cuenta de que el ARNm que inyectaron había obligado a los
ovocitos a producir una nueva proteína que, cuando se movía a la membrana del ovocito mediante
mecanismos de transporte celular, causaba que la membrana se volviera altamente permeable al
agua. Se produjo mucha celebración. Una serie de trabajos posteriores confirmaron que esta nueva
proteína, llamada CHIP28 (proteína de membrana integral formadora de canales de 28 kD), fue el
primer canal de agua que se identificó definitivamente

La familia Aquaporin
Poco después de conocerse la identidad molecular de CHIP28, otros encontraron una serie de
proteínas homólogas que formaron una nueva familia. Se hicieron conocidos como aquaporins
[14]. En el momento en que se utilizó por primera vez el nombre, había 4 acuaporinas conocidas en
mamíferos: AQP1, 2, 3 y 4. Ahora hay 13 acuaporinas de mamíferos [15], y se han identificado
cientos en otros organismos, incluidas las plantas.
[dieciséis] . Todos estos tienen las mismas características estructurales globales, con un peso
molecular de aproximadamente 30 kD en la forma no glicosilada, y varios estados de glicosilación
diferentes que dan como resultado un peso molecular mayor. Todos ellos tienen 6 dominios
transmembrana que abarcan; los extremos C y N están ambos en el citoplasma; forman un
tetrámero funcional en la bicapa lipídica y la estructura del poro del agua dentro de la proteína ha
sido elucidada por cristalografía de rayos X para algunas de las aquaporinas [17]. Inesperadamente,
algunas aquaporinas son más permeables al agua que otras, y algunas pueden transportar otras
moléculas además del agua. Por ejemplo, AQP3 es permeable al glicerol, y AQP9 es permeable a la
urea. Además, algunas acuaporinas son permeables a gases como el CO 2 [18] y el NO [19]. Por lo
tanto, el campo de la biología de aquaporina se está expandiendo constantemente, y los informes de
funciones nuevas e inesperadas dentro de varias células y tejidos continúan emergiendo
regularmente

Aquaporin 1 y 2 (el VP Sensitive Water Channel) en el riñón

Un QP1, el canal de agua de glóbulos rojos, está altamente expresado en túbulos proximales y
extremidades delgadas de Henle, ambos son altamente permeables al agua en todo momento [20,
21]. Estos segmentos del túbulo están involucrados en la reabsorción del 90% del agua filtrada. Se
identificó una segunda acuaporina, AQP2, en la recolección de células principales del conducto del
riñón [22]. Estas son las células que (como la vejiga sapo) cambian su permeabilidad al agua en
respuesta a la hormona antidiurética, VP, y así regulan la reabsorción del fluido remanente, casi 20
L por día. AQP2 es el canal de agua regulado por VP. En presencia de VP, AQP2 se acumula en la
superficie de las células principales y el agua atraviesa el epitelio impulsado por un gradiente
osmótico (Fig. 2). El aspecto basolateral de estos túbulos es hipertónico al líquido en la luz del
túbulo y el agua fluye cuesta abajo a lo largo de este gradiente en presencia de VP. La membrana
basolateral de las células principales es siempre permeable al agua debido a la presencia de AQP3 o
AQP4 en diferentes partes del riñón [23]. Por lo tanto, la cantidad de AQP2 en la membrana apical
es el factor limitante de la velocidad que regula la reabsorción de agua en el conducto colector de
riñón. Muchos años de investigación han demostrado que AQP2 recicla entre la membrana
plasmática y las vesículas citoplásmicas en células principales, y VP cambia el equilibrio de tal
forma que se acumula más AQP2 en la superficie celular y menos dentro de la célula, lo que explica
el aumento de la permeabilidad de la membrana (Fig. 2). La biología celular que subyace a este
proceso se comprende parcialmente e implica una cascada de señalización que se inicia por la
interacción VP con su receptor, la activación de una adenilil ciclasa para aumentar el cAMP
intracelular, la activación de la proteína quinasa A y la fosforilación de la proteína AQP2. La
fosforilación es el evento crítico que causa la acumulación de AQP2 en la membrana, y varios
laboratorios participan en estudios destinados a comprender mejor este proceso. El lector
interesado se refiere a revisiones detalladas recientes sobre este proceso [23, 24].

Fisiopatología de Aquaporins
Como cabría esperar, las acuaporinas se han visto implicadas en varias enfermedades, sobre todo
en el riñón (figura 3). El mal funcionamiento o las mutaciones en AQP2 o, más comúnmente, el V2R,
causan diabetes insípida nefrogénica (NDI), en la que los pacientes no pueden concentrar su orina y
teóricamente podrían anular hasta 18 L de orina diluida cada día, es decir, la cantidad normalmente
reabsorbida en el conducto colector Debido a otros mecanismos compensatorios, la mayoría de los
pacientes con NDI producen entre 5 y 10 L por día [25, 26]. Las terapias disponibles solo pueden
aliviar parcialmente los síntomas, y se necesita más trabajo para encontrar mejores curas. El más
causa común de NDI es en pacientes que reciben tratamiento con litio para el trastorno bipolar. El
litio causa una regulación a la baja severa del gen AQP2 por razones que no se comprenden por
completo [27]. Si bien es una terapia muy efectiva para el trastorno bipolar, este y otros efectos
secundarios hacen que muchos pacientes sean reacios a iniciar un tratamiento con litio. Otros
trastornos relacionados con AQP, principalmente identificados en modelos animales knockout [28],
son un defecto de concentración urinaria (se han identificado seres humanos AQP1), cataratas
(AQP0), accidente cerebrovascular (AQP4) y piel quebradiza debido a una hidratación defectuosa
(AQP3). AQP1 y AQP2 también se han implicado en la migración celular y la cicatrización de
heridas. Finalmente, el atractivo de las acuaporinas ha cautivado la imaginación de las agencias de
publicidad involucradas, por ejemplo, en la industria cosmética. Google y ver!

Fig. 2. Secciones de tejido

del conducto colector de
riñón de una rata control
Brattleboro (a) y una rata
infundida durante 30 min
con vasopresina (VP; b), y
luego inmunotinción para
mostrar la ubicación del
canal de agua AQP2 (tinción
verde). En ratas de control,
AQP2 se distribuye
difusamente a lo largo de
las células principales que recubren el conducto colector, y el agua permanece en la luz del túbulo.
En el VP-tratado
animales, AQP2 se acumula rápidamente en una banda apretada en la membrana apical de las
células principales, que se vuelven permeables y sale agua de la luz, a través de la célula (flechas) y
hacia el intersticio hipertónico circundante donde posteriormente es recapturada en la circulación
a través de los capilares peritubulares. Bar = 5 μm.
Humano
Fig. 3. Los defectos en la expresión o el tráfico de aquaporin 2 causan una variedad de
enfermedades relacionadas con el balance hídrico. Estos pueden ser hereditarios o adquiridos. La
regulación negativa de la acumulación de la membrana AQP2, más comúnmente debido a
mutaciones en el receptor de vasopresina (V2R) o AQP2 (con menor frecuencia) causa diabetes
insípida nefrogénica y la producción de grandes volúmenes de orina diluida. Esta enfermedad
también puede ser adquirida como resultado de una serie de otros problemas, el más común de los
cuales es la nefrotoxicidad inducida por litio (ver texto). Por el contrario, la regulación al alza
inapropiada de AQP2 en la membrana de las células principales del conducto colector ocurre en la
insuficiencia cardíaca congestiva, la cirrosis y el síndrome de secreción inadecuada de ADH
(SIADH). Esto estimula la acumulación excesiva de agua en el cuerpo, lo que resulta en
hiponatremia, edema e hipertensión.
Color

Direcciones futuras
Un área interesante de la biología de la aquaporina es la aparición de las llamadas funciones de
pluriempleo de estas proteínas del canal. Estos pueden estar relacionados con su función de canal,
como en el caso de la permeabilidad a los gases de AQP1, o no relacionada con la actividad del canal
como en el caso de AQP2, que está involucrado en el desarrollo renal mediante su interacción con
integrinas y la matriz extracelular [29] . Estudios futuros indudablemente identificarán
propiedades más inesperadas de las aquaporinas. Se encuentra una gran cantidad de aquaporinas
en especies "inferiores" no mamíferas, como plantas, microbios y hongos. Esto abre la puerta al uso
de esta información para mejorar el crecimiento y la adaptación de las plantas mediante la
estimulación de la función AQP y para combatir las infecciones microbianas y fúngicas al inhibir las
acuaporinas. Dichos inhibidores específicos aún no están disponibles, pero si se desarrollan,
también podrían tener un papel importante en la medicina como acuarelas (para tratar la
hipertensión), y por
quizás cáncer (para bloquear metástasis). También tenemos mucho que aprender sobre la biología
celular del tráfico de aquaporina. ¿Cómo se mueven en la celda? ¿Cómo interactúan con otras
proteínas? ¿Se pueden identificar y apalancar vías de señalización alternativas para eludir la
señalización V2R defectuosa en NDI? Este trabajo está en curso y promete revelar secretos
celulares que pertenecen no solo a la biología de AQP sino también a otros eventos importantes de
tráfico celular que están implicados en una serie de otras enfermedades humanas.