DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA Y PARÁMETROS DE LA

ECUACIÓN DE MICHAELIS-MENTEN (Vmax y Km)

Alejandra Cortes, Luisa Fernández, Fabián Mass, Anthony Montesino, María Solera, Juan
Payares

Universidad de Córdoba, Facultad de Ingeniería, Ingeniería de Alimentos

RESUMEN
 RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Curva patrón

Concentración (ppm) Absorbancia (575 nm)

200 0,184

400 0,276

600 0,369

800 0,449

1000 0,632

Tabla 1. Muestra patrón

La curva patrón se realiza con el fin de poder calcular la ecuación que relaciona la
absorbancia medida y la concentración para los cálculos posteriores, como es el de la
concentración real que se consigue al multiplicar por el factor de dilución 1/50.

concentración vs absorbancia
0.7
y = 0.1157x - 0.0865
0.6 R² = 0.9786
Absorbancia (575 nm)

0.5

0.4

0.3

0.2

0.1

0
0 200 400 600 800 1000
Concentración (ppm)

Grafica 1. Curva patrón

Concentración 1%

Tiempo Absorbancia [P] ppm [P] gr/L [P] mol/L [P] µmol/ml
(min)
0 0,096 0,0821089 8,21089E-05 4,56161E-07 0,000456161
10 0,098 0,09939499 9,9395E-05 5,52194E-07 0,000552194
20 0,101 0,12532411 0,000125324 6,96245E-07 0,000696245
30 0,11 0,2031115 0,000203111 1,1284E-06 0,001128397
40 0,189 0,88591184 0,000885912 4,92173E-06 0,004921732
50 0,194 0,92912705 0,000929127 5,16182E-06 0,005161817
60 0,225 1,19706137 0,001197061 6,65034E-06 0,006650341
70 0,247 1,3872083 0,001387208 7,70671E-06 0,007706713
Tabla 2. Concentraciones de glucosa obtenidas a partir de una solución de maltosa
al 1%

Se determinó la velocidad inicial de la enzima tomando los datos obtenidos de los primeros
20 minutos del proceso de hidrolisis, a dicho grafico se le determino la pendiente,
conociendo así la velocidad con la cual se inicia el proceso de hidrolisis.

0.0008
y = 1E-05x + 0.0004
0.0007 R² = 0.9868

0.0006

0.0005

0.0004

0.0003

0.0002

0.0001

0
0 5 10 15 20 25

Grafica 2. Velocidad de inicio en el proceso de la hidrolisis al 1%

A partir de la ecuación se logró determinar el comportamiento teórico de la enzima a las

condiciones dadas. Luego se comparó el comportamiento real y el comportamiento teórico.
 Real/Ideal vs Tiempo
0.009
0.008 y = 0.0001x - 0.0007
0.007 R² = 0.9043
0.006
0.005
[P] µmol/ml

0.004 [P] µmol/ml (real)

0.003 ideal
0.002 Linear (ideal )
0.001
0
-0.001 0 20 40 60 80
-0.002
Tiempo (min)

Grafica 3. Concentraciones ideales y reales al 1%

Luego se procede a determinar la productividad de la enzima, para un volumen de control

de 200 ml.

Velocidad inicial(µmol/ml*min) 0,00001

Actividad(µmol/min) 0,0025

Tabla 3. Actividad de la enzima

Para la productividad expresada en el sustrato (AGU), se estableció según la información

suministrada en la ficha técnica del producto.

Actividad Mol de malt./mg de enzima

AGU 14
Tabla 4. Actividad en AGU. Fuente. Sigma Aldrich