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GUIA DE PRÁCTICAS DE
TOXICOLOGÍA Y QUÍMICA LEGAL
LIMA - PERÚ
2018
INTRODUCCION
Para la eliminación de los insectos nocivos de los cultivos, se hace uso de los
insecticidas.
PRÁCTICA N° 1
MANEJO DE MUESTRAS PARA EXAMEN TOXICOLÓGICO
OBJETIVO
Explicar al alumno las implicancias del Análisis Químico Toxicológico, así como los
diferentes tipos de muestra problema y su procesamiento. Se emplea el método
descriptivo de asesoría permanente.
MARCO TEÓRICO
El Peritaje Toxicológico de vísceras y tejidos es de gran interés criminalístico, requiere
de un adecuado procedimiento en la toma de la muestra, su fijación, preservación,
embalaje y envió con la solicitud específica de lo que se desea determinar en el
examen a informar, porque sus resultados servirán para una buena administración de
justicia.
COMPETENCIAS
- Toma de muestras para el análisis toxicológico
- Identificar el tipo de intoxicación
- Enviar y recepcionar las muestras. Preparar los protocolos de envío y recepción de
las muestras
- Actitud del profesional especializado
- Procesamiento de los diferentes tipos de muestra para el análisis toxicológico,
adquiriendo los conocimientos para diferenciar los tipos de agentes tóxicos que
pueden causar intoxicaciones.
- Cumplir y hacer cumplir las medidas de bioseguridad.
2. MUESTRAS
Los alumnos deberán traer en la siguiente práctica una muestra correctamente
embalada de acuerdo a las características de la muestra, del análisis solicitado y de
las normas legales para uhn análisis toxicológico.
CUESTIONARIO:
1. ¿Qué Normas legales rigen el Análisis Toxicológico?
2. Procedimiento en caso de la Exhumación de un cadáver
3. Responsabilidad legal del profesional Químico-Farmacéutico en el análisis
toxicológico.
PRACTICA Nº 2
MARCO TEORICO
En los análisis toxicológicos son muchas las sustancias que pueden ser
identificadas por lo que se hace necesario la participación de métodos que
permitan determinar la presencia de sustancias no volátiles como alcaloides,
barbitúricos, pirazolonas, etc., no sólo para su identificación sino también para
su cuantificación.
La presente experiencia se basa en la solubilidad del principio activo así como
de su pH, por se utiliza una marcha analítica para separar los xenobióticos
acidicos y también los de carácter básico.
COMPETENCIAS
MATERIALES Y REACTIVOS
REACTIVOS
1) Papel de pH. 6) Sulfato de amonio.
2) Papel de filtro. 7) H2SO4 (20 %).
3) Éter etílico. 8) Amoniaco conc.
4) Cloruro de metileno. 9) Agua destilada.
5) Sol. Saturada de 10) NaOH (1.8%)
11) Bicarbonato de sodio
PROCEDIMIENTO
1) Tomar el pH de la muestra.
2) Fraccionar la muestra biológica y colocarla en el vaso.
3) Adicionar agua destilada y calentar hasta cerca del punto de ebullición.
4) Agregar sulfato de amonio, seguir calentando y agregar gota a gota
ácido sulfúrico 10%.
5) Filtrar.
6) Llevar a pH de 3 a 4 si fuera necesario con el H 2SO4, y trasvasar a una
pera de bromo.
7) Extraer con éter etílico (10 ml).
8) A la fracción acuosa adicionar gota a gota amoniaco 10% hasta pH 8-9
9) Extraer con cloroformo (05 ml), y desechar la fase acuosa
10) Concentrar el extracto clorofórmico al baño maría, a este extracto se le
denomina: "fracción básica"
11) A la fase etérea, adicionar gota a gota solución de bicarbonato de
sodio, obteniéndose dos nuevas fases, una acuosa constituyendo la
fracción ácida fuerte (A), y una nueva fase etérea.
12) A esta última fase extraer con solución de NaOH (1.8%), obteniéndose
una fase acuosa, que constituye la fracción ácida débil (a) y una fase
etérea, que constituye la fracción neutra (N).
En todas las fracciones indicadas, están presentes los diversos tóxicos
orgánicos.
1.1 RESULTADOS
1) Indique las sustancias extraídas a pH ácido.
2) Indique las sustancias extraídas a pH alcalino.
3) Indique las sustancias extraídas a pH neutro
1.2 CUESTIONARIO
1) Fundamente el proceso de extracción realizado.
2) Escriba el procedimiento de cada método de extracción, para tóxicos
gaseoso, volátil, inorgánico, orgánico.
3) Escriba una marcha analítica que involucre los xenobióticos a pH ácido,
otra marcha analítica a pH neutro y otra a pH básico.
PRACTICA Nº 3
Rf
Cada componente de la mezcla se mueve siguiendo una línea vertical. La distancia
que recorre es proporcional a la distancia recorrida por el disolvente en el papel, a la
constante de proporcionalidad se le llama Rf (del inglés, "retention factor"):
Así el Rf varía entre 0 y 1 y es 0,5 para aquellas sustancias que han llegado a la mitad
del frente. El Rf es una característica de cada sustancia, y no depende de la longitud
del papel ni de la distancia recorrida por el disolvente. Lógicamente, varía con la
temperatura, al cambiar el tipo de papel y el disolvente.
Cuando se quieren averiguar los componentes de una mezcla por cromatografía, lo
que suele hacerse es sembrar también muestras de cada una de las sustancias que
se supone forman la mezcla. La comparación del aspecto de cada mancha y el valor
de Rf con los correspondientes a las manchas de las sustancias conocidas, permite
identificar los constituyentes de la mezcla
MÉTODO EXPERIMENTAL
SEPARACION E IDENTIFICACIÓN POR CROMATOGRAFÍA DE CAPA FINA
Fase móvil : CETONA
Revelador de color : Cloruro de Paladio
Estándar : Muestra pura de insecticida
CUESTIONARIO
PRACTICA Nº 4
1 MARCO TEORICO
Las benzodiacepinas, fármacos tranquilizantes menores del sistema nervioso
central y que son indicados en los casos de ansiedad, Calman la tensión y alivian
el insomnio. A dosis algo elevadas provoca somnolencia y aún ataxia. Por vía I.M.
produce sueño sin llegar a la anestesia. Es anticonvulsivante en especial el
Diazepam.
2 COMPETENCIAS
Al realizar el examen toxicológico se deberá separar y luego identificar estas
sustancias en las muestras de orina y en sangre con la finalidad de conocer el
estado de toxicidad de una persona cuando se ha consumido un compuesto
benzodiazepínico.
3 MATERIALES
1) Vaso de 250 ml 9) Viales
2) Bagueta 10) Capilares
3) Pera de bromo 11) Láminas de vidrio
4) Cámara fotográfica 12) Baño maría.
5) Pipeta de 5 ml 13) Mechero
6) Tubos de ensayo 14) Balon
7) Varilla de vidrio 15) Tapón de jebe
8) Gradilla 16) Probeta de 25 ml
REACTIVOS
1) HCl concentrado 5) Sulfanilato Na al 0.1%
2) HCI (6N) 6) Fuente de luz U.V.
3) NaNO2 (0.1%) 7) H2SO4 (2N)
4) Sulfato de amonio (0.5%) 8) Éter etílico
4 PROCEDIMIENTO
En un balón adicionar 20 ml de orina, luego 4 ml de HCl concentrado y calentar
par 30 minutos. Enfriar y alcalinizar. Luego extraer con 5 ml de éter etílico.
Concentrar.
Identificación por cromatografía de capa fina.-
a) Fase estacionaria : Silicagel G
5. RESULTADOS
1) Indique el color observado en su placa cromatográfica.
2) Indique el Rf de la sustancia inalterada y del metabolito
3) Indique el Rf de la sustancia patrón utilizado
6. CUESTIONARIO
1) Escriba la reacción química de acuerdo al método.
2) Indicar otros métodos operatorios de examen toxicológico de una
benzodiazepina.
3) Escriba una técnica por Cromatografía de gas para compuestos
benzodiacepinicos.
4) Reacción química de las benzodiacepinas con el lodoplatinato acidificado
5) Escriba el nombre de diversas especialidades farmacéuticas que presentan un
solo principio activo, y de otras cuando estén asociadas
PRACTICA Nº 5
DETERMINACION DE LAS FENOTIACINAS EN ORINA.
1. MARCO TEORICO
Los fármacos fenotiazínicos fundamentalmente como tranquilizantes mayores y que son
indicados en el tratamiento de enfermedades nerviosas.
Se analizará la muestra biológica, orina o sangre para lo cual se procede a la extracción
líquido y luego de separar se concentra y estar apto para su identificación por cromatografía
de capa fina.
2. COMPETENCIAS
Al realizar el examen toxicológico se deberá separar y luego identificar estas sustancias en
las muestras de orina y en sangre con la finalidad de conocer el estado de toxicidad de una
persona cuando ha consumido estos fármacos.
3. MATERIALES
- Vaso 250 mL - Baqueta - Pera de Bromo - Frasco de vidrio con tapa - Mechero
- Probeta 25 mL - Capilares - Papel de filtro - Atomizador - Cuba cromatografica
Equipos: - Lámpara UV - Cocinilla
REACTIVOS
- HCl 10% - Papel indador - Eter - Cloroformo - Placas cromatograficas
- NH4OH 10% - Reactivo FPN (FeCI3,HClO4,HNO3) - CHCI3: EtOH (70:30)
Estándares: Clorpromacina: Largactil en amp. - Levopromacina: Sinogan en amp.
- Tioproperacina: Magepfil en amp
4. PROCEDIMIENTO
EXTRACCION:
En un vaso agregar 20 ml de orina y ajustar a pH alcalino con amoniaco a pH de 8 a 9.
Colocar en la pera de bromo y extraer con 05 ml de éter etílico, separando la fase etérea.
Concentrar el extracto al vacío o en atmósfera de nitrógeno.
IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA DE CAPA FINA.-
a) Fase estacionaria : Silicagel "G".
b) Fase móvil CHCI3 Etanol (7:3) o CHCl3 Metanol (7:3).
c) Revelador de color : Reactivo FPN
Procedimiento.-
En la lámina sembrar el Standard respectivo y el extracto etéreo. Colocar la lámina en la
cámara.
Retirar la lámina al llegar al frente de solvente y evaporar dicho solvente (fase móvil).
Pulverizar con el revelador FPN y secar la lámina.
Medir el Rf del Standard y del compuesto correspondiente.
5. RESULTADOS
1) Indique el color observado en el proceso de revelado.
2) Indique el Rf del Standard y del metabolito.
6. CUESTIONARIO
1) Escriba la reacción química de este proceso.
2) Escriba otras técnicas de revelado, así como la técnica por HPLC.
3) Escriba la reacción química con una pirazolona.
4) Dar 04 ejemplos de Especialidades farmacéuticas con un sólo principio activo y
04 con Especialidades asociadas.
PRACTICA Nº 6
MARCO TEORICO
5.2. COMPETENCIAS
5.3. MATERIALES
REACTIVOS
1) HCl (10%) 6) Estándares:
2) Acetona-Benceno (1:1) - Fenobarbital
3) Benzina de petróleo - Pentobarbital
4) Silicagel G - Tiopental
5) Reactivo de Zwicker 7) Amoniaco
5.4 PROCEDIMIENTO
EXTRACCION:
METODO OPERATORIO.-
5.5. RESULTADOS
5.6. CUESTIONARIO
PRACTICA Nº 7
MARCO TEORICO
COMPETENCIAS.
MATERIALES
REACTIVOS
1) HCI al 10% 7) Sol. de MgNO2 (10%)
2) Sulfanilato Na 8) HCI concentrado
3) Benceno-Hexano (1:1) 9) Muestra: orina.
4) Éter etílico 10) Papel de pH.
5) KOH [10N] 11) Bencidina
6) St. Cannabinoide 12) Fast-blue
PROCEDIMIENTO
Procedimiento:
En la lámina, sembrar el standard de Cannabinoide, y el extracto etéreo.
Colocar la lámina en la cámara, y retirarla al llegar al frente de solvente.
Evaporar y secar. Pulverizar con el revelador y secar la lámina.
Medir el Rf del standard y la sustancia correspondiente del extracto.
RESULTADOS
CUESTIONARIO
PRACTICA Nº 8
MARCO TEORICO
COMPETENCIAS
MATERIALES
REACTIVOS
1) Amoniaco. 6) R. de Draggendorff
2) Cloroformo 7) Estándares:
3) Silicagel G - Cocaina
4) Metanol: NH3 (100:1.5) - Benzoilecgonina
5) Papel pH cromático
PROCEDIMIENTO
Extracción líquida-líquida
d) Método Operatorio.-
RESULTADOS
CUESTIONARIO
PRACTICA Nº 9
MARCO TEORICO
COMPETENCIAS
MATERIALES
REACTIVOS.-
1) HCI concentrado 6) Silicagel G
2) Papel pH cromático 7) St. Morfina
3) Amoníaco 8) St. Codeína
4) CHCl3-isopropanol(9:1) 9) Codipront (cápsulas)
5) Acetona, etanol, NH3 (22: 22:3)
PROCEDIMIENTO
Extracción:
d) Método Operatorio:
RESULTADOS
CUESTIONARIO