PREPARACION DE LA MUESTRA
A. Anticoagulante.
TROMBOPLASTINA - S
Para uso en las determinaciones de
Tiempo de Protrombina
RESUMEN
La prueba del tiempo de protrombina (PT), como fue
originalmente diseñada por Quick 1,2 ha sido utilizada
ampliamente durante varios años como una prueba pre-
operatoria para conocer ciertos factores de coagulación y
en el monitoreo de la terapia anticoagulante oral. Todos los
factores de las fases II y III son necesarios para resultados
normales cuando se realiza la prueba del tiempo de
protrombina, por lo que es sensible a niveles reducidos o
deficientes en los factores I, II, V, VII y X.
El dicumarol y algunas drogas relacionadas3 reducen la
actividad de los llamados Factores “complejos de protrom-
bina”, II, VII , IX y X. Como la prueba de PT es sensible a las
deficiencias de todos estos factores, excepto el IX, se ha
probado que es útil en el monitoreo de la terapia anticoa-
gulante oral.
La prueba para Tiempo de Protrombina también es utilizada
en la determinación cuantitativa (Pruebas de Factores) de
los factores II, V, VII y X.
PRINCIPIO
El tiempo de protrombina de 1 estado mide el tiempo
de coagulación del plasma de prueba después de la adición
del reactivo de tromboplastina que contiene cloruro de calcio.
El reactivo proporciona una fuente de “tromboplastina tisular“,
activando el factor VII, y es por lo tanto sensible para todos
los factores de las fases II y III. La deficiencia en los factores
de la Fase I (VIII, IX, XI y XII) no se detecta con la prueba.
REACTIVO
Tromboplastina-S, liofilizado 4 mL para 20 pruebas.
Tromboplastina-S contiene un extracto de cerebro de conejo
con un buffer, estabilizadores y cloruro de calcio y esta
especialmente formulado para proporcionar mayor
sensibilidad a los Factores II, V, VII y X. Almacénese a
2-8°C. Reconstitúyalo con agua destilada con el volumen
indicado en la etiqueta. Déjelo a temperatura ambiente con
agitación ocasional hasta que se complete su solución. Es
estable por 7 días después de reconstituido cuando se
almacena entre 2-8°C; evite el calentamiento prolongado.
Utilice citrato de sodio regulado, 3.8% o 3.2%
B. Recolección de la muestra
1. Obtenga la sangre venosa en condiciones asépticas.
2. Inmediatamente mezcle 9 partes de sangre con una parte
de anticoagulante, por inversión del tubo contra el tapón.
3. Centrifugue la muestra a 3 400 rpm por 15 segundos.
4. Retire el plasma del tubo inmediatamente antes de 60
minutos, utilizando una pipeta y almacénelo en tubos.
5. Analice el plasma antes de 2 horas, de otra manera,
congele el plasma y descongélelo justo antes de usarse.
PROCEDIMIENTO
A. Material suministrado
Tromboplastina-S, liofilizado, con cloruro de calcio.
B. Materiales requeridos
1. Un medio manual, mecánico o foto-óptico para la detec-
ción del coágulo.
2. Cronómetro.
3. Parafilm o equivalente.
4. Pipetas automáticas de 0.1 y 0.2 mL.
5. Plasmas controles.
C. Procedimiento de la prueba
El uso de la Tromboplastina-S en la realización de la
determinación del Tiempo de Protrombina se adapta a
instrumentos manuales o automatizados para la detección
del coágulo. Vea las instrucciones del fabricante del
instrumento para mayores detalles.
1. Pre-caliente la Tromboplastina-S a 37°C.
2. Pre-caliente 0.1 mL del plasma a 37°C por 2 minutos.
3. Inmediatamente añada 0.2 mL de la Tromboplastina-S
pre-calentada al plasma y active el cronómetro.
4. Anote el tiempo requerido para la formación del coágulo.
5. Realice las determinaciones por duplicado.
6. Reporte los resultados como Tiempo de Protrombina en
segundos.
RESULTADOS
Calcule la media del tiempo de coagulación de las determina-
ciones por duplicado para cada plasma de prueba y para
los plasmas controles. La diferencia entre cada prueba hecha
por duplicado, no debe exceder del 5% (repítalo si es
necesario).
Reporte los resultados del tiempo de protrombina en
segundos junto con el rango normal. La media del rango
normal también puede ser reportada.
Los plasmas controles se utilizan como ayuda para
asegurar que algunas variables de la prueba como tempe-
ratura, reactivos, instrumentación, pipetas, etcétera estén
funcionando apropiadamente. No es recomendable que
los valores de los controles se reporten junto con los
resultados del paciente.
INDICE INTERNACIONAL DE SENSIBILIDAD
El Comité Internacional para la estandarización en
Hematología y el Comité Internacional en Trombosis y
5-7
Hemostasis están de acuerdo con las recomendaciones
para el reporte de los resultados del Tiempo de Protrombina
basados en un Indice Internacional de Sensibilidad (ISI) de
reactivos de Tromboplastina y en una Relación Internacional
Normalizada (INR).
Los reactivos de Tromboplastina tienen asignado un valor
de ISI mediante calibración contra una Preparación
Internacional de Referencia WHO para Tromboplastina
(cerebro de conejo) la cual, por definición, tiene un ISI = 1.0.
El valor ISI asignado a los reactivos de Tromboplastina
comerciales definen una pendiente comparativa o sensi-
bilidad relativa, en comparación con la Tromboplastina de
Referencia. Entre más bajo es el valor del ISI, más sensible
es el reactivo.
Al conocer el ISI de un reactivo de Tromboplastina en
particular, la relación puede ser calculada y se puede
encontrar si se ha utilizado como reactivo la Preparación de
Referencia Internacional WHO para Tromboplastina.
Este es el termino que da la Relación Internacional
Normalizada (INR), y es determinado por:
TP Paciente
a) Relación = = R
TP Normal
b) INR = RISI
A cada lote de Tromboplastina-S Biopool se le asigna un
valor ISI en relación con el WHO Standarized Thromboplastin.
Se proporciona una carta con cada equipo de prueba, con
base a su valor ISI asignado, para la fácil conversión de la
relación del tiempo de coagulación Ò a un valor INR. Además,
8
Poller y Hirsch han ofrecido también un nomograma
simplificado para la determinación de los valores INR.
RESULTADOS ESPERADOS
Los resultados normales típicos al utilizar Tromboplastina-S
son de 10.7-14.3 seg. Sin embargo, cada laboratorio debe
establecer sus propios rangos normales al utilizar los
reactivos, instrumentación y técnicas comúnmente usadas
en el laboratorio. Se debe establecer un rango normal
utilizando representaciones individuales de la población que
se ha probado en ese laboratorio.
Se debe establecer un Rango Normal nuevo con cualquier
cambio de instrumentación, técnicas de recolección de
sangre, anticoagulante y cuando los reactivos cambian de
lote.
CONTROL DE CALIDAD
Los Plasmas Controles de Coagulación Normales y Anor-
males de Biopool se deben probar en conjunto con las
muestras de los pacientes. Se recomienda correr por lo
menos uno normal y uno anormal para cada serie y una vez
como mínimo por cada 20 muestras4.
Se debe establecer un rango de control por el laboratorio
para determinar la posible variación en la realización de
cada plasma control de un día para otro.
LIMITACIONES
Se debe de tener gran cuidado para minimizar las varia-
ciones, las cuales pueden ocurrir por factores exteriores
insignificantes.
A. Recolección de la muestra:
EVITE :
1. Demorar en la mezcla de la sangre con el anticoagulante.
2. Muestras hemolizadas o lipemicas.
3. Contaminación con la tromboplastina tisular.
4. La relación inapropiada del anticoagulante con la sangre.
B. Técnicas de laboratorio
1. Realice las pruebas a 37°C.
2. Utilice únicamente agua destilada
3. El pH óptimo debe ser 7.0-7.5
REFERENCIAS
1. Quick, A.J., The Hemorrhagic Diseases and the Physio-
logy of Hemostasis. Charles C. Thomas : Springfield, IL
1942.
2. Quick, A.J., Hemorrhagic Diseases. Lea & Febi-
ger Philadelphia. 1957.
3. Miale, J.B., laboratory Medicine - Hematology, 4th edition.
C.V. Mosby ; St. Louis 1972.
4. National Committee for Clinical Laboratory Standards :
Guidelines for the Standarized Collection, Transport and
preparation of Blood Specimens for coagulation testing
and performance of coagulation assays.
rd
5. WHO Expert Committe on Biological Standarization 33
report. Technical report series 687, WHO Geneva 1983.
6. Kirkwood, T., Thromb. Haemostasis. 49 :238. 1983.
7. International Committee for Standarization in
Haematology and international Committee on Thrombosis
and Haemostasis. Amer. J. Clin. Path 88 :779 1985.
8. Poller, L. and Hirsch, J., Amer, J. Clin Path 92 :124 1989.
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