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1.1 Practica No. 007 – Prueba de sensibilidad a los antimicrobianos,
método de Kirby-Bauer
 
1.1.1 Tema a desarrollar
 
La  determinación  de  sensibilidad  de  los  microorganismos  a  los  diferentes  antibióticos  es  de 
extrema importancia en el diagnóstico y terapia de enfermedades infecciosas. 
 
Los antimicrobianos son compuestos que se obtienen a partir de bacterias, hongos y levaduras 
o  de  forma  sintética.  Los  de  origen  microbiano  por  lo  general  son  metabolitos  secundarios 
producidos durante la fase estacionaria de crecimiento. Los agentes antimicrobianos presentan 
toxicidad selectiva, son muy efectivos contra los microorganismos, por lo que se utilizan como 
agentes quimioterapéuticos para el tratamiento de enfermedades infecciosas en seres humanos 
y  animales.  Un  parámetro  de  evaluación  de  antimicrobianos  es  la  concentración  mínima 
bactericida  (CMB),  que  se  refiere  a  la  concentración  de  agente  antibiótico  necesaria  para 
producir una disminución del tamaño original del inóculo bacteriano en un porcentaje mayor o 
igual al 99.9%. Es el método habitual utilizado en los laboratorios de Microbiología Clínica. Este 
nos ofrece información sobre la sensibilidad de las bacterias: 
1. Sensible (S): si existe una buena probabilidad de éxito terapéutico en el caso de un 
tratamiento a la dosis habitual. 
2. Resistente (R): si la probabilidad de éxito terapéutico es nula o muy reducida. No 
es de esperar ningún efecto terapéutico sea cual fuere el tipo de tratamiento. 
3. Intermedia(I):  cuando  el  éxito  terapéutico  es  imprevisible.  Se  puede  conseguir 
efecto  terapéutico  en  ciertas  condiciones  (fuertes  concentraciones  locales  o 
aumento de la posología). 
 
Los antibióticos que inhiben la síntesis de la pared celular y/o de la membrana plasmática son 
de  gran  aplicación  para  la  eliminación  de  especies  bacterianas.  El  efecto  particular  de  los 
antibióticos  sobre  grupos  de  bacterias  específicas  se  le  conoce  como  espectro  de  acción.  En 
general, las bacterias Gram positivas son más sensibles que las Gram negativas; sin embargo, 
existen antibióticos de amplio espectro que actúan sobre ambos tipos de bacterias. 
La eficiencia de un antibiótico se establece determinando la concentración mínima inhibitoria 
(CMI) que nos indica “la concentración mínima en mg/mL de antibiótico necesaria para inhibir 
el  crecimiento  microbiano”.    Existen  varios  métodos  que  se  utilizan  para  llevar  a  cabo  los 
estudios  de  sensibilidad  a  los  antibióticos  y  todos  ellos  se  realizan  bajo  condiciones 
estandarizadas por organismos internacionales. 
 
La  técnica  descrita  y  estandarizada  por  Kirby‐Bauer,  es  la  más  aceptada  por  su  practicidad, 
rapidez y reproducibilidad. Este método incorpora el antimicrobiano a discos de papel de filtro. 
Su  introducción permitió agilizar la determinación de la sensibilidad de las cepas bacterianas 
frente  a  un  número  importante  de  antimicrobianos  de  forma  simultánea.  Es  un  método  de 
referencia recomendado por el Clinical and Laboratory Standard Institute (CLSI) norteamericano 
para determinar la sensibilidad bacteriana a los antimicrobianos. 
 
 
 
 
 
 

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1.1.2 Objetivos de la práctica
 
1. Conocer las pruebas de susceptibilidad (sensibilidad) a los antimicrobianos, con el fin de 
evaluar in vitro la utilidad de estos contra las bacterias que producen enfermedad en el 
ser humano. 
2. Determinar el tipo de reacción que tienen los microorganismos frente a los distintos 
antimicrobianos 
3. Adquirir la habilidad en la lectura e interpretación de la técnica de sensibilidad a los 
antimicrobianos 
 
1.1.3 Alcance
 
Esta  práctica  va  desde  el  sembrado  de  una  bacteria  problema  en  un  medio  de  cultivo  y  el 
posterior análisis frente a la sensibilidad de los antimicrobianos siguiendo el método de Kirby‐
Bauer, para ello se usará una serie de antibióticos para determinar la sensibilidad o resistencia. 

1.1.4 Requisitos previos a la realización de la práctica

 
Antes de comenzar la práctica el estudiante debe:  
 
1. Conocer  sobre  la  forma  de  acción  de  los  antimicrobianos  para  la  eliminación  de  los 
microorganismos  
2. Conocer  sobre  la  correcta  interpretación  de  los  resultados  obtenidos  según  la  tabla 
publicada por CLSI 
3. Leer la guía de la práctica de forma comprensiva 
 
1.1.5 Aparatos, equipos e instrumentos
 
Aparatos, equipos e instrumentos Cantidad Requisitos técnicos
Mecheros  6   
Turbidimetro  1
Incubadora  1  37 C 
 
1.1.6 Parámetros, magnitudes y rangos a ser determinados
 
Medición del diámetro (mm) de las zonas de inhibición de cada uno de los discos utilizados.  
 
1.1.7 Materiales y reactivos
 
Materiales   Cantidad
Gradilla plástica  4
Guantes de manejo S‐M  12
Fósforos caja  3
Lápiz dermográfico  6
Hisopos estériles  6
Regla graduada en mm  3
Pinzas quirúrgicas  6
Set de antibióticos para cocos Gram negativos y 
Gram positivos 
Set de antibióticos para bacilos Gram negativos 

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Reactivos  Cantidad
Hipoclorito de Sodio al 10%  100 ml
Estándar 0.5 MacFarland  1
Agua salina 0,85%  100 ml
 
1.1.8 Recursos adicionales
 
Medios de cultivo  Cantidad
Cajas con Agar Muller Hinton (MH) 6
 
Microorganismos en medios de cultivo  Cantidad
Cajas Petri con Staphylococcus aureus en agar sangre 6
Cajas Petri con Bacillus subtillis en agar sangre   6
Cajas Petri con Pseudomonas aeruginosa en agar nutritivo 6
Cajas Petri con Klebsiela pneumoniae en agar EMB  6

1.1.9 Descripción del procedimiento

 
I. DILUCIÓN 
 
1. Con un asa bacteriológica, tome una colonia aislada y colóquela en un tubo de agua 
salina 0.85%. 
2. Ajustar  la  turbidez  del  cultivo  a  la  turbidez  del  estándar  (0.5  McFarland)  en  el 
turbidimetro (agitar antes de usar). 
3. Comparar la turbidez del estándar con la suspensión de bacterias. 
4. Si resulta muy concentrada adicionar agua salina de un tubo estéril sin inóculo  
 

II. INOCULO 
 
1. Introduzca  un  aplicados  estéril  (hisopo)  en el  tubo  con  la  dilución, descartando  el 
exceso en las paredes del tubo, luego inocular el medio MH con un hisopo estéril. 
2. Estríe el medio MH en tres planos cubriendo completamente la superficie con una 
de las bacterias seleccionadas 
3. Permitir secar la siembra mediante el reposo por un lapso de 3 a 5 minutos 
4. Con las pinzas y de manera aséptica coja uno por uno los discos de antibióticos y 
colóquelos en la superficie inoculada del agar. 
5. Los discos deben estar espaciados de manera que su distancia a la pared de la placa 
sea de 15 mm y entre ellos de 30 mm. 
6. Con  las  pinzas  presione  suavemente  los  discos  sobre  la  superficie  del  agar,  para 
asegurar un buen contacto con el medio de cultivo 
7. Incubar las cajas Petri de 35 °C a 37 °C por 18 a 24 horas 
8. Después  de  la  incubación,  medir  las  zonas  de  inhibición  con  una  regla  (todo  el 
diámetro). 
9. De acuerdo con la tabla de interpretación (CLSI) determine para cada antibiótico si 
el microorganismo es sensible, intermedio o resistente 
10. Para los reportes actuales se usa solamente sensible o resistente 

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III. CONTROLAR CUIDADOSAMENTE 
1. Estándar de inoculación 
2. Contacto entre discos y el agar 
3. Temperatura y tiempo de incubación 
4. Lectura y reporte de resultados 
5. Número de discos por caja (8 máximo, en cajas de 10 cm de diámetro y máximo 12 
en cajas de 15 cm) 
 
IV. ANTIBIOTICOS APROPIADOS 
 
1. Para cocos Gram negativos anaeróbicos, Gram negativos patógenos y cocos Gram 
positivos (excluyendo enterococos) 
 
a. Ampicilina (amp)  f. Meticilina (met) 
b. Cefotaxima (ctx)  g. Oxacilina (oxa) 
c. Cloranfenicol (clo)  h. Penicilina (pen) 
d. Eritromicina (eri)  i. Tetraciclina (tet) 
e. Cefepima (fep)  j. Vancomicina (van) 
 
2. Para bacilos Gram negativos y enterococos 
a. Ampicilina (am)  h. Tetraciclina (tet) 
b. Ciprofloxacina (cip) 
c. Cefotaxima (ctx) 
d. Cloranfenicol (clo) 
e. Colistina (col) 
f. Gentamicina (gm) 
g. Kanamicina (kan) 

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1.1.10 Datos a ser registrados y el método de análisis y de presentación de resultados.

Los estudiantes registrarán los resultados de la siguiente forma: 

a) Fotografías del medio de cultivo antes y después de la siembra  
b) Tabla 1.‐ Características de las colonias de las bacterias en los distintos medios de cultivo 
c) Tabla 2.‐ Características del medio de cultivo antes de la siembra 
d) Tabla 3.‐ Características del medio de cultivo 24 h después de la siembra (microorganismo A)  
e) Tabla 4.‐ Características del medio de cultivo 24 h después de la siembra (microorganismo B) 

1.1.11 Referencias cruzadas

No aplica 

1.1.12 Referencias normativas

No aplica 
 

   
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