MÉTODOS EN

BIOLOGÍA MOLECULAR

Romina Martinelli
Médica - T.S. en Genética
Mg. Biología Molecular Médica
Dogma Central
 Biología Molecular

Rama de la biología que está centrada en el

análisis de los fenómenos biológicos a partir de
la perspectiva de la estructura de las moléculas.

¿A qué se denominan técnicas de biología molecular?

Técnicas de laboratorio que se usan para extraer ADN (ARN o
proteínas), visualizarlo para ver su estado, cortarlo y pegarlo (Ingeniería
genética), amplificar una región en una enorme cantidad de moléculas
(PCR - clonación), corte de una determinada región con enzimas de
restricción para ver si por una mutación se gana o se pierde un sitio de
restricción (análisis de mutaciones por RFLP o Restriction fragment
lengt polymorphism) o secuenciarlo.
Estructura del ADN
Estructura del ADN
Estructura del ARN
Estructura de las proteínas
Estructura del gen
 Biología Molecular

Rama de la biología que está centrada en el

análisis de los fenómenos biológicos a partir de
la perspectiva de la estructura de las moléculas.

¿A qué se denominan técnicas de biología molecular?

Técnicas de laboratorio que se usan para extraer ADN (ARN o
proteínas), visualizarlo para ver su estado, cortarlo y pegarlo (Ingeniería
genética), amplificar una región en una enorme cantidad de moléculas
(PCR - clonación), corte de una determinada región con enzimas de
restricción para ver si por una mutación se gana o se pierde un sitio de
restricción (análisis de mutaciones por RFLP o Restriction fragment
lengt polymorphism) o secuenciarlo.
Amplificación: reacción en cadena de la polimerasa
Amplificación: reacción en cadena de la polimerasa
Amplificación: reacción en cadena de la polimerasa

Termociclador
Amplificación: reacción en cadena de la polimerasa
RT-PCR
Secuenciación
Secuenciación
Estudios de expresión: Microarrays
Estudios de expresión: Microarrays
Estudios de expresión: RNAseq
Histoquímica
Inmunohistoquímica
Hibridación in situ
Extracción de ácidos nucleicos de cortes histológicos

Por qué es importante?

La técnica mantiene la estructura del tejido e impide la putrefacción durante años

Es la técnica más usada para el guardado de tejidos

Permite conservar el tejido a la espera de nuevas técnicas diagnósticas

Existe gran cantidad de cortes que pueden ser utilizados en investigación

Extracción de ácidos nucleicos de cortes histológicos

Por qué es importante?

La técnica mantiene la estructura del tejido e impide la putrefacción durante años

Es la técnica más usada para el guardado de tejidos

Permite conservar el tejido a la espera de nuevas técnicas diagnósticas

Existe gran cantidad de cortes que pueden ser utilizados en investigación

Pero...

El formaldehído puede producir cross-linking que interfiera en los estudios a realizarse luego
de la extracción

Los protocolos de rutina pueden aumentar la degradación y/o fragmentación de los ácidos
nucleicos

El guardado de los tacos en malas condiciones condiciones puede llevar a la degradación de

los ácidos nucleicos
Extracción de ácidos nucleicos
Extracción de ácidos nucleicos

Algunas soluciones...

Desparafinización: es uno de los pasos más críticos ya que restos de parafina reducen
la calidad de la muestra

Utilización de kits comerciales

Utilización de amplicones más pequeños para RT-PCR

Ajustar los protocolos para muestras de tamaño más pequeño

Muchas Gracias
por su Atención

Romina Martinelli
Médica - T.S. en Genética
Mg. Biología Molecular Médica