Universidad Central de Venezuela

Facultad de Medicina
Escuela de Bioanálisis

Contenido de programas de Asignaturas.

Asignatura:

TÉCNICAS EN BIOLOGÍA MOLECULAR

Código Carácter Créditos
3611 Electiva 3 (2T – 1L)
Vigencia
Desde 2010 semestral
Requisito: Inmunología, Bioquímica II.
Fuente: Oficina de Control de Estudios.

Oficina de Control de Estudios de la Escuela de Bioanálisis.

Edificio Administrativo de la Escuela de Bioanálisis, P.B. oficina # 09

Av. Carlos Raúl Villanueva, Ciudad Universitaria de Caracas, zona Este.

Los Chaguaramos, Caracas – Venezuela.

Teléfono 058 0212 6053326

CSF/JF/KR.2018
UNIVERSIDAD CENTRAL DE VENEZUELA
FACULTAD DE MEDICINA
ESCUELA DE BIOANALISIS
CATEDRA DE BIOQUIMICA “A”

ASIGNATURA: TECNICAS DE BIOLOGIA MOLECULAR CODIGO: 3611

CREDITOS: 3 (2T – 1P) TIPO: ELECTIVA
VIGENCIA: DESDE 2010 PRELACION:
Bioquímica II,
Inmunología

PROGRAMA TEORICO

Tema 1: INTRODUCCION A LA BIOLOGIA MOLECULAR

Definiciones. Importancia. Aplicaciones. Técnicas. Generalidades de los Ácidos nucleicos.

Tema 2: LAS HERRAMIENTAS DE LA BIOLOGÍA MOLECULAR APLICADAS AL

DIAGNÓSTICO Y AL TRATAMIENTO EN MEDICINA.

2.1.- EXTRACCION DE ACIDOS NUCLEICOS.

Herramientas de la Biología Molecular para la obtención y análisis de ADN. Extracción y

purificación de ADN: métodos y tecnologías. Herramientas de la Biología Molecular para
la obtención y análisis de ARN. Extracción y purificación de ARN: métodos y tecnologías.
Metodologías para análisis de Ácidos Nucleicos. Evaluación de la calidad y cantidad de
ADN/ ARN obtenido.

2.2.- TÉCNICAS DE SEPARACIÓN Y PURIFICACIÓN DE ACIDOS NUCLEICOS.

Electroforesis conceptos básicos principios de análisis mediante electroforesis. Tipos de

electroforesis y principios. Electroforesis horizontal y vertical. Aplicaciones. Electroforesis
vertical. SSCP (conformación de polimorfismo de cadena simple). DGGE (electroforesis
en gel de gradiente desnaturalizante). TTGE (electroforesis en gel de gradientes de
temporales de temperatura). CDGE (electroforesis en gel desnaturalizantes a
concentraciones constantes). Identificación de genes y fragmentos de ADN. Purificación
de fragmentos de ácidos nucleicos a partir de geles. Transferencia de ácidos nucleicos a
matrices sólidas. Principios y Aplicaciones. Southern blot y Northern blot. Electroforesis
capilar. Uso y aplicaciones.

2.3.- ENZIMAS QUE ACTUAN SOBRE ÁCIDOS NUCLÉÍCOS

Análisis de restricción. Enzimas de restricción. Tipos. Usos y aplicaciones. RFLP

(polimorfismos de la longitud de los fragmentos de restricción). Mapeos físicos mediante
enzimas de restricción. Otras enzimas modificadoras (Ligasas, Polimerasas,
Transcriptasa reversa, Nucleasas, Fosfatasas, Quinasas, Transferasas, Metilasas, etc).
Reacción que cataliza cada una. Su uso en Biología Molecular.

2.4.- LA REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR).

Reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Principios y fundamentos. Etapas del
proceso. Diseño de primers. Programas informáticos. Factores que afectan la PCR. Tipos
de PCR. PCR larga, PCR anidada, asimétrica, con adaptadores, inversa,
retrotranscripción (RT-PCR) y PCR Multiplex. Estandarización, validación y control de
calidad de resultados en biología molecular. Aplicaciones y potencialidad diagnóstica de la
amplificación de ácidos nucleicos. Uso de PCR en la detección de agentes infecciosos y
deficiencias genéticas, clonamiento de genes mediante PCR, secuenciación vía PCR.
Características y elementos básicos del laboratorio de Biología Molecular.

Principio y fundamento de PCR en Tiempo Real. Químicas de los sistemas de detección

(SYBR Green, Taqman, FRET, molecular beacons, scorpions, eclipse, sondas lux).
Aplicaciones de PCR en Tiempo Real. Preparación de muestras. Métodos de validación.
Aplicaciones. Cuantificación absoluta, cuantificación relativa. Métodos de Livak., Plaff .
Selección de controles y genes. Usos. RT-PCR en Tiempo Real. Discriminación alélicas.
SNP (Polimorfismo de nucleótido simple).

2.5.- SECUENCIACIÓN Y ANALISIS DE SECUENCIAS

Secuenciación. Principio y fundamento. Estrategias para secuenciación. Análisis de geles.

Uso de programas para el análisis de secuencias de ADN. Homologías de secuencias.
BlasN-T, traducción de marcos de lectura. Análisis de mapas de restricción. Manejo de
banco de datos de genoma.

2.6.- MICROARREGLOS

Microarreglos. Principio y fundamento. Marcaje de sondas para microarreglos. Purificación

y cuantificación de sondas. Fabricación de bibliotecas genómicas y de microarreglos.
Aplicaciones de microarreglos y consideraciones. para el diseño experimental. Análisis de
imágenes en microarreglos y análisis estadístico. Análisis de imágenes. Análisis
estadístico de los resultados
Bioinformática.

Tema 3: MECANISMOS DE REPARACION DEL MATERIAL GENETICO: REPARACION,

RECOMBINACION, TRANSFORMACION, RESTRICCION Y MODIFICACION.

Mutaciones. Tipos. Reparaciones de ADN. Mecanismos generales. Recombinación.

Tipos. Transformación bacteriana. Restricción y modificación. Mapeo Genético.

Tema 4: LOS ORGANISMOS TRANSGÉNICOS Y SU RELACIÓN CON LA SALUD

HUMANA.

Fundamentos y metodologías para la modificación genética de organismos. Alimentos,

productos farmacéuticos y animales obtenidos por modificación genética y transgénesis.
Seguridad y control. Detección de transgénicos. Vinculación de transgénicos y la salud
humana. Conceptos básicos de terapia génica.

Tema 5: CLONAMIENTO DE GENES.

Clonamiento. Vector de clonamiento. Tipos de vehículos de clonamiento. Características

que deben reunir. Biología de Plásmidos. Usos como vectores. Estrategias de
clonamiento. Clonamiento shot-gun, clonamiento dirigido, enriquecimiento de secuencias,
etc. Empaquetamiento. Transformación. Transfección. Electroporación. Selección y
caracterización de clones. Marcajes de sondas y anticuerpos. Selección (Screening).
Grados de rigurosidad.

Tema 6: ANÁLISIS DE GENOMAS DE EUCARIOTAS.

Análisis de polimorfismo de fragmentos de restricción (RFLP). Marcadores Moleculares,

Huellas Génicas (Fingerprinting). Forénsica. Bases de cada una de estas técnicas y
aplicaciones. Proyectos genoma. “Genomics” análisis funcional de secuencias
provenientes de bancos de datos [Discusión de

Tema 7: BIOINFORMÁTICA Y PROYECTO GENOMA

Utilización de las herramientas bioinformáticas para el análisis de genes y regiones de

interés. Cómo determinar comparativamente regiones conservadas y variables.

PROGRAMA PRÁCTICO

Tema 1: Extracción y cuantificación de ADN a partir de distintas muestras.

Tema 2: Extracción y cuantificación de ARN.

Tema 3: Electroforesis en agarosa.

Tema 4: Reacción en Cadena de la Polimerasa.

Tema 5: Corte con enzimas de restricción.

Tema 6: Electroforesis en gel de poliacrilamida.

Tema 7: Transferencia de ácidos nucleicos a matrices sólidas. Southern blot o Northern

blot

Tema 8: Hibridización.

Tema 9: PCR en Tiempo Real.

Tema 10: Análisis de secuencia

 BIBLIOGRAFIA RECOMENDADA

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books
Conceptos de Genética. 8ª Edición. WS Klug, MR Cummings & CA Spencer. Pearson
Educación SA, Madrid, 2006. Versión en castellano de Concepts of genetics, 8th Edition.
WS Klug, MR Cummings & CA Spencer. Pearson Education Inc - Prentice Hall, NJ, USA.
2006.
Genética: un enfoque conceptual. 2ª Edición. BA Pierce. Editorial Médica Panamericana
SA, Madrid, 2006. Versión en castellano de Genetics: a conceptual approach, 2nd Edition.
BA Pierce. WH Freeman & Co, NY, USA, 2005.
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Hill/Interamericana de España, 2000. Versión en castellano de Modern Genetic Analysis, 1st
Edition. AJF Griffiths, WM Gelbart JH Miller, RC Lewontin. WH Freeman & Co. 1999.
Texto ilustrado de Biología Molecular e Ingeniería Genética. Conceptos, Técnicas y
Aplicaciones en Ciencias de la Salud. J Luque y Á Herráez. Ediciones Harcourt, SA,
Madrid, 2001.
Genetics. A molecular perspective. WS Klug & MR Cummings. Prentice Hall, Pearson
Education, Upper Sadle River, New Jersey, USA. 2003.
Genética. 7ª Edición. AJF Griffiths, JH Miller, DT Suzuki, RC Lewontin, WM Gelbart.
McGraw-Hill/ Interamericana de España, 2002. Versión en castellano de An Introduction to
Genetic Analysis, 7th Edition. AJF Griffiths, JH Miller, DT Suzuki, RC Lewontin, WM
Gelbart. WH Freeman & Co. 2000.
Genética: Texto y Atlas. 2ª Edición. E Passarge. Editorial Médica Panamericana SA,
Buenos Aires, 2004. Versión en castellano de Color Atlas of Genetics. Eberhard Passarge.
Thieme Medical Pub, 2001.
Análisis Evolutivo. 2ª Edición. S Freeman & JC Herron. Pearson Educación, SA, Madrid,
2002. Versión en castellano de Evolutionary Analysis, 2nd edition. S Freeman & JC Herron.
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Genomes. 2nd edition. TA Brown. BIOS Scientific Publishers Ltd, Magdalen Rd, Oxford,
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Genética Humana. T Strachan & AP Read. McGraw-Hill Interamericana Editores SA de
CV, México DF, 2006. Versión en castellano de Human Molecular Genetics 3. T Strachan
& AP Read. Garland Publishing Science, Abingdon, UK, 2004.
Genética Molecular Humana. 2ª Edición. P Sudbery. Pearson Educación SA, Madrid,
2004. Versión en castellano de Human Molecular Genetics, 2nd edition, P Sudbery, Pearson
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Genética Humana. Fundamentos y Aplicaciones en Medicina. 2ª Edición. AJ Solari.
Editorial Médica Panamericana, SA, Buenos Aires, Argentina, 1999.
Biología Molecular del Gen. 5ª Edición. JD Watson, TA Baker, SP Bell, A Gann, M
Levine & R Losick. Editorial Médica Panamericana, SA, Madrid, 2006. Versión en
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Gann, M Levine & R Losick. Pearson Benjamin Cummings, San Francisco, CA, USA,
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Genes VIII. B Lewin. Prentice Hall, Pearson Education, Upper Sadle River, New Jersey,
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Genetics: a molecular approach. 3rd edition. TA Brown. Chapman & Hall, Boundary Row,
London, UK. 1998.
Genética. Fundamentos y Perspectivas. 2ª Edición. MJ Puertas. McGraw-Hill
Interamericana de España, SAU, Madrid, 1999.