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1 Evaluación de los residuos de Coco, Arveja y Caña de azúcar como sustratos

2 en la producción de Hongo Orellana (Pleurotus Ostreatus).


3 Victor Eduardo Caez Erazo, Oscar Mateo Pazos Mera, Duvan Santiago Tena
4 Arellano.
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6 Dirección de Email: vcaez@umariana.edu.co, opazos@umariana.edu.co,
7 santitenaa@gmail.com.
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9 Introducción

10 Desde los inicios del ser humano se ha caracterizado por tener una vida de consumo continuo
11 en cuanto a fuentes ricas en nutrientes (proteínas); todas estas necesidades han surgido por
12 prevalecer nuestra vida, a esto se le atribuye los múltiples desechos que nosotros como seres
13 humanos generamos en este medio, la utilización de tecnologías inapropiadas e irrespetuosas
14 con el medio ambiente y la tendencia de crecimiento de la población del mundo que ha
15 registrado un aumento explosivo de 2500 millones de habitantes en el año 1950 a 5700
16 millones en 1995, previendo 9400 millones para el año 2050 ha propiciado un incremento
17 en la acumulación de contaminantes y residuos (UNDP, 2005). Estos desechos por mucho
18 tiempo se han visto como algo de cero utilidad, desperdiciando los múltiples sub-usos, de los
19 cuales uno de ellos es generar componentes nutritivos (altos en carbono, nitrógeno,
20 hidrógeno, oxígeno) para otros organismos, los cuales hacen parte de nuestra vida cotidiana,
21 pueden ser alimentados por estos ''desechos'' al verse como fuentes de abono, concentrados,
22 suplementos, fertilizantes.
23 El cultivo de hongos comestibles es un proceso biotecnológico utilizado en el reciclaje de
24 residuos orgánicos lignocelulósicos. En la actualidad combina la producción de alimentos
25 ricos en proteínas con la reducción de la contaminación ambiental (Beetz y Kustudia 2004).
26 La producción de hongos es considerada como la segunda tecnología microbiana comercial
27 más importante después de la levadura (Pathak et al.2009). Los hongos se han comido y
28 apreciado por su sabor, sus valores económicos y ecológicos, y sus propiedades medicinales
29 durante muchos años. En general, los hongos contienen 90% de agua y 10% de materia seca
30 (Morais et al. 2000; Sánchez 2004). Tienen una composición química que es atractiva desde
31 el punto de vista nutricional (Gbolagade 2006). El valor energético total de las cabezas de
32 hongos está entre 250 y 350 cal / kg de hongos frescos (Oliver et al. 1987; Laborde 1995).
33 Algunos hongos se pueden cultivar fácilmente y tienen mercados importantes en todo el
34 mundo. Se han recolectado más de 300 especies de la naturaleza y se han utilizado para
35 diversos fines médicos tradicionales, principalmente en el Lejano Oriente. Aproximadamente
36 200 especies de hongos son comestibles, pero sólo 30 han sido domesticadas y diez cultivadas
37 comercialmente (Barny 2009). El principal hongo cultivado en todo el mundo es Agaricus
38 bisporus seguido de Pleurotus sp. (Rühl et al. 2008).. Los hongos tienen la capacidad de
39 degradar varios sustratos lignocelulósicos y pueden producirse en materiales naturales de la

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40 agricultura, bosques, cría de animales y industrias manufactureras. Las lacasas o las
41 peroxidasas ligninolíticas (LiP y MnP) producidas por hongos de pudrición blanca oxidan el
42 polímero de lignina, generando así radicales aromáticos.
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45 Las Orellanas son un tipo de hongo comestible poco conocido y cultivado en Colombia, esto y
46 su alto valor nutricional, hace que sea un producto atractivo y con un gran potencial en este
47 momento donde las personas se están interesando más por su salud y por los productos que
48 consumen; es por esto que se busca introducirse en el mercado como una nueva alternativa de
49 alimentación y nutrición, siendo un producto libre de fungicidas y herbicidas (Amado et al.,
50 2001). Los hongos son organismos que cumplen funciones muy importantes dentro de los
51 ecosistemas, algunos incluso sirven como alimento y poseen capacidad degradadora y
52 descomponedores de materia orgánica e hidrocarburos. Específicamente el género Pleurotus
53 ostreatus tiene estas dos características lo que permitió utilizarlo como descomponedor de los
54 residuos lignocelulósicos que se generan como desechos en el departamento de Nariño. Los
55 abonos o fuentes de sustratos son uno de los preferidos subproductos para estos ''desechos''
56 orgánicos, los sustratos orgánicos como la composta y vermicomposta protege y desarrolla la
57 vida de los microorganismos y mejora la estructura del suelo, es decir, el suelo está vivo,
58 permitiendo el retorno de la materia orgánica al suelo y su reinserción en los grandes ciclos
59 ecológicos vitales de nuestro planeta (Ruiz, 2011) los cuales sirven para elevar el rendimiento de
60 producción de muchos organismos vegetales, animales, insectos, humanos, fungía, plantas, etc.
61 Las fuentes de sustrato muchas veces se destacan por brindar sus nutrientes en base a sus desechos
62 de orgánicos, los cuales ayudan a que el organismo en trabajo crezca con los máximos nutrientes
63 que este necesita, los cuales estos se pueden aprovechar de muchas formas dependiendo las
64 técnicas a implementar y dependiendo el organismo al cual se quiere beneficiar. De tal manera
65 que muchos sustratos pueden variar en su precio por la manera en que ayudan a los organismos
66 de grande y baja escala, por tal forma que se puede recurrir a muchas alternativas que ayuden a
67 este objetivo.
68 El micelio de este hongo puede crecer en una temperatura entre 0 y 35 °C, con temperatura óptima
69 de 30 °C, y en un rango de pH entre 5.5 y 6,5 y se ha observado que después de cosechar los
70 cuerpos fructíferos de P. ostreatus, en los materiales usados como sustratos las cantidades finales
71 de hemicelulosa, celulosa y lignina se han reducido en un 80% sugiriendo que todos los
72 materiales que contienen estos compuestos, pobres en nitrógeno pueden ser usados como
73 sustratos para Pleurotus spp.(Zadrazil, 1974). En esta ocasión construiremos un invernadero
74 desde cero, los invernaderos para cultivo varían en sus diseños y tamaños. generalmente los más
75 populares se construyen en forma de pirámide, circular, octogonal, etc. La construcción de los
76 invernaderos no difiere mucho en la construcción de un invernadero comercial. Para construirlo
77 es importante considerar que un invernadero con una superficie de plástico es superior a uno con
78 una superficie de vidrio, ya que el plástico es más resistente y sirve de refugio para las plantas en

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79 las temperaturas muy bajas (Benito et al., 2006). La tecnología de producción de hongos
80 comestibles tiene una importancia relevante para la alimentación de la población rural, ya que
81 los hongos comestibles forman una estrategia de subsistencia basada en el aprovechamiento de
82 los recursos naturales (Aguilar et al., 2002).
83 Un sistema de control ambiental computarizado es una herramienta invaluable para el cultivo de
84 hongos. La computadora controla los parámetros ambientales como la temperatura, la humedad,
85 el flujo de aire y la presión (Hawton et al. 2000). Para este proyecto implementaremos un control
86 automatizado por sensores, el cual diseñamos, que permita verificar el comportamiento de la
87 Temperatura y Humedad presentes en el invernadero. Para los procesos de crecimiento y
88 fructificación, los hongos requieren de la combinación de factores físicos como temperatura,
89 humedad, luz, aireación, oxígeno y dióxido de carbono, cuyos valores y concentraciones óptimas
90 varían en función de la etapa en que se encuentran (fase de inoculación y fase de fructificación),
91 además de un adecuado pH en un intervalo entre 5,5 a 7,0 (Sánchez et al., 2001). En nuestro caso
92 profundizaremos en la relación Carbono/Nitrógeno (C/N) ya que son el principal componente
93 para que el Hongo P. Ostreatus pueda desarrollarse debidamente y también en la caracterización
94 de qué combinación de sustratos arroja mejores resultados.
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97 Objetivo General:
98 ● Evaluar los residuos de coco, arveja y caña de azúcar como sustratos en la producciòn de
99 Hongo Orellana (pleurotus ostreatus).
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101 Objetivos específicos:
102 ● Caracterizar los contenidos de C/N de los residuos de coco, arveja y caña de azúcar para
103 dar cumplimiento a los requerimientos nutricionales del hongo.
104 ● Formular los sustratos a utilizar en la producción de Hongos Comestibles, tipo Orellana,
105 con base en sus reportes proximales de Carbono y Nitrógeno que permita una relación
106 C/N de 5,1.
107 ● Producir el Hongo Orellana (pleurotus ostreatus).
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109 Metodología
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111 Fig 1. Diagrama de flujo de la metodología:

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118 Ubicación de estudio:
119 Este estudio se llevará a cabo en el laboratorio de microbiología de la Universidad Mariana
120 sede Alvernia en Pasto-Nariño.
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122 Recolección de materias primas:
123 Los residuos agroindustriales fueron recolectados respectivamente, la estopa de coco de
124 Tumaco-Nariño, el bagazo de caña fue recolectado de residuos provenientes de un trapiche
125 del municipio de Sandoná-Nariño, la vaina de arveja fue recolectada de la finca Moñona del
126 municipio de Guaitarilla - Nariño. La fabricación de compostaje con pelusa de coco para la
127 formulación de los sustratos se llevó a cabo respectivamente con un balance de materia el
128 cual opta por una relación C/N 5 a 1 la cual se conformará según la composición de los
129 residuos agroindustriales recolectados teniendo en cuenta parámetros como la limpieza y la
130 frescura del residuo para evitar contaminantes fuertes u organismos competidores los cuales
131 puedan afectar el crecimiento del hongo.
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133 Recepción y clasificación de materia prima:
134 Se realizará la recepción de la materia prima verificando que se encuentre en buen estado. Se
135 debe retirar cualquier materia (bagazo de caña, estopa de coco y vaina de arveja) que presente
136 nivel de putrefacción o contaminación mayor al 20%. Para ello realizar un muestreo aleatorio
137 en el cual se toma el 2% de cada lote por cuarteo, para esto tomar la muestra de diferentes
138 partes del cargamento, verificar las muestras seleccionadas teniendo en cuenta que la
139 aceptación estará dada por su estado de putrefacción y contaminación. Para asegurar la
140 aleatorización de la muestra se debe tomar bagazo de caña y vaina de arveja de diferentes
141 partes del lote hasta completar el 2% del total. En caso de que al realizar el muestreo esté
142 presente mayoría de unidades con un nivel de putrefacción del 20% se debe hacer de la misma
143 forma otro muestreo con el 4% del total y reevaluar, si posteriormente la muestra sigue
144 presentando mayoría de unidades en mal estado no se aceptará el cargamento.
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146 Reducción de tamaño:
147 Se sometió las materias primas a reducción de tamaño por medio de un molino de martillo el
148 cual redujo el tamaño de partícula a una longitud de 2 a 4 cm.
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152 Caracterización de las materias primas (Método Kjeldahl):
153 La caracterización de las materias primas se llevará a cabo en el laboratorio de química en la
154 Universidad Mariana sede Alvernia Pasto-Nariño, El método de Kjeldahl se fundamenta en
155 la conversión del nitrógeno total de una muestra orgánica en sales de amonio que son
156 posteriormente valoradas por volumetría ácido base, este método consta de 3 etapas las cuales
157 son: digestión de la muestra, destilación con arrastre de vapor del amoniaco producido y
158 valoración ácido base de este amoniaco.
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160 Etapas del método Kjeldahl

Descripción Reacción

Digestión 𝑷𝒓𝒐𝒕𝒆í𝒏𝒂 + 𝑯𝒔 𝑺𝑶𝟒 → 𝑪𝑶𝟐 + 𝑯𝟐 𝑶 + 𝑵𝑯𝟒 𝑯𝑺𝑶𝟒


Liberación de Amoniaco 𝑵𝑯𝟒 𝑺𝑶𝟒 + 𝟐𝑵𝒂𝑶𝑯 → 𝑯𝟐 𝑶 + 𝑵𝒂𝑺𝑶𝟒 + 𝑵𝑯𝟑
Titulación 𝑵𝑯𝟒 𝑯𝟐 𝑩𝑶𝟒 + 𝑯𝑪𝑳 → 𝑵𝑯𝟒 𝑪𝑳 + 𝑯𝟑 𝑩𝑶𝟒

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162 Tabla 1 Etapas del método de caracterización de proteínas.
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164 Preparación y formulación del sustrato:
165 El sustrato se muele a una longitud de aproximadamente 2 a 4 cm, par que haya una mejor
166 captación de los nutrientes por parte del organismo y el sustrato no ocupe tanto volumen
167 dentro del sistema de cultivo (bolsa). Uno de los sustratos más comunes utilizados para los
168 hongos modernos es una mezcla de componentes que contengan nutrientes que puedan ser
169 captados por este microorganismo a producir, para este fin se formula dos mezclas (M1, M2),
170 la M1 está conformada por cáscara de arveja con pelusa de coco y la segunda M2 está
171 conformada por bagazo de caña y arveja, cuyas cantidades de mezcla es de 5 kilogramos para
172 los dos tipos de sustratos M1 y M2. Para calcular las cantidades de componente para realizar
173 esta mezcla, se tuvo en cuenta las relaciones pertinentes de Carbono/Nitrogen en los residuos
174 trabajados (Tabla1).
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CARACTERÍSTICA PELUSA DE COCO (C1) BAGAZO DE CAÑA (C2) ARVEJA (C3)

C/N 115 50,94 2,77

%C 38,53 56,55 25,51

%N 0,335 1,11 9,2

%O 61,135 42,34 65,29

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177 Tabla 2 Resultados de la formulación.
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179 Se toma en cuenta los datos de relación C/N para la formulación de la M1 donde W es la
180 fracción de cierto componente.

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182 Fig 2. Diagrama de bloques de la etapa de mezclado
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186 Se realiza un balance de materia Fig 1. para identificar las cantidades de cáscara de arveja
187 C3 y pelusa de coco C1 para el sustrato, se identifica el balance global en el proceso de
188 mezcla (Fig. 2), dos ecuaciones de los componentes Nitrógeno y Carbono (Fig. 3 y Fig. 4),
189 y la ecuación de relación de 5 C/N la cual se utiliza para la mezcla o sustrato Fig 5.
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194 Balance global
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196 𝐶1 + 𝐶3 = 𝑀1 Ec. 1
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198 Balance por componentes (C y N)
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200 𝑾𝒄 ∗ 𝑪𝟏 + 𝑾𝒄 ∗ 𝑪𝟑 = 𝑾𝒄 ∗ 𝑴𝟏 Ec. 2
201 𝑾𝒏 ∗ 𝑪𝟏 + 𝑾𝒏 ∗ 𝑪𝟑 = 𝑾𝒏 ∗ 𝑴𝟏 Ec. 3
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203 Ecuación de relación 5:1 C:N
204
205 𝑾𝒏 = 𝟓 ∗ 𝑾𝒄 Ec. 4
206
207 Estas ecuaciones por medio un metodo de solucion de ecuaciones se pudo encontrar los
208 valores de entrada de los C1 y C3, identificando así las cantidades que conforman a la M1 o
209 sustrato, para C1 una cantidad de 3.2 Kg de vaina de arveja y 1,8 Kg de pelusa de coco. Así
210 mismo se repite el método de balance de materia para la M2, dado esto se obtuvo los datos
211 para C3 3.6 Kg y para C2 de 1.4 Kg. Ya obtenido estos datos se puede realizar la mezcla
212 respectiva para los dos tipos de sustratos.
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214 Esterilización de sustrato:
215 Para esta etapa se cuenta con un equipo Autoclave en la sede Alvernia de la Universidad
216 Mariana, donde se ingresó los sustratos a este equipo y se los dejo a 121 psi por 20 minutos
217 evitando la degradación de azúcares por el factor de severidad,La desnaturalización por calor
218 y pH extremos cuando estas quedan a estos niveles quedan desactivadas y degradados
219 cambiando el arreglo espacial de la proteína. Durante la desnaturalización se pierden
220 estructuras de orden superior de las proteínas con pérdida de actividad biológica (Melo,

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221 2007), una vez haya culminado esta etapa se retira el sustrato y se deja enfriar en una
222 superficie limpia y estéril.
223
224 Fase de Inoculación:
225 Los sustratos se empacan en bolsas de polietileno con capacidad de 1 lb, la cantidad que se
226 seleccionó para la investigación fue de 200 g de sustrato por lo cual se agrega 4 g de semilla,
227 para el proceso de inoculación se utilizó una semilla comercial de Pleurotus ostreatus, se
228 obtuvo el micelio de semilla la empresa ChampinFung con las siguientes especificaciones:
229 Cepa: Pleurotus Ostreatus
230 T° Fase Vegetativa: Óptimo (24-27°C)
231 T° Primordio: (10-16°C)
232 T° Fructificación: (10-21°C)
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235 Se debe dejar enfriar el sustrato a la misma o a una equilibrada temperatura de la del micelio
236 para poder inocular el sustrato, este proceso se debe realizar con total inocuidad y protección
237 se introduce el 2% del peso del sustrato en semilla por lo cual 200 g de sustrato se inocularon
238 con 4 g de micelio, después de introducir el micelio al sustrato se agita para homogeneizar el
239 sustrato y facilitar la distribución del micelio además de acortar el tiempo de colonización se
240 hace perforaciones en las bolsas para facilitar el intercambio gaseoso.
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247 Incubación: Se debe realizar bajo condiciones oscuras con temperaturas de 19 a 26°C el
248 ambiente no debe tener humedad pero el sustrato debe tener una humedad del 60 % y se
249 debe hacer una revisión de la invasión del hongo cada 3 días, se debe tener en cuenta la
250 aparición de primordios en el sustrato ya que en el momento en que estos aparezcan de debe
251 perforar la bolsa con una tijera o cuchilla estéril.
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253 Fructificación: Se debe aumentar la humedad relativa del área a un rango de 80% y la
254 regular la temperatura a un rango de 20 a 23°C.

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256 Cosecha: Dos semanas después de la aparición del de los primordios se pueden recoger los
257 cuerpos fructíferos el Pleurotus ostreatus fructifica más rápido a 15 que a 22°C
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259 Proceso de biodegradación de la lignina por hongos de la podredumbre blanca.
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265 Diagrama gráfico del cultivo y recolección de setas.

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282 Imagen tomada de:

283 Sánchez 2004

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287 Resultados esperados:

288 ● Se espera obtener un sustrato limpio e inocuo evitando la competitividad microbiana.

289 ● Se espera que en la esterilización del sustrato se pierda la menor cantidad de azúcares

290 para no afectar la cinética del hongo.

291 ● Se espera producir de manera exitosa la mayor cantidad de Hongos dependiendo del

292 sustrato.

293 ● Esperamos poder evaluar con base la producción de hongo que combinacion de

294 residuos agroindustriales utilizados como sustratos son más rentables para la

295 producción de pleurotus ostreatus

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