En este trabajo, los macrófagos humanos se infectaron con diferentes cepas

virulentas de M. tuberculosis y se investigaron los efectos del tiempo de infección.

Usando múltiples métodos de análisis estadístico, los resultados experimentales
mostraron que las concentraciones de muchos metabolitos intracelulares
cambiaron significativamente. El cambio anormal de estos metabolitos estaba
estrechamente relacionado con una variedad de vías metabólicas y funciones
fisiológicas. Se sugiere que el metabolismo de los macrófagos humanos se
desordenó después de infectarse con cepas de M. tuberculosis, y los mecanismos
de acción virulentos de M. tuberculosis podrían revelarse en cierta medida. Hubo
veintidós metabolitos diferenciales que pueden identificarse como biomarcadores
potenciales. Curiosamente, estos metabolitos tuvieron una regularidad y una
tendencia a la variación similares después de infectarse con diferentes cepas de
M. tuberculosis en diferentes períodos de tiempo, ya sea en grupos virulentos
(BCG y Ra) o grupos virulentos. (Rv y B36). Se utilizó otro método para verificar y
certificar este resultado; Se analizaron los metabolitos completos con áreas de
pico relativas utilizando MetaboAnalyst 2.0 después de normalizarse con ribitol
(estándar interno). Después del análisis de grupo sin supervisión (Figura 5a) y del
análisis PLS-DA supervisado (Figura 5b), se obtuvieron veinticuatro metabolitos (el
valor VIP total de los componentes principales de cada metabolito estaba por
encima de 1.0) como metabolitos diferenciales. Este resultado fue bastante
encajado con el resultado antes mencionado. El análisis de la ruta del
metabolismo mostró que estos metabolitos diferenciales se relacionaban
principalmente con el metabolismo de los aminoácidos y la biosíntesis (como la
alanina, aspartato, glutamato, valina, leucina, etc.), el metabolismo anabólico del
glutatión (GSH), el metabolismo de los carbohidratos (como la galactosa, fructosa,
sacarosa, etc.), metabolismo de los ácidos grasos, metabolismo de los
esfingolípidos, metabolismo del piruvato y glioxilato, y metabolismo del
dicarboxilato. Muchas vías de metabolismo y biosíntesis se vieron afectadas
después de la infección por cepas de M. tuberculosis, como el metabolismo de los
aminoácidos, el metabolismo de los carbohidratos y el metabolismo de los
fosfolípidos. Finalmente, estas rutas de metabolismo y biosíntesis afectaron el
ciclo del ácido tricarboxílico (TAC, que no solo es la ruta final del metabolismo de
tres nutrientes principales, sino que también es un importante centro asociado de
metabolismo de carbohidratos, ácidos grasos y aminoácidos), y luego causa la
Anomalías del metabolismo energético.
El ácido glutámico, la 5-oxoprolina y el ácido aspártico tuvieron la misma dirección
de perturbación (regulación hacia arriba o hacia abajo) en los grupos infectados
por diferentes virulentos. Estos tres metabolitos son sustratos muy importantes
involucrados en el metabolismo anabólico de GSH (las líneas de puntos en la
Figura 6). Se propone que el metabolismo anabólico GSH fue afectado en estas
condiciones. GSH es un componente importante de la defensa celular contra la
virulencia del oxígeno (Ung y Av-Gay 2006). Las concentraciones de estos
metabolitos aumentaron después de infectarse por M. tuberculosis durante un día.
Se indica que los macrófagos inducen la producción de GSH para proteger a los
macrófagos contra el efecto virulento de los intermediarios reactivos del oxígeno
(ROI) y los intermediarios reactivos del nitrógeno (RNI) (Venketaraman et al. 2005;
Millman et al. 2008; Zahrt and Deretic 2002). En nuestro trabajo, las
concentraciones de los tres metabolitos mencionados anteriormente disminuyeron
después de la infección durante tres días y más. Se indica que la ruta del
metabolismo anabólico de GSH se destruyó, por lo que se agotó el GSH y
disminuyó la inmunidad de los macrófagos. Las concentraciones de otros
aminoácidos, como la prolina, treonina, hidroxiprolina, glicina, beta-alanina, etc.,
disminuyeron, lo que resultó directa o indirectamente del metabolismo anabólico
de GSH (Figura 6).

Figure 6. Putative metabolic pathways of human macrophages infected by M. Tuberculosis. For

clarity, arrows indicate the direction of the reaction assumed in the model. Red marks indicated
the reactions that were significantly elevated relative to those of the controls. Blue marks show
significantly inhibited reactions. Amaranth marks show insignificantly inhibited reactions. PEP,
phosphoenolpyruvate; AA, Amino acids; Amino acids were abbreviated using the standard three-
letter convention. (Figure available in color online.)

La perturbación de varios metabolitos diferenciales, como el fosfoglicérido, el ácido

fosfórico, el glicerol, la fosforiletanolamina, el ácido esteárico, el ácido palmitínico y
el ácido oxálico, sugirieron que el metabolismo de los ácidos grasos, el
metabolismo de los glicerofosfolípidos, el metabolismo de los esfingolípidos y el
metabolismo del inositolfosfito se vieron afectados. Estas vías metabólicas se
relacionaron con la biosíntesis y el metabolismo de los lípidos. Muchos estudios
han demostrado que las grandes cantidades de lípidos en la envoltura celular de
M. tuberculosis tienen funciones importantes en los virulentos (Barry 2001;
Mendelson et al. 2005). Algunos de estos lípidos sirven como ligandos clave
cuando las micobacterias ingresan a las células huésped a través de varios
receptores de superficie y pueden afectar fuertemente la señalización de la célula
huésped y la secreción de las citoquinas inflamatorias (Neyrolles y Guilhot 2011).
Al mismo tiempo, las células T activan los macrófagos a través del interferón
gamma (IFN-c), una citoquina de tipo TH1 para proteger contra la tuberculosis
como respuesta inmune (Rocha-Ramirez et al. 2008). Las concentraciones de los
lípidos anteriores (o esos metabolitos). relacionado con la biosíntesis y el
metabolismo de los lípidos) disminuyó en cierta medida en el grupo virulento. Se
indica que las vías biosintéticas de los lípidos se pueden inhibir y las vías
metabólicas de los lípidos se pueden reforzar. Se sugirió que la actividad o
expresión de enzimas en la biosíntesis de lípidos se puede suprimir para que
disminuyan las composiciones y cantidades de lípidos. Eventualmente conduciría
a restringir las citoquinas diferenciales (o quimiocinas) de la respuesta inmune de
macrófagos a la infección micobacteriana (Manca et al. 2004). Las
concentraciones de galactosa, glucosa y maltosa en los grupos virulentos
mostraron una tendencia alcista. Se sugirió que varias vías metabólicas de
carbohidratos, como el metabolismo de la galactosa, el metabolismo de la fructosa
y la manosa, el metabolismo del almidón y la sacarosa, etc., se vieron afectadas
después de la infección por M. tuberculosis, y se puede promover la biosíntesis de
los polisacáridos. Los polisacáridos son una de las sustancias inmunomoduladoras
importantes. Algunos de ellos pueden unirse a receptores de superficie comunes e
inducir respuestas inmunomoduladoras en macrófagos para aumentar la
producción de especies reactivas de oxígeno (ROS) y óxido nítrico (NO) y
aumentar la secreción de citoquinas y quimioquinas (Bai et al. 2012). Por otro
lado, algunas partes de los carbohidratos pueden introducirse en los macrófagos
durante la infección por M. tuberculosis, como los polisacáridos en la capa más
externa de M. tuberculosis, que pueden bloquear la fagocitosis de los macrófagos.