MACROMOLECULAS DE LA LEVADURA

Arboleda Valencia Lina María (lina.arboleda04@usc.edu.co)

Medina Delgado Carol Lizeth (carol.medina00@usc.edu.co)
Siachoque Meza Laura Vanessa (laura.siachoque00@usc.edu.co)
Triviño katherin (katherin.8c@gmail.com)
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Facultad de Ciencias Básicas
Universidad Santiago de Cali
Programa de Química
Laboratorio de Bioquímica
Profesora Luz Dary Caicedo
Santiago de Cali
2019-2

RESUMEN
En la práctica se realizó la extracción e identificación cualitativa de las macromoléculas
más significativas (glucógeno, ácidos nucleicos y proteínas), que están presentes en la
Saccharomyces cerevisiae (levadura de panadería). Se obtuvieron resultados positivos
para las pruebas realizadas para cada macromolécula. Para la prueba de la
determinación cualitativa de glucógeno, la tinción de un color pardo rojizo indicó la
presencia de este. Para la prueba de ácido nucleicos, la aparición de una coloración verde
indicó la presencia de ARN. Y finalmente, con la obtención positiva de la prueba de Biuret,
es decir, la aparición de un color violeta, se pudo concluir que había presencia de
proteínas.

Palabras Clave: Macromoléculas, Saccharomyces cerevisiae, glucógeno, ácidos nucleicos y

proteínas.

1. INTRODUCCIÓN alcohólicas. A la vez, este organismo ha

Conocida desde la antigüedad, la levadura del
pan, del vino y de la cerveza, Saccharomyces
cerevisiae, se ha convertido en un organismo
de estudio común en el laboratorio. La
investigación biotecnológica ha mantenido el
uso tradicional que se ha hecho de esta
levadura, mejorando e innovando los procesos
de panificación y de producción de bebidas
1
ganado protagonismo en el laboratorio al
convertirse en un potente modelo biológico de
organismos eucariotas. La secuenciación
completa del genoma de Saccharomyces
cerevisiae –concretamente, de la cepa de
laboratorio S288C- se finalizó en 1996, tras
cuatro años de un proyecto liderado por la
Unión Europea y la participación de más de
cien laboratorios de todo el mundo. Fue el
primer organismo eucariota en ser secuenciado
y actualmente es el genoma eucariota mejor
conocido. [1]
2. OBJETIVO
Extraer por medio de centrifugación, las
principales macromoléculas de la levadura,
e identificarlas cualitativamente.
3. METODOLOGÍA
En un mortero se colocó una cucharadita de
levadura y de arena lavada para su posterior
trituración, esto se realizó durante 5 minutos.
Posteriormente, a este triturado se le adiciono
15 mL de ácido tricloroacético al 5%
continuando con la maceración por 3 minutos
más. A continuación, se dejó que la arena se
asiente, se decantó la suspensión para ser
centrifugada a 3000 rpm por 5 minutos. Se llevó
a baño con hielo la sustancia sedimentada en
la centrifugación y se extrajo el sobrenadante al
cual se le adicionó 2 mL de alcohol etílico al
96% agitando en frio, la suspensión resultante
se centrifugó a 3000 rpm. El sobrenadante se
descartó y el precipitado obtenido se disolvió en
1 mL de agua destilada, se usó como blanco
(tubo control) agua destilada, una vez disuelto
el precipitado, se le adicionó a ambos tubos 1
mL de yodo, la tinción de un color pardo rojizo
indicó cualitativamente la presencia de
glucógeno.
rpm por 3 minutos. El sobrenadante se
descartó y el precipitado obtenido se disolvió en
2 mL de amortiguador salino. Se usó como
blanco un tubo control con 2 mL del
amortiguador salino, se le adicionó a ambos
tubos 3 mL de reactivo de orcinol y se llevaron
los dos tubos a un baño de agua hirviendo por
unos minutos. La aparición de una coloración
verde indicó la presencia cualitativa de ARN.
Al precipitado obtenido en la prueba anterior
descrita, se le adicionó 2 mL de solución de
NaCl 0.15 M, se usó como blanco un tubo
control con 2 mL de la solución salina, se le
adicionó a ambos tubos 1 mL de una solución
de sulfato de cobre, continuamente 2 mL de
NaOH 10 M y se agitó la solución para mezclar.
La aparición de un color violeta indicó la
presencia cualitativa de proteínas.
4. RESULTADOS
4.1. Determinación de glucógeno
Una vez, realizado el procedimiento indicado en
la metodología para la obtención del glucógeno,
tal como se observa en la figura 1 con la
obtención de un color rojizo pardo.

Al sedimento obtenido inicialmente, se le

adicionó 15 mL de NaCl al 10%, agitando
cuidadosamente. En seguida, la suspensión
resultante se colocó en un baño de agua
hirviendo durante 10 minutos. Una vez enfriada
la suspensión, se centrifugó a 3000 rpm por 3
minutos. Se llevó a baño con hielo la sustancia
sedimentada en la centrifugación y se extrajo el
sobrenadante al cual se le adicionó lentamente
2 volúmenes de alcohol etílico frio, agitando
sobre un baño de hielo y déjelo por unos 3
minutos. Esta suspensión se centrifuga a 3000
2
 Figura 3. Tubo control (azul) frente a tubo con
presencia de proteína (morado).
Figura 1. Tubo control (naranja) frente a tubo con
presencia de glucógeno (rojo pardo).

4.2. Determinación de ácidos nucleicos

5. DISCUSIÓN DE LOS RESULTADOS

Con el objetivo de separar el glucógeno de los

ácidos nucleídos y proteínas, la muestra de
levadura (Saccharomyces cerevisiae), se trató
con ácido tricloroacético al 5%. Esto se da,
debido a que el glucógeno presenta una
estructura muy ramificada, la importancia de
que el glucógeno sea una molécula tan
ramificada es que aumenta su solubilidad en
disolventes de baja polaridad. Aunque el ácido
acético es un disolvente bastante polar, el ácido
tricloroacético está conformado por agentes
desactivantes (halógenos) en su cadena
carbonada, esto ocasiona que la polaridad de
este compuesto disminuya cuantiosamente,
esto le da la propiedad al ácido tricloroacético
para ser un buen solvente para el glucógeno,
ya que la parte apolar de este ácido solubiliza
Figura 2. Tubo control (amarillo) frente a tubo con las cadenas carbonadas del glucógeno y por
presencia de ARN (verde). otro lado, la función ácido orgánico forma
puentes de hidrogeno con los grupos hidróxidos
4.3. Determinación de proteína (OH-) aumentando la solubilidad del
glucógeno, este es el motivo por el cual, al
3
adicionar el ácido se forman dos fases, una
fase líquida que contiene el glucógeno
solubilizado y otra fase sólida con proteínas y
ácidos nucleicos precipitados [2]. Con el fin de
optimizar el proceso de separación de estas
dos fases, se centrifuga para garantizar que no
se vuelvan a mezclar. El sobrenadante
obtenido se trató con etanol al 96% para
precipitar el glucógeno, esto gracias a que el
etanol con sus grupos hidróxidos (OH-) forma
puentes de hidrogeno con los OH- del
glucógeno y esto provoca que el glucógeno se
solubilice, es por esto que es necesario realizar
el proceso de precipitación en un baño de hielo
(bajas temperaturas) para disminuir al máximo
las interacciones entre estos dos grupos y de
esta manera disminuir su solubilidad.
Después de realizados los procesos de
centrifugación, la muestra se pasó a un tubo de
ensayo, se usó como tubo de control (blanco)
agua destilada, se le adicionó a ambos tubos 1
mL de lugol y la obtención en el tubo de la
muestra de una tinción de color pardo rojizo
indicó cualitativamente la presencia de
glucógeno.
Figura 4. Formación del complejo helicoidal, entre el
glucógeno y los iones I3 del lugol embebidos. [5]
El sedimento obtenido anteriormente el cual
contenía proteínas y ácidos nucleicos se trató
con NaCl, debido a que los ácidos nucleicos
tienen bases nitrogenadas y grupos fosfatos,
pueden solubilizarse en la solución acuosa de
NaCl, pero ya que su solubilidad es baja es
necesario elevar la temperatura, para aumentar
las interacciones entre las moléculas de
solvente y soluto y así favorecer la solubilidad
de los ácidos nucleicos. [3]
4
A continuación de la respectiva centrifugación y
decantación, se separa el sobrenadante con los
ácidos nucleicos y el precipitado que contiene
las proteínas se deja en un baño de hielo y de
esta manera se garantiza que hay una mayor
precipitación de esas moléculas.
Los ácidos nucleicos se precipitan adicionando
un solvente más débil en comparación con el
medio acuoso del NaCl, para que los grupos
OH- del etanol no solubilicen ciertos grupos
fosfatos y bases nitrogenadas, es necesario
disminuir la temperatura del sistema,
desfavoreciendo la solubilidad entre estos
compuestos. [3]
Luego de la centrifugación, el sedimento se
disolvió en amortiguador salino, se usó como
tubo de control (blanco) un tubo con 2 mL del
amortiguador salino, se le adicionó a ambos
tubos 3 mL de reactivo de orcinol y se llevaron
los dos tubos a un baño de agua hirviendo por
unos minutos. La aparición gradualmente de
una coloración verde indica que hay presencia
cualitativa de ARN.
Por último, el sedimento que contiene proteínas
se trató con NaCl 0.15 M, formándose una
suspensión debido a la solubilidad de estas dos
sustancias, se usó como tubo de control
(blanco) un tubo con 2 mL de la solución salina,
una vez realizado esto, a cada tubo se le
adicionó sulfato de cobre, volviéndose las
muestras a color azul claro, este debido a que
este es el color del sulfato de cobre y al estar
en las soluciones en exceso, estas toman este
color. Luego, al adicionar el NaOH 10 M, la
solución salina no se ve afectada, sin embargo,
en el otro tubo si se observó la aparición de un
color violeta, lo cual indica, según la Prueba del
Biuret la presencia de proteínas. Las proteínas
reaccionan con el reactivo de Biuret, formando
compuestos de coordinación con los pares de
electrones no compartidos del N, presente en
los aminoácidos de las proteínas. [4]

Figura 5. Complejo de cobre formado en la reacción
de Biuret. [4]
6. PREGUNTAS
I. Cuáles son los fundamentos de las
técnicas de extracción (Cuál es la
utilidad de cada uno de los pasos
que se sigue y de cada uno de los
reactivos que se utiliza para purificar
las macromoléculas y de las pruebas
de identificación empleadas en esta
práctica.
Extracción / Separación Líquido - líquido.
En método separación, para separación
centrífuga de soluciones compuestas de dos
líquidos no miscibles de densidades diferentes.
En método extracción, para extracción por
solvente. Extracción por contra-corriente.
Posibilidad de bacterias de extractores en
función del nº de etapas de extracción
requeridas. [6].
II. Escriba las reacciones químicas
correspondientes de las diferentes
pruebas de identificación utilizadas.
Reacción de formación del complejo de cobre
resultante en la reacción de Biuret. Para
proteínas.
Al disolver el glucógeno en agua destilada se
añadió a este 1 mL de reactivo de yodo. La
reacción generada por el yodo en presencia de
glucógeno vira el color de la mezcla a un pardo
rojizo. El control fue un tubo que contenía solo
agua destilada y 1 mL de reactivo de yodo.
5
Como se mostró en la figura 1.
En la identificación y extracción de los ácidos
nucleicos, se le adicionó el reactivo de Orcinol
más el calentamiento en baño de maría, viro el
color de la solución a un verde oliva,
significando así la presencia de ARN. Observar
figura 2.
Y en el precipitado de proteínas obtenido con la
adición de cloruro de sodio al 10%,
calentamiento y posterior centrifugación se
preservo en baño de agua fría para luego ser
tratado con solución salina 0.15 M, 2 mL de
NaOH 10 M y 1mL de solución de CuSO4.
Después de la mezcla resulto un color violeta la
cual indica que la prueba de Biuret es positiva,
logrando la identificación de proteínas. [7]
7. CONCLUSIONES
 La determinación cualitativa
evidente por coloración es de gran
ayuda para observar los diferentes
tipos y comportamientos de
macromoléculas tan importantes
para los seres vivos.
 Es importante tener la
recomendación de relazar una
buena maceración de la muestra,
debido a que si no se realiza con
vigor no se podrá obtener una
buena primera separación de dichos
analitos a estudiar.
8. REFERENCIAS
[1] Seres modélicos, entre la naturaleza y el
laboratorio. La levadura de la cerveza y del
laboratorio.
Consultado en:
http://seresmodelicos.csic.es/llevat.html
10/09/2019

[2] Morrison, R; Boyd, R. Química Orgânica.5ª

edición. Ed. Pearson. Pag 945-947

[3] Propiedades de los ácidos nucleicos.

Consultado
https://www.acidosnucleicos.org/propiedades/
10/09/2019

[4] Guarnizo A., Martínez P., Experimentos de

Química Orgánica, con enfoque en ciencias de
la vida, Universidad del Quindío, 2008, pp 183.

[5] Kearsley S., Dziedzic Z., Handbook of

Starch Hydrolysis Products and their
Derivatives, The University Press, Gran
Bretaña, 1995, pp 14.

[6]. Extracción / Separación Líquido - líquido.

Consultado en

http://www.comteifa.com/es/114318/Separacion
-/-Extraccion.htm

[7]. Aminoácidos y proteínas. [Consultado el 2

de abril de 2019]. Disponible en internet:
http://www.bioquimica.dogsleep.net/Laboratori
o/Plummer/Chp05a.pdf