10.

 Characterization  of  waterborne  outbreak  -­‐  

associated  campylobacter  jejuni,  Walkerton,  Ontario  
 
RESUME  COURT:  
 
RESUME  
 
L'épidémie  hydrique  de  2000,  à  Walkerton,  Canada,  résulte  de  l'entrée  d'E.  coli  O517:H7  et  
campylobacter  spp.  depuis  des  fermes  voisines,  dans  les  réserves  d'eau  de  la  ville.  Des  isolats  de  
Campylobacter  jejuni  et  Campylobacter  coli  obtenus  à  partir  des  enquêtes  sur  l'épidémie  ont  été  
charactérisés  en  types  (=  plus  précis  que  l'espèce)  par  des  méthodes  génotypiques  et  phénotypiques,  
incluant:    
1)  le  sérotypage  résistant  à  la  chaleur  (sérotypage  HS)  
2)  le  sérotypage  thermolabile  (=  instable)    
Sérotypage:  technique  immunologique  consistant  à  la  mise  en  évidence  d'antigènes  structuraux  
bactériens  ou  viraux  permettant  le  diagnostic  de  sérotypes  bactériens.  
3)  la  lysotypie    
Lysotypie:  consiste  en  une  méthode  d'identification  de  bactéries  à  l'aide  de  souches  spécifiques  de  
bactériophages  =  le  lysotypage  (par  exemple  phage  ne  se  nourrissant  que  d'E.  coli).  
4)  Le  biotypage  (gram,  taille,  forme,  pourtour,  couleur,  texture  etc.)  
5)  Le  typage  fla-­‐restriction  fragment  lenght  polymorphisme  (PLFR)  
Cette méthode permet de déterminer le type des isolats de Campylobacter pour des investigations
cliniques et épidémiologiques.
En fait, elle est basée sur l'analyse des RFLP du gène codant pour la flageline A (flaA gene).
L'amplification est effectuée en utilisant des oligodésoxyrinucléotides complémentaires à des régions
conservées, respectivement en 5' et en 3' du gène, et le fragment obtenu après amplification (1.7 kb) est
digéré avec l'enzyme de restriction DdeI et les sous-fragments sont analysés par électrophorèse. La
typologie des souches de Campylobacter par la méthode Fla-RFLP apparaît donc une méthode alternative
à la méthode de l'analyse des sérotypes.
6)  L'électrophorèse  en  champ  pulsé  (PFGE)    
PFGE:  séparation  des  molécules  en  fonction  de  leur  charge  électrique  et  de  leur  taille.  
 
Deux  principales  souches  épidémiques  ont  été  identifiées  sur  la  base  du  sérotypage  résistant  à  la  
chaleur  et  du  typage  fla-­‐PLFR.  Ces  souches  produisent  un  nombre  limité  de  types  lorsqu'elles  sont  
testées  par  les  autres  méthodes.    
Les  isolats  de  types  indistinguables  ou  semblables  aux  2  types  épidémiques  n'ont  été  trouvé  que  
dans  une  seule  ferme  près  de  la  ville  de  Walkerton,  tandis  que  les  bovins  provenant  d'autres  
fermes  portaient  une  variété  de  souche  de  Campylobacter  avec  différentes  caractéristiques  types.    
 
Les  résultats  de  ces  analyses  ont  confirmé  les  résultats  d'études  épidémiologiques  et  l'utilité  d'utiliser  
plusieurs  méthodes  diférentes  de  typage  et  sous-­‐typage  pour  caractériser  complètement  les  
populations  bactériennes.    
 
INTRODUCTION  
 
Une  épidémie  de  Campylobacter  jejuni  dans  une  communauté  agricole  dans  le  sud  de  l'Ontario,  au  
Canada,  en  1985  a  entraîné  la  contamination  de  l'eau  de  puits,  causée  par  le  ruissellement  printanier  
et  de  fortes  pluies.  En  mai  2000,  une  seconde  épidémie  hydrique  d'Escherichia  coli  O157:  H7  et  
Campylobacter  eu  lieu  dans  le  comté  de  Bruce,  en  Ontario.  L'eau  des  puits  au  service  de  la  ville  de  
Walkerton  a  été  contaminée  par  l'eau  de  surface  qui  a  transporté  les  excréments  contaminés  de  
l'élevage  immédiatement  après  des  fortes  pluies.    
Une  analyse  épidémiologique  et  microbiologique  détaillée  de  l'épidémie  de  2000  personnes  
fournissent  un  aperçu  qui  pourrait  aider  à  rendre  ce  type  d'épidémie  moins  fréquent.    
 
On  estime  que  20%  des  cas  de  maladies  causées  par  C.  jejuni  sont  dus  à  un  véhiculage  de  l'infection  
via  un  autre  moyen  que  les  aliments,  y  compris  l'eau.    
Les  épidémies  d'origine  hydrique  de  Campylobacter  ont  tendance  à  se  produire  au  printemps  ou  au  
début  de  l'automne.    
 
Il  a  été  observé  que  des  excréments  d'oiseaux  et  d'animaux,  notamment  de  bovins,  contaminés  par  
Campylobacter,  peuvent  contaminer  les  réserves  d'eau  utilisées  par  les  humains.  
On  a  trouvé  que  Campylobacter  spp.  a  déjà  causé  des  épidémies  hydriques  partout  dans  le  monde.    
 
Aux  États-­‐Unis,  les  maladies  causées  par  C.  jejuni  ou  C.  coli  ont  été  estimées  comme  affectant  7  
millions  de  personnes  chaque  année,  causeraient  110  à  511  morts  et  coûterait  1,2-­‐6  miliard  de  
dollards.  Ces  organismes  sont  responsables  de  17%  de  l'ensemble  des  hospitalisations  liées  à  des  
maladies  d'origine  alimentaire  aux  États-­‐  Unis,  et  bien  qu'associés  à  un  taux  de  létalité  beaucoup  plus  
faible  que  Salmonella  spp.  et  E.  coli  O157:  H7,  ils  représentent  5%  des  décès  liés  à  l'alimentation.  
Bien  que  l'incidence  des  infections  à  Campylobacter  semble  être  plus  élevée  dans  les  pays  
industrialisés  que  dans  les  pays  en  développement,  la  campylobactériose  peut  être  importante  d'un  
point  de  vue  social  et  économique.    
 
Des  analyses  épidémiologiques  et  microbiologiques  on  été  entreprises  afin  de  mieux  comprendre  les  
circonstances  qui  ont  mené  à  l'épidémie  de  Walkerton.    
Cet  article  résume  les  résultats  du  typage  phénotypique  et  génotypique  des  souches  associés  à  
l'épidémie.  
 
MATERIEL  ET  METHODES  
 
Enquête  épidémiologiques  
On  a  effectué  une  identification  de  l'épidémie,  la  description  des  cas  et  on  a  fait  des  études  croisées  
avec  les  résultats  des  descriptifs  épidémiologique  des  patients.    
 
Les  échantillons  environnementaux    
Les  études  environnementales  liées  à  l'épidémie  ont  été  décrite  précédemment  (pluies  et  
ruissellement).  Les  premières  enquêtes  ont  identifié  13  fermes  d'élevage  dans  un  rayon  de  trois  à  4  
km  autour  des  puits  desservant  la  ville  de  Walkerton,  on  y  a  prélevé  des  échantillons.    
 
Traitement  des  échantillons    
 
Identification  des  isolats    
Les  colonies  suspectées  d'être  des  Campylobacter  ont  subit  une  coloration  de  Gram  et  on  été  testées  
pour  l'oxydase,  la  catalase  et  l'hydrolyse  de  l'hippurate.      
L'identification  présomptive  de  C.  coli  était  obtenue  par  le  test  de  l'acétate  d'indoxyle  et  en  
déterminant  la  sensibilité  à  l'acide  nalidixique  (30  ug  disque)  et  à  la  cephalothine  (30  ug  disque).  Le  
biotypage  a  été  réalisée  comme  décrit  par  Lior.  En  plus  du  biotypage,  le  système  de  PCR-­‐RFLP  décrit  
par  Marshall  et  al.  a  été  utilisé  pour  confirmer  l'identification  des  espèces.    
Les  amorces/primer  spécifique  à  C.  jejuni  (25)  et  de  C.  coli  (26)  ont  été  utilisées  pour  confirmer  
l'identité  d'un  C.  jejuni  "hippurate  négatif".    
 
Le  sous-­‐typage  des  souches  (une  fois  qu'on  a  séparé  les  deux  espèces,  ont  regardes  les  différents  
types  épidémiques  ou  pas)  
Les  tests  ont  continé  jusqu'à  ce  que  les  caractéristiques  types  des  souches  épidémiques  aient  été  
identifiées  et  que  les  désignations  épidémiologiques  des  patients  impliqués  dans  l'épidémie  aient  été  
confirmées  micribiologiquement.    
Après  cela,  seule  le  biotypage,  le  sérotypage  et  la  lysotypie  ont  été  utilisés  pour  caractériser  les  
souches  épidémiques.    
(En  résumé:  d'abord  on  fait  plein  de  tests  pour  trouver  les  caractéristiques  types  des  souches  
épidémiques  et  les  identifier  par  rapport  aux  souches  non  épidémiques,  ensuite  on  refait  quelques  
tests  pour  différentier  les  souches  épidémiques  entre  elles.)  
 
RESULTATS  
 
Une  description  détaillée  de  l'enquête  épidémiologique  et  environnementale  sont  en  préparation.    
Un  total  de  532  échantillons  de  selles  humaines  on  été  testés  pour  Campylobacter  spp.  et  les  selles  
de  116  personnes  étaient  positives  pour  l'organisme.  11  de  ceux-­‐ci  étaient  également  positifs  pour  
E.col  O157:H7.  Parmi  ces  116  souches,  106  on  été  soumises  au  LNPE  pour  une  analyse  plus  
approfondie,  avec  20  souches  provenant  du  sud  de  l'ontario,  pas  directement  liées  à  l'épidémie.  Les  
49  isolats  de  Campylobacter  spp.  obtenus  à  partir  d'animaux  ou  de  fumier  sur  11  des  13  exploitations  
testées  ont  également  été  envoyés  au  LNPE  pour  une  analyse  ultérieure.    
 
(106,  20  et  49  =  175  isolats)  Tous  les  175  isolats  ont  été  caractérisés,  d'abord  par  biotypage  et  
sérotypage,  puis  par  lysotypage  (tableau  1).    
La  plupart  des  souches  associées  à  l'épidémie  étaient  des  sérotype  résistants  à  la  chaleur  (HS)  O:  2.    
Lysotypage  était  utile  pour  l'identification  des  souches  suivantes.  ce  qui  donna  22  types  de  phages.  
PT  33  (un  phage)  a  été  le  plus  souvent  associé  à  des  souches  épidémiques,  bien  que  d'autres  types  
de  phages  ont  également  été  associés  à  des  souches  épidémique    
etc.etc.etc.  
 
Ce  tableau  montre  que  toutes  les  différentes  méthodes  ne  donnent  pas  les  mêmes  résultats,  car  
elles  ne  ciblent  pas  les  mêmes  éléments  comparatifs.  (une  fois  on  compare  le  phénotype,  une  fois  les  
souches  mangées  par  différents  bactériophage  tout  en  sachant  qu'un  phage  peut  manger  plusieurs  
type  ou  non,  une  fois  les  molécules  produites  par  les  différents  types  etc.)  
 
On  trouve  donc  différents  types  pour  la  même  espèce,  et  certains  types  sont  épidémiques,  d'autres  
pas.  

 
 
Les  Fermes  près  de  la  ville  de  Walkerton  ont  été  considérées  comme  sources  possibles  de  bactéries  
causant  l'épidémie.  L'échantillonnage  des  animaux  sur  11  fermes  a  abouti  à  un  certain  nombre  
d'isolats  de  C.  jejuni  et  C.  coli.  Les  isolats  épidémiques  de  type  1  ont  été  trouvés  chez  les  bovins  aux  
fermes  2  et  14,  tandis  que  le  second  type  épidémique  a  été  trouvé  chez  les  bovins  de  la  ferme  2.    
 
Méthodes  utilisées  pour  la  caractérisation  des  souches    
Beaucoup  d'isolats  pouvaient  être  distingués  en  types  par  seulement  une  ou  deux  méthodes,  tandis  
que  tous  les  autres  types  restaient  les  mêmes  avec  les  tests  réalisés  avec  ces  deux  méthodes.  
 
 
DISCUSSION  
 
Ensembles,  les  méthodes  de  typage  phénotypiques  et  moléculaires  soutiennent  l'hypothèse  que  les  
bactéries  entrées  dans  les  réserves  d'eau  municipale  de  Walkerton  depuis  les  fermes  voisines  
impliquent  la  ferme  2  comme  la  source  majeure  des  souches  épidémiques.  Cette  conclusion  est  
compatible  avec  le  modèle  hydrogéologique  qui  dit  que  le  ruissellement  des  fortes  pluies  ont  balayé  
les  bactéries  Campylobacter  spp.  et  E.  coli  O157:H7  de  la  ferme  2  jusqu'aux  puits  5,  où  elles  ont  eut  
accès  aux  autres  puits  et  ont  été  distribuées  dans  les  réserves  d'eau  de  la  ville.    
 
La  diversité  observée  chez  les  isolats  de  Campylobacter  est  en  contraste  frappant  avec  le  seule  type  
d'E.  coli  ayant  infecté  les  patients  et  le  bétail  de  l'épidémie  de  Walkerton.  
En  outre,  l'épidémie  de  New  York  a  elle  été  provoquée  par  un  seul  type  de  Campylobacter  provenant  
d'une  source  ponctuelle  provoquée  par  de  la  salade  de  thon.  Au  royaume  unis,  un  seul  type  a  causé  
l'épidémie  associée  avec  de  la  nourriture  frie.  
Pareil  pour  les  isolats  obtenus  à  partir  d'une  épidémie  hydrique  d'une  ville  au  Danemark.  Une  
conduite  d'égout  endommagée  a  été  mise  en  cause  pour  cette  épidémie.    
 
La  diversité  des  sérotypes  SH  et  types  de  PFGE  rencontrés  à  Walkerton  est  donc  quelque  peu  
inhabituelle,  alors  que  la  diversité  des  sérotypes  de  HL  et  types  de  phages  est  compatible  avec  les  
informations  trouvées  dans  la  littérature.    
Cette  diversité  peut  être  le  résultat  d'inclusions  de  souches  ou  de  types  qui  ne  sont  pas  liés  épidémie  
ou  de  l'hétérogénéité  des  types  présents  dans  les  fermes  voisines.  Les  données  actuelles  ne  nous  
permettent  pas  de  déterminer  laquelle  de  ces  hypothèses  est  correcte.    
Des  bases  de  données  continues  et  compréhensibles  de  sous-­‐typage  moléculaire  des  espèces  de  
Campylobacter  n'ont  pas  encore  été  mis  au  point  au  Canada.    
On  ne  sait  donc  pas  si  les  types  présents  à  Walkerton  sont  rares  ou  communs  au  Canada.      
Cette  incertitude  rend  l'interprétation  des  données  plus  difficiles  et  souligne  la  nécessité  de  
continuer  la  surveillance  des  pathogènes.    
   
Le  lysotypage  seul,  sans  accompagnement  de  donnée  épidémiologiques  n'aurait  pas  permis  
d'identifier  les  types  épidémiques.  
 
En  résumé,  deux  souches  de  Campylobacter  jejuni  furent  associées  à  l'épidémie  de  Walkerton  grâce  à  
l'utilisation  de  différentes  méthodes  de  typage  et  sous-­‐typage  en  combinaison  avec  des  données  
épidémiologiques.    
Ces  méthodes  furent  utiles  pour  définir  la  portée  de  l'épidémie,  pour  identifier  la  source  des  souches  
épidémiques  et  pour  tracer  la  voie  par  laquelle  les  bactéries  ont  infecté  les  humains.    
Les  résultats  bactériologiques  confirment  que  les  bactéries  ont  pu  contaminer  l'eau  à  partir  des  
bovins  et  du  fumier  après  de  fortes  pluies  en  contaminant  les  puits  desservant  la  ville  de  Walkerton  
et  infectant  ensuite  ceux  qui  boivent  l'eau.  
 
 
 
PRESENTATION POWER POINT
a.Titre du domaine avec le nom des auteurs;

Contamination microbiologique des eaux de boisson

Doriane Tanner, Coralie Montavon, Elodie Ferrando, Laura Vorpe, Quentin Humair, Lauriane
Dani

b.Introduction thématique;

La contamination microbiologique des eaux de boissons entraine de nombreuses

complications:
Exemple:
• épidémie hydrique due à la bactérie Campylobacter dans la ville de Walkerton,
Ontario.
Aux États-Unis, les maladies causées par C. jejuni ou C. coli ont été estimées comme
affectant 7 millions de personnes chaque année, causeraient 110 à 511 morts et
coûteraient 1,2-6 miliard de dollards. Ces organismes sont responsables de 17% de
l'ensemble des hospitalisations liées à des maladies d'origine alimentaire aux États-
Unis, et bien qu'associés à un taux de létalité beaucoup plus faible que Salmonella
spp. et E. coli O157: H7, ils représentent 5% des décès liés à l'alimentation.
Bien contrôler la contamination de l'eau potable a une très grande importance socio-
économique.
• ...

c. Description des principales méthodes;

charactérisation des souches par des méthodes génotypique et phénotypique:

• sérotypage résistant à la chaleur et le sérotypage thermolabile (= instable):

technique immunologique consistant à la mise en évidence d'antigènes structuraux
bactériens ou viraux permettant le diagnostic de sérotypes et donc l'identification du
type de bactérie
• lysotypie: méthode d'identification de bactéries à l'aide de souches spécifiques de
bactériophages, c'est le lysotypage, par exemple phage ne se nourrisant que d'E. coli
• biotypage: observation du phénotype de la bactérie (gram, taille, pourtour, élévation,
couleur, texture)...
• typage fla-restriction fragment lenght polymorphisme (PLFR)
Cette méthode permet de déterminer le type des isolats de Campylobacter pour des investigations
cliniques et épidémiologiques.
En fait, elle est basée sur l'analyse des RFLP du gène codant pour la flageline A (flaA gene).
L'amplification est effectuée en utilisant des oligodésoxyrinucléotides complémentaires à des régions
conservées, respectivement en 5' et en 3' du gène, et le fragment obtenu après amplification (1.7 kb)
est digéré avec l'enzyme de restriction DdeI et les sous-fragments sont analysés par électrophorèse. La
typologie des souches de Campylobacter par la méthode Fla-RFLP apparaît donc une méthode
alternative à la méthode de l'analyse des sérotypes.
• électrophorèse en champ pulsé (PFGE): sépare les molécules en fonction de leur
charge électrique et de leur taille.

d.Résultats;
Les résultats obtenus grâce à ces méthodes ont confirmé les résultats d'études
épidémiologiques et l'utilité d'utiliser plusieurs méthodes diférentes de typage et sous-typage
pour caractériser complètement les populations bactériennes, car les différentes méthodes
ne donnaient pas les mêmes résultats.

Les Fermes près de la ville de Walkerton ont été considérées comme sources
possibles de bactéries causant l'épidémie. L'échantillonnage des animaux sur 11 fermes
a abouti à un certain nombre d'isolats de C. jejuni et C. coli (tableau 3). Les isolats
épidémiques de type 1 ont été trouvés chez les bovins aux fermes 2 et 14,
tandis que le second type épidémique a été trouvé chez les bovins de la ferme 2.
Une variété de différentes souches a été obtenue à partir d'autres fermes, bien qu'aucune
n'aie exprimé de caractéristiques des deux types épidémiques majeures.

Beaucoup d'isolats pouvait être distingués en types par seulement une ou deux méthodes,
tandis que tous les autres types restaient les mêmes avec les tests réalisés avec ces deux
méthodes.

e.Conclusion;

En résumé, deux souches de Campylobacter jejuni furent associées à l'épidémie de

Walkerton grâce à l'utilisation de différentes méthodes de typage et sous-typage en
combinaison avec des données épidémiologiques.
Ces méthodes furent utiles pour définir la portée de l'épidémie, pour identifier la source des
souches épidémiques et pour tracer la voie par laquelle les bactéries ont infecté les humains.
Les résultats bactériologiques confirment que les bactéries ont pu contaminer l'eau à partir
des bovins et du fumier après de fortes pluies en contaminant les puits desservant la ville de
Walkerton et infectant ensuite ceux qui boivent l'eau.
Des recherches futures sur la contribution des parcs d'engraissement et autres operations
fermières à la contamination de l'eau par Campylobacter pourraient donner d'utiles
informations quant aux pratiques de gestion de fermes et à la protection et à la gestion des
ressources d'eau

f.Références bibliographiques.
 
10. CLARK CLIFFORD, LAWRENCE PRICE, RAFIQ AHMED, DAVID L. WOOWARD, PASQUALE
L. MELITO, FRANK G. RODGERS, FRANCES JAMIESON, BRUCE CIELIN, AIMIN LI AND ANDREA
ELLIS. 2003. Characterization of a waterborne
 
 
1  clishé  pour  intro  et  conclusion  
 
ensuite  présenter  méthodes  et  résultats