Procedimiento para crear niveles de calibración de cromatografía

El objetivo de este documento es pautar los pasos para crear los diferentes niveles de concentración de
los diferentes compuestos a evaluar en una cromatografía de alcohol etílico.

Para esto nos debemos de asegurar de tener los siguientes materiales de laboratorio y reactivos:

Materiales necesarios:

 8 matraces aforados de 100mL

 Pipeta aforada de 1 mL
 Pipeta aforada de 5 mL
 Pipeta aforada de 10 mL
 Perilla o pipeteador

Reactivos necesarios:

 Etanol grado reactivo (99.99% pureza)

 Acetaldehído grado reactivo
 Metanol grado reactivo
 Acetona grado reactivo
 Isopropanol grado reactivo
 Propanol grado reactivo
 Acetato de etilo grado reactivo
 Isobutanol grado reactivo
 Butanol grado reactivo
 Acetal (1,1-dietoxi-etano) grado reactivo
 Alcohol isoamílico grado reactivo
 Alcohol amílico grado reactivo
 Acetato de isoamilo grado reactivo
 Furfural grado reactivo

Se busca la pureza de cada reactivo y se anota. Así mismo con su densidad. Ambos datos deberían de
estar explícitos en el recipiente del reactivo. Sino consultar con la ficha técnica del mismo o contactar a
su suplidor.

La concentración del patrón principal será calculada de la siguiente manera:

𝑔
𝑃𝑢𝑟𝑒𝑧𝑎 𝐷𝑒𝑛𝑠𝑖𝑑𝑎𝑑 (𝑚𝐿)
𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖𝑜𝑛 = ∗ ∗ 𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝑚𝑒𝑑𝑖𝑑𝑜(𝑚𝐿) = 𝑚𝑔/100𝑚𝐿
100 1000
Se tomara un (1) mL de cada reactivo y se enrasara hasta 100 mL con una solución 50% de Etanol y 50%
agua.

En la siguiente tabla podemos ver un ejemplo de cómo resultara el patrón principal.

Tabla 1. Preparación de Patrón principal
Volumen Patrón
Pureza Densidad
No. Compuesto medido Principal
(%) (g/mL)
(mL) (mg/100 mL)
1 Acetaldehído 99.50 0.781 1 777.10
2 Metanol 99.80 0.795 1 793.41
3 Acetona 99.80 0.7845 1 782.93
4 Acetato de metilo 99.80 0.781 1 779.44
5 Isopropanol 99.00 0.93 1 920.70
6 Propanol 99.70 0.872 1 869.38
7 Acetato de etilo 99.70 0.894 1 891.32
8 Isobutanol 99.00 0.854 1 845.46
9 Butanol 99.70 0.806 1 803.58
10 Acetal 99.00 0.831 1 822.69
11 Isoamílico 98.00 0.812 1 795.76
12 Amílico 98.00 0.985 1 965.30
Acetato de
13 isoamilo 99.50 0.876 1 871.62
14 Furfural 99.50 1.08 1 1074.60

Tabla 2. Preparación de los distintos niveles de concentración.

No. Compuesto Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3 Nivel 4 Nivel 5 Nivel 6 Nivel 7

1 Acetaldehído 0.16 0.39 1.17 7.77 23.31 38.85 116.56
2 Metanol 0.16 0.40 1.19 7.93 23.80 39.67 119.01
3 Acetona 0.16 0.39 1.17 7.83 23.49 39.15 117.44
4 Acetato de metilo 0.16 0.39 1.17 7.79 23.38 38.97 116.92
5 Isopropanol 0.18 0.46 1.38 9.21 27.62 46.04 138.11
6 Propanol 0.17 0.43 1.30 8.69 26.08 43.47 130.41
7 Acetato de etilo 0.18 0.45 1.34 8.91 26.74 44.57 133.70
8 Isobutanol 0.17 0.42 1.27 8.45 25.36 42.27 126.82
9 Butanol 0.16 0.40 1.21 8.04 24.11 40.18 120.54
10 Acetal 0.16 0.41 1.23 8.23 24.68 41.13 123.40
11 Isoamílico 0.16 0.40 1.19 7.96 23.87 39.79 119.36
12 Amílico 0.19 0.48 1.45 9.65 28.96 48.27 144.80
Acetato de
13 isoamilo 0.17 0.44 1.31 8.72 26.15 43.58 130.74
14 Furfural 0.21 0.54 1.61 10.75 32.24 53.73 161.19
15 mL
2 mL de 5 mL de 5 mL de 3 mL de 5 mL de
1 mL de de
nivel 4 nivel 4 nivel 5 principal principal
principal principal
llevados llevados llevados llevados llevados
llevados llevados
a 100 a 100 a 100 a 100 a 100
a 100 mL a 100
mL mL mL mL mL
mL

Para la preparación de los siete (7) niveles de concentración se enrasará o diluirá con Etanol puro o
grado reactivo (99.99% pureza). Se realizarán en el siguiente orden:
 1. El nivel 7 se preparará tomado una alícuota de 15 mL del patrón principal y llevando a 100mL
con etanol de grado reactivo.
2. El nivel 6 se prepara tomando una alícuota de 5 mL del patrón principal y llevando a 100 mL con
etanol de grado reactivo.
3. El nivel 5 se prepara tomando una alícuota de 3 mL del patrón principal y llevando a 100 mL con
etanol de grado reactivo.
4. El nivel 4 se prepara tomando una alícuota de 1 mL del patrón principal y llevando a 100 mL con
etanol de grado reactivo.
5. El nivel 3 se prepara tomando una alícuota de 5 mL del nivel 5 y llevando a 100 mL con etanol
de grado reactivo.
6. El nivel 2 se prepara tomando una alícuota de 5 mL del nivel 4 y llevando a 100 mL con etanol
de grado reactivo.
7. El nivel 1 se prepara tomando una alícuota de 2 mL del nivel 4 y llevando a 100 mL con etanol
de grado reactivo.

Es de buena práctica conservar los distintos niveles en el refrigerador si se van a seguir usando otro día.

Una vez realizados se pondrán en un vial para inyectar en equipo desde el nivel 1 hasta el 7 en ese
orden.

Los datos de las concentraciones de cada componente por nivel se adquieren aplicando un factor de
dilución sobre el patrón principal. Es decir se toma la concentración del patrón, se multiplica por la
alícuota de ese nivel y se divide entre el volumen diluido.