INFORME Nº1 BIOQUIMICA

(CUANTIFICACION DE PROTEINAS EN SOLUCION)

Nombres: -María Fernanda Pinto

-Lucas Araya
-Catalina Pérez

1.-Objetivos:
Determinar las concentraciones de ovoalbúmina y BSA en muestras problemas
utilizando técnicas espectroscópicas, como el método de Biuret y el método de
Lowry respectivamente.

2.-Fundamento de las Técnicas:

Método de Biuret
Los compuestos que tienen dos o más uniones peptídicas generan un color
púrpura al ser tratados con una solución alcalina de sulfato de cobre diluida.
El color se debe aparentemente al complejo de coordinación del Cu con cuatro
átomos de nitrógeno, que participan en el enlace peptídico.
Este método requiere una alta concentración de proteínas para la formación de
color.
La sensibilidad del método es de 0,25 – 200 mg de proteínas por mL de
solución.
Se mide a absorbancia a 540 nm

Método de Lowry
En el método de Lowry la muestra se trata con el reactivo de Folin – Ciocalteau
modificado. Si hay proteínas presentes se produce una coloración azul debido
principalmente a la presencia de residuos de tirosina y triptófano en las
proteínas, debido a su ramificación aromática
Se mide la absorbancia a 650 nm
Sensibilidad 1 – 200 g de proteínas por ensayo.
Se mide la absorbancia a 650 nm
3.- Resultados:
A) Método de Biuret:

Curva de Calibrado:

TUBO OVOALBUMINA ABSORBANCIAS

% 540 nm
1 1 0,328
2 0,8 0,228
3 0,6 0,193
4 0,4 0,104
5 0,2 0,051

Ecuación de la Recta: Y = m X + b; m = 0,339 , b = -0,0223

r = 0,991

Coeficiente de extinción específico:  = 0,339

Absorbancia MP1 = 0,018 Concentración MP1 = ------------

Absorbancia MP2 = 0,002 Concentración MP2 = ------------

B) Método de Lowry:

Curva de Calibrado:

TUBO  BSA  ABSORBANCIAS

mg/ml 650 nm
1 6,67*10-3 0,037
2 0,013 0,094
3 0,020 0.155
4 0,027 0,204
5 0,033 0,222

Ecuación de la Recta: Y = m X + b; m = 7,218 , b = -1,491*10-3

r = 0,988
Coeficiente de extinción específico:  = 7,218

Absorbancia MP1 = 0,137 Concentración MP1 = 0,0189

Absorbancia MP2 = 0,199 Concentración MP2 = 0,0276

4.- Cálculos:

Para sacar la concentración de la muestra estándar en ambos métodos se

utilizó:

𝑽1× 𝑪1 = 𝑽2 × 𝑪2 𝑽1: Volumen de BSA u Ovoalbúmina

𝑪1: Concentración de BSA u Ovoalbúmina
𝑽2: Volumen de la solución total
𝑪2: Lo que busco

En la determinación de la concentración de la muestra problema en Método de

Lowry :

𝑨=𝜺×𝒍×𝑪 𝒍 =1

MP1 MP2
0,137=7,218*C 0,199=7,218*C
C = 0,0189 C=0,0276
5. Discusión:
Al realizar las correspondientes mediciones de absorción molecular a el blanco,
patrón y muestra problema de ovoalbúmina con el método de biuret, se
obtuvieron valores de absorbancia de las MP inferiores a los del patrón
quedando así fuera del rango de este, imposibilitando la interpolación, esto
puede deberse ya que al ser la concentración de una molécula directamente
proporcional a su absorbancia, a que su concentración era demasiado baja en
relación al patrón. Otra forma de obtener datos de concentración aunque
menos precisos seria evaluando las absorbancias obtenidas en la ecuación
pero siendo en este caso una extrapolación con la cual se obtendrán datos
cada vez mas imprecisos conforme se alejen los valores de aborbancia
ingresados con los utilizados para generar la ecuación.
En el caso de la cuantificación de BSA con el método de lowry, los datos de
absorbancia obtenidos en la muestra problema se encontraban dentro del
rango de las absorbancias del patrón permitiendo así una optima interpolación
obteniendo datos de concentración bastante más precisos que el caso anterior.

Conclusiones:
De ambas experiencias realizadas en el laboratorio puede concluirse que la
cantidad de muestra para ambos métodos son experimentalmente consistentes
con las proposiciones teóricas ya que la cantidad de proteína en los patrones y
muestras problema en ambos casos resultaron estar dentro de las cantidades
estipuladas. También es posible concluir que para la cuantificación de
ovoalbúmina hubiese sido más preciso realizar patrones con un rango de
concentración mas amplio, para que la absorbancia de la MP hubiese estado
dentro de los valores óptimos para una interpolación lineal que arroje datos
más precisos que la extrapolación realizada.

Resultados extrapolación ovoalbúmina:

MP1= 0.12%
MP2= 0.07%