23/9/2019 Biosíntesis y caracterización de nanopartículas de plata (SNP) mediante el uso de extractos de hojas de Ocimum Sanctum L (Tulsi) y est…

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anomedicina y nano
tecnología

norte
Diario de Bindhani y Panigrahi, J Nanomed Nanotechnol 2015, S6
al o DOI: 10.4172 / 2157-7439.S6-008
Nanomedicina y Nanotecnología
olog
urna
y
Jo
ISSN: 2157-7439

Artículo de investigación Acceso abierto

Biosíntesis y caracterización de nanopartículas de plata (SNP) mediante el uso de

Extractos de hojas de Ocimum Sanctum L (Tulsi) y estudio de su antibacteriano
Ocupaciones
Birendra K Bindhani * y Ashok K Panigrahi 1 2

1 Escuela de Biotecnología, Universidad KIIT, Bhubaneswar, Odisha, India.

2 Departamento de Botánica, Universidad de Berhampur, Berhampur, Odisha, India.

Resumen

El presente estudio tuvo como objetivo la síntesis de SNP (nanopartículas de plata) o (verde-plata) en medio acuoso utilizando
extractos de hojas de Ocimum sanctum L. Las nanopartículas de plata sintetizadas (SNP) se caracterizaron por las diferentes
técnicas como el espectrofotómetro UV-vis, XRD, FTIR y TEM. La síntesis de nanopartículas de plata fueron
confirmado debido al pico de banda de absorción óptica SPR a ~ 440 nm por espectrofotómetro UV-vis, casi 15-45 nm en
diámetro con forma esférica por TEM, alto cristalino con los picos de Bragg de (111), (200), (220) y (311) plano
como la orientación predominante por XRD y FTIR confirmó la presencia de grupos metoxi y alilo en SNPs. los
La reducción de iones metálicos de Ag se realizó debido a la presencia de varios tipos de antioxidantes en las hojas de Ocimum
sanctum L. y cada uno tiene una estructura y funciones únicas. Las formaciones de nanopartículas de plata a través de agua
los medios fueron bastante estables y se pueden incubar hasta 4 meses en el refrigerador. Por fin, las actividades antimicrobianas
de AgNPs fueron evaluados usando diferentes cepas de bacterias. Se descubrió que esta biosintetización de nanopartículas de plata
puede inhibir todos los tipos de organismos patógenos bacterianos de manera competente. Este reciente estudio de investigación abre un innovador
El diseño para avanzar en nuestra comprensión de cómo se comportan los SNP se puede optimizar para mejorar las actividades antimicrobianas en humanos.

Palabras clave : Biosíntesis; Ocimum sanctum L (Tulsi); Plata actividad [33], anti-bactarial [34] y antiviral [35]. El mejoramiento
nanopartículas (SNP); Actividad antibacterial de los SNP están aumentando rápidamente en diferentes campos y pueden usarse en alimentos
embalaje, revestimiento para bioetiquetado, agente antimicrobiano, energía solar
Introducción y entrega de drogas [36-38].

En la última década hubo desarrollos tremendos
en ciencias de la nanotecnología, lo que resultó en el establecimiento de
Varias técnicas nuevas para la investigación. La nanotecnología ha logrado
la tasa de peinado de todos los organismos vivos: plantas, animales y
microorganismos [1-7]. Incluye interés en investigación multidisciplinaria.
como Bioquímica, Ciencia de Materiales, Ciencia de Polímeros, etc. Esto tiene
hizo que la nanotecnología sea indispensable en campos tan diversos como la agricultura,
industria, medicina, silvicultura y gestión ambiental [8-12].
Los materiales a nanoescala con hierro cero-valent han aceptado mayor
importancia para la remediación ambiental debido a su abundante eco-
amigable, de bajo costo y no tóxico [13-18].
Hoy en día, el uso de diferentes tipos de plantas medicinales ha sido
aumentar por los médicos tradicionales para los tratamientos de
Varios tipos de enfermedades. El medicamento más común e importante.
planta, es decir, Ocimum sanctum L. que tienen diferentes medicinas
propiedades tales como anticancerígenos, antimicrobianos, cardioprotectores, anti-
diabético, analgésico, antiespasmódico, antiemético, hepatoprotector, anti-
fertilidad, acciones adaptogénicas y diaforéticas. El componente activo de
licencia del Ocimum sanctum L. es Eugenol (l-hidroxi-2-metoxi-4-
alilbenceno), que es el principal responsable de los potenciales terapéuticos
del sistema cardiovascular, sistema urinario, sistema reproductivo, inmune
El propósito de este trabajo de investigación es proporcionar información sobre
proceso de síntesis verde recientemente descubierto de SNP utilizando extractos de hojas
de Ocimum sanctum L. y reducción de iones Ag + a nanopartículas de Ag 0
de la solución de AgNO 3 dentro de los 45 minutos del tiempo de reacción a 80 ° C
temperatura. El tamaño de los SNP se puede gestionar desde un rango de 5
nm a 40 nm cambiando la concentración de ambos extractos de hojas y
AgNO 3 . Además, este estudio de investigación abre un diseño innovador para
progresar nuestra comprensión de cómo se comportan los SNP puede optimizarse para
Mejorar las actividades antimicrobianas humanas, particularmente contra las bacterias.
Materiales y métodos
El nitrato de plata (AgNO 3 ) y el agar nutritivo se obtuvieron de
Sigma-Aldrich. Todos los productos químicos tenían un estado viable y se utilizaron.
de sin refinamiento adicional. Milipure Water fue utilizado en todo
trabajo experimental. Se obtuvo la planta Ocimum sanctum L. (Tulsi)
del RPRC (Centro Regional de Investigación de Plantas) Bhubaneswar, Odisha,
India y se cultivaron en macetas de barro de la Escuela de Biotecnología.
* Autor para correspondencia: Birendra K Bindhani, Escuela de Biotecnología,
Universidad KIIT, Bhubaneswar, Odisha, India, Tel: 06742740326; Email:

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sistema, drbindhani@gmail.com
Tambiénsistema gástrico,
significación bioquímica
en diversas sanguínea,
dolencias en lasistema nervioso
medicina modernacentral y
[19-21].
Recibido el 12 de agosto de 2015; Aceptado el 09 de octubre de 2015; Publicado el 19 de octubre de
Hoy en día, la síntesis verde de SNP se llevó a cabo utilizando 2015

diferentes partes de extractos de plantas, a pesar de la biosíntesis de SNP
por plantas como Solanum xanthocarpum L. Berry [22], hoja de té
[23], corteza del tallo Callicarpa maingayi [24], Bauhinia variegate L.
[25], Terminalia chebula [26], Trachyspermum ammi y Papaver
somniferum [27], Hevea brasiliensis [28], Memecylon edule [29], Aloe
vera [30] han sido reportados. El uso de SNP ya ha sido
informado como antiangiogénesis [31], antiinflamatorio [32], antiplaquetario
Cita: Bindhani BK, Panigrahi AK (2015) Biosíntesis y caracterización
de nanopartículas de plata (SNP) mediante el uso de extractos de hojas de Ocimum Sanctum L
(Tulsi) y estudio de sus actividades antibacterianas. J Nanomed Nanotechnol S6: 008.
doi: 10.4172 / 2157-7439.S6-008
Copyright: © 2015 Bindhani BK, et al. Este es un artículo de acceso abierto distribuido
bajo los términos de Creative Commons Attribution License, que permite
uso, distribución y reproducción sin restricciones en cualquier medio, siempre que
El autor original y la fuente son acreditados.

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jardín, Universidad KIIT, Bhubaneswar, Odisha, India.

Recolección de material vegetal

Ocimum sanctum L. las hojas fueron tomadas de la Escuela de
Jardín de biotecnología, Bhubaneswar, Odisha India. Entonces, hojas de
Ocimum sanctum se secó al aire durante al menos 10 días utilizando un horno de aire caliente.
a 60 ° C durante 24 ha 48 h. Después de eso, las hojas se molieron hasta obtener un polvo fino
forma usando hojas secas.

Extraccion solvente
Las hojas de Ocimum sanctum L. secadas al aire se molieron para obtener un
polvo grueso Se tomaron aproximadamente 100 g de polvos secos con agua a
temperatura ambiente usando el aparato Soxhlet durante 8 horas o la extracción
se mantuvo hasta que el líquido fue aparente. Entonces la extracción fue
La masa seca filtrada y concentrada se realizó usando vacío. Después de eso,
la extracción se secó al aire y los extractos acuosos como se hizo anteriormente fueron
Del mismo modo se filtra y se concentra al vacío. Este crudo
el extracto se almacenó a 4 ° C en botellas herméticas después de diluido con 5% de
DMSO para hacer el volumen final una décima parte del volumen original para
estudios adicionales.
Síntesis de nanopartículas de plata (SNP)
Para la síntesis de nanopartículas de plata (SNP), 5 ml de extractos de hojas
de Ocimum sanctum L. se añadió con 100 ml de 1 × 10 −3 M acuoso
Solución de AgNO 3 y se agitó en el agitador magnético a temperatura ambiente.
temperatura. Después de 0 minutos de reacción de la mezcla de color amarillo de
La solución de AgNO 3 con extracto de hoja se cambió mezcla negra suspendida
muy rápidamente a temperatura ambiente justo después de 2 minutos. Se observó
que la biosíntesis de SNPs utilizando extractos de hojas de Ocimum sanctum
se llevó a cabo muy rápidamente que la otra hoja de plantas [39]. La hoja
extractos de Ocimum sanctum y concentraciones de solución de AgNO 3
también fueron de amplio rango de 5% a 10% y 1 a 4 mM por volumen,
respectivamente. La formación de SNP se confirmó mediante espectros UV-vis.
ya que mostró un fuerte SPR (mostró una fuerte resonancia de plasmón superficial)
banda a ~ 440 nm. Además, los SNP obtenidos de extractos de hojas de Ocimum
el lugar sagrado se centrifugó a 15,000 durante 5 minutos y luego se dispersó en
agua destilada estéril para liberarse de cualquier material biológico ingrato.
El procedimiento se basó en el grupo fenol (es decir, Eugenol) presente
en extracto vegetal y reducido para formar nanopartículas de plata que era
se muestra esquemáticamente (Figura 1).
Técnicas utilizadas para la caracterización.
Se utilizaron diferentes técnicas para caracterizar los SNP
como UV-Vis ( Shimadzu, Modelo: UV-1601, Kyoto, Japón) solía
Conozca la banda en el nanómetro, difractómetro de rayos X (Shimadzu, XRD-
Figura 2: Espectros de absorción UV-visible de AgNPs.
espectrofotómetro que se usó en el rango de 4,000 a 400 cm −1 por
Método de pellets KBr para polvo de extracto de hoja de Ocimum sanctum y SNP.
El análisis TEM (Philips CM-10) se realizó para confirmar las imágenes de
muestra por foco ampliado en dispositivo de imagen.
Prueba de microorganismos
Actividad antibacteriana: las cepas bacterianas estudiadas fueron
Enterobacter cloacae , Staphylococcus aureus , Staphylococcus aemolytius ,
Pseudomonas aeruginosa Proteus mirabilis y Proteus vulgaris . Todas
los microorganismos se mantuvieron a 4 ° C y se obtuvieron de
Departamento de Botánica, Universidad de Berhampur, Odisha, India.
Actividad antimicrobiana: se realizó la actividad antimicrobiana
por el método de difusión de disco. Se utilizó el MHA (agar Mueller Hinton)
para detectar la actividad antimicrobiana in vitro . Las placas de Petri esterilizadas.
conteniendo 15 ml de medio fundido de MHA fueron preparados y permitidos
solidificar por 5 minutos. Luego, las suspensiones de inóculo al 0.1% fueron
se frotó igualmente y se dejó secar durante 5 minutos. El extracto de prueba
se cargaron aproximadamente 50 μl en un disco estéril de 0,5 cm que se encuentra en
el medio superficial que se dejó difundir durante 5 minutos
y se incubaron a 37 ° C durante 24 h. La zona de inhibición fue
se formó en la región del disco después de 24 horas de incubación y
se midió con una regla transparente en milímetros. Los controles negativos
fueron retenidos contra cada cepa bacteriana usando solventes puros como
alternativa de extracto. Los resultados del diámetro de la zona se tabularon después de
zonas de control sustraídas de las zonas de prueba. Para un control positivo,

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6000) utilizado para determinar las estructuras de cristalinidad de los SNP, FT-IR se usó un antibiótico, a saber, Cefotaxima (30 mcg / disco) y fue
( Infrarrojo de transformada de Fourier) de un FTIR tipo BIORAD-FTS-7PC realizado por triplicado.

Resultados
Absorbancia UV-vis
La solución de nitrato de plata (AgNO 3 ) se mezcló con extractos de hojas de
Ocimum sanctum mostró cambio de color marrón de transparente
solución que confirmó la síntesis de nanopartículas de plata. Esta
El cambio de color se debió a la excitación de la vibración de la superficie por
nanopartículas de plata La mezcla de reacción se determinó por UV-
vis desde 0 hasta 45 min y formaron resonancia de plasmones superficiales de SNP
pico centrado cerca de 440 nm (Figura 2) que indicó la reducción
de AgNO 3 en SNPs. Esta biosíntesis de nanopartículas de plata fue
Figura 1: Representación esquemática de la síntesis de AgNPs utilizando Ocimum
completado con 2 minutos a temperatura ambiente después de la reducción de
sanctum L. extractos de hojas.
AgNO 3 en SNPs.

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Estudios de difracción de rayos X (DRX)

La radiografía confirmó la naturaleza crotalina de los SNP
Análisis de difracción. El número de reflexiones de Bragg se mostró debido
a la estructura cúbica de plata centrada en la cara mediante el análisis de rayos X
difracción. En este experimento, se confirmó los SNP en el formulario
de nanocristales debido al pico a valores 2θ de 38. 28 °, 44.04 °, 64.34 °
y 77,28 ° correspondientes a (111), (200), (220) y (311) Bragg
reflexiones (Figura 3) respectivamente sobre la base de caras cúbicas centradas
estructura de plata. Este resultado confirmó la formación de SNP por
reducción de iones Ag + con extracto de hoja de Ocimum sanctum que es
De naturaleza cristalina. El tamaño cristalino promedio alrededor de 18 nm de plata
Las nanopartículas se confirmaron mediante nuestros métodos verdes de síntesis.
Se calculó utilizando la ecuación de Debye-Scherrer [22,25]:
Kλ
re =
β cos θ
Donde D es el tamaño cristalino de AgNPs, λ es la longitud de onda de Figura 5: Micrografía TEM de AgNP sintetizados por la reacción de 1
Nitrato de plata mM con extracto de hoja de Ocimum sanctum L.
la fuente de rayos X (0.1541 nm) utilizada en XRD, β es el ancho completo a la mitad
máximo del pico de difracción, K es la constante de Scherrer con un
valor de 0.9 a 1, y θ es el ángulo de Bragg. cm −1 que tal vez asignado al enlace amida I de proteínas tiene lugar
a partir del estiramiento de carbonilo en proteínas y pico a 3.411 cm −1 posiblemente
Espectros FT-IR de nanopartículas de plata biosintetizadas asignado a OH estiramiento en alcoholes y compuestos fenólicos.
Los resultados de las nanopartículas de plata biosintetizadas fueron estudiados por Sin embargo, las proteínas nativas se cerraron en el pico de absorción a
FT-IR y mostró picos de absorción claros ubicados 3,411, 1,606, 1,554, 1,606 cm −1 por las interacciones de SNPs a través de la biosíntesis y la
y 1,406 cm −1 (Figura 4). Los diferentes picos de absorción son como 1,606 la estructura secundaria no se vio afectada durante el período de reacción con Ag +
iones o después de la unión con nanopartículas de Ag 0 . Este estudio fue confirmado
que el grupo carbonilo de los residuos de aminoácidos tiene una fuerte unión
capacidad con plata, lo que significa la creación de capas de cobertura de SNP
y actuando como un mediador de limitación para evitar la aglomeración y dar
fuerza al medio. Estos hallazgos corroboran la aparición de
probables proteínas que actúan como agentes reductores y estabilizadores [25].

TEM (microscopio electrónico de transmisión)

El estudio TEM confirmó que la morfología de las nanopartículas
era principalmente esférica pero algunas eran ovales y / o elípticas
en forma y tamaño de aproximadamente 15-45 nm (Figura 5). Estas variaciones
son comunes en nanopartículas biológicas sintetizadas. Los bordes de
las nanopartículas principalmente más claras que los centros eran visibles debido a
proteínas de biomoléculas cubiertas con SNP. Este estudio indicó que

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había aproximadamente
Las partículas 75% de rangos de tamaño de nanoparicles de 5 nm a 30 nm de
totales observadas.
Figura 3: Perfil representativo de XRD de AgNPs.
Actividad bactericida de nanopartículas de plata.

Los resultados de la actividad antimicrobiana se muestran en la Tabla 1.

Se observó zona de inhibición con el extracto crudo y diferentes
concentraciones (20 µg, 40 µg, 60 µg y 80 µg) de nanopartículas de plata
contra tres bacterias grampositivas ( Staphylococcus aureus ,
Enterococcus cloacae , Streptococcush aemolytius ) y tres gramos
Bacterias negativas ( Pseudomonas aeruginosa , Proteus vulgaris , Proteus
mirabilis ). La actividad antimicrobiana de las nanopartículas de plata mostró
más actividad que la de los extractos de hojas de plantas. En bacterias gram positivas,
Staphylococcus aureus , Enterococcus cloacae mostró similar significativa
actividad de 1.77 ± 0.06 a una concentración de 20 μg que Streptococcus
hemolitio y en bacterias gram negativas, Proteus vulgaris mostró
mejor actividad significativa de 2.06 ± 0.04 a una concentración similar
en comparación con Pseudomonas aeruginosa y Proteus mirabilis .
Existen numerosas características preocupantes que todavía están al borde de

Figura 4: Espectro FTIR de AgNPs.

verificación experimental aún por explorar.

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Organismos Antibiótico Extractos de plantas Zona de inhibición de AgNPs en cm Valor P

(Cefotaxima) 20 μg 40 μg 60 μg 80 μg

Enterobacter cloacae 2.74 ± 0.03 1.10 ± 0.40 1.77 ± 0.06 1.51 ± 0.10 1.31 ± 0.10 1.03 ± 0.12 0.008 **

Staphylococcus aureu 2,31 ± 0,4 1.00 ± 0.40 1.77 ± 0.06 1.66 ± 0.06 1.33 ± 0.06 1.01 ± 0.10 0,031 *
Streptococcus haemolytius 2.12 ± 0.01 0.83 ± 0.22 1.67 ± 0.12 1.41 ± 0.10 1.24 ± 0.06 0.92 ± 0.05 0,015 **

Pseudomonas aeruginosa 2.23 ± 0.43 0.63 ± 0.16 1.16 ± 0.03 1.11 ± 0.10 0.83 ± 0.06 0.83 ± 0.05 0.001 **

Proteus vulgaris 2.84 ± 0.05 0.77 ± 0.2 2.06 ± 0.04 1.56 ± 0.06 1.21 ± 0.10 0,94 ± 0,05 0,026 *

Proteus mirabilis 2,36 ± 0,11 1.30 ± 0.20 1.75 ± 0.13 1.31 ± 0.10 1.23 ± 0.06 0.71 ± 0.11 0,020 **

Los valores son la media ± DE de tres muestras; * Significativo al 1% de nivel; ** Significativo al nivel del 5%

Tabla 1: La actividad antibacteriana de AgNP sintetizados usando extractos de hojas de Ocimum sanctum L.

Discusiones Método para la preparación de AgNP que es ambientalmente benigno

y rentable.
Generalmente, diferentes tipos de enzimas y metabolitos antioxidantes.
se encuentran en plantas y son muy útiles para verificar Conclusión
Daño oxidativo a los componentes celulares. Como todas las otras plantas, Tulsi
En conclusión, un procedimiento biológico simple, rápido y económico.
( Ocimum sanctum L.) contiene varios tipos de nutrientes importantes,
introducido para sintetizar nanopartículas de plata usando Ocimum sanctum
manganeso, vitamina C, fibra y también incluye plantas beneficiosas
L. extracto de hoja. La caracterización espectroscópica de partículas de plata.
fitoquímicos (es decir, Eugenol) que tienen anticancerígeno y anti-
por UV-Visible, XRD, FTIR y TEM apoya la estabilidad de la
propiedades oxidantes [40,41]. Estos complejos antioxidantes sostienen
nanopartículas biosintetizadas. El extracto de Ocimum sanctum L.
o reducir la oxidación de las moléculas al inhibir la iniciación o
se usó como agente reductor y taponador. Se descubrió que los SNP
propagación de la reacción en cadena oxidativa. Los compuestos fenólicos
tienen una actividad antimicrobiana más amplia en gramnegativo que gramnegativo
de la actividad antioxidante se debe principalmente a su propiedad redox que
organismos La actividad antibacteriana de los SNP concluyó que el
puede participar en la neutralización y absorción de radicales libres, apagando
nanopartículas de plata mostraron actividad antibacteriana significativa contra
singlete, peróxidos en descomposición u oxígeno triplete. Tantos informes
Enterobacter cloacae, Staphylococcus aureu, Streptococcush aemolytius,
han revelado categóricamente una estrecha conexión entre todo fenólico
Pseudomonas aeruginosa, Proteus vulgaris, Proteus mirabilis mientras que
contenido y capacidad antioxidante [42]. La acción antioxidante es la
Se observó menos actividad contra Pseudomonas aeruginosa .
resultado de una mezcla de complejos diferentes que tienen ambos antagonistas
así como efecto sinérgico. El potencial antioxidante del eugenol debido Expresiones de gratitud
a su radical fenoxi estabilizado, presente en el núcleo fenólico que Los autores desean agradecer a la Universidad de Berhampur, Odisha, India y KIIT
se puede formar fácilmente conjugación de cadena lateral extendida. La formación Universidad, Odisha, India, por brindar la oportunidad de llevar a cabo esta investigación.
de eugenol cataliza el radical fenoxi estable puede determinarse por UV trabajo.

absorción [43]. El eugenol puede servir un importante antioxidante Referencias

funcionan debido a su eliminación efectiva de radicales dañinos y frenan
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reacciones oxidativas inducidas por la radiación. Esto es extremadamente de calidad
radical estabilizado debido al oxígeno no apareado que puede ser deslocalizado
a través de las moléculas enteras [43]. Esto es posible debido a que el eugenol actúa como
un agente reductor y es oxidado por AgNO 3 , lo que resulta en la formación
de AgNPs. Los diferentes tipos de capacidad de los carroñeros se presentan como
ácidos clorogénicos, ácidos cefálicos, eugenol y ácidos rosamarínicos que
son más efectivos para los radicales libres que los derivados del ácido benzoico [44].
Como resultado, los diversos tipos de antioxidantes presentes en el Ocimum
el santuario es único en términos de su estructura y función para atrapar
Los diversos radicales libres reducen sinérgicamente los iones metálicos de Ag.
Además, los antioxidantes no relacionados reaccionan entre sí para la formación de
Un nuevo antioxidante.
La formación de AgNPs después de la reducción de Ag + que era
confirmado por los cambios de color con la adición de extractos de hojas de
Ocimum sanctum L. a solución de AgNO 3 . La síntesis y agregación.
de AgNP a través de la caída del tiempo se apoyó el progreso de la última
bandas de absorbancia a 444 nm [45]. Mostró que la transferencia de cargos
puede ocurrir entre el medio y las partículas presentes en el
solución. La eficiencia del antioxidante tal vez se asume como resultado de
encapsulación de moléculas bioactivas que se encuentran en la superficie esférica
de AgNPs durante la atracción electrostática junto con neutro o
nanopartículas cargadas positivamente y carga bioactiva negativamente
compuestos (COO - ). El consiguiente efecto de la actividad del antioxidante.
agente depende del sitio de adición de metales. Para usar AgNP contra
microbios en varios campos, es importante y necesario preparar
AgNP en un entorno verde [45]. En este estudio, informamos un verde
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