Tema:

Toma, envío de muestras y técnicas de laboratorio para identificación de

enfermedades

ÍNDICE

Toma, envío de muestras y técnicas de laboratorio para identificación de

enfermedades

1. Introducción ………………………………………………………………. 3
2. Revisión de la literatura ………………………………………………… 3
2.1 Toma y envío de muestras ………………………………………… 3
2.1.1 Sangre (análisis de suero) …………………………………. 3
2.1.2 Órganos ………………………………………………………. 5
2.1.3 Hisopo traqueal ………………………………………………. 5
2.1.4 Hisopo cloacal ………………………………………………… 6
2.1.5 Heces frescas ………………………………………………… 7
2.2 Técnicas de laboratorio ……………………………………………... 7
2.2.1 Pruebas de patología ………………………………………… 7
2.2.2 Microbiología …………………………………………………. 9
2.2.3 Serología ……………………………………………………… 10
2.2.4 Virología ………………………………………………………. 11
2.2.5 Biotecnología o Técnicas moleculares …………………….. 12
2.2.6 Parasitología ………………………………………………….. 12
3. Conclusiones ……………………………………………………………… 13
4. Recomendaciones ………………………………………………………... 13
5. Bibliografía ………………………………………………………………… 14
 Toma, envío de muestras y técnicas de laboratorio para identificación de
enfermedades

1. Introducción

En la avicultura es característico que se adopten sistemas de crianza intensivos

para lograr una óptima productividad. Por ende, se deben tomar medidas de
bioseguridad con el fin de mejorar la producción y evitar patologías. Debido a esta
situación, es importante el diagnóstico y el monitoreo constante de la sanidad del
galpón. (Gonzales, 2017)

Las muestras que serán analizadas se emplean para conocer el estado de las aves
o para verificar la presencia de agentes patógenos en planteles avícolas. Los
exámenes que suelen realizarse emplean muestras de sangre, suero, tejidos y
muestras de gasas o hisopos en formalina (traqueal, orofaringeo, cloacal, de
órganos y articulaciones). (Serología & Muestras, n.d.)

2. Revisión de la Literatura:
2.1 TOMA Y ENVÍO DE MUESTRAS

2.1.1 SANGRE (ANÁLISIS DE SUERO)

Serología

Analiza los niveles de anticuerpos presentes en suero, llamados títulos. El estudio

de estos es útil para el monitoreo de la eficacia en la vacunación o para identificar

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enfermedades en el galpón. Se deben tomar en cuenta las aves seleccionadas para
la extracción, las técnicas empleadas y el manejo de las muestras tanto de sangre
como de suero para obtener resultados acertados. (Serología & Muestras, n.d.)

Sitio de recolección:

Aves adultas: Punción cardíaca o vena radial.

Aves de 1 día: Punción cardiaca o vena yugular por decapitación. (Serología &
Muestras, n.d.)

Método:

Aves Adultas:

Vena radial (ala): Extraemos la sangre empleando una jeringa descartable de 5 ml.

1. Se sujeta el ave por las dos patas.

2. Colocamos las patas bajo el codo.
3. Con las manos libres tenemos acceso bajo el ala.
4. Retiramos las plumas para visibilizar la vena.
5. Procedemos a la extracción. Si la aguja está en la vena, la sangre fluirá
fácilmente.
6. Al retirar la aguja, presionar el sitio de punción para la formación del coágulo.
7. Colocamos la sangre en tubos de ensayo sin anticoagulante.

Aves de 1 día (decapitación):

Se insensibiliza al animal con una tijera, y se continúa seccionando la primera

vértebra cervical. Vertimos la sangre en un tubo de ensayo. (Gonzales, 2017)

Aves adultas y aves de 1 día:

Punción cardíaca: Se sujeta al ave inmovilizando las patas y alas, y se procede a

punzar en la mitad de la base del esternón, evitando el pulmón. La jeringa debe ser
introducida perpendicularmente al punto de punción, y paralelo a la columna
vertebral. Se coloca la sangre en tubo de ensayo de 10 ml sin anticoagulante.
(Gonzales, 2017)

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Cantidad de sangre: 4 ml por ave (1 ml suero).

Cantidad de muestras: 20 muestras de suero por lote para un control rutinario es

lo óptimo, aunque con 10 muestras también se pueden obtener resultados.
(Gonzales, 2017)

Exámenes:

Serológico para identificación de anticuerpos.

 Seroaglutinación rápida.
 Prueba de inhibición de hemaglutinación, ELISA, seroneutralización.

Temperatura para el transporte:

 Refrigeración (2 °C a 8 °C).

2.1.2 ÓRGANOS

Se puede extraer muestras de: pulmón, corazón, hígado, bazo, riñón, cerebro,
proventrículo, molleja, duodeno y ciego. (Gonzales, 2017)

Método:

Con una tijera se abre la cavidad abdominal y torácica del ave que ha sido
sacrificada. Se separan los órganos seleccionados con la ayuda de pinzas y se
extraen cortes de máximo 2 cm. Para evitar contaminación, manipular los tejidos
únicamente con pinzas. En caso de análisis histopatológico se deben colocar los
cortes en formol al 10%. (Gonzales, 2017)

Cantidad de tejido recolectado:

Los órganos de mínimo 5 aves por cada lote, de ellas 3 que presenten síntomas y
2 sanas.

Exámenes:

 Bacteriológico
 Aislamiento viral

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  Histopatológico

Temperatura para el transporte:

 Refrigeración (2 °C a 8 °C)
 Ambiente (Gonzales, 2017)

2.1.3 HISOPO TRAQUEAL

Método:

Abrir el pico del animal, retirar la lengua e introducir un hisopo estéril en la tráquea
frotando en esta área. Evitar tener contacto con la mucosa en la boca para no
contaminar la muestra. Se debe cortar el extremo del hisopo que estuvo cerca de la
mano e introducir el resto en el medio de transporte. (Gonzales, 2017)

Cantidad de muestras:

Muestras de 30 aves por cada lote.

Medio de transporte:

Solución salina.

Exámenes:

 Aislamiento viral
 Aislamiento bacteriológico (Gonzales, 2017)

2.1.4 HISOPO CLOACAL

Método:

Recoger la muestra con un hisopo esterilizado y mediante movimientos circulares

en la cloaca, una vez finalizada la recolección, cortar el extremo que estuvo cerca
de la mano. Depositar el extremo restante en el medio de transporte. (Gonzales,
2017)

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Cantidad de muestras:

Muestras de 30 aves.

Medio de transporte:

Solución salina.

Exámenes:

 Bacteriológico (salmonella)
 Aislamiento viral. (Gonzales, 2017)

2.1.5 HECES FRESCAS

Sitio de recolección:

Plantel avícola.

Método:

Empleando guantes descartables y una pequeña pala estéril, se recogen muestras

de heces frescas en varios sitios del galpón, las cuales se almacenan en el mismo
recipiente por lote. (Gonzales, 2017)

Cantidad de muestras:

50g por cada lote

Envase:

Bolsas plásticas o frasco estéril.

Exámenes:

 Bacteriológico
 Aislamiento viral (Gonzales, 2017)

2.2 TECNICAS DE LABORATORIO

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Las técnicas de laboratorio para determinar patologías son:

2.2.1 Pruebas de patología

Las pruebas de patología permiten la identificación y cuantificación de diversas

lesiones morfológicas en los tejidos, especificando los tipos de lesiones,
distribución, curso y grado de severidad; entre estas tenemos la necropsia y la
histopatología (Valladares, 2010).

Necropsia

“Las necropsias pueden llevarse a cabo en el campo como en el laboratorio, pueden

realizarse de aves específicamente seleccionadas y sacrificadas para tal fin o bien
utilizar las aves de la mortalidad. En las necropsias se pueden identificar las lesiones
macroscópicas en general y también evaluar lesiones en distintos órganos”
(Valladares, 2010).

“En la necropsia no aparecen todas las causas de la enfermedad porque un alto

porcentaje de los problemas sanitarios están relacionados con el manejo,
incluyendo mala nutrición, privación de alimento y/o agua, mala ventilación, mala
higiene, enfriamiento y/o sobre calentamiento de las aves y sobrepoblación”
(Montilla, s.f.).

"La necropsia permite identificar procesos infecciosos, deficiencias nutricionales,

toxicidad, enfermedades parasitarias y tumores. Antes del examen de las aves, es
necesario hacer una evaluación de la historia del problema. En la medida que se
obtenga más información sobre las condiciones de las aves, del ambiente en que
estuvieron, de los procedimientos de manejo y de la historia del grupo” (Montilla,
s.f.).

Histopatología

Es el estudio microscópico de las lesiones en órganos y tejidos de las aves, permite

en muchos casos dar con el diagnóstico definitivo de una enfermedad aviar
(Montilla, s.f.).

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El estudio histopatológico permite orientar el diagnóstico, la interpretación puede ser
descriptiva, identificando las lesiones microscópicas de los tejidos. El resultado
puede ser concluyente en algunos casos, por ejemplo, en las enfermedades
neoplásicas es esencial para determinar el tipo de tumor (Enfermedad de Marek,
Leucosis Linfoide, Leucosis Mieloide y Reticuloendoteliosis); en algunas
enfermedades virales la presencia de cuerpos de inclusión es patognomónica, como
en los casos de Viruela Aviar, Laringotraqueítis Infecciosa, Hepatitis con Cuerpos
de Inclusión y Síndrome de Baja de Postura; en otros casos se puede observar el
agente en las lesiones, como en la coccidiosis o en la aspergilosis. (Valladares,
2010).

En algunas ocasiones la histopatología permite cuantificar el grado de daño que las

aves poseen en algunas enfermedades como en las micotoxicosis y en la Infección
de la bolsa de Fabricio, incluso se puede determinar sí las aves están o no
protegidas contra los desafíos de campo (Valladares, 2010).

2.2.2 Microbiología

“Este tipo de pruebas permiten la detección de bacterias, hongos o virus, ya sea por
medio de su aislamiento, identificación y tipificación o bien por la demostración de
sus antígenos; usualmente se realizan a partir de tejidos de aves seleccionadas,
pero también se pueden hacer estudios a partir de alimento, agua, ingredientes,
cama, instalaciones, equipo, etc” (Valladares, 2010).

“El aislamiento bacteriano o micótico requiere de muestras en refrigeración

mientras que para el aislamiento viral es la congelación, se usa también sustancias
crio protectoras, como la glicerina, que prolongan la vida útil de las mismas. Existen
medios de cultivo para la conservación y el transporte de las muestras y en algunos
casos tiene propiedades de inhibición de microorganismos comensales y
propiedades selectivas de protección para algunos microorganismos, también se
puede usar un hisopo estéril y luego conservar este en un medio de transporte
adecuado. Por ejemplo, las muestras para aislamiento de Salmonella pueden ser

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adecuadamente conservadas en medios de transporte como agua peptonada o
selectivos como el caldo tetrationato o el caldo selenito” (Valladares, 2010).

En bacteriología se usan medios enriquecidos y selectivos artificiales, pruebas

bioquímicas y antisueros. Los resultados se expresan como género y especie
bacteriana aislada y en ocasiones su cantidad relativa (crecimiento abundante,
moderado o escaso). La interpretación de estos resultados depende del tipo de ave
analizada, el tipo de bacteria aislada y el órgano o tejido donde se aisló la bacteria
(Valladares, 2010).

En condiciones ideales todas las muestras deben ser negativas a Salmonella

(pullorum, gallinarum y enteritidis), en todos los tipos de aves (progenitoras,
reproductoras, postura, engorda), en ingredientes, alimentos, agua, cama e
instalaciones, particularmente de la planta incubadora y de la planta de
procesamiento. En aves recién nacidas la bacteriología del saco vitelino y la
micología del pulmón, deberán ser estériles, ocasionalmente se aíslan coliformes y
cocos de saco vitelino, así como Aspergillus y Penicillium de pulmón, lo que refleja
la higiene de la planta incubadora y eventualmente la salud de las reproductoras.
Salvo el tracto digestivo y la piel, el resto de los tejidos aviares debe ser
bacteriológicamente estéril, así que el aislamiento bacteriano a partir de cualquier
órgano fuera del tracto digestivo es relevante, particularmente si la bacteria aislada
es causa conocida de enfermedad, como en los casos de Escherichia coli,
Salmonella sp, Avibacterium (Haemphilus) paragallinarum, Pasteurella multocida,
Ornitobacterium rhinotracheale y Staphylococcus aureus.

En aves mayores se recomiendan estudios bacteriológicos del tracto respiratorio

(tráquea, pulmón, sacos aéreos) en la cual se aisla Escherichia coli y organismos
similares con relativa frecuencia, como Gallibacterium anatis (Pasteurella
haemolytica), Bordetella avium y algunos cocos gram positivos. En las plantas de
procesamiento el interés principal es el aislamiento de bacterias potencialmente
patógenas para el consumidor, como Escherichia coli, Salmonella sp,
Campylobacter sp, Listeria monocytogenes y Staphylococcus aureus (Valladares,
2010).

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 2.2.3 Serología

Las pruebas de serología sirven para detectar la inmunidad humoral contra

diferentes antígenos; las pruebas detectan anticuerpos séricos y para detectar
anticuerpos en yema o en cualquier líquido corporal (Valladares, 2010).

Las pruebas más comunes en avicultura son la aglutinación en placa para la técnica

Aglutinación en placa Mycoplasma y Salmonella

Micro aglutinación
Inmunodifusión en gel de agar
Inhibición de la hemaglutinación
Virus suero neutralización
ELISA
S. pullorum
Adenovirus, Encefalomielitis, Infección de la bolsa de Fabricio,
Reovirus e Influenza Aviar
Enfermedad de Newcastle, Influenza Aviar, Síndrome de Baja de
Postura, Mycoplasma, Bronquitis Infecciosa y Coriza Infecciosa
Infección de la bolsa de Fabricio, Adenovirus Aviar, Enfermedad
de Newcastle, Reovirus, y otros agentes
Alta sensibilidad, facilidad de realización, disponibilidad de
reactivos estandarizados, rapidez de los resultados.

En aves recién nacidas la presencia de anticuerpos es un reflejo de los anticuerpos

maternos, esto puede indicar protección (Infección de la bolsa de Fabricio,
Enfermedad de Newcastle) o infección materna y muy probablemente infección de
la progenie (Mycoplasma, Salmonella). En aves mayores a dos semanas la
presencia de anticuerpos contra antígenos no incluidos en el programa de
inmunización indica exposición de campo a dicho agente y casi seguramente
infección (Pneumovirus Aviar, Influenza Aviar, Anemia Infecciosa Aviar,
Micoplasmosis, etc.) (Valladares, 2010).

En otros casos la inmunidad contra ciertos virus no es mediada por anticuerpos

como es el caso de la viruela aviar y laringotraqueitis. La serología siempre debe
interpretarse para el lote del cual se tomaron las muestras, teniendo en cuenta la
mortalidad, los signos clínicos, el rendimiento y los decomisos. Es muy importante

10
conocer los títulos “normales” para la empresa, ya que cualquier cambio de estos
títulos puede ser el aviso de alerta de un problema potencial (Montilla, s.f.)

2.2.4 Virología

Los virus se pueden aislar y propagar en el laboratorio en los siguientes sistemas:

Cultivos celulares, animales y huevos embrionados, este último es el apropiado para
el aislamiento de Newcastle, Bronquitis e Influenza aviar, entre otras. Si existen
sospechas se deberá tomar muestras de órganos y tejidos, hacer los inóculos
correspondientes e intentar su aislamiento, lo cual de ser positivo identificar el tipo
de virus mediante otros análisis (Montilla, s.f.).

2.2.5 Biotecnología o Técnicas Moleculares.

Los métodos más modernos para la detección de patógenos aviares utilizan la

tecnología de la biología molecular y se basan en la detección del material genético
del agente. Para poder realizar la identificación se requiere tener una cantidad
suficiente de material genético, la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) que
permite amplificar la cantidad de DNA hasta niveles detectables (Valladares, 2010).

Las ventajas de estas técnicas incluyen su rapidez, su alta sensibilidad y la

posibilidad de tipificación de los microorganismos. Las desventajas de estas
técnicas incluyen su costo, su elevado nivel de tecnología, la complejidad en la
conservación de las muestras, y el requerir del conocimiento previo del material
genético de los microorganismos. Con estas técnicas no pueden determinar la
viabilidad del microorganismo detectado (Valladares, 2010).

2.2.6 Parasitología

Las pruebas de parasitología identifican el tipo y el número de parásitos existentes

en las aves, ya sea externos y/o internos. Las técnicas utilizadas en avicultura son
flotación, McMaster y observación microscópica. Su aplicación depende de la
función zootécnica de las aves a analizar. Para la detección y cuantificación de los
endoparásitos más frecuentes de las aves domésticas la muestra de elección es de
heces (Valladares, 2010).

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En el caso del pollo de engorda la parasitosis más importante es la coccidiosis La
prueba más usada es la de McMaster y debe incluir además la diferenciación de las
especies de Eimeria involucradas, las que se identifican con criterios morfológicos
convencionales. La prueba detecta al parásito es su fase de oocisto y puede
realizarse a partir de heces, contenido cecal o cama (Valladares, 2010).

En aves de vida prolongada, como reproductoras y gallinas de postura, es posible

encontrar infestación por cestodos y nematodos cuyos huevos se pueden detectar
en heces por la prueba de flotación y cantidad de parásitos adultos en la necropsia.
Con los ectoparásitos la situación es similar, estos se identifican morfológicamente
con el microscopio y el grado de infestación puede interpretarse como leve,
moderado o severo (Valladares, 2010).

3 Conclusiones

El análisis de muestras ya sea de sangre, heces u órganos, son de vital importancia

para poder emitir un diagnóstico, pero de igual manera, se deben conocer los
métodos de obtención de cada muestra y el posterior manejo que estas tienen hasta
llegar al laboratorio.

Las diferentes técnicas de laboratorio han permitido el diagnostico de diversas

causas de enfermedades que afectan a todas las aves, con lo cual se podría
establecer una profilaxis para evitar pérdidas económicas para el productor y de tal
manera evitar enviar al mercado animales enfermos que ponen en peligro la vida
del consumidor.

Es importante conocer que técnica se debe aplicar y en qué situación, es por ello
que el estudio de la patología aviar es un campo de la medicina veterinaria que
necesita de profesionales dispuestos a profundizar en nuevas técnicas de
diagnóstico para la prevención de enfermedades que afectan tanto a los animales
como a la sociedad.

4 Recomendaciones

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  Es importante tomar las muestras con la técnica correcta, pues de no ser así,
los resultados no serán certeros y no se podrá llegar a un diagnóstico.
 La adecuada sujeción del ave se debe considerar al momento de extraer
muestras como la de sangre para que el procedimiento sea menos traumático
para el animal y más cómodo para el operador.
 Incluir y mantener medidas de bioseguridad en el galpón.
 Establecer un buen programa de sanidad avícola en el galpón.
 Enviar las muestras al laboratorio de manera correcta para evitar alteraciones
y la predicción de un diagnóstico erróneo.
 Consultar a su Médico veterinario inmediatamente observado los primeros
síntomas.

5 Bibliografía
 Gonzales. (2017). Manual Veterinario de Toma y Envío de Muestras 2017.
218.
 Serología, P., & Muestras, Y. T. D. E. (n.d.). Boletín Técnico. 1–8.

 CALNER. (2000). Enfermedades de las aves. Manual moderno: México

 Montilla. (s.f.). Laboratorio, herramienta clave en la industria avícola.

PRONACA, 1-11.

 Valladares . (2010). elementos requeridos para un diagnóstico de laboratorio.

engormix.

 Valls. (2007). protocolo para un diagnóstico. selecciones avicolas- patologia,

763-765.

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