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I) Estudios de saturación:
Para cualquiera de estos estudios debe tenerse en cuenta que la unión del radioligando a
sus sitios de unión se produce de acuerdo con la siguiente ecuación:
R L
KD
RL
Por lo tanto:
KD
R . L
RL
Como:
RT R RL
R RT RL
Entonces:
KD
RT RL . L
RL
KD
RT . L RL. L
RL
KD
RT . L L
RL
K D L
RT . L
RL
RL L
RT K D L
(1)
De este modo, obtenemos la ecuación que nos permite el cálculo de la fracción de sitios
de unión libres. Además, cuando:
L K D
Se observa que:
RL 1 . RT
2
El ligando se une a los receptores de estudio (unión específica) y además se une a sitios
inespecíficos (unión inespecífica). La unión específica es saturable mientras que la
inespecífica no lo es. Por lo tanto:
El gráfico anterior nos brinda información acerca de la unión total. Por lo tanto, si
queremos obtener información acerca de los receptores de estudio, debemos de alguna
manera medir la unión inespecífica para luego restársela a la unión total y así obtener la
unión específica:
Se procede por lo tanto del modo detallado en el siguiente esquema. La unión total se
obtiene debido a que los ligandos radiactivos se unen a los sitios específicos y a los
sitios inespecíficos (izquierda), mientras que la unión inespecífica se obtiene debido a
que los ligandos no radiactivos se unen a los sitios específicos y los ligandos radiactivos
se unen a los sitios inespecíficos (derecha).
Sabiendo que:
KD
R . L
RL
K D . RL
R
L
Y que:
RT R RL
RL RT R
Nos queda:
RL RT K D . RL
L
Scatchard propuso esta ecuación utilizando diferentes términos, en donde B hace
referencia a la capacidad del ligando de unirse a los receptores y F hace referencia a la
fracción de ligando libre:
B RL
Bmax RT
F L
B
B Bmax K D
F
RL RT K D . RL
L
K D . RL
RT RL
L
RL
RT RL
L KD KD
B Bmax 1
.B
F KD KD
Si graficamos B/F = f (B) nos queda una gráfica cuya pendiente es -Ka y su raíz es Bmax.
Por otra parte, a partir de la ecuación (1):
RL L
RT K D L
B F
Bmax KD F
Bmax K F
D
B F
Bmax KD
1
B F
Bmax K
1 D
B F
Bmax B K
D
B F
B F
Bmax B KD
B
log log F log K D
Bmax B
Si graficamos log (B/(Bmax-B)) = log F obtenemos una gráfica cuya pendiente debe ser 1
en caso de que no exista regulación alostérica en lo que se refiere a la unión ligando-
receptor. En caso de que sí exista regulación alostérica, la pendiente será distinta de 1 y
la ecuación debe corregirse según:
B
log n. log F log K D
Bmax B
En ocasiones el gráfico de Scatchard puede ser no lineal. Esto sucede cuando existen
dos receptores distintos, de modo tal que la afinidad de cada uno por el ligando es
diferente. Inicialmente el ligando se unirá a los receptores de baja y alta afinidad. Una
vez ocupados todos los receptores de alta afinidad, solo nos quedarán los receptores de
baja afinidad. Esto se da cuando pKD es mayor que dos.
k1
KD
k1
Entonces la constante asociación k1 puede calcularse luego de calculada la KD por
estudios de saturación y la k-1 por estudios cinéticos.